Моноклональные антитела при вич

Суперантитела почти победили ВИЧ

У больных СПИДом пока есть только одна надежда – антиретровирусная терапия, которая основана на препаратах, препятствующих размножению ВИЧ. Геном этого вируса записан в РНК, поэтому после попадания в клетку он с помощью фермента ревертазы (обратной транскриптазы) делает копию ДНК на шаблоне собственной РНК. Потом с этой ДНК собственные белки клетки начинают штамповать вирусную РНК. Если, скажем, подавить работу обратной транскриптазы вируса, то он не сможет размножаться.

Но даже коктейли антиретровирусных препаратов помогают лишь перевести болезнь из острой фазы в хроническую. Такая терапия ничего не может сделать с вирусом, который плавает в крови или находится в клетке в спящем состоянии. Поэтому исследователи ищут способ избавления от самого вируса, а не просто подавления его способности к размножению. (К слову, обычная антиВИЧ-терапия теоретически позволяет избавиться от вируса, но лишь при особых условиях, и такие случаи, увы, единичны.)

Когда же речь заходит о том, чтобы полностью изгнать ВИЧ, то все соглашаются, что лучше антител тут инструмента не найти. С одной стороны, здесь всё просто: достаточно найти иммуноглобулины, которые узнавали бы белок вирусной оболочки, связывались бы с ним и сигнализировали иммунным клеткам-убийцам о том, что этот комплекс нужно уничтожить. Проблема, однако, в том, что ВИЧ обладает колоссальной изменчивостью, и антитела обычно ловят только некую долю вирусных частиц, ибо тот же самый белок у них наделён рядом отличий, благодаря которым антитела его не видят.

Однако наш иммунитет всё же способен справиться с таким разнообразием вируса, создавая антитела широкого спектра действия. То, что иммунитет может вырабатывать иммуноглобулины, распознающие более 90% разновидностей ВИЧ, учёные обнаружили в 2010 году, и это открытие, разумеется, вселило во всех надежду, что СПИД вот-вот падёт. Но со временем выяснилось, что такие антитела возникают редко и через огромный промежуток времени, к тому же исключительно в ответ на настоящую инфекцию – то есть спровоцировать их синтез с помощью вакцины из убитого патогена не получится.

Тем не менее учёные продолжили работать с подобными антителами. И не так давно удалось обнаружить универсальные антитела, которые появляются гораздо раньше и выглядят проще, чем те, что наблюдались до этого, – правда, и универсальность их оказалась пониже. Но обязательно ли заставлять сам иммунитет вырабатывать такие антитела? Как показали эксперименты двух исследовательских групп – из Медицинского центра дьяконицы Бет Израэль и Национального института аллергии и инфекционных болезней (оба – США), – иммуноглобулины широкого спектра действия, просто введённые в кровь, эффективно понижают уровень ВИЧ.

ВИЧ между эпителиальной клеткой (снизу) и лимфоцитом (сверху) (фото Visuals Unlimited / Corbis).

Сразу стоит сказать, что группы Дана Баруха (Dan Barouch) и Малкольма Мартина (Malcolm Martin) экспериментировали с обезьянами: резусов заражали гибридным обезьянье-человеческим ВИЧ, который размножался в макаках, но выглядел похожим на человеческий вирус. Оружием против него послужили антитела широкого спектра действия, полученные от пациентов со СПИДом.

Дан Барух и его коллеги использовали коктейль из трёх видов антител, и, как пишут исследователи в Nature (Therapeutic efficacy of potent neutralizing HIV-1-specific monoclonal antibodies in SHIV-infected rhesus monkeys), в течение недели уровень вируса упал настолько, что его нельзя было обнаружить! Похожий результат был и тогда, когда вместо смеси иммуноглобулинов применяли только один их вид. После того как содержание таких антител в крови начало снижаться, концентрация вируса снова поднялась, однако у некоторых обезьян она по-прежнему оставалась неразличимо низкой даже без введения дополнительных порций антител.

В другой работе, выполненной Малкольмом Мартином и его коллегами и опубликованной в том же журнале (Antibody-mediated immunotherapy of macaques chronically infected with SHIV suppresses viraemia), речь идёт примерно о том же, только тут исследователи использовали иные разновидности антител против ВИЧ. И вновь концентрация вируса падала у макак в течение семи дней до неразличимого (ещё раз: неразличимого!) уровня и оставалась такой на протяжении 56 дней, пока антитела сами не начинали исчезать. Дальше всё зависело от того, сколько вируса было у обезьян изначально: если мало, то после исчезновения антител вирус оставался под контролем собственного иммунитета животных, если же его изначально было много, то уровень начинал расти.

При этом, как подчёркивают исследователи, вирус исчезал как из крови, так и из других тканей, и никакой устойчивости к вводимым антителам у него не появлялось. (Правда, было одно исключение: когда во втором исследовании вводили лишь одно антитело, и подопытной была макака с 3-летним опытом сожительства с вирусом, у неё возникал устойчивый вирусный штамм.)

Что дальше? Стоимость антител гораздо выше, чем антиретровирусных препаратов, да и обращаться с ними сложнее. Но авторы работ полагают, что такие антитела нужно соединить с обычными антиВИЧ-лекарствами: это снизит стоимость лечения, и, скорее всего, повысит его эффективность – если к антителам добавить также вещества, препятствующие размножению вируса в клетке.

Подготовлено по материалам Национального института аллергии и инфекционных болезней (HIV Antibody Infusions Show Promise for Treating SHIV-Infected Monkeys) и Медицинского центра дьяконицы Бет Израэль (Monoclonal Antibodies Show Promise As Effective HIV Therapy).

Новый метод векторной доставки ВИЧ-специфических антител приведет к устойчивой выработке антивирусных агентов на протяжении более года, уверены специалисты NIH. Предложенная ими технология использует безвредный вирус для доставки гена антитела в клетки человека, что позволяет организму генерировать антитело в течение длительного времени. По словам исследователей, при дальнейшем развитии такая стратегия может быть применима для профилактики и лечения широкого спектра инфекционных заболеваний.

Исследователи из Национального института аллергии и инфекционных заболеваний NIH (NIAID) сообщили о полученных результатах 9 марта в онлайн-презентации на конференции по ретровирусам и оппортунистическим инфекциям (CROI 2020).

Антитела – белки иммунной системы, которые помогают предотвратить или искоренить инфекцию. Традиционно используемые вакцины побуждают иммунную систему генерировать защитные антитела. Другой подход к профилактике инфекций заключается в таргетной доставке моноклональных антител – препаратов специфических белков, предназначенных для связывания с одной мишенью, - непосредственно в организме. Моноклональные антитела также используются в терапевтических целях, причем многие из них уже одобрены для лечения рака, аутоиммунных и инфекционных заболеваний.

Сохранение требуемой концентрации антител в организме требует периодических инъекций, что может быть проблематично особенно в условиях ограниченных ресурсов. Альтернатива доставки специфических антител с использованием вируса в качестве носителя или вектора ввиду этого может иметь потенциальное преимущество.

Система доставки лекарств, разработанная учеными из Научно-исследовательского центра вакцин NIAID (VRC), использует аденоассоциированный вирус серотипа 8 (AAV8) для доставки гена антитела. AAV – микроскопические вирусы, не вызывающие заболеваний у людей – оказались безопасным транспортом для генной терапии. В предыдущем исследовании на животных моделях исследователи VRC обнаружили, что использование AAV8 для доставки генов антител к вирусу иммунодефицита обезьяны (SIV) позволило иммунитету приматов производить высокие уровни антител против SIV и защитить их от инфицирования.

Основываясь на этой доклинической работе, специалисты провели фазу 1 клинического испытания, известного как VRC 603. Его целью было оценить безопасность и переносимость вектора AAV8, несущего ген антитела против ВИЧ, у взрослых, имеющих стабильную вирусную супрессию, и установить, как он влияет на выработку антител. Вектор несет ген моноклонального антитела против ВИЧ под названием VRC07, который первоначально был выделен из крови человека с ВИЧ.

VRC07 является широко нейтрализующим антителом (bNAb), способным нейтрализовать инфицирование клеток человека в лаборатории широким спектром штаммов ВИЧ. В настоящее время проводятся другие клинические исследования, направленные на установление того, могут ли инфузии bNAb защитить человека от инфицирования ВИЧ. Ученые также стараются определить, могут ли комбинации ВИЧ-специфических bNAb подавлять вирус у людей, уже живущих с вирусом.

Презентация д-ра Джозефа П. Касаза, главного исследователя VRC 603, представила первоначальные результаты первых восьми участников продолжающегося испытания, которое проводится в Клиническом центре NIH в Бетесде, штат Мэриленд, США. Каждый из этих людей в возрасте от 30 до 60 лет получал однократную дозу антител путем внутримышечной инъекции одной из трех разных уровней дозы AAV8-VRC07. При этом пациенты продолжали ежедневно принимать антиретровирусную терапию.

После инъекции AAV8-VRC07 у всех участников оценивалось производство VRC07 до определяемых уровней. Генерация VRC07 достигла раннего пика через четыре-шесть недель после инъекции, затем сократилась и постепенно начала увеличиваться примерно через 16 недель после инъекции. Специалисты наблюдали за пятью участниками, которые получали низкие или промежуточные дозы AAV8-VRC07 в течение полутора-двух лет. У трех из этих пяти человек уровни антител через год после инъекции были выше, чем уровни, наблюдаемые через четыре-шесть недель. Три добровольца, которые получили самую высокую дозу AAV8-VRC07, находились под наблюдением от пяти месяцев до одного года. Два из них продуцировали VRC07 в концентрациях, превышающих уровни, наблюдаемые в группах с низкой и средней дозой.

Участники исследования не испытали каких-либо серьезных побочных эффектов из-за AAV8-VRC07. Некоторые добровольцы испытывали кратковременное легкое раздражение в месте инъекции или слабую мышечную боль.

Введение терапии на основе моноклональных антител иногда приводит к тому, что иммунная система человека вырабатывает антитела против самой терапии. Только три из восьми участников VRC 603 вырабатывали антитела против VRC07; пока не совсем ясно, могут ли эти антитела снижать способность VRC07 нейтрализовать ВИЧ. Уровень ВИЧ-инфекции участников VRC 603 находился под контролем благодаря приему антиретровирусной терапии.

Концентрации VRC07, наблюдаемые у участников исследования, были ниже, чем концентрации антител, наблюдаемые в исследованиях на животных по технологии на основе AAV8. Специалисты VRC проанализируют данные VRC 603, чтобы лучше интерпретировать факторы, определяющие, сколько bNAb генерируется клетками человека. Они также продолжат следить за участниками VRC 603 и привлекут новых добровольцев к участию в исследовании.

AAV8-VRC07 был разработан учеными VRC в сотрудничестве с д-ром Дэвидом Балтимором из Калифорнийского технологического института и д-ром Алехандро Балазсом из Института Рагона MGH, MIT и Гарварда.

AAV8-VRC07 был изготовлен Клиническим Центром клеточной и молекулярной терапии при Детской больнице Филадельфии.

И.Г. Сидорович, И.А. Николаева, Г.О. Гудима, А.Ф. Шевалье, Э.В. Карамов, С.В. Коробова, Р.М. Хаитов

Иммунотерапия ВИЧ-инфекции и СПИДа более 20 лет привлекает внимание исследователей. Рассматривались и были опробованы различные подходы. В целом подходы к иммунотерапии при ВИЧ-инфекции можно разделить на две категории: 1) когда цель - восстановление общей иммунореактивности хозяина; 2) когда вмешательство направлено на усиление ВИЧ-специфического иммунного ответа. Второй подход основан на том, что контроль репликации вируса иммунным ответом хозяина играет основную роль в течении вызванного ВИЧ заболевания, а усиление вирус-специфического иммунного ответа полезно для хозяина. Предполагается, что благодаря усилению "правильного" иммунного ответа на ВИЧ можно продлить период клинической латентности.

ВИЧ-инфекция вызывает иммунный ответ в форме антител, в том числе нейтрализующих, антителозависимой клеточной цитотоксичности и ВИЧ-специфических цитотоксических лимфоцитов (CTL). Эти типы ответа появляются на ранней фазе ВИЧ-инфекции и существуют в той или иной степени в течение всей жизни ВИЧ-инфицированного человека. Хотя возможность усиления ВИЧ-специфического иммунного ответа кажется привлекательной, ее воплощение в жизнь осложняется тем, что компоненты действенной иммунной защиты в случае ВИЧ-инфекции/СПИДа пока не определены. Специфическая иммунотерапия ВИЧ-инфекции может осуществляться (и действительно проводилась) различными методами. Среди них - пассивная иммунотерапия с использованием ВИЧ-специфических антител и экспансия ex vivo CD8+-эффекторов. Однако наибольшее внимание исследователей привлекает концепция терапевтической вакцинации. Эту идею стали активно разрабатывать в связи с появлением и применением в практике высокоактивной антиретровирусной лекарственной терапии (Highly active antiretroviral therapy - HAART).

Нейтрализующие антитела появляются на ранней стадии ВИЧ-инфекции и присутствуют вплоть до поздних стадий заболевания. Выявление нейтрализующих антител в ходе первичной инфекции, во время быстрого падения виремии привело к предположению, что нейтрализующие антитела могут быть важным фактором контроля репликации ВИЧ in vivo. Испытания специфической пассивной иммунотерапии с применением иммуноглобулинов ведутся с 1988 г. Проведены клинические испытания, в которых использовали либо пул иммуноглобулинов из сывороток ВИЧ-инфицированных, либо моноклональные антитела, нейтрализующие ВИЧ-1 in vitro. Испытания с пулом иммуноглобулинов показали безопасность этого подхода, но не выявили четкой клинической или вирусологической эффективности. Снижение количества антигена р24 в сыворотке было, вероятно, простым следствием образования комплекса антиген-антитело при вливании плазмы или сыворотки с избытком антител к р24. В 1991-1992 гг. проводились испытания пассивной иммунотерапии с применением моноклональных антител против оболочки ВИЧ. Используемый материал представляет собой хорошо охарактеризованный гомогенный продукт. Потенциальный недостаток состоит в том, что при использовании моноклональных антител вирусу легче избежать их действия, чем в случае применения поликлональных антител. Следует также отметить, что вместе с антителами происходит перенос ВИЧ. В последнее время интерес к этому подходу возобновился в связи с получением моноклональных антител, способных нейтрализовать широкий спектр первичных изолятов ВИЧ. Такие исследования проводит А. Тркола из Цюрихского университетского госпиталя. Пациенты, получающие HAART, получают также смесь моноклональных антител 2F5, 2G12 и 4F10, затем применение HAART прекращается и проводится мониторинг вирусной нагрузки и уровня CD4+. Цель этих исследований состоит в улучшении клинического состояния пациентов, а также в оценке роли гуморального иммунитета в развитии заболевания.

Экспансия эффекторных клеток ex vivo. Сильный иммунный ответ в форме вирус-специфических CTL, наблюдаемый при ВИЧ-инфекции, послужил основанием для разработки терапии, направленной на усиление этой активности in vivo. Первый вариант такого подхода состоит в выделении и селективной экспансии ex vivo клеток СD8 любой специфичности. Такая терапия достаточно хорошо переносилась. Было показано, что возвращенные клетки поступают в легкие, печень, костный мозг и селезенку. Неселективный характер этого подхода в отношении специфичности возвращаемых клеток может теоретически дать то преимущество, что эффекторные клетки могут оказаться направлены против нескольких оппортунистических инфекций, развивающихся на фоне иммунодефицита, связанного с ВИЧ-1. Ранее сообщалось о регрессии саркомы Капоши у двух пациентов в результате такого лечения. Второй вариант предполагает избирательную экспансию ВИЧ-1-специфических CD8+-Т-клеток ex vivo. Этот подход также был экспериментально проверен. Одному пациенту в NIH была проведена реинфузия аутологичных nef-специфических CTL, размноженных ex vivo. Трафик клеток был тем же, что и при размножении неселективных CD8+-Т-клеток, сообщалось и о снижении виремии (правда, преходящем). Были, однако, и обескураживающие (хотя и ожидаемые) результаты. Сообщалось о случае, когда после реинфузии размноженных ex vivo CTL у пациента наступило резкое ухудшение состояния с гибелью CD4+-Т-клеток, после чего испытания были прекращены.

Итак, развитие подхода, связанного с экспансией CD8+-Т-клеток ex vivo, наталкивается на ряд ограничений. Во-первых, существует опасность массовой гибели Т-хелперов, во-вторых, следует найти способ размножить эффекторы до такого же порядка величины, который существовал у пациента до реинфузии, в-третьих, стоимость терапии весьма высока. Этот подход уступает место разработке терапевтических вакцин, стимулирующих специфический CTL-ответ.

Во-первых, противовирусные препараты не могут удалить вирус из организма, поэтому требуется пожизненная терапия. Со временем отбираются резистентные формы вируса. Препараты весьма токсичны, поэтому следует использовать любую возможность перерыва в лечении.

Во-вторых, налицо иммунный контроль ВИЧ-инфекции. В динамике это выглядит так: примерно через две недели после заражения происходит всплеск размножения вируса, острая фаза инфекции регистрируется по клинической картине (сыпь, лихорадка, симптомы, напоминающие ОРЗ) и снижению количества CD4+-Т-лимфоцитов. Лабораторные методы позволяют обнаружить в крови вирус (антиген р24, регистрируемый в ИФА, и вирусный геном в форме РНК, определяемый с помощью обратной транскрипции с последующей ПЦР). Однако вскоре иммунный ответ в значительной мере подавляет репликацию ВИЧ, концентрация ВИЧ в крови снижается и одновременно возрастает уровень ВИЧ-специфических CD8+-CTL. Считается, что именно ВИЧ-специфические CTL являются главными игроками команды иммунной системы в деле сдерживания инфекции, и поэтому стратегии иммунотерапии направлены именно на активацию клеточного ответа. Продукция ВИЧ, определяемая по вирусной нагрузке (концентрации ВИЧ в сыворотке или плазме крови), падает до уровня, который значительно ниже наблюдавшегося на пике репликации. Этот уровень отражает наступившее равновесие между вирусом и состоянием иммунной системы, он характерен для каждого пациента и поддерживается в течение длительного времени. В этот период количество CD4+-Т-клеток восстанавливается до уровня, существовавшего до заражения. Вслед за этим появляются антитела с нейтрализационной активностью, но их появление запаздывает на "линию обороны". Поэтому индукция нейтрализующих антител является целью профилактической вакцинации. Наступает состояние хронического носительства, которое длится годами. При этом у некоторых ВИЧ-инфицированных, т. н. long term non-progressors, иммунный контроль вируса может длиться до 25 лет. Эти люди составляют не более 2 % инфицированных. Таким образом, естественный иммунный ответ не может удалить вирус из организма, но длительное время сдерживает развитие инфекции. Поэтому идея усиления и/или расширения иммунного ответа на ВИЧ-инфекцию представляется привлекательной.

Каковы цели терапевтической вакцинации? Целью терапевтической вакцинации при ВИЧ-инфекции/СПИДе является, прежде всего, возможность повысить надежность применяемой высокоактивной антиретровирусной лекарственной терапии (HAART). Ожидается, что применение терапевтической вакцины в схеме лечения после курса HAART даст возможность отсрочить появление резистентных мутантов ВИЧ. Вторая важная цель - это возможность сделать перерыв в токсичной химиотерапии, дать пациенту отдых. В перспективе возможно будет значительно сократить применение лекарственной антиретровирусной терапии.

Что ожидается от терапевтической вакцины? Какие требования к ней предъявляются? Цель терапевтической вакцинации - предотвратить тяжелые осложнения хронической ВИЧ-инфекции за счет усиления или расширения специфического иммунного ответа.

Какие есть основания считать, что можно создать терапевтическую вакцину? Надежда на возможность создания терапевтической вакцины основана на существовании иммунного контроля при ВИЧ-инфекции. Именно наличие иммунного контроля приводит к тому, что клинически латентное состояние длится годами. Определенную надежду дает существование долговременных непрогрессоров, причины этого явления интенсивно изучаются.

Подпишитесь на журнал "Цитокины и Воспаление" он-лайн!

Начата подписка на 2018 год!

Обновление на книжной полке: компакт-диск Цитокины и воспаление, 2008 год.

Несмотря на широкое применение проточной цитофлюориметрии в различных областях современной медицины, на российском рынке представлены в основном зарубежные крупные фирмы-производители. Цель: сравнить набор реагентов для проточной цитометрии Российской фирмы-производителя с зарубежными моноклональными антителами на проточных цитофлюориметрах разных производителей.

Том 15, №2. С. 101-196
2013

Официальный журнал Санкт-Петербургского Регионального Отделения Российской Ассоциации Аллергологов и Клинических Иммунологов

МЕДИЦИНСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ

Ключевые слова: моноклональные антитела, гейтирование по CD45, двухплатформенная методика

Адрес для переписки:

Попова Анна Анатольевна

Поступила 09.07.2012 Отправлена на доработку 04.08.2012 Принята к печати 23.10.2012

Авторы:

Новожилов С.Н. — сотрудник Evrogen JSC, Москва

Введение

Современная диагностика гематологических заболеваний не ограничивается только клиническим анализом форменных элементов крови. Проточная цитофлюориметрия с помощью моноклональных антител дала возможность типировать клетки не только благодаря их морфологическим различиям, но и за счет набора поверхностных антигенов и рецепторов, характерных для строго определенных клеток и их функционального состояния [1]. Поэтому не удивительно, что метод проточной цитометрии прочно вошел в лабораторную практику многих центров.

Помимо этого методом проточной цитометрии можно получать самые разные данные: определять содержание в клетке ДНК и РНК, суммарное количество белков и количество специфических белков, узнаваемых моноклональными антителами, исследовать клеточный метаболизм (например, измерять внутриклеточный pH), изучать транспорт ионов кальция и кинетику ферментативных реакций [8].

Данная проблема усугубляется практически недостаточной информацией о российских производителях моноклональных антител для нужд проточной цитофлюориметрии.

Материал и методы

Материалом для исследования являлась венозная кровь. Забор крови для иммунофеноти- пирования и общего анализа крови проводился у пациентов утром натощак, в вакуумную пробирку VACUTANER, содержащую антикоагулянт К₃ЭДТА. Сразу же после забора кровь аккуратно перемешивали с антикоагулянтом во избежание образования сгустков.

Для определения основных гематологических показателей (общего количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, гемоглобина, лейкоцитарной формулы крови) образцы исследовались на гематологическом анализаторе ACT diff, Beckman Coulter.

Для иммунофенотипирования применялись моноклональные антитела (МаТ) Becton Dickinson (USA), Лаборатория Константа (Россия) и Beckman Coulter (USA). Пробоподготовка к иммунофенотипированию осуществлялась согласно инструкции МаТ по безотмывочной технологии в два этапа (внесение МаТ, внесение лизирующего раствора). Использовали следующие комбинации МаТ:

Лизирующий раствор выбирали в соответствии с фирмой-производителем моноклональных антител (Лаборатория Константа — Реагент для лидирования эритроцитов, Beckman Coulter — Optilyse С-однокомпонентный лизирующий раствор, Becton Dickinson — Lysing Solution).

Нами были проанализированы результаты измерений относительного и абсолютного содержания субпопуляций лимфоцитов в двух группах образцов. В 1 группе был 21 образец крови, во 2-ой группе — 15. Опытные образцы были взяты у пациентов, наблюдавшихся в ФНМЦ ПБ СПИД по поводу ВИЧ-инфекции или других инфекционных заболеваний.

Для обработки статистических данных использовалась программа GraphPad Prism5. Рассчитывали следующие показатели: среднее, медиана, минимальное и максимальное значение, стандартное отклонение, критерий Блэнда- Альтмана, критерий Фридмана [4].

Результаты и обсуждение

В таблицах 1 и 2 представлены данные описательной статистики результатов измерения относительных и абсолютных значений субпопуляций лимфоцитов, выполненных различными реагентами на различных приборах.

Особого внимания заслуживает тот факт, что в группу определения относительных и абсолютных значений С D4 - лимфоцитов вошли пробы как с высоким, так и с низким содержанием данного показателя (табл. 1).

По данным описательной статистики мы не видим сильных отличий в результатах, полученных при использовании различных методик. Для более информативного представления применим анализ Блэнда—Альтмана (табл. 3, 4). На графиках Блэнда—Альтмана отображалась разность значений количества С04-лимфоцитов, полученных двумя сравниваемыми методами (по оси у), относительно среднего этих значений (по оси х) (рис. 2). Подсчитывалась средняя разница значений (bias), которая характеризует систематическое расхождение результатов, и границы согласия (Limits of Agreement; LOA),

Примечание. А, Б - алгоритм анализа на проточном цитометре FACSCalibur (BD, USA) и Epics (Beckman Coulter, USA): A - гистограмма распределения лейкоцитов периферической крови с использованием CD45 меченного РСу5. Б - CD3*CD4* Т-клетки (квадрант II), R3- CDЗ-лимфоциты. В, Г - алгоритм анализа на проточном цитометре Epics (Beckman Coulter, USA): В - гистограмма распределения лейкоцитов периферической крови с использованием CD45 меченного РСу5. Г - СD3*СD4 + Т-клетки (квадрант II), СDЗ-лимфоциты - квадрант II+IV.

ТАБЛИЦА 1. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЯ ОТНОСИТЕЛЬНЫХ И АБСОЛЮТНЫХ ЗНАЧЕНИЙ CD4- И CDЗ-ЛИМФОЦИТОВ [n = 21; M±SD; Me (min-max)]

Методика (прибор + реагент)

Лабораторная диагностика ВИЧ инфекции

Современная медицина позволяет поддерживать иммунитет пациента с ВИЧ на должном уровне. Это происходит за счет применения антиретровирусной терапии, которая повышает количество иммунных клеток. Это не приводит к выздоровлению, однако снижает риск присоединения других заболеваний, дает человеку возможность нормально жить и заниматься своей привычной работой.

К сожалению, распространение ВИЧ-инфекции всё еще есть. Из года в год эпидемиологическая картина становится всё более неутешительной. Первое время ВИЧ не проявляет себя в организме, а первые симптомы неспецифичны и могут ошибочно восприниматься за другую патологию. Диагностика ВИЧ - это выбор сознательных пациентов, которые заботятся о своем здоровье и состоянии своих близких.

В каких случаях необходимо пройти диагностику на ВИЧ?

Пройти диагностику следует, если были случаи потенциального риска заражения. Также, существуют клинические критерии, на которые стоит ориентироваться и сдать анализ. Провериться на ВИЧ стоит, если наблюдаются такие симптомы:

стойкое повышение температуры без видимых причин;
длительная диарея без сопутствующих симптомов;
потеря массы тела при обычном рационе и физических нагрузках;
длительные простудные болезни, пневмонии;
сепсис;
кашель, который не проходит;
увеличение и болезненность лимфатических узлов разных групп;
развитие атипичной пневмонии;
гнойно-воспалительные процессы на коже и слизистых, которые плохо поддаются лечению;
опоясывающий герпес;
поражение слизистой оболочки рта (кандидоз, гингивит);
туберкулез;
поражение периферической иннервации;
саркома Капоши;
рецидивирующие инфекционные патологии.

Эти состояния говорят о сниженном иммунитете. Необязательно это спровоцировано ВИЧ-инфекцией, могут быть и другие состояния. Однако диагностический поиск необходимо начинать именно с этого анализа, чтобы исключить патологию или вовремя начать лечение.

Виды лабораторной диагностики

вирусологическая;
серологическая;
исследование иммунного статуса;
бактериологический анализ.

Рассмотрим каждый вид диагностики более подробно.

Для исследования применяются иммунные клетки крови, лейкоциты костного мозга, ткани организма, плазма, слюна, сперма, ликвор. Материалом заражают культуру лимфоцитов. О наличии в материале ВИЧ говорит процесс образования симпластов. Для их индикации применяются методы ЦПД, электронная микроскопия, иммунофлюоресценция, изучение активности транскриптазы. Чувствительность метода настолько высока, что позволяет обнаружить одну инфицированную клетку из тысячи исследуемых. Чтобы обнаружить вирусный антиген в лимфоците, используются моноклональные антитела.

Наиболее оптимальный вариант диагностики - проведение ПЦР - полимеразно-цепной реакции. Методика позволяет прогнозировать состояние пациента и определить тяжесть вирусной нагрузки на организм. Суть заключается в определении копий РНК вируса в плазме пациента.

Для исследования применяется сыворотка крови. Применяется иммуноферментный анализ. В его основе лежит реакция “антиген-антитело”. Для проведения диагностики используются стандартные диагностические системы, которые реагируют на наличие антител в сыворотке. Метод скрининговый и его необходимо подтвердить в случае положительного ответа.

Для этого используется метод иммунного блоттинга. Это способ подтвердить диагноз и более четко определить, к каким белкам вируса у пациента есть антитела. Основа диагностика заключается в различии молекулярной массы. Результат - определение антител к определенным антигенам ВИЧ.

Для оценки состояния иммунной системы исследуются такие параметры:

соотношение клеток CD4/CD8, которое в норме составляет 2, а при СПИДе может быть 0,5 и меньше;
уровень иммунных клеток CD4;
изучение уровня лейкоцитов, тромбоцитов, лимфоцитов;
изучение уровня иммуноглобулинов и иммунокомплексов в сыворотке;
оценка реакции лимфоцитов на митогены.

Бактериологическая диагностика применяется для диагностики сопутствующих патологий. Для этого применяется окраска по Граму, в результате чего можно определить тип микроорганизма.

Как подготовиться к диагностике?

Специфической подготовки к сдаче анализов не требуется. Желательно исключить посторонние факторы, которые влияют на состояние крови:

курение;
употребление алкоголя;
выраженные физические и эмоциональные нагрузки;
стресс.

Лучше сдавать анализ в утреннее время, так как утром удобнее прийти в клинику натощак. На результат может повлиять наличие вирусной инфекции, менструальный цикл, обильный прием пищи незадолго до диагностики.

Забор крови происходит в стерильных условиях, с соблюдением правил асептики и антисептики. Все манипуляции проводит медицинский персонал, который обладает навыками забора крови. Необходимо обеспечить правильное хранение биоматериала до проведение лабораторного исследования.

Как долго ждать результатов анализа?

Результат анализа зависит от метода диагностики. В среднем, узнать результат можно будет от 2 до 10 дней после сдачи. Результат сообщается лично пациенту, диагностику можно пройти в наших центрах анонимно.

Лаборатория АО "СЗЦДМ" предлагает услуги, обеспечивающие комплексное и преемственное лабораторное обследование пациента

Диагностика В медицинских центрах АО "СЗЦДМ" проводят качественные диагностические исследования всего организма

Лечение Наши медицинские центры ориентированы на обслуживание пациентов в амбулаторном режиме и объединены единым подходом к обследованию и лечению пациентов.

Реабилитация Реабилитация - это действия, направленные на всестороннюю помощь больному человеку или инвалиду для достижения им максимально возможной полноценности, в том числе и социальной или экономической.

Выезд на дом Внимание! Действует акция "Выезд на дом - 0 рублей"

Профосмотры АО "СЗЦДМ" проводит профилактические осмотры работников, которые включают в себя - комплексы лечебных и профилактических мероприятий, проводимых для выявления отклонений в состоянии здоровья, профилактики развития и распространения заболеваний.

Читайте также: