Бактериофаг против сальмонеллеза энтеритидис кур

Получены данные об эффективности бактериофага S-394 относительно штаммов Salmonella в экспериментах на цыплятах, что обуславливает возможность его применения для лечения и профилактики сальмонеллезов птиц. Выявлены различия в концентрации бактериофага, выделенного из органов цыплят через 20 часов после выпаивания фага.

Ключевые слова: бактериофаг, сальмонелла, птицеводство, фаготерапия.

Введение. Развитие птицеводческой промышленности неизбежно сопровождается концентрацией поголовья птицы и увеличением заболеваемости инфекционными болезнями, в том числе и сальмонеллезом. Сальмонеллез птиц наносит значительный экономический ущерб, который слагается из снижения яйценоскости кур, количества оплодотворенных яиц, высокой летальности эмбрионов, потери привесов молодняка, значительных затрат на диагностические и лечебно-профилактические мероприятия [1]. Известно, что основными возбудителями сальмонеллеза птиц являются Salmonella enteritidis [7] и Salmonella typhimurium [3, 8]. Однако спектр возбудителей в разных хозяйствах может изменяться. Преобладание тех или иных штаммов определяется различными путями заноса инфекции, например с кормом.

В последние годы сальмонеллы приобретают лекарственную устойчивость ко многим антибиотикам [4]. Антибиотикообработки также не позволяют избавить птицу от сальмоносительства, не способны профилактировать и ликвидировать инфекцию, а предотвращают лишь массовое клиническое проявление заболевания [5]. Кроме нанесения ущерба птицеводческой отрасли, сальмонеллез имеет большую социальную значимость — увеличивается эпидемиологическая роль таких продуктов питания, как мясо кур и яйца.

Широкое распространение среди людей и животных, отсутствие тенденции к снижению заболеваемости в большинстве стран мира, увеличение инфицированности сальмонеллами различных объектов среды показывает необходимость поиска новых эффективных мер борьбы с заболеванием [2, 6]. Таким образом, изучение возможности применения бактериофагов для лечения сальмонеллеза является актуальной задачей экологии человека.

Цель исследования: оценка эффективности использования бактериофага S-394 для профилактики и лечения сальмонеллезов птиц.

В работе были использованы коллекционные штаммы бактерий Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis, Shigella sonnei, Escherichia coli. Также был использован штамм Salmonella sp. 1, выделенный в ходе санитарных мероприятий на птицефабрике.

Органы цыплят были предоставлены С. В. Леоновым в рамках договора о творческом сотрудничестве с Институтом экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока академии сельскохозяйственных наук.

В работе использовали следующие питательные среды и растворы: рыбно-пептонный плотный агар, верхний мягкий агар, висмут-сульфитный агар, LB-агар, хлороформ, физиологический раствор, раствор глюкозы 40 %, одномолярный раствор MgSO₄.

Биологические свойства бактериофага изучали стандартными методами. Фаголизат получали путем заражения фагом бактериальной культуры, находящейся в логарифмической фазе роста. Определение литической активности проводили микрометодом. Антибиотикорезистентность определяли диско-диффузионным методом.

Результаты исследования и их обсуждение. В ходе санитарных мероприятий на птицефабрике был выделен штамм Salmonella sp. 1. Нами был проведен поиск бактериофага, активного в отношении данного штамма. Для этого изучали спектр литической активности коллекционных бактериофагов, лизирующих сальмонеллы. По сравнению с бактериофагами PS-2, SS-2, PS-465, № 1 и DS-1 фаг S-394 показал более широкий спектр литической активности как в отношении сальмонелл, так и в отношении штаммов E. coli и Shigella.

Среди сальмонелл бактериофаг S-394 лизировал не только штамм Salmonella sp. 1, используемый в нашей работе, но и штаммы S . typhimurium и S. enteritidis, являющиеся основными возбудителями сальмонеллеза. Необходимо отметить, что высокий урожай бактериофага S-394 можно получать на условно патогенных штаммах Escherichia coli, что безопасно при масштабных культивированиях для создания препаратов на основе этого бактериофага для ветеринарии против Escherichia coli, Salmonella, Shigella, а также для уничтожения и предотвращения больничных инфекций. Таким образом, для нашего исследования был выбран именно бактериофаг S-394.

Для определения морфологии негативных колоний высевали исследуемый бактериофаг на чашки Петри с газоном бактериальной культуры E. coli. Было показано, что бактериофаг S-394 образует округлые с ровным краем, прозрачные, светлые, четкие негативные колонии одного типа диаметром от 0,1 до 0,2 см. Таким образом, можно сделать вывод о том, что данный бактериофаг является вирулентным и приводит к быстрой гибели зараженной клетки.

Изучение антибиотикорезистентности штамма Salmonella sp . 1 показало, что к 9-ти из 20-ти антибиотиков исследуемый штамм проявил чувствительность. Однако в отношении остальных 11-ти антибиотиков не было отмечено ингибирования роста микроорганизма. Данный штамм оказался полирезистентным по отношению к традиционно применяемым для лечения сальмонеллеза животных и человека антибиотикам, таким как хлорамфеникол, линкомицин, энрофлоксацин и др.

Полученный фаголизат вводился трехсуточным цыплятам методом выпаивания. Каждому птенцу было введено по 1 мл препарата с концентрацией 10 8 фаговых частиц/мл. Первая группа цыплят получала только бактериофаг, а вторая предварительно была заражена культурой Salmonella sp. 1 с титром 10 8 КОЕ/мл. Через определенный промежуток времени (2, 4, 6, 8, 20 часов) производился забой птицы, и у каждого цыпленка были извлечены такие внутренние органы как селезенка, печень и кишечник для дальнейшего исследования. Опыт проводился в двух повторностях.

Затем определяли присутствие бактериофага и его количественное содержание в органах всех цыплят. Для этого каждый орган помещали в пробирку с физиологическим раствором и измельчали. Полученную суспензию в каждой пробирке обрабатывали хлороформом и высевали на газоны культуры Salmonella sp. 1, инкубировали в термостате 24 часа и проводили учет результатов.

Группа цыплят, получавших только бактериофаг (контроль). До 20 часов наблюдали присутствие фага в кишечнике, причем наибольшие концентрации — в течение первых 2, 4 часов: от 10 3 до 10 4 БОЕ на 1 г ткани. Также отмечали незначительные количества фага в ткани селезенки у цыплят, забой которых происходил через 4 часа после выпаивания фага. Можно предположить, что проникновение фага в ткани цыплят уже через 2 часа обусловлено его малыми размерами (75–80 нм). Такая скорость распределения является преимуществом для применения бактериофага в терапевтических целях. В течение 20 часов наблюдалось понижение концентрации бактериофага. К 20 часам его концентрация составляла 2 × 10 3 БОЕ/г (см. рис.). Это можно объяснить тем, что для размножения фагу необходима чувствительная к нему бактериальная культура. Отсутствие таковой среди микрофлоры желудочно-кишечного тракта, в печени и селезенке не позволяет ему размножаться и обуславливает снижение концентрации. Так, фаговые частицы разрушаются и постепенно выводятся из организма.

Группа цыплят, зараженная культурой Salmonella sp. 1 и получавшая бактериофаг в качестве лечения. В течение первых часов в исследуемых тканях бактериофаг количественно не определялся. Незначительные количества присутствовали в двухчасовых пробах (кишечник и печень одного цыпленка), бактериофаг выявлен после обогащения пробы. Также из четырехчасовых проб удалось накопить бактериофаг из кишечника второго цыпленка. Однако количественный анализ данных проб не показал присутствия значительных количеств фага. Через 6 часов из кишечника одного цыпленка был выделен фаг в концентрации 3,1 × 10 2 БОЕ на 1 г ткани, что является сравнительно небольшим количеством. Так, в шестичасовых пробах с выпаиванием бактериофага без предварительного заражения культурой концентрация фага достигала 10 3 БОЕ/г. Однако, к 20 часам концентрация фага во всех органах обоих цыплят увеличилась до 10 3 ‒10 4 БОЕ на 1 г ткани (см. рис.). При этом наибольшие количества наблюдаются в печени и кишечнике. Возможно, такой характер динамики определяется тем, что в первые часы фаг находится в латентном периоде взаимодействия с бактериальной клеткой, а затем происходит лизис клеток и выход фаговых частиц.

Выделение бактериофага из проб с печенью и селезенкой цыплят через 20 часов после введения им препарата может свидетельствовать о том, что исследуемый бактериофаг сохраняет способность к размножению не только в желудочно-кишечном тракте, но и в других внутренних органах и тканях.

Концентрация бактериофага, выделенного из органов цыплят через 20 часов после выпаивания фага

Выводы. Изучены биологические свойства бактериофага S-394 (литическая активность, спектр литического действия, морфология негативных колоний). Установлена высокая антибиотикоустойчивость культуры Salmonella sp. 1. Выявлено, что в органах цыплят бактериофаг распределяется преимущественно в кишечнике. При отсутствии специфичных бактериальных клеток через 20 часов бактериофаг практически полностью выводится из организма. При наличии в организме чувствительной к нему культуры Salmonella sp. 1 происходит активный лизис бактериальных клеток и увеличение концентрации бактериофага, что обуславливает возможность его практического применения для лечения сальмонеллеза птиц.

Борисенкова А. Н. Система контроля бактериальных болезней: научное издание / А. Н. Борисенкова // Птицеводство. — 2004. — № 8. — С. 13–16.
Ванханен В. В. Сальмонеллез — эпидемиология и профилактика (научно-практическое издание) / В. В. Ванханен, В. Д. Ванханен, А. Д. Усенко ; под ред. Ванханена В. Д. — Донецк, 2003. — 48 с.
Осидзе Д. Ф. Инфекционные болезни животных: справочник / Ю. Ф. Борисович, Л. В. Кирилов. Под ред. Д. Ф. Осидзе. — М.: Агропромиздат, 1987. — 287 с.
Пименов Н. В. Антибиотикорезистентность сальмонелл, выделенных у домашних голубей / Н. В. Пименов, Н. В. Данилевская // Ветеринария. — 2006. — № 9. — С. 20–24.
Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур / А. Н. Куриленко [и др.]. — М. : МСХ / МГАВМиБ, 2002. — 34 с.
Рожнова С. Ш. Сальмонеллезы : проблемы и решения / С. Ш. Рожнова // Эпидемиология и инфекц. болезни. — 1999. — № 2. — С. 39–41.
Chung Y. H. Prevalence and antibiotic susceptibility of Salmonella isolated from foods in Korea from 1993 to 2001 / Y. H. Chung, S. Y. Kim, Y. H. Chang // Journal of Food Protection. — 2003. — Vol. 66, N 7. — P. 1154–1157.
Flensburg J. Programs to control or eradicate Salmonella in animal production in Denmark / J. Flensburg // Acta Veterinaria Scandinavia. — 1999. — N 91. — P. 51–58.

Государственная лицензия ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России
на образовательную деятельность:
серия ААА № 001052 (регистрационный № 1029) от 29 марта 2011 года,
выдана Федеральной службой по надзору в сфере образования и науки бессрочно

Свидетельство о государственной аккредитации ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России:
серия 90А01 № 0000997 (регистрационный № 935) от 31 марта 2014 года
выдано Федеральной службой по надзору в сфере образования и науки
на срок по 31 марта 2020 года

Адрес редакции: 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52
тел./факс: (383) 229-10-82, адрес электронной почты: mos@ngmu.ru

Средство массовой информации зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) —
Свидетельство о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-72398 от 28.02.2018.

08.02.2016
Уважаемые авторы! Открыт прием статей во 2-й номер 2016 года (выход номера — середина мая 2016 г.).
Подробнее >>

11.01.2016
Уважаемые авторы! Продолжается прием статей в 1-й номер 2016 года (выход номера — конец февраля 2016 г.).
Подробнее >>

28.12.2015
Уважаемые авторы! Сетевое издание входило в Перечень ВАК до 30 ноября 2015 г. Работа по включению издания в новый Перечень ВАК продолжается.
Информация о формировании Перечня ВАК
Подробнее >>

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Плешакова Валентина Ивановна, Степанов Денис Николаевич, Золотова Наталья Сергеевна

Работа посвящена сравнительной оценке эффективности использования бактериофага и серебросодержащего препарата при лечении сальмонеллеза кур. В ходе исследований авторами установлено, что применение препарата серебра и бактериофага является самым эффективным способом лечения сальмонеллеза кур, так как были отмечены выздоровление на 7 суток раньше и больший прирост живой массы.

Treatment and prevention of salmonellosis chickens

The work is devoted to a comparative evaluation of the effectiveness of drug use and drug bacteriophage silver in the treatment of salmonellosis chickens. In the course of the studies, the authors found that use of the drug silver + bacteriophage is the most effective way to treat salmonellosis chickens, as noted earlier recovery and the greatest increase in body weight.

ВЕТЕРИНАРНЫЕ НА УКИ

В.И. Плешакова, Д.Н. Степанов, Н.С. Золотова

ЛЕЧЕНИЕ И ПРОФИЛАКТИКА САЛЬМОНЕЛЛЕЗА КУР

Работа посвящена сравнительной оценке эффективности использования бактериофага и серебросодер-жащего препарата при лечении сальмонеллеза кур. В ходе исследований авторами установлено, что применение препарата серебра и бактериофага является самым эффективным способом лечения сальмонеллеза кур, так как были отмечены выздоровление на 7 суток раньше и больший прирост живой массы.

Ключевые слова: цыплята-бройлеры, сальмонеллез, бактериофаги, микрофлора, производственные показатели.

Среди бактериальных инфекций птиц регистрируются сальмонеллезы, основным возбудителем которых является Salmonella enteritidis. Сальмонеллез кур наносит не только значительный экономический ущерб, который слагается из снижения яйценоскости кур, количества оплодотворенных яиц, высокой летальности эмбрионов, потери привесов молодняка, значительных затрат на диагностические и лечебно-профилактические мероприятия, но и имеет большую социальную значимость - увеличивается эпидемиологическая роль таких продуктов питания, как мясо кур и яйца [1].

В настоящее время для лечения и профилактики сальмонеллеза применяют комплексные антибактериальные препараты, в состав которых входят разные группы действующих веществ. Антибиотики и химиотерапевтические средства не всегда дают желаемые результаты [2; 3]. В связи с тем, что сальмонеллы обладают устойчивостью ко многим антибиотикам, ВОЗ не рекомендует использовать антибиотики в борьбе с инфекцией [4; 5]. Широкое распространение среди людей и животных, отсутствие тенденции к снижению заболеваемости в большинстве стран мира, увеличение инфицированности сальмонеллами различных объектов внешней среды показывают необходимость поиска новых эффективных мер борьбы с заболеванием [7; 8]. Одним из путей решения проблемы сальмонеллеза является использование бактериофагов.

Цель исследования - сравнительная оценка эффективности использования бактериофага и препарата серебра при лечении сальмонеллеза кур.

Объекты и методы

цией фага 109 PFU/мл. На базе той же организации был изготовлен экспериментальный образец серебросодержащего препарата для применения в опыте.

Цыплята-бройлеры были завезены из птицеводческого хозяйства в возрасте 7 суток и содержались напольно, в 4 клетках (рис. 1). Птицу кормили комбикормом ПК-2 для цыплят-бройлеров, доступ к воде был не ограничен. До начала эксперимента вся птица была клинически здорова.

Рис. 1. Напольное содержание в клетках цыплят-бройлеров кросса Ross 308, 10 сут.

Заражение птицы проводили в 10-суточном возрасте суточной бульонной культурой Salmonella enteritidis, перорально, однократно, в дозе 1 • 109 м. к.

Рис. 2. Индивидуальное пероральное выпаивание препарата серебра цыпленку, 12 сут.

С лечебной целью цыплятам первой опытной группы выпаивали бактериофаг, второй -препарат серебра, третьей - бактериофаг в сочетании с серебросодержащим препаратом (по 0,5 мл). Препараты вводили индивидуально, перорально, в дозе 1 мл на голову каждые 12 часов первые 1-3 сутки (рис. 2). Затем препараты вводили каждые 48 часов до выздоровления.

Результаты исследования При клиническом осмотре на вторые сутки после заражения у 63% птиц всех опытных групп отмечали вялость, снижение аппетита, жажду, расстройство пищеварения в виде диареи. Были проведены бактериологические исследования клоакальных смывов, в первой группе была выделена исходная культура у шести цыплят, при этом у трех монокультура и у трех в ассоциации с E. coli; во второй группе - у семи цыплят выделена S. еnteritidis, в том числе у пяти монокультура и у двух в ассоциации с E. coli. В третьей - у шести цыплят вы-

делена монокультура S. enteritidis. По результатам бактериологических исследований клоакальных смывов на 4-е сутки после заражения во всех группах отмечали выделение сальмонелл. Так, в первой опытной группе у семи цыплят была выделена монокультура S. enteritidis и у трех в ассоциации S. enteritidis + E. coli, во второй - у семи цыплят монокультура и у двух цыплят в ассоциации S. enteritidis + E. coli, в третьей - у восьми цыплят монокультура S. enteritidis и у двух в ассоциации S. enteritidis + E. coli. На 11 сутки после заражения монокультуру S. enteritidis выделяли в первой опытной группе у двух цыплят, во второй опытной группе у одного цыпленка. В третьей группе спустя 11-х суток после заражения в клоакальных смывах сальмонеллы не выделяли, только E. coli, Citr. freundii.

В 4-й контрольной группе на всем протяжении эксперимента из клоакальных смывов выделялись только санитарно-показательные микроорганизмы.

За все время эксперимента было выделено 143 изолята. Из них в первой группе S. enteritidis - 37%, E. coli - 43%, Pr. vulgaris - 10%, Citr. freundii - 10%, во второй группе -S. enteritidis - 34%, E. coli - 38%, Pr. vulgaris - 19%, Citr. freundii - 9%, в третьей группе -S. enteritidis - 41%, E. coli - 46%, Citr. freundii - 13%. Результаты бактериологических исследований отражены в таблице.

Результаты бактериологических исследований клоакальных смывов

Гр. № 12 сут. 14 cyr. 21 сут. 28 сут. 35 cyr. 42 cyr. 49 cyr. 51 сут.

Бактериофаг 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 S. ent. S. ent. S. ent. + E. coli S. ent. S. ent.+ E. coli S. ent. + E. coli S. ent. S. ent. S. ent. S. ent. S. ent. + E. coli S. ent. S. ent. S. ent. + E. coli S. ent. S. ent. + E. coli Citr. fr. S. ent. E. coli S. ent Pr. vulg. E. coli E. coli Citr. fr. E. coli Pr. vulg. E. coli E. coli Citr. fr. E. coli Pr. vulg. E. coli E. coli Citr. fr. E. coli Pr. vulg. E. coli E. coli Citr. fr. E. coli Pr. vulg. E. coli E. coli -

Препарат серебра 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 S. ent. S. ent. S. ent. S. ent. S. ent. S. ent. S. ent. S. ent. + E. coli E. coli S. ent. S. ent. + E. coli S. ent. S. ent. S. ent. S. ent. S. ent. E. coli E. coli E. coli E. coli S. ent. Pr. vulg. Citr. fr. Pr. vulg. E. coli E. coli E. coli E. coli Pr. vulg. Citr. fr. Pr. vulg. E. coli E. coli E. coli E. coli Pr. vulg. Citr. fr. Pr. vulg. E. coli E. coli E. coli Pr. vulg. Citr. fr. Pr. vulg. E. coli E. coli E. coli Pr. vulg. Citr. fr. Pr. vulg. -

Бактериофаг + препарат серебра 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 S. ent. + E. coli S. ent. S. ent. S. ent. + E. coli S. ent. S. ent. S. ent. S. ent. S. ent. + E. coli S. ent. S. ent. S. ent. S. ent. S. ent. + E. coli S. ent. S. ent. S. ent. E. coli Citr. fr. E. coli E. coli Citr. fr. E. coli Citr. fr. E. coli E. coli Citr. fr. E. coli Citr. fr. E. coli E. coli E. coli E. coli E. coli E. coli E. coli E. coli -

Контроль 1 2 3 4 5 - - E. coli E. coli Pr. vulg. E. coli Pr. vulg. E. coli E. coli Pr. vulg. E. coli E. coli Pr. vulg. E. coli E. coli Pr. vulg.

Спустя 11 суток после заражения клинических симптомов заболевания не наблюдали, цыплята были активны, улучшился аппетит. По результатам еженедельного взвешивания установлено, что у цыплят группы, где применяли бактериофаг + препарат серебра, прирост живой массы наибольший по сравнению с другими опытными группами. Если в первой группе (бактериофаг) среднесуточный прирост живой массы составил 44 г, во второй группе (препарат серебра) - 47 г, то в третьей группе он был больше на 8 и 5 г соответственно и составил 52 г.

В результате проведенных исследований после экспериментального заражения цыплят было установлено, что возбудитель выделялся во всех опытных группах. На 11-е сут. после заражения возбудитель не обнаружили только в группе, где применяли бактериофаг + препарат серебра. По результатам взвешивания можно сказать, что средний вес одной птицы по окончании эксперимента в первой группе 2,240 кг, во второй - 2,400 кг, в третьей - 2,670 кг. Таким образом, применение препарата серебра + бактериофаг является самым эффективным способом лечения сальмонеллеза кур, так как было отмечено раннее выздоровление и наибольший прирост живой массы.

1. Венгеренко, Л.А. Актуальные ветеринарные проблемы птицеводства и их решение / Л.А. Венгеренко // Био. - 2003. - № 4. - С. 14-16.

2. Влияние бетулина на клеточный и гуморальный иммунитет цыплят при вакцинации против Ньюкасл-ской болезни и инфекционного бронхита кур / М.В. Задорожная [и др.] // Актуальные проблемы инфекционных и незаразных патологий животных : материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. памяти выдающегося организатора Сибирской ветеринарной науки А.В. Копырина. - Омск : Вариант-Омск, 2010. - С. 217-220.

3. Болотников, И.А. Стресс и иммунитет у птиц / И.А. Болотников, В.С. Михниева, Е.К. Олейник. - Л. : Наука, 1983. - 118 с.

4. Программа ВОЗ по надзору за сальмонеллезами (изоляция, идентификация и лекарственная устойчивость Salmonella). Протокол лабораторных исследований. - 2002. - № 3.

5. Опыт применения специфической профилактики сальмонелло-энтеритидис инфекции у птиц // Ветеринарная патология. - 2010. - № 2. - С. 75-77.

6. Ванханен, В.В. Сальмонеллез - эпидемиология и профилактика (научно-практическое издание) / В.В. Ванханен, В.Д. Ванханен, А.Д. Усенко ; под ред. Ванханена В.Д. - Донецк, 2003. - 48 с.

7. Рожнова, С.Ш. Сальмонеллезы: проблемы и решения / С.Ш. Рожнова // Эпидемиология и инфекц. болезни. - 1999. - № 2. - С. 39-41.

SUMMARY V.I. Pleschakova, D.N. Stepanov, N.S. Zolotova

Treatment and prevention of salmonellosis chickens

Keywords: chickens-broilers, salmonellosis, bacteriophages, microflora, production indicators.

Состав и форма выпуска:
Бактериофаг сальмонеллезный групп АБСДЕ жидкий для местного применения и приема внутрь во флаконах по 100 мл.
Бактериофаг сальмонеллезный групп АБСДЕ таблетки с кислотоустойчивым покрытием для приема внутрь по 100 мг по 10, 25 или 50 шт. в упаковке.
Бактериофаг сальмонеллезный групп АБСДЕ свечи по 10 шт. в упаковке.
Препарат представляет собой фильтрат фаголизатов, активный в отношении наиболее распространенных сальмонеллезных бактерий: группа А - паратиф А; группа В - паратиф В, тифимуриум, гейдельберг; группа С - ньюпорт, инфантис, холера суис, ораниенбург; группа Д - дублин, энтеритидис, галлинарум; группа Е - анатум, ньюлендс. Видовой состав бактерий, используемых в производстве для приготовления сальмонеллезного бактериофага, может быть изменен в зависимости от изменения микробного пейзажа возбудителей.

Свойства / Действие:
Бактериофаг сальмонеллезный - иммунобиологический препарат, фаг.
Лечебное и санирующее действие Бактериофага сальмонеллезного основано на способности вызывать лизис сальмонелл вышеперечисленных серовариантов и близких к ним по антигенной структуре бактерий.

Показания:
Сальмонеллезный бактериофаг применяют при сальмонеллезе у детей и взрослых:

лечение сальмонеллеза;

санация реконвалесцентов (бактерионосительство);

профилактика сальмонеллезов по эпидпоказаниям.

Способ применения и дозы:
Для лечения сальмонеллеза Бактериофаг сальмонеллезный применяют внутрь 2-3 раза в сутки за 1-2 часа до приема пищи (натощак) в течение 5-7 дней. Возможно назначение в клизме или свечах после опорожнения кишечника 1 раз в сутки (вместо одного приема через рот). Лечение желательно начинать с первого дня болезни (по назначению врача еще до госпитализации больного). Применение бактериофага с первых дней заболевания дает лучший результат.
Одна таблетка сухого сальмонеллезного бактериофага соответствует 20 мл жидкого. Дозировка в схемах лечения и профилактики приводится на сухой бактериофаг, но это не исключает использования жидкого бактериофага. Жидкий бактериофаг перед употреблением необходимо взбалтывать. При отсутствии жидкого бактериофага можно ограничиться только приемом бактериофага в таблетках через рот.
Рекомендуемая дозировка Бактериофага сальмонеллезного:

Возраст	Доза на один прием
Возраст	Внутрь жидкий	Внутрь в таблетках	В клизме
До 6 месяцев	10 мл	-	20 мл
От 6 месяцев до 3-х лет	20 мл	1 таблетка	30-40 мл
От 3-х лет до 8-ми лет	40 мл	2 таблетки	40-50 мл
Детям старше 8 лет и взрослым	40-80 мл	2–4 таблетки	40-100 мл

Максимальная суточная доза Бактериофага сальмонеллезного жидкого 3 мл/кг массы тела, таблетированного – 3 мг/кг массы тела. Кратность приема внутрь - 2-3 раза в день, от 3-х лет возможно 3-4 раза в день. Ректально – 1 раз в день после опорожнения кишечника.
Детям до 6 месяцев рекомендуется жидкий сальмонеллезный бактериофаг, с 6 месячного возраста до 3-х лет - бактериофаг в таблетках с пектином (таблетку можно растворять в воде или молоке, в том числе - материнском), детям старше 3-х лет и взрослым - бактериофаг с пектином или с кислотоустойчивой оболочкой из АФЦ (в последнем случае нарушение целостности таблетки не допускается).
Если в течение первых трех суток после окончания лечения сальмонеллезным бактериофагом улучшения не наступило - курс лечения рекомендуется повторить. Если и после повторного курса лечения улучшения не наступило, продолжать лечение сальмонеллезным бактериофагом нецелесообразно.
Всем реконвалесцентам перед выпиской из стационара в случаях продолжающегося бактериовыделения рекомендуется провести пятидневный курс лечения Сальмонеллезным бактериофагом в указанных выше дозах.
Для профилактики сальмонеллеза Бактериофаг сальмонеллезный применяют для предупреждения заболевания и бактерионосительства, в стационарах для предупреждения возникновения внутрибольничных инфекций, в местах неблагополучных по заболеваемости (мясокомбинат, детские учреждения и т.п.). Бактериофаг сальмонеллезный назначают внутрь по 2 таблетки или 40-50 мл 1 раз в неделю в течение одного месяца. Детям - по 1 таблетке или 20 мл 1 раз в неделю.

Противопоказания:

индивидуальная непереносимость препарата Бактериофаг сальмонеллезный.

Побочное действие:
Реакций на введение сальмонеллезного бактериофага не отмечено.

Особые указания и меры предосторожности:
Бактериофаг сальмонеллезный не пригоден для применения при отсутствии маркировки и истечении срока годности; жидкую форму нельзя применять при помутнении!

Лекарственное взаимодействие:
Применение сальмонеллезный бактериофага не исключает использования других антибактериальных препаратов, дието- и витаминотерапии.

Условия хранения:
Хранить в сухом темном месте при температуре 2–8°C.
Срок хранения: таблетированная форма и свечи - 2 года; жидкая форма - 1 год.
Порядок отпуска из аптеки - отпускается без рецепта.

Оглавление диссертации Пименов, Николай Васильевич :: 2003 :: Москва

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Этиологические особенности сальмонеллеза кур.

2.1.1. Характеристика возбудителя.

2.1.2. Эпизоотологические данные.

2.1.3. Клинические признаки.

2.1.4. Патологоанатомические изменения.

2.2. Специфическая профилактика сальмонеллеза кур.

2.3. Природа бактериофагов и их использование при бактериальных инфекциях птиц.

2.3.1. Морфология и структура бактериофагов, их классификация.

2.3.3. Применение фагов при сальмонеллезах.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ЗЛ. Материалы и методы.

3.2. Результаты собственных исследований.

3.2.1. Эпизоотическая ситуация по сальмонеллезу кур.

3.2.2. Характеристика изолятов сальмонелл.

3.2.3. Экспериментальная инфекция сальмонеллеза цыплят.

3.2.4. Выделение и изучение бактериофагов к S. enteritidis.

3.2.5. Профилактические и лечебные свойства фагового компонента бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пулло-роза-тифа кур в лабораторных условиях.

3.2.6. Протективные свойства вакцинного компонента энтеритидис бивалентного сальмофага в лабораторных условиях.

3.2.7. Изучение протективных свойств бивалентного сальмофага за счет вакцинного компонента пуллорум и определение оптимальной дозы его применения.

3.2.8. Производственные испытания бивалентного сальмофага.

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Пименов, Николай Васильевич, автореферат

Актуальность темы. Развитие производства продуктов питания, получаемых от сельскохозяйственной птицы, неизбежно связано с интенсификацией промышленного птицеводства, увеличением производственных мощностей и, как следствие, плотности посадки птицепоголовья. Увеличение в последние годы токсичности кормов при сохранении массированной стресс-нагрузки на птицу, особенно цыплят первых дней жизни, привело к повышению эпизоотологической значимости инфекций энтеробактериального происхождения, среди которых одно из важнейших мест принадлежит сальмо-неллезу. Особенность течения сальмонеллеза у молодняка кур - септицемия. Взрослая птица является скрытым бактерионосителем, что служит критерием стационарности инфекции и усложняет борьбу с ней (11,13,17,19,25,26,32,35, 38,39,43,49,54,55,58,60,76,78,84,91,93,115,121,132,151).

Птицеводческие хозяйства, сталкиваясь с проблемой сальмонеллеза кур, несут большие потери из-за смертности цыплят, снижения продуктивности и качества продукции (17,19,37,43,84,132).

Обсемененные сальмонеллами яйца и мясо кур становятся зачастую причинами пищевых токсикоинфекций человека (20,25,26,36,37,50,51, 69,75,83,117,118,126,137,142,145,147,150,152,154,159). Согласно медицинской статистике токсикоинфекции сальмонеллезной этиологии распространены почти во всех странах мира, причем за последнее двадцатилетие медицина отмечает рост сальмонеллезных заболеваний среди людей, что обусловлено, в первую очередь, ростом инфицированности домашних животных и птиц (101,132,140,162).

Так, в США в 1998 году было отмечено более 20 вспышек сальмонеллеза, особенно среди потребителей и работников баров и ресторанов (140). S. Lukinmaa, R. Schildt, Т. Rinttila сообщали о 12 вспышках сальмонеллеза в Финляндии в 1997 году (137). В Великобритании было зарегистрировано в 1989 году 5 сальмонеллезных вспышек; обсемененные сальмонеллой яйца и тушки птицы обнаружили в магазинах, что привело к отставке министра сельского хозяйства Е. Curie. Т.К. Kolferstein и D.W. Bettcher отмечают, что за 1993 г. только в США число случаев токсикоинфицирования человека составило 224000, из них 96% - сальмонеллез, причиной которого были в 65% случаев зараженное мясо птицы и яичные продукты (140).

Не менее важная эпидемиологическая значимость сальмонеллеза кур в пищевом токсикоинфицировании человека и увеличение числа вспышек этого заболевания отмечаются в Дании, Германии, Канаде, Швейцарии, Италии, Замбии, Гане, Сенегале и многих других странах, в т.ч. и в Российской Федерации (11,13,20,25,26,36,49,51,55,96,101,115,126,140,145,150,152,156,162).

Борьба с сальмонеллезом кур заключается в проведении организационных, санитарно-гигиенических мероприятий, серологическом выявлении подозреваемых в заражении или бактерионосительстве кур, проведении терапевтических мероприятий (профилактические и лечебные обработки птиц антибиотиками и другими химиотерапевтическими препаратами) (15,16,17, 18,19,31,32,33,38,42,43,49,54,58,63,66,75,78,84,94,115,132).

К сожалению, эффективность этих мероприятий недостаточна. Перечисленные обработки не позволяют избавить птицу от сальмоносительства, не способны профилактировать и ликвидировать инфекцию, а предотвращают лишь массовое клиническое проявление заболевания среди молодняка птиц. Кроме того, применение химиотерапевтических препаратов несет ограничения на использование продукции, постоянные антибиотикообработки не оправданы с экологической точки зрения (20,33,37,60,76).

Вышесказанное свидетельствует о необходимости специфической профилактики сальмонеллеза кур. Работа над созданием вакцин проводится с 50-х гг. прошлого столетия. В разных странах были предложены живые, инакти-вированные и химические вакцины против сальмонеллеза кур, однако они не решают проблему защиты цыплят первых дней жизни и санирования птице-поголовья от бактерионосительства. Вот почему в последнее время возрос интерес к фаговым препаратам. Бактериофаги лизируют эпизоотические штаммы сальмонелл, к которым они специфичны, применение фагов снимает бактерионосительство, не имеет противопоказаний (4,15,28,45,54,60,61,77, 79,95,147,155).

В лаборатории контроля и стандартизации препаратов против сальмо-неллеза, колибактериоза и лептоспироза ВГНКИ создан препарат нового типа - сальмофаг энтеритидис, объединивший в себе высокоактивный бактериофаг, лизирующий эпизоотические штаммы S. enteritidis наиболее распространенных фаготипов, и фагоустойчивый вакцинный штамм данного серовара. Применение препарата позволяет освободить птицу от сальмонеллы за счет фагового компонента препарата, защитить иммунотолерантных цыплят первых дней жизни от инфекции, пока они не выработают собственный поствакцинальный иммунитет к сальмонеллезу, вызываемому S. enteritidis (59,61).

Препарат нового поколения - бивалентный сальмофаг, создаваемый в той же лаборатории, объединил в себе уже два фаговых компонента против S. enteritidis и S. gallinarum-pullorum, и, соответственно, два фагоустойчивых вакцинных штамма данных сероваров.

Данные 1989-2001 гг. свидетельствуют, что основными этиопатогенны-ми сероварами сальмонелл для кур являются Salmonella enteritidis (ее выделяют в 44-46% случаев из патологического материала от птицы, павшей от сальмонеллеза) и S. gallinarum-pullorum (ее доля в случаях сальмонеллеза кур 41-43%). Далее следует S. typhimurium (8-10%), S. dublin (1-2%). Роль остальных сальмонелл (Ss. virchow, infantis, hamburg, haifa, panama, kottbus, bo-vis morbificans, colindale, Chester, derby, brandenburg, newlands, tshiongeve, lin-denburg, thompson, dahomey, banana, omderman, anatum, paratyphi В и других) в этиологии сальмонеллеза кур незначительна и изменчива (6,11,17,19,20, 23,35,38,54,100,105,127).

Тем самым необходимость создания бивалентного сальмофага продиктована производственной реальностью и является актуальной задачей. Применение бивалентного сальмофага позволит защитить кур и цыплят от основных возбудителей сальмонеллеза с первых дней жизни, решить проблемы сальмоносительства, вспышки сальмонеллеза при иммунизации по инфицированному фону, большого применения антибиотиков.

До настоящей работы оставались не изученными некоторые аспекты эпизоотологического процесса при сальмонеллезе кур, эффективность сальмофага в острых лабораторных опытах, производственных испытаниях, не отработана оптимальная дозировка по вакцинному компоненту S. gallinarum-pullorum, не изучено влияние применения препарата на показания утвержденных основных диагностических серологических тестов при сальмонеллезе.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение эффективности бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энте-ритидис и пуллороза-тифа кур.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи работы:

- изучить эпизоотическую ситуацию по сальмонеллезам птиц в Российской Федерации;

- изучить свойства изолятов сальмонелл, выделенных в различных регионах РФ (в т.ч. их серовариантную принадлежность и антибиотикочувствительность);

- выделить и селекционировать высокоактивные бактериофаги к S. enteritidis; изучить зависимость развития сальмонеллеза кур от производственного направления, возраста, способа инфицирования птицы;

- изучить особенности развития септицемии при сальмонеллезе энтеритидис и пуллорозе-тифе кур;

- изучить протективиую и лечебную эффективность экспериментальных серий бивалентного сальмофага в лабораторных условиях;

- определить оптимальную дозу применения вакцинного штамма S. gallinarum-pullorum при обработке цыплят бивалентным сальмофагом;

- изучить эффективность применения экспериментальных серий препарата бивалентный сальмофаг в птицеводческих хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу кур.

Научная новизна. Изучена эпизоотическая ситуация по сальмонеллезам кур в Российской Федерации. Обоснованы особенности проявления сальмо-неллеза кур от этиопатогенного серовара, зависимость инфицирующей дозы от производственного направления, возраста птицы и способа инфицирования, изучена эффективность применения нового препарата - бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур в лабораторных и производственных условиях, отработана доза применения его вакцинного компонента пуллорум.

Выделены и селекционированы активные бактериофаги к S. enteritidis, служащие резервом фагового компонента препарата бивалентный сальмофаг.

Публикации. По теме диссертации опубликованы 5 научных статей и выпущены методические рекомендации, одобренные Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ от 04.11.02 № 13-3-6/1965.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. Эпизоотическая ситуация по сальмонеллезу кур в РФ.

2. Выделение и свойства этиопатогенных изолятов сальмонелл, выделение и селекция бактериофагов к S. enteritidis.

3. Особенности проявления сальмонеллеза кур.

4. Определение оптимальной дозы применения вакцинного компонента пуллорум бивалентного сальмофага.

5. Оценка протективной и лечебной эффективности бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур в лабораторных экспериментах и производственных испытаниях.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения и выводов. Библиографический список включает 163 публикации, из них 69 зарубежных источников. Материалы иллюстрированы 5 электронно-микроскопическими фотографиями, 22 таблицами, 3 графиками, 5 диаграммами. Работа содержит документальное приложение.

Заключение диссертационного исследования на тему "Эффективность бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур"

1. Эпизоотическая напряженность по сальмонеллезу кур не снижается. Количество вновь выявленных неблагополучных пунктов в РФ по сальмонеллезу птиц увеличилось с 37 в 1996 г. до 175 в 2001 г. Основными возбудителями сальмонеллеза кур являются сероварианты S. enteritidis и S. gallinarum-pullorum.

2. Из патологического материала от птицы, отобранного из 24 птицефабрик, а также частного сектора Московской, Тульской, Нижегородской, Оренбургской областей, Краснодарского края, Татарстана и других регионов РФ выделены 34 изолята сальмонелл, 23 из которых отнесены к S. enteritidis, 4 к S. gallinarum-pullorum. Выделенные изоляты характеризовались типичными культуральными, морфологическими, биохимическими свойствами, высокой вирулентностью для цыплят и белых мышей. Большинство из изолятов чувствительны к энрофлоксацину, цефа-лексину, устойчивы к бензилпенициллину, мономицину, эритромицину, ампициллину, линкомицину, тилозину, рифампицину, карбенициллину.

Вероятность инфицирования цыплят S. enteritidis в 15-суточном возрасте относительно 5-суточного снижается незначительно (LD50 возрастает в 3,97 раза), немногим менее чем вероятность заражения 5-дневных цыплят относительно цыплят 2-суточного возраста (LD50 возрастает в 5,6 раза).

4. Возбудитель S. gallinarum-pullorum вирулентнее для двухдневных цыплят, чем S. enteritidis, но существенной разницы от способа инфицирования не установлено.

При экспериментальном пуллорозе развитие сепсиса начинается на сутки позднее, чем при экспериментальном сальмонеллезе энтеритидис, но септический процесс развивается быстрее.

5. Из сточных вод птицефабрик выделены 10 бактериофагов к S. enteritidis, 3 из которых обладали высокой активностью, широким спектром литического действия и могут использоваться в качестве резервных штаммов для изготовления фагового компонента бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур. Строение вирионов выделенных фагов позволило их отнести к IV классификационной группе по А.С. Тихоненко и семейству Siphoviridae.

6. Бивалентный сальмофаг обладает выраженными профилактическими и лечебными свойствами за счет фагового компонента при инфицировании цыплят яичных кроссов и бройлеров двух- и пятидневного возраста в дозе 7LD50, 12LD5o и 20LD50 вирулентных штаммов S. enteritidis и S. gallinarum-pullorum в лабораторных условиях. Сохранность поголовья в опытных группах составила 100% при 100% летальности в контроле.

7. Бивалентный сальмофаг обладает выраженными протективными свойствами за счет вакцинного компонента и способен защитить 75100% цыплят при заражении S. gallinarum-pullorum и 87,5% цыплят при инфицировании S. enteritidis в дозах 6-10 млрд. мкр. кл. в лабораторных условиях при летальности в контрольных группах 75-100%.

Оптимальная доза применения вакцинного компонента S. gallinarum-pullorum бивалентного сальмофага - 0,5 млрд. мкр. кл.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Рекомендован к производственному применению для профилактики, лечения и ликвидации сальмонеллеза кур бивалентный сальмофаг против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур.

Выделенные бактериофаги Phagum Salmonella enteritidis A-l, Ph. S. enteritidis ЮН-1, Ph. S. enteritidis ЮН-2 депонированы во ВГНКИ и рекомендованы в качестве резервных производственных для бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур.

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.