Постановка рнга при тифе

Антитела к Vi-антигену возбудителя брюшного тифа (S. typhi) – это специфические белки-иммуноглобулины, вырабатываемые иммунной системой в ответ на инфицирование возбудителем брюшного тифа и участвующие в реакциях иммунной защиты организма.

Анти-Vi-антитела, возбудитель брюшного тифа.

Синонимы английские

Anti-Salmonella typhi Vi, Anti-Salmonella typhi Vi antibodies, Anti-Vi antibodies, Antibodies to the Vi capsule of Salmonella Typhi.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Брюшной тиф – это острое инфекционное заболевание с фекально-оральным путем передачи, возбудителем которого является Salmonella typhi. Инкубационный период длится в среднем 9-14 дней. Заболевание начинается постепенно с общего недомогания, бессонницы и головной боли, затем к ним присоединяются лихорадка, симптомы поражения центральной нервной системы в виде заторможенности, нарушений сознания и бреда, а также нарушения стула и характерная сыпь в области живота и грудной клетки. Источник инфекции – болеющие брюшным тифом и бактерионосители S. typhi. Бактерионосительство может быть острым, хроническим или транзиторным.

Наряду с другими антигенами возбудитель брюшного тифа содержит Vi-антиген, который обеспечивает устойчивость возбудителя к фагоцитозу (способности специализированных клеток организма, фагоцитов, поглощать и переваривать чужеродные частицы, в том числе и микроорганизмы), способствует хронизации инфекции и брюшнотифозному бактерионосительству.

Для чего используется исследование?

• Для выявления бактеpионосителей, в том числе сpеди pаботников пищевых пpедпpиятий.
• Чтобы оценить эффективность вакцинации против брюшного тифа.

Когда назначается исследование?

• Когда необходимо выявить бактеpионосителей среди сотрудников пищевых пpедпpиятий пpи их поступлении на pаботу.
• Если нужно определить эффективность вакцинации – через 7 дней после введения вакцины.
• При обследовании лиц, контактировавших с больными брюшным тифом или носителями S. typhi.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Обнаружение антител к Vi-антигену S. typhi дает основание подозревать хроническое носительство брюшнотифозных бактерий или развитие иммунной реакции на вакцинацию против брюшного тифа. Отсутствие антител свидетельствует о том, что возбудителя брюшного тифа нет, или о низкой эффективности вакцинации.

Причины положительного результата:

• брюшнотифозное бактерионосительство,
• вакцинация против брюшного тифа в течение последних 3 лет.

Причины отрицательного результата:

• отсутствие иммунитета к S. typhi в связи с тем, что нет инфицирования возбудителем (если вакцинация от брюшного тифа не проводилась),
• отсутствие иммунного ответа или слабый иммунный ответ к возбудителю брюшного тифа вследствие нарушений в иммунной системе.

Что может влиять на результат?

• Возможен ложноположительный результат вследствие перекрестной реакции с другими возбудителями из рода Salmonella, в том числе и с возбудителями паратифов А, B и C.
• Проведение антибактериальной терапии.



• Переболевшие брюшным тифом относительно устойчивы к повторному заражению S. Typhi, за исключением случаев массивного поступления возбудителя в организм.
• Возможно проведение вакцинации пpотив брюшного тифа по специальным показаниям. Защитный титр антител достигается через 2-3 недели после введения вакцины и сохраняется в течение 3 лет.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, терапевт, врач общей практики, гастроэнтеролог.

Лабораторное серологическое исследование, направленное на диагностику эпидемического сыпного тифа и болезни Брилла, представляющей рецидивную форму заболевания.

Риккетсии Провачека; эпидемический сыпной тиф; болезнь Брилла – Цинссера.

Синонимы английские

Rickettsia prowazekii; epidemic typhus; Briell-Zinser disease; reaction passive or indirect hemagglunation.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Эпидемический сыпной тиф (классический, вшивый, европейский) – это острая антропонозная трансмиссивная инфекция, поражающая людей любого возраста и характеризующаяся характерными клиническими проявлениями. Возбудителем инфекции является неподвижный грамотрицательный микроорганизм Rickettsia prowazekii, риккетсии Провачека, семейства Rickettsiaceae, рода Rickettsia. Они являются преимущественно внутриклеточными паразитами, выделяют гемолизины, эндотоксины.

Инфекция передается преимущественно трансмиссивным путем передачи от больного человека платяными или головными вшами, которые выделяют риккетсии с инфицированными экскрементами. В организм человека возбудители попадают через поврежденные кожные покровы, в результате расчесов и раздавливания насекомых, а также через слизистую оболочку верхних дыхательных путей и конъюнктиву глаз.

Инкубационный период заболевания длится от 5 до 25 дней, в среднем составляет 10-14 дней. Основными клиническими проявлениями сыпного тифа являются лихорадка в течение 3-4 дней без тенденции к снижению, головная боль, гепатоспленомегалия, нарушение сна, тошнота, поражение сердечно-сосудистой системы, генерализованное поражение сосудов кожи и слизистых оболочек. На слизистой оболочке мягкого неба возможно появление сыпи (энантемы) или кровоизлияний, характерная сыпь на конъюнктиве. На 4-5-й день болезни у 90 % больных появляется характерная петехиальная сыпь на боковых поверхностях туловища, спине, подмышечных областях, на сгибательных поверхностях предплечий. Для данной инфекции также характерно поражение сосудов центральной нервной системы с вовлечением серого вещества, проявляющееся нарастающей головной болью, бредом, возбуждением, наличием менингеальной симптоматики, присоединением менингоэнцефалита. Различают легкую, средней тяжести и тяжелую форму заболевания. Возможно развитие стертой и латентной форм. Болезнь Брилла – Цинссера представляет собой рецидивную форму эпидемического сыпного тифа. Она имеет сходную клиническую картину, как и при первичной инфекции, но с менее выраженной интенсивностью патологичных симптомов.

Диагностика заболевания основывается на данных эпидемиологического исследования, специфических клинических проявлениях и на оценке лабораторных данных. В клиническом анализе крови отмечается лейкоцитоз с нейтрофильным сдвигом лейкоцитарной формулы. Возможно повышение скорости оседания эритроцитов.

Большое значение в лабораторной диагностике активных форм сыпного тифа и болезни Брилла – Цинссера имеет серологическая диагностика. Она заключается в определении специфических антител с помощью реакции пассивной, или непрямой, гемагглютинации (РПГА). Данная реакция основана на склеивании антигенов (клеток или частиц-носителей антигена) при взаимодействии со специфическими антителами к этим антигенам. Рекомендуется выявление нарастания титра специфических антител в парных сыворотках, взятых на 6-7-й день болезни и через 12-20 дней (в среднем через две недели) от ее начала. У больных сыпным тифом диагностический титр антител составляет 1:1000 и определяется к концу первой недели заболевания, достигая максимума к 15-му дню с возрастанием титров антител 1:32000-1:64000. Для болезни Брилла – Цинссера также характерно нарастание титра специфических антител в РПГА с сыпнотифозным диагностикумом риккетсий Провачека (Rickettsia prowazekii).

Для чего используется исследование?

• Для диагностики активных форм эпидемического сыпного тифа;
• для диагностики болезни Брилла – Цинссера – рецидивной формы эпидемического сыпного тифа.

Когда назначается исследование?

• При клинических проявлениях и подозрении на эпидемический сыпной тиф и болезнь Брилла – Цинссера: лихорадка, головная боль, гепатоспленомегалия, нарушение сна, тошнота, поражение сердечно-сосудистой системы, генерализованное поражение сосудов кожи (петехиальная сыпь на боковых поверхностях туловища, спине, подмышечных областях, на сгибательных поверхностях предплечий) и слизистых оболочек (мягкого неба и конъюнктивы), поражение центральной и периферической нервной системы, менингоэнцефалит;
• для оценки диагностического титра антител в начале заболевания и его нарастания на 14-15-й день болезни;
• в комплексной диагностике эпидемического сыпного тифа и болезни Брилла – Цинссера.

Что означают результаты?

Причины положительного результата (повышение титра):

• эпидемический сыпной тиф, активная форма;
• болезнь Брилла – Цинссера, активная форма;
• текущее инфицирование возбудителем Rickettsia prowazekii или перенесенная ранее инфекция, протекающая в латентной форме.

Причины отрицательного результата:

• отсутствие инфицирования возбудителем Rickettsia prowazekii;
• ранние сроки заболевания эпидемическим сыпным тифом, первые 6-7 дней от момента инфицирования возбудителем;
• ложноотрицательные результаты.

Что может влиять на результат?

• Форма заболевания, период заболевания от момента инфицирования.



• Для комплексной оценки полученных результатов их необходимо сопоставлять с эпидемиологическими, клиническими и другими лабораторными данными.

7 Лейкоцитарная формула

57 Белок общий в ликворе

10 Глюкоза в ликворе

Кто назначает исследование?

Инфекционист, кардиолог, невролог, офтальмолог, оториноларинголог, дерматолог, терапевт, врач общей практики.

Литература

1. Покровский В.И., Творогова М.Г., Шипулин Г.А. Лабораторная диагностика инфекционных болезней. Справочник / М. : БИНОМ. – 2013.
2. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / М.: Медицина. – 2005. – 696 с.
3. Fauci, Braunwald, Kasper, Hauser, Longo, Jameson, Loscalzo Harrison’s principles of internal medicine, 17th edition, 2009.

Медицина победила множество болезней. Такие опасные заболевания, как холера и оспа, сегодня почти не встречаются. Брюшной тиф, который еще сотню лет назад представлял огромную опасность для миллионов людей и уничтожал целые поселения до единого человека, тоже почти побежден. Почти, но не полностью.

Риск заразиться этой болезнью есть и в наши дни. Подхватить тиф можно и дома, и в путешествии. В таких странах, как Индия, Пакистан и Афганистан, Перу, Чили, Эквадор и Колумбия, Малайзия, Индонезия и Папуа-Новая Гвинея, а также во всей Центральной Африке тиф до сих пор является совершенно реальной угрозой. Эта болезнь особенно опасна тем, что заразиться ей очень просто, а симптомы брюшного тифа в начале заболевания легко спутать и с банальным пищевым отравлением, и с многими другими инфекциями.

Когда назначается анализ на брюшной тиф

Брюшной тиф — опасная инфекционная болезнь, которую вызывает сальмонелла S.typhi. Заразиться брюшным тифом несложно: достаточно съесть немытый фрукт, выпить зараженной воды, воспользоваться плохо промытой посудой или искупаться в водоеме, вода которого заражена бактериями. Инфекция может попасть в организм при контакте с зараженным человеком или через грязные руки.

Симптомы брюшного тифа неспецифичны, то есть совпадают с симптоматикой некоторых других заболеваний. Врач может заподозрить брюшной тиф, если пациент жалуется на:

• диарею или запор;
• кровь в кале или анальное кровотечение;
• тошноту и рвоту;
• снижение аппетита;
• упадок сил, бессонницу, общую слабость, апатию;
• плавное повышение температуры на протяжении 3–4 дней (температура может доходить до 40°C)
• сильную жажду;
• красную сыпь на коже;
• серый налет на языке (кончик языка при этом остается ярко-красным);
• боль в животе и правом подреберье.

Иногда к этим симптомам добавляется дезориентация и бред.

Если пациент незадолго до болезни бывал в странах, где брюшной тиф широко распространен, ел или пил что-то подозрительное или общался с кем-то с похожими симптомами, врач обязательно направит его сдавать анализ на брюшной тиф.

Анализ на брюшной тиф делают незамедлительно, еще до начала курса лечения антибиотиками. Все дело в том, что уже через двое суток такой терапии выделить возбудителя болезни становится очень трудно, однако это вовсе не значит, что его нет.

Для диагностики брюшного тифа в основном используются лабораторные методы, а биоматериалом для исследований является кровь. Вот типичный список исследований при подозрении на брюшной тиф:

• Общий анализ крови . Это первое исследование при постановке диагноза. Общий анализ крови не дает 100% точного результата, однако позволяет косвенно установить наличие бактериального поражения. На это, в частности, указывает лейкопения и высокая СОЭ.
• Биохимический анализ крови проводят, чтобы выявить наличие и концентрацию белков, вырабатывающихся во время острой стадии болезни.
• Серологический анализ крови . Это исследование позволяет заметить антигены к сальмонелле, если с момента заражения прошло 4–5 дней. Для брюшного типа характерно наличие О-, Vi- и Н-антигенов.
• Бактериальный посев . Надежный, но медленный метод, суть которого заключается в выращивании бактериальной культуры на питательной основе. Рост микрофлоры занимает около 5 дней и ускорить этот процесс нельзя. Зато по результатам специалисты могут не только идентифицировать бактерию, но и проверить, какие антибиотики наиболее действенны для ее уничтожения. Как правило, биоматериалом для посева становится кровь, но иногда используют мочу (на любом этапе болезни) или кал (по прошествии недели после заражения).
• Реакция иммунной флуоресценции (РИФ) — точный и быстрый метод, который выявляет наличие антител к возбудителю брюшного тифа на самых ранних стадиях. Суть метода состоит в том, что в биоматериал добавляют помеченные флуоресцентными веществами антитела. Если в пробе имеются антигены возбудителя болезни, антитела связываются с ним, и исследователь может заметить специфическое свечение, рассматривая препарат в микроскоп.
• Иммуноферментный анализ (ИФА) , показывающий присутствие антител и антигенов. Считается высокочувствительным методом и позволяет определить не только факт наличия антител, но и их количество. Поэтому ИФА применяется не только для диагностики, но и для отслеживания динамики состояния больного.

На данный момент основным биоматериалом для диагностики брюшного тифа является кровь. На точность результатов могут повлиять многие факторы, поэтому перед тем, как сдавать анализ на брюшной тиф, следует подготовиться, а именно:

• отказаться от приема лекарств за 72 часа до анализа. Если же в случае отказа может возникнуть риск для здоровья, необходимо проинформировать врача, что именно и в какой дозировке вы принимаете.
• сдавать кровь натощак, лучше всего утром, примерно в 8–11 часов.
• воздержаться от обильного ужина, а за сутки до анализа полностью отказаться от жирного, жареного, острого, копченого, молока и молочных продуктов, яиц.
• за двое суток до анализа воздержаться от употребления алкоголя в любых дозах.
• не курить перед сдачей анализа хотя бы пару часов.
• постараться не нервничать и избегать физических нагрузок — и то, и другое заметно влияет на биохимию крови.
• инструментальные исследования и физиотерапию лучше проводить после анализа крови, так как подобные вмешательства тоже могут сказаться на показателях и исказить результат.

При брюшном тифе общий анализ крови показывает повышение количества лейкоцитов в первые два дня болезни и понижение в последующие дни. Характерно также повышенное количество лимфоцитов, увеличение количества тромбоцитов и высокая СОЭ.

Как бы там ни было, результаты анализа — это еще не диагноз. Они предназначены для врача, и только специалист, сравнив результаты разных исследований, может сделать верный вывод, о чем идет речь — об острой либо хронической болезни или же о ложноположительном результате.

Анализ на брюшной тиф можно сдать в частных и государственных больницах, поликлиниках и лабораториях. Несмотря на то, что эта инфекция нетипична для России, диагностику тифа проводят практически везде, так как этот анализ необходим для получения санитарной книжки.

Серологический анализ в частных диагностических центрах обойдется примерно в 600–800 рублей. Общий анализ крови стоит около 300–400 рублей, биохимический анализ крови на иммуноглобулины при брюшном тифе стоит примерно столько же. Бактериологический посев в среднем стоит 700–900 рублей. Анализы методами РИФ и ИФА стоят приблизительно 500–800 рублей.

Специфика диагностики брюшного тифа такова, что для постановки точного диагноза требуется сопоставить результаты нескольких типов анализов. Лишь после этого врач сможет не только установить причину заболевания, но и определить стадию и назначить адекватное лечение.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА СЫПНОГО ТИФА

Методические указания об иммунологических способах диагностики риккетсиозов, составленные К.Н. Токаревичем и Л.Д. Васильевой, были изданы институтом в 1960 и 1961 годах. С тех пор накоплен большой дополнительный материал, характеризующийся введением в практику все более чувствительных и специфических методик.

В связи с эпидемиологическим и клиническим своеобразием спорадических случаев сыпного тифа (болезни Брилля-Цинссера) современные лабораторные методы диагностики этой инфекции приобрели особенно важное значение . Они позволяют не только надежно подтверждать сыпнотифозную природу заболеваний, но и решать важные вопросы эпидемиологического характера, например, выявление источника инфекции, обнаружение зараженных переносчиков, дифференцирование эпидемического (передающегося через вшей) и спорадического (рецидивного) сыпного тифа, определение иммунной прослойки к сыпному тифу среди населения и т.д. Этим способам и посвящено настоящее издание.

I. ВЫДЕЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЫПНОГО ТИФА ОТ БОЛЬНЫХ

Возбудитель сыпного тифа - риккетсии Провачека может быть обнаружен в крови заболевшего в последние дни инкубации, в продроме и в течение всего лихорадочного периода; риккетсии исчезают из крови после падения температуры, в первые дни реконвалесценции, когда в крови больного специфические антитела достигают высокой концентрации. Наибольшее количество риккетсий циркулирует в крови в первые дни лихорадки и поэтому ранние сроки заболевания особенно перспективны для выделения возбудителя.

Риккетсии Провачека - облигатные внутриклеточные паразиты; они не растут на обычных питательных средах и могут размножаться лишь в живых или переживающих клетках. Выделение возбудителя из крови больного производят путем заражения восприимчивых лабораторных животных, обычно морских свинок, или при помощи инфицирования вшей, выращенных в лаборатории.

а) Выделение возбудителя при помощи

биологической пробы на морских свинках

Морским свинкам весом 250 граммов, которым предварительно в течение нескольких дней проверяют температуру, вводят внутрибрюшинно дефибринированную кровь больного в объеме 3 - 5 мл или взвесь в физиологическом растворе сгустка свернувшейся крови в том же объеме. (Сыворотка, отделенная от сгустка, может быть использована для иммунологического исследования.)

При наличии риккетсии Провачека в исследуемой крови подопытные морские свинки начинают лихорадить спустя примерно 5 - 15 дней и при этом теряют в весе. Лихорадочное состояние животных, хорошо воспроизводимое в цепи пассажей, продолжается от 2 - 3 до 8 - 10 дней. Ежедневное термометрирование свинок проводится ректально специальным термометром в течение 30 дней.

Длительность инкубации и лихорадочного периода, а также высота лихорадки зависят в основном от концентрации возбудителя в исследуемой крови больного.

Для подтверждения сыпнотифозной природы лихорадки у животного, после падения температуры, через 3 - 4 недели после заражения, морских свинок исследуют серологически. Наличие комплементфиксирующих антител или агглютининов к риккетсиям Провачека убеждает в специфичности заболевания. Риккетсиальная этиология перенесенной экспериментальной инфекции может быть подтверждена также испытанием иммунности свинок путем заражения их риккетсиями Провачека спустя полтора-два месяца после прекращения лихорадки.

Поддержание возбудителя на животных производится путем пассажей мозговой тканью. С этой целью морскую свинку забивают на высоте лихорадки, из черепной коробки стерильно извлекают мозг и подвергают его гомогенизации в физиологическом растворе (обычно в банке со стеклянными бусами). Введение внутрибрюшинно 1 - 2 мл 10-процентной мозговой взвеси здоровым животным воспроизводит лихорадку у последних.

При экспериментальной сыпнотифозной инфекции возбудитель визуально не обнаруживается в мазках-отпечатках из органов морских свинок. Только при внутрибрюшинном введении им концентрированных взвесей риккетсий Провачека (например, из инфицированных вшей или легких интраназально зараженных мышей) удается вызвать у животных перитонеальный риккетсиоз, а у самцов периорхит. В этих случаях в мазках-отпечатках из туника вагиналис или из соскоба с брюшины удается обнаружить возбудителя. Для сохранения и выделения риккетсий в визуальной форме мозговой взвесью лихорадящей морской свинки заражают куриные эмбрионы, белых мышей (интраназально), поддерживаемых в лаборатории вшей или культуру ткани.

б) Выделение риккетсий Провачека путем заражения переносчика

Платяная вошь является переносчиком риккетсий Провачека. Возбудитель сыпного тифа вызывает заболевание этих насекомых, заканчивающееся их гибелью. Вошь, напитавшаяся кровью сыпнотифозного больного в период риккетсиемии, уже в первые дни становится заразной. На второй-третий день после заражения при помощи иммунлюминесцентного метода (см. ниже) удается уже обнаружить в мазках из кишечников вшей единичные риккетсии. В дальнейшем наблюдается интенсивное размножение этих микроорганизмов, причем на 5 - 6 день после кровососания риккетсии в кишечнике обнаруживаются в больших количествах. Максимальное накопление их наблюдается на 8 - 10 день. Размножение возбудителя в эпителиальных клетках кишечника насекомых приводит к разрушению инфицированных клеток, что вызывает нарушение процесса пищеварения. Нередко за 1 - 2 дня до гибели вошь приобретает красный цвет вследствие проникновения крови через разрушенные клетки кишечника в полость тела. В мазках-отпечатках из кишечников больных вшей при окраске по Романовскому-Гимза или по Здродовскому обнаруживается огромное количество риккетсий Провачека в виде полиморфных, главным образом палочковидных образований. Быстрота развития риккетсиоза у вшей, так же как и гибель насекомых, зависят от интенсивности риккетсиемии у больных людей. Выделение возбудителя из крови больного может быть проведено путем непосредственного кормления лабораторных насекомых на больном.

При необходимости исследования вшей, снятых с больного или собранных в его окружении, выделение возбудителя может быть проведено двумя способами: внутрибрюшинным заражением морских свинок взвесью растертых насекомых или заражением этой же взвесью лабораторных ("паспортных") вшей. Последнее осуществляется при помощи вскармливания однодневных личинок вшей через эпидермомембрану по Пшеничнову или же по методу Вейгля (при помощи микроклизм). В дальнейшем наблюдение за насекомыми проводят при помощи микроскопии окрашенных препаратов из кишечника последних.

Приведенное краткое описание приемов выделения культуры риккетсий Провачека из крови больных показывает сложность применяемых для этого методик, которые могут быть осуществлены только в обстановке специальных лабораторий.

Метод биопроб на морских свинках довольно широко применялся для выявления возбудителя в начале изучения сыпного тифа в эпоху эпидемического его распространения при классических формах этой инфекции. При заражении животных кровью таких больных на ранних днях болезни удавалось весьма часто воспроизводить экспериментальную инфекцию у морских свинок. При спорадическом же сыпном тифе (болезни Брилля) биологические пробы на морских свинках в очень редких случаях бывают положительными.

Более эффективным методом является вскармливание переносчика на больном в первые дни лихорадки. Однако и при этом способе у больных болезнью Брилля удается обнаружить риккетсии только при тяжелых формах заболеваний. При этом вследствие низкой концентрации риккетсий в крови больных в большинстве случаев при болезни Брилля удается обнаруживать их во вшах лишь после пассажа через эпидермомембрану.

Культивирование риккетсий Провачека в лабораториях необходимо для приготовления диагностикумов и вакцин, а попытки выделения новых штаммов не потеряли своего значения и в настоящее время для изучения их биологических особенностей.

II. ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ СЫПНОГО ТИФА

Из иммунологических способов диагностики риккетсиозов в настоящее время ведущее место занимают серологические.

При сыпном тифе серологический анализ используют как для распознавания заболеваний, так и для решения эпидемиологических вопросов, связанных с данной инфекцией.

Основным методом серодиагностики сыпного тифа является реакция связывания комплемента, которая характеризуется высокой специфичностью. Используют также реакцию агглютинации риккетсий и реакцию непрямой гемагглютинации. Постановка этих серологических проб предусмотрена отечественными официальными инструкциями. Они должны применяться в лабораториях инфекционных больниц и санэпидстанций. Согласно утвержденным Минздравом СССР Инструктивно-методическим указаниям (N 310 от 23.04.1968) с целью наиболее полного выявления больных сыпным тифом серологическому обследованию должны подвергаться:

лица, лихорадящие в течение 5 дней и более с диагнозами, не позволяющими полностью отвергнуть сыпной тиф;

провизорно госпитализированные с подозрением на сыпной тиф;

лица, бывшие в контакте с заболевшими сыпным тифом, в том числе:

а) при отсутствии у них педикулеза - перенесшие в течение последних 3-х месяцев какое-либо лихорадочное заболевание;

б) при наличии педикулеза - все находившиеся в контакте с больными сыпным тифом.

У сыпнотифозных больных, не леченных антибиотиками, специфические антитела в крови могут быть обнаружены в невысоких титрах начиная с 5 - 7 дня болезни; к 10 дню они могут быть выявлены почти у всех больных, причем титры антител достигают наивысшего уровня к 15 - 20 дню от начала лихорадки, после чего постепенно снижаются. При получении негативного ответа или положительной реакции в низких титрах при первом обследовании серологическое исследование необходимо повторить через 3 - 5 дней.

Кроме перечисленных серологических реакций, для серодиагностики сыпного тифа используют иммунлюминесцентный метод исследования, а также реакцию преципитации. Весьма чувствительной пробой является реакция нейтрализации токсической субстанции риккетсий, позволяющая выявлять наличие в крови больных и болевших вируснейтрализующих антител. Эта реакция может быть применена лишь в специализированных лабораториях, т.к. она ставится с живыми риккетсиями, содержащими токсическое вещество.

Для серологических исследований кровь берут в стерильную пробирку из локтевой вены в количестве 3 - 5 мл. Ее свертывают в термостате при 37° в течение 15 - 30 минут, а для отстаивания сыворотки пробирку помещают в комнатный холодильник. В тех случаях, когда взять кровь из вены не удается (например, у детей), кровь берут из пальца.

Кончик пальца протирают спиртом и прокалывают иглой, кровь набирают микропипеткой 0,2 мл и вносят в пробирку с 1,8 мл стерильного физиологического раствора, содержащего 0,25% лимоннокислого натрия, что соответствует разведению сыворотки 1:10. Для осаждения форменных элементов взвесь центрифугируют при 1 - 2 тысячах об . / м ин. в течение 5 - 10 минут или оставляют в рефрижераторе до следующего дня.

При невозможности проведения исследований на месте сыворотки пересылают в лабораторию в запаянных ампулах.

Сыворотки могут быть доставлены также и в высушенном виде на фильтровальной бумаге или на стекле. В первом случае 0,2 - 0,4 мл прозрачной (не содержащей эритроцитов) сыворотки наносят градуированной пипеткой на фильтровальную бумагу и высушивают при комнатной температуре. В лаборатории участок бумаги с нанесенной сывороткой вырезают, измельчают ножницами и помещают в пробирку с физиологическим раствором, взятым в таком объеме, чтобы получить исходное разведение сыворотки 1:10. В термостате при 37° в течение часа происходит полное растворение сыворотки; ее отсасывают и используют для постановки реакции по обычной методике.

Высушивание на стекле проводят в соответствии с инструкцией Министерства здравоохранения СССР, предложенной для серодиагностики сифилиса: на тщательно вымытое предметное стекло наносят 0,2 мл сыворотки, которая свободно растекается по поверхности при покачивании стекла. Последнее накрывают чашкой Петри и оставляют при комнатной температуре до следующего дня. Высохшую сыворотку соскабливают и помещают в пакетик. В день постановки реакции содержимое пакетика высыпают в пробирку и заливают 1,8 мл физиологического раствора, что создает разведение 1:10. Пробирки ставят на час в термостат, после чего сыворотку инактивируют и готовят необходимые разведения.

Примечание. С этими сыворотками можно ставить реакции связывания комплемента и гемагглютинации, но они непригодны для постановки реакции агглютинации.

Каждую пробу сыворотки должны сопровождать следующие данные о больном: фамилия, имя, возраст, профессия (место работы), день болезни, дата взятия крови, предполагаемый диагноз, анамнез в отношении перенесения сыпного тифа в прошлом.

1. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ

С АНТИГЕНАМИ ИЗ РИККЕТСИЙ ПРОВАЧЕКА

Широкое применение серологических методов исследования со специфическими антигенами из риккетсий Провачека стало возможным благодаря разработке способов культивирования и накопления риккетсий.

Достоверность серологических методов исследования при риккетсиозах определяется качеством выпускаемых централизованно риккетсиальных антигенов. Они представляют собой очищенные и стандартизированные взвеси риккетсий Провачека, выращенных в желточных оболочках куриных эмбрионов по Коксу или культивируемых во вшах.

Риккетсиальные антигены, применяемые в серологических реакциях, выпускают в виде корпускулярных взвесей, растворимых субстанций, или цельных антигенов, состоящих из корпускул риккетсий и растворимых фракций.

Корпускулярные антигены применяют для реакции агглютинации, цельные же и растворимые - для реакции связывания комплемента, а также для реакции преципитации.

Ввиду малой стойкости жидких антигенов (лизис и аггрегация риккетсий) в настоящее время их выпускают в сухом виде в запаянных ампулах, что обеспечивает неизменность их свойств на протяжении длительного времени при хранении при +4 - +10 °С.

В день постановки реакции антигены разводят физиологическим раствором согласно указаниям на этикетке ампул или в прилагаемом к препарату наставлении.

Сухие антигены, подвергнутые лиофильному высушиванию, должны иметь вид сухого порошка, хорошо отстающего от стенок ампул, или сухой пористой массы. Если содержимое ампулы плохо растворяется и выпадает в виде хлопьев, это указывает на недоброкачественность антигена (дефекты высушивания или нарушение вакуума).

Срок годности диагностикума указывается на этикетке ампул: по прошествии его антигены подлежат обязательной проверке с 2 - 3 заведомо положительными сыворотками средних титров и с 2 - 3 отрицательными сыворотками.

Каждая вновь полученная серия антигена перед введением ее в опыт также должна быть проверена с заведомо положительными и отрицательными инфекционными или иммунсыворотками.

а) Реакция связывания комплемента (РСК)

Реакция связывания комплемента имеет целью определение в исследуемых сыворотках специфических комплементсвязывающих антител.

Сущность реакции заключается в связывании комплемента специфически комплексом (антиген + антитело), что обнаруживается в присутствии индикатора: бараньих эритроцитов, сенсибилизированных гемолитической сывороткой. При образовании комплекса антиген + антитело последний связывает комплемент и вследствие этого после добавления гемолитической системы не возникает гемолиза. Если же комплекс антиген + антитело не образуется, свободный комплемент вызывает гемолиз сенсибилизированных эритроцитов.

Таким образом, положительный результат РСК характеризуется отсутствием или задержкой гемолиза, а отрицательный - феноменом гемолиза (рис. 1 - здесь и далее рисунки не приводятся).

Реакцию связывания комплемента можно ставить при 37° и путем длительного связывания на холоде (при +4°). Последний способ чувствительнее первого, но требует несколько большего срока для завершения исследования (около суток); поэтому для диагностических целей обычно применяют метод постановки РСК в условиях термостата, что позволяет закончить исследование в течение одного дня.

Для постановки РСК необходимо 5 ингредиентов: 1) испытуемая сыворотка; 2) антиген; 3) комплемент; 4) гемолитическая сыворотка; 5) эритроциты барана. Реакцию ставят в общем объеме 1 мл, т.е. берут по 0,2 каждого ингредиента. Обязательным условием постановки РСК является использование точно оттитрованных компонентов.

Для обеспечения точности получаемых результатов необходимо пользоваться отдельной посудой (пробирки, пипетки, колбы), хорошо вымытой и высушенной в сухожаровом шкафу.

Для каждого ингредиента реакции используют отдельную пипетку. Все разведения делают стерильным физиологическим раствором (0,85-процентный раствор химически чистой поваренной соли в дистиллированной воде).

Исследуемую сыворотку прогревают перед опытом в течение 30 минут при 56 - 58° для разрушения комплемента.

Риккетсиальный антиген и гемолитическую сыворотку титруют те институты, которые их готовят. В соответствии с данными титрования на этикетке сухого антигена указывают объем жидкости, в котором он должен быть растворен, а на этикетке гемолитической сыворотки указывают ее титр.

Комплемент употребляют или сухой (выпускаемый в ампулах), или жидкий. Для получения последнего берут по 2 - 3 мл крови из сердца нескольких морских свинок в стерильную посуду и после отстаивания сыворотки ее разливают в пробирки и хранят в леднике (при +4°). Комплемент консервируют химическими смесями, например, 0,05 г сернокислого натрия и 0,04 г кристаллической борной кислоты на 1 мл сыворотки (Гинзбург, Калинин, 1947), или замораживанием в рефрижераторе при температуре минус 20°. Сухой комплемент применяется согласно прилагаемой к этому препарату инструкции. Как свежий, так и консервированный комплемент следует титровать каждый раз перед постановкой опыта.

При работе с риккетсиальными антигенами основным разведением комплемента является обычно 1:10.

Гемолитическая сыворотка выпускается в ампулах; это сыворотка кролика, иммунизированного по определенной схеме взвесью бараньих эритроцитов. В опыт гемолитическую сыворотку вводят в тройном титре: например, рабочий титр, указанный на этикетке, равен 1:1800; в этом случае в опыт берут сыворотку, разведенную 1:600. При длительном хранении первоначальный титр гемолитической сыворотки может снижаться. Проверку ее титра производят следующим образом. Готовят основное разведение сыворотки 1:100 (0,1 мл сыворотки + 9,9 мл физиологического раствора). В ряд пробирок последовательно разливают по 0,2 мл разведений сывороток, начиная с 1:1000; в каждую пробирку добавляют комплемент в разведении 1:10 в объеме 0,2 мл и по 0,2 мл 3-процентной взвеси бараньих эритроцитов; затем доливают в каждую пробирку по 0,4 мл физиологического раствора. Смесь ингредиентов выдерживают в термостате при 37° в течение часа. По наличию полного гемолиза эритроцитов судят о титре сыворотки. Схема титрования гемолитической сыворотки представлена в таблице 1.