Вакцина против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула ассоциированная живая

ИНСТРУКЦИЯ по применению вакцины против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула ассоциированной живой

I. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

1. Вакцина против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула ассоциированная живая (Vaccinum contra Anthracem ct Carbunculum emphysematum associatum vivum).

2. Вакцина состоит из взвеси живых спор бескапсульной слабовирулентной культуры сибиреязвенного штамма 55-ВНИИВВиМ и живой культуры вакцинного штамма 2/ 14 возбудителя эмфизематозного карбункула с добавлением геля гидрата окиси алюминия.

3. Вакцина по внешнему виду представляет собой суспензию светло-желтого цвета, расслаивающуюся при хранении на желтоватую прозрачную жидкость и ссровато-белый осадок, при взбалтывании разбивающийся в гомогенную взвесь.

4. Вакцина расфасована по 50, 100 или 200 см3 в стеклянные флаконы соответствующей вместимости, укупоренные резиновыми пробками, укреплёнными алюминиевыми колпачками.

Флаконы с вакциной упакованы в ящики из дерева, картона или других материалов. Внутрь каждого ящика вложено не менее пяти экземпляров инструкции по применению вакцины.

На: поверхности транспортной тары или на этикетке указаны: ооганизация-производитель, адрес и товарный знак, назавание вакцины, номер серии, срок годности (месяц, год), количество флаконов в ящике, надпись "Для животных"

Вакцину хранят в сухом темном месте и транспортируют при температуре от 2°С до 10°С.

Срок годности вакцины — 12 месяцев с даты изготовления.

5. Вакцину во флаконах без этикеток, с нарушением целостности и герметичности укупорки, содержащую посторонние примеси, плесень, неразвивающиеся хлопья, после замораживания, с истекшим сроком годности, не использованную в день вскрытия флакона, выбраковывают и обеззараживают кипячением в течение 2 ч.

Так же поступают с флаконами из-под вакцины.

II. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

6. Иммунитет против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула формируется у крупного рогатого скота через 10 сут. после однократной вакцинации и сохраняется у телят три месяца, у взрослых животных — не менее 12 месяцев.

7. Вакцина безвредна, умеренно реактогенна, не обладает лечебными свойствами.

III. ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ ВАКЦИНЫ

8. Вакшшу применяют для иммунизации крупного рогатого скота против сибирской язвы и .эмфизематозного карбункула в хозяйствах всех форм собственности и направления производственного использования животных.

9. Внеплановой однократной вакцинации подвергают всех животных, вновь поступивших в хозяйство. В общее стадо вакцинированных животных допускают не ранее чем через 14 сут.

В случае заболевания животных сибирской язвой или эмфизематозным карбункулом вынужденной вакцинации подвергают всё поголовье крупного рогатого скота, имевшее прямой или косвенный контакт с больным животным, независимо от времени года и сроков ^предыдущей иммунизации.

10. Вакциниоуют только клинически здоровых животных.

Вакцину вводят подкожнов области задней трети шеи в дозах: телятам в возрасте от 3 до 6 месяцев - 1,0 см3 , жипотиым в возрасте 6 месяцев и старше - 2,0 см3.

Повоторно животных вакцинируют через 3 месяца, ревакцинируют ежегодно однократно. В процессе работы флакон с вакциной встряхивают.

В течение 10 сут. после вакцинации за животными устанавливают ветеринарное наблюдение, не допуская переохлаждения, перегревании, утомительных перегонов.

- применять вакцину одновременно с другими биологическими лекарственнымисредствами;

- обрабатывать животных в течение 10 суток до и после вакцинации антибиотиками, антительминтиками, инсектоакарицидами;

- вакцпипровать телят, не достигших трехмесячного возраста;

- вакцинировать животных в жаркое и холодное время года

- вакцинировать животных с повышенной температурой тела, слабых, истощенных, в последний месяц беременности, а также в течение 7-10 сутокпосле хирургических операций и отела

- проводить вакцинацию животных, имеющих признаки острых инфекционных болезней (на таких животных составляют опись с указанием причины, из-за которой они небыли вакцинированы, и возможного срока иммунизации).

12. При проведении вакцинации соблюдают правила асептики и антисептики. Место введения дезинфи цируют 70%-ным раствором этилового спирта. Шприцы и иглы стерилизую кипячением в 2-% растворе кальцинированной содыперед началом и после окончания работы в течение 2 ч.

13. На месте введения вакцины у отдельных животных возможно формирование незначительной припухлости, исчезающей через 2-3 сут. В случае возникновения у животных поствакцинальпых осложнений (общее угнетение, повышение температуры, обширные нерассасывающиеся отеки) их выделяют из стада и лечат противосибиреязвенной сывороткой, глобулином и антибиотиками.

14. Молоко от вакцинированных животных используют без ограничений, за исключением случаев, когда у них возникают поствакцинальиые осложнения. В этих случаях молоко разрешается использовать только после кипячения в качестве корма для животных.

Убой животных на мясо разрешается не ранее чем через10 суток после введения вакцины. В случае гибели животного до истечения 10 сут. после вакцннации труп сжигают) При вынужденном убое животного до истечения 10 сут. после вакцинации мясо направляют на термическую промышленную переработку.

Экспертизу мяса и боенских продуктов проводят в соответствии с действующими правилами ветеринарного осмотра убойных; животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов,

IV. МЕРЫ ЛИЧНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ

15. При проведении вакциниции необходимо соблюдать правила личной гигиены и техники безопасности предусмотренные при работе с лекарственными средствами для животных.

Не допускаются до работы по вакцинации животных против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула лица имеющие на открытых участках тела царапины, ссадины, ранения или другие повреждении

16 При попадании вакцины на слизистые оболочки их необходимо тщательно промыть большим количеством водопроводной поды, участки кожи моют водой с мылом и обеззараживают 70%-ным раствором этилового спирта

17 При случайной инъекции вакцины человеку необходимо немедленно обратиться в медицинское учреждение и сообщить об этом врачу.

18. При попадании вакцины на объекты окружающей среды, загрязненные места немедленно обеззараживают горячим 10%-ным раствором едкого натра.

19. Вакцину следует хранить в недоступном для детей месте.

Инструкция разрафтаиа ФГУП "Орловская биофабрика" 302501, Орловская обл., Орловский р-н, пос. Биофабрика

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Разработка и испытание живой ассоциированной вакцины против Сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГЛАВНОЕ УПРАВЛЕНИЕ ВЕТЕРИНАРИИ

ВСЕРОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬС.-ИЙ ИНСТИТУТ КОНТРОЛЯ, СТАНДАРТИЗАЦИИ И СЕРТИФИКАЦИИ ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРЕПАРАТОВ

РАЗРАБОТКА И ИСПЫТАНИЕ ЯИВОЙ АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И ЭМФИЗЕМАТОЗНОГО МРБУННУЛА КРУПНОГО РОГАТОГО

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология.

На правах рукописи

ПЛЕСКИХ Сергей Александрович

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Работа выполнена в лаборатории контроля и стандартизации препаратов против анаэробных инфекций и лаборатории контроля и стандартизации препаратов против сибирской язвы и листериоза животных Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов, а также в лаборатории бактериологии Всесоюзного научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии.

Научные руководители - доктор ветеринарных наук,

академик ВАСХНИЛ, доктор ветеринарных наук, профессор И.А.Бакулов

Официальные оппоненты - доктор ветеринарных наук,

профессор М'.А.Сидоров (ШПБ)

доктор ветеринарных наук,

Ведущая организация - Всесоюзный научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности.

Защита состоится "¿■■с/ " ✓¿¿У/-? 1992 г. в "/i " час. на заседании специализированного совета Д. 120.85.01 при Всероссийском государственном научно-исследовательском институте "контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) Главного управления ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации по адресу: 123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5, ВГНКИ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВГНКИ ветпре-паратов.

-) / "" Автореферат разослан " t>f " ¿¿-v,у . 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета

кандидат ветеринарных наук Ю.А.Козырев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Инфекционные болезни животных, включая и такие, в целом хорошо изученные, как сибирская язва и эмфизематозный карбункул крупного рогатого скота', все еще продолжают наносить определенный, а в отдельных случаях достаточно ощутимый ущерб народно^ хозяйству страны, тем более, что в современных условиях промышленного животноводства риск возникновения указанных инфекций увеличивается пропорционально концентрации животных на пастбищных участках.

Совершенствование методов и средств специфической профилактики инфекционных болезней и, в частности, разработка ассоциированных иммунизирующих препаратов является актуальной задачей, имеющей как научную, так и практическую значимость. Применение ассоциированных вакцин позволяет создавать у привитых животных иммунитет одновременно против двух или нескольких инфекций, что приводит не только к существенному снижению затрат труда ветеринарных специалистов, но и позволяет в более короткие сроки создавать стойкое благополучие поголовья по отношению к инфекционным болезням микробной и вирусной этиологии.

О высоком экономическом эффекте при применении различных ассоциированных препаратов сообщает ряд исследователей - К.И.Одарен-ко и Б.К.Ильясов, В.И.Грязин, Л.Д.Панкратов, Р.А.Кадымов, Б.Г.Трух-манов и другие.

Тем не менее, из всех биопрепаратов, применяемых в настоящее время в ветеринарии, ассоциированные составляют менее 10 процентов.

О важности затронутого нами вопроса говорит и то обстоятельство, что проблеме конструирования и применения ассоциированных вакцин неоднократно посвящались международные симпозиумы, состоявшиеся в СССР (1958), Швейцарии (1967), Югославии (1972) и других странах.

В нашей стране все поголовье крупного рогатого скота, начиная с трехмесячного возраста,ежегодно вакцинируют против антракса, а в возрасте от трех месяцев и до четырех лет - против эмфиземато:--ного карбункула.

В последние годы в нашей стране, с целью специфической профилактики сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота, применяют две ассоциированные вакцины. Одна из них, разработанная специалистами Казахского НИВИ (Горелов Ю.М., Одаренно К.И., 1990) содержит формалинизированную культуру вирулентного штамма эмфизематозного карбункула и живую культуру вакцинного сибиреязвенного штамма СТИ-1. Другая вакцина, промышленное производство которой начато в 1988 году, создана 'во Всесоюзном государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов на основе двух живых микробных агентов - аттенуированных вакцинных штаммов 2/14 - эмфизематозного карбункула и СТИ-1 сибирской язвы. Благодаря использованию живой культуры штамма 2/14, обладающей низко? остаточной вирулентностью и значительно превосходящей по иммуноген-ности инактивированную формалином культуру вирулентного штамма сЮ-stridium ciiauvooi эта ассоциированная вакцина является существенно более эффективной, так как создаваемый ею у крупного рогатого скота иммунитет против эмкара наступает в более ранние сроки и „сохраняется дольше, чем при использовании ассоциированной вакцины, изготовленной на основе убитого компонента. Кроме того, при изго- ■ товлении живого препарата не нужно проводить нейтрализацию остаточного формалина, что существенно упрощает технологический процесс изготовления вакцины. Присутствие формалина даже в незначительных количествах оказывает губительное действие на жизнеспособность сибиреязвенных спор.

Известные бивалентные вакцины указанного назначения во всех странах готовят на основе убитых антигенов эмфизематозного карбун-

кула, поэтому они обладают теми же недостатками, что и отечественный аналог препарата.

В СССР с 1988 года для профилактики сибирской язвы животных, применяют живую вакцину из аттенуированного бескапсульного штамма 55, созданную во Всесоюзном научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии. Вакцинный сибиреязвенный штамм 55 обладает более широким иммунологическим спектром, умеренно реактогенен, а приготовленная на его основе вакцина создает у привитых животных более напряженный и более продолжительный иммунитет против антракса, чем применяющаяся с 1942 года вакцина из штамма СТИ-1. Благодаря большей иммуногенности противосибиреязвенной вакцины, изготовленной на основе штамма 55, оказалось возможным принципиально изменить схему применения препарата и прививать животных один раз в год, вместо двукратной вакцинации предусмотренной при использовании вакцины из штамма СТИ-1.

Цель и задачи исследований. Изучить иммунологическую совместимость вакцинных штаммов вас. апШгас1з ' 55 и с1- с!1аиуое1 2/14, разработать методику приготовления и изучить свойства живой ассоциированной вакцины против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота.

Для проведения экспериментов были использованы морские свинки, кролики и крупный рогатый скот.

В ходе исследований для разрешения были поставлены следующие задачи:

1. Изучить совместимость вакцинных штаммов Вас. ап^гас1з 55 и С1. с]пашгое1 2/14.

2. Подобрать иммунологически сбалансированное соотношение сибиреязвенного компонента и антигена эмфизематозного карбункула при сведении их в одной прививочной дозе препарата.

3. Установить сроки формирования иммунитета против сибирской члвы и эмфизематозного карбункула у лабораторных животных привитых

живой ассоциированной вакциной из сибиреязвенного штамма 55 и штамма 2/14, в сравнении с монопрепаратами изготовленными по аналогичной методике из этих же штаммов.

4. Определить длительность персистирования, локализации и сроки элиминации вакцинных штаммов вас. anthracis 55 и el. chauroei 2/14 в организме морских свинок,иммунизированных ассоциированной вакциной, в сравнении с группами животных, привитых указанными антигенами раздельно.

5. Изучить продолжительность и напряженность иммунитета против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула в опытах на крупном рогатом скоте, вакцинированном живым ассоциированным препаратом из штаммов вас. anthracis 55 и el.chauvoei '2/14.

6. Определить уровень образования сибиреязвенных гемагглютини-нов в сыворотке'крови крупного рогатого скота, иммунизированного живой ассоциированной вакциной против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула через различные сроки после вакцинации.

7. Изготовить опытно-лабораторную серию живой ассоциированной вакцины против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула из штаммов вас.anthracis 55 и el. chauvoei 2/14 и испытать ее на крупном рогатом скоте в производственных условиях.

8. Изучить жизнеспособность штаммов и иммуногенные свойства образцов живой ассоциированной вакцины против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула в сравнении с монопрепаратами в процессе . длительного хранения.

9. Подготовить проект временной НТД на опытно-проМышленную серию живой ассоциированной вакцины против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота из штаммов Вас.anthracis 55 и Cl. chauvoei 2/14.

Научная новизна. Впервые получены результаты по изучению основных параметров ассоциированной вакцины против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота из штаммов Bac.anth-

гас!з 55 и с1. с11аиуое1 2/14 (оптимальное соотношение компонентов; сроки формирования иммунитета; длительность персистирования, локализации и элиминации штаммов; продолжительность и напряженность иммунитета).

Практическая значимость. Разработан способ приготовления и схема применения живой ассоциированной вакцины против сибирской язвы и эмкара из аттенуированных вакцинных штаммов 55 и 2/24. На указанный препарат разработаны проекты временных НТД: инструкция по изготовлению и контролю, технические условия изготовления, наставление по применению.

Апробация и внедрение. Основные материалы диссертации доложены на конференции молодых ученых БИЭВ" ВАСХНИЛ (1989 г.); на двенадцатой (1990 г.) конференции молодых ученых ВГНКИ ветпрэпаратов; на тринадцатом Пленарном заседании Межведомственной научно-методической комиссии по борьбе с сибирской язвой, Государственной комиссии по продовольствию и закупкам Совета Министров СССР и Министерства здравоохранения СССР (1990 г.); на межлабораторном совещании сотрудников ВГНКИ ветпрепаратов (1991 г.).

Живую ассоциированную вакцину против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота, изготовленную на основе аттенуированных вакцинных штаммов вас. ап-Шгас1з 55 и С1. оЬаи-уое1 2/14, испытывали в соответствии с приказом Главного управления ветеринарии СССР № 48 от 12.06.1989 г. в совхозе "Россия" и ОПХ "МИС" Петушинского района Владимирской области, которые являются неблагополучными по заболеваемости животных сибирской язвой и эмфизематозным карбункулом.

Главным, управлением ветеринарии СССР в 1991 г. утверждены: "Временная инструкция по изготовлению и контролю вакцины против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота живой ассоциированной"; "Временные технические условия

(ТУ 10.07.238-91) на вакцину живую ассоциированную и "Временное наставление по применению вакцины живой против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота живой ассоциированной".

Публикации. Основные положения диссертации изложены в четырех печатных работах.

Основные положения диссертационной работы выносящиеся на защиту.

1. Экспериментальное обоснование иммунологической совместимости и определение иммунологически сбалансированного соотношения вакцинных штаммов вас .ап-Шгасхз 55 и с1 .сЬашгоех 2/14, при сведении их в одной прививочной дозе.

2. Методика изготовления, контроля и применения живой ассоциированной вакцины против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота.

3. Экспериментальная работа по изучению свойств живой ассоциированной вакцины, изготовленной из аттенуированных. штаммов вас . ап1;11гас1з 55 и с1. сЬаиуое! 2/14.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста и включает в себя введение, обзор литерутры, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, список литературы. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 3 рисунками. Список использованной литературы содержит 203 источника, в том числе 68 иностранных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

В ходе проведенных исследований были использованы следующие виды животных: морские свинки - 1560, кролики - 9, крупный рогатый скот - 76 голов.

В опытах с заражением крупного рогатого скота использовали вирулентные штаммы Вас.ап1;11гас:1а "и 76" и С1-с11аилгоез.Р-15. При выполнении экспериментов использовали следующие вакцинные штаммы возбудителя сибирской язвы - 55, СЩ-1 и М-71; возбудителя эмкара -2/14.

Для культивирования производственных штаммов возбудителя эмфизематозного карбункула использовали мясопептонный печеночный бульон (МППБ) с кусочками печени под вазелиновым маслом. Для получения матровой расплодки и изготовления вакцины против эмфизематозного карбункула использовали питательную среду, изготовленную на основе перевара Хоттингера и печеночного экстракта с добавлением пептона Мартена. Типичность роста устанавливали путем высева культур с1-сЬаиуое1 на мясопептонный печеночный агар с добавлением глюкозы и дефибринированной крови барана, в чалшах Петри и культивированием в условиях анаэробиоза.

Для культивирования вакцинных и вирулентных штаммов вас .ап-№гас1з использовали 2%-й мясо-пептонный агар (МПА) и мясо-пептон-ный бульон - (МПБ).

Чистоту штаммов вас.ап-Шгасхз, с1. сЬаиуое! в отношении конта-минантов проверяли путем посева на среду Китт-Тароцци, МПБ, МПА и среду Сабуро.

В работе использовали следующее оборудование: микроскоп, тор-зионные весы типа В-802; потенциометр типа рН-340; термостат, холодильник, микрокалькулятор программируемый; микроанаэростат с вакуумным насосом; центрифуга с частотой вращения 10.000 об/мин.; водяную баню, шуттельаппарат.

Количество живых сибиреязвенных спор в культуре определяли путем посева последовательных десятикратных разведений культур вас. ап-ЬЬгасгз на плотные питательные среды.

Количество микробных тел в 1,0 см культур с1.сЬаиуое1 определяли по оптическому стандарту мутности ГИСп им. Тарасевича.

Кммуногенную активность ассоциированной вакцины по отношению к обеим инфекциям определяли по методике Спирмэна-Кербера, позволяющей расчитывать 50%-ю иммунизирующую дозу (ИмДзд). Расчеты по полученным результатам выполняли на программируемом калькуляторе по разработанной нами программе.

Определение титров противосибиреязвенных антител определяли в реакции непрямой гемагглютинации (РИГА). Для исследования использовали свежую неконсервируемую сыворотку крови вакцинированного ассоциированной вакциной крупного рогатого скота, лиофилизирован-ный эритроцитарный диагностикум, представляющий собой 2,5%-ю взвесь формалинизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных цитоплазменным антигеном возбудителя сибирской язвы.

В качестве положительного контроля применяли противосибире-язвенную лечебно-профилактическую сыворотку, в качестве отрицательного - нормальную сыворотку крови лошади. При дифференциации поствакцинальных антител от постинфекционных, использовали 2-меркапто-этанол.

Исследования по определению сроков хранения и пригодности живой ассоциированной вакцины против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота проводили с помощью метода оценки стабильности (устойчивости биологической активности препарата и составляющих его антигенов при длительном хранении) -тест термостабильности при повышенных температурах (тест "ускоренного старения"). Этот метод позволяет количественно оценить стабильность биопрепарата и прогнозировать сроки хранения в зависимости от температуры.

Расчеты по этой методике выполняли на программируемом калькуляторе по разработанной нами программе. В программе расчитываются: константа скорости инактивации, для каждой интересующей температуры, логарифм искомого значения активности биопрепарата при любой

интересующей температуре, в любое заданное время.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Определение совместимости вакцинных штаммов Вас. ап1;Ьгас1з 55 и cl.chau.voei 2/14 при сведении их в одной прививочной дозе

При создании живых ассоциированных препаратов необходимо учитывать явление бактериоциногении - одной из форм микробного антагонизма.

Так как возбудитель сибирской язвы выделяет антрацин, который подавляет рост некоторых микроорганизмов,прежде чем приступить к основной части работы мы определили совместимость вакцинных штаммов вас. ап-ЬЬгасхз 55 и С1. сЬаитое! 2/14. При этом №1 применяли метод отсроченного антагонизма.

В результате проведенной работы было установлено, что продукты жезнедеятельности как штамма Вас. ап1;1хгас1з 55, так и штамма С1 . сЬаотое1 2/14 не угнетают микробный рост друг друга.

3.2. Подбор оптимальной концентрации антигенов в ассоциированной вакцине

Важнейшей задачей при конструировании ассоциированных препаратов является подбор оптимальных (иммуногенно сбалансированных) соотношений антигенов, входящих в его состав.

Изготовление сибиреязвенного и эмкаровского компонентов проводили согласно действующих, в настоящее время, инструкций по изготовлению и контролю соответствующих моновакцин.

Работу по подбору оптимального соотношения микробных компонентов в вакцине проводили в два этапа.

На первом этапе определяли оптимальное число сибиреязвенных спор в ассоциированном препарате.

С этой целью изготовили 4 варианта ассоциированной вакцины с

постоянной концентрацией (10-8 млрд микробных тел в см С1. сЬаиуоех)

эмкаровского антигена И различными концентрациями (40, 20, 10 и

5 млн спор в см вас .ап«1гас1э ) сибиреязвенного антигена.

Далее делали по четыре разведения каждого варианта (шаг разведения 5). Каждый из приготовленных препаратов вводили подкожно

в объеме 0,5 см шести морским свинкам. Одну группу животных вакцинировали монопрепаратом из штамма 55 ВНИИЗВиМ (табл. I).

Через 10 суток после вакцинации всех привитых животных и шесть контрольных (не вакцинированных) морских свинок заражали стандартной заражающей споровой сибиреязвенной культурой шт. М-71 подкожно в дозе I млн спор. Через 10 суток после заражения учитывали результаты опыта и расчитывали ИмДзд по методу Спирмэна-Кер- > бера для испытуемых вариантов ассоциированной вакцины и монокультуры шт. 55-ВНИИВВиМ б^с .апгЬгас1з .

Вариант ассоциированной вакцины с концентрацией сибиреязвен-

ных спор - 20 млн в см избран в качестве основного для определения оптимального количества компонента эмкара, т.к. при этом варианте величина ИмД^ была наименьшей.

Приняв концентрацию .20 млн сибиреязвенных спор в см , как основную, было изготовлено 4 варианта ассоциированной вакцины с содержанием антигена эмкара в количестве 10; 5; 2,5; 1,25 млрд м.т.

Images

Abstract

Description

Изобретение относится к ветеринарии, в частности, к производству и применению биологических препаратов для вакцинации сельскохозяйственных животных и предназначается для одновременной специфической профилактики сибирской язвы и эмфизематозного карбункула (эмкара).

Известна живая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула, представляющая собой смесь споровой культуры авирулентного штамма Bac. anthracis 55-ВНИИВВиМ и клеток вакцинного штамма Cl. chauvoei 2/14 [1] . Вакцина содержит в своем составе 20 млн/см 3 сибиреязвенных спор и 1-2 млрд/см 3 микробных клеток эмфизематозного карбункула. Продолжительность иммунитета к сибирской язве и эмкару у крупного рогатого скота (КРС), привитого ассоциированной вакциной, составляет 12 месяцев.

Недостатком данной вакцины является небольшая продолжительность иммунитета у привитых животных как к сибирской язве, так и к эмкару (12 месяцев).

Предлагаемая живая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и эмкара устраняет этот недостаток за счет более высокого содержания обоих компонентов.

Цель изобретения - изготовление ассоциированной вакцины против сибирской язвы и эмкара, обладающей высокой иммуногенностью, ареактогенностью, безвредностью, создающей более длительный и напряженный иммунитет к сибирской язве и эмкару, и способ профилактики этих заболеваний.

Цель достигается использованием более высокого содержания спор сибиреязвенного авирулентного штамма 55-ВНИИВВиМ и клеток вакцинного штамма эмфизематозного карбункула 2/14 в составе живой ассоциированной вакцины против сибирской язвы и эмкара.

В результате проведенных экспериментов установлено, что предлагаемая живая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и эмкара, изготовленная из штаммов Bac. anthracis 55-ВНИИВВиМ и Cl.chauvoei 2/14. создает у однократно привитых животных более напряженный и длительный иммунитет к обеим инфекциям, чем известная.

Показано (табл. 1), что увеличение по сравнению с прототипом содержания сибиреязвенных спор в ассоциированной вакцине до 2,0•10 7 - 2,5•10 7 в 1 см 3 , позволяет создать у крупного рогатого скота иммунитет к сибирской язве продолжительностью 18 месяцев (срок наблюдения).

Так, через 18 месяцев после иммунизации известной ассоциированной вакциной (прототип) выживаемость животных после заражения вирулентным штаммом N 76 сибирской язвы составляла 80%, тогда как при вакцинации предлагаемой вакциной этот показатель равнялся 100%. Все непривитые животные пали после заражения сибирской язвой.

Увеличение содержания клеток клостридий в ассоциированной вакцине до 2,0 - 2,1•10 9 в 1 см 3 создает более длительный и напряженный иммунитет к эмкару (табл. 2).

Выживаемость привитых животных при заражении вирулентным штаммом R-15 возбудителя эмкара через 18 месяцев составила 60% при иммунизации известной вакциной, 100% при иммунизации предлагаемой вакциной. Все непривитые животные пали после заражения эмкаром.

Предлагаемая ассоциированная вакцина ареактогенна и безвредна для КРС, кроликов и морских свинок и создает более длительный и напряженный иммунитет к эмкару и сибирской язве по сравнению с прототипом.

Для подтверждения иммуногенности и ареактогенности новой ассоциированной вакцины против сибирской язвы и эмкара в трех хозяйствах Владимирской и Московской областей были вакцинированы 320 голов крупного рогатого скота. Поствакциональных осложнений не отмечали ни у одного животного. После заражения крупного рогатого скота через 18 месяцев вирулентным штаммом N 76 сибирской язвы из 10 привитых ассоциированных вакциной животных выжили 10, при заражении вирулентной культурой R-15 возбудителя эмкара выживаемость также составила 100%. Все непривитые животные (контроль) пали после заражения сибирской язвой (6 из 6 зараженных), так же, как и после заражения эмкаром (10 из 10 зараженных животных). Полученные результаты подтверждены актом комиссионных испытаний.

Следовательно, предлагаемая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и эмкара является иммуногенным препаратом, способным защищать животных одновременно от сибирской язвы и эмкара, и по напряженности и длительности иммунитета превосходит ранее известную. Предлагаемая живая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и эмкара из штаммов 55-ВНИИВВиМ и 2/14 безвредна, ареактогенна, создает напряженный иммунитет у крупного рогатого скота продолжительностью 18 месяцев (срок наблюдения).

Для профилактики сибирской язвы и эмкара у животных ассоциированную вакцину вводят подкожно в области средней трети шеи в дозе 1,0 - 1,1 см 3 - телятам в возрасте от 3 до 6 месяцев, животным старше 6 месяцев - в дозе 2,0 - 2,1 см 3 .

Использование ассоциированной вакцины в ветеринарной практике дает возможность сократить число профилактических прививок и тем самым уменьшить уровень стрессового воздействия на организм животных, а также снизить себестоимость и трудоемкость вакцинации сельскохозяйственных животных.

Пример 1. Живую ассоциированную вакцину против сибирской язвы и эмкара готовили следующим образом: к 96 см 3 суспензии клеток вакцинного штамма Cl. chauvoei 2/14 с концентрацией 2,1•10 9 клеток в 1 см 3 добавляют 1,0 см 3 спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией 2,5•10 9 спор в 1 см 3 и доводят объем физиологическим раствором до 100 см 3 . Смесь тщательно перемешивают.

Вакцина представляет собой однородную жидкость желтовато-серого цвета, при хранении на дне флакона образуется рыхлый осадок, который при встряхивании превращается в однородную взвесь.

Пример 2. Живую ассоциированную вакцину против сибирской язвы и эмкара применяют для профилактики и вынужденных прививок клинически здоровых животных старше 3 месяцев. Препарат вводят подкожно в области средней трети шеи телятам в возрасте от 3 до 6 месяцев - в дозе 1,0 см 3 , старше 6 месяцев - 2,0 см 3 .

Читайте также:

Вакцина против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула ассоциированная живая

Links

Images

Abstract

Description