Пцр на гонококки отрицательный

Выявление возбудителя гонореи (Neisseria gonorrhoeae), в ходе которого определяется генетический материал (ДНК) бактерий в образце.

Гонококк, ДНК возбудителя гонореи.

Neisseria gonorrhoeae, DNA.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Секрет простаты, первую порцию утренней мочи, соскоб из прямой кишки, соскоб урогенитальный, эякулят.

Общая информация об исследовании

Гонококк (Neisseria gonorrhoeae) – это грамотрицательная бактерия, относящаяся к диплококкам и вызывающая одно из самых распространенных венерических заболеваний – гонорею. Гонорея распространяется половым путем. Большинство пациентов (около 80 %), заразившихся гонореей, – сексуально активные люди в возрасте от 16 до 30 лет. Чаще всего это происходит в результате незащищенных сексуальных контактов с инфицированным партнером, однако иногда гонорея передается бытовым путем (через предметы личной гигиены: полотенца, губки и прочее), а также вертикальным путем – во время родов от инфицированной матери ребенку.

Клинические проявления заболевания у мужчин и женщин разнятся. У женщин чаще всего это бессимптомные формы инфекции, и выраженная симптоматика появляется лишь в период развития осложнений. В связи с этим нередко возбудитель у них обнаруживается случайно, например при профилактическом обследовании. Признаками инфекции являются:

У мужчин гонорея обычно проявляется спустя 3-4 дня после заражения выделениями из уретры, резкой болью при мочеиспускании, отечностью и гиперемией в области наружного отверстия уретры. При хронизации инфекции выделения могут быть очень скудными.

При длительном течении инфекции развиваются поражения верхних отделов мочевыделительной системы: мочевого пузыря, почек, а также репродуктивной системы (простаты, яичек – у мужчин и матки, маточных труб, яичников – у женщин). Заболевание также способно поражать суставы (особенно крупные – коленные, тазобедренные), глаза (конъюнктивиты). Хроническая гонорея может являться причиной мужского и женского бесплодия.

Основными факторами риска заражения являются: частая смена половых партнеров, секс с партнером, у которого в прошлом были заболевания, передающиеся половым путем, незащищенный вагинальный, анальный или оральный секс.

Существует несколько подходов к диагностике данного заболевания: микробиологический, серологический и молекулярно-биологический. Наиболее высокой чувствительностью и специфичностью обладает молекулярно-биологический метод (ПЦР-диагностика), основанный на выделении генетического материала возбудителя.

Гонорея в подавляющем большинстве случаев успешно лечится приемом курса антибиотиков.

Для чего используется исследование?

Для диагностики и мониторинга лечения гонококковой инфекции.
Для профилактического обследования определенных контингентов лиц (работников здравоохранения, питания и пр.).

Когда назначается исследование?

При симптомах гонореи. У мужчин это гнойные выделения из уретры, жжение, боль во время мочеиспускания, гиперемия и отечность в области наружного отверстия уретры, воспалительные изменения, жжение, боль в области ануса, у женщин – выделения из влагалища желтовато-белого цвета, жжение во время мочеиспускания, кровотечения в межменструальный период, кровотечения после вагинального полового акта.
В связи с тем что инфекция часто протекает бессимптомно, рекомендуется регулярно проводить обследование даже тем, у кого нет признаков гонореи: молодым сексуально-активным женщинам в возрасте до 25 лет – ежегодно, беременным или планирующим беременность женщинам; сексуально активным мужчинам – не реже одного раза в год.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Возбудителя в исследуемом материале не выявлено.

Если обнаружена инфекция, анализ на Neisseria gonorrhoeae перед назначением лечения необходимо провести еще и половому партнеру – для исключения реинфицирования после проведенной терапии. В случае выявления инфекции у полового партнера курс лечения рекомендуется пройти обоим партнерам.
Инфицирование Neisseria gonorrhoea повышает риск возникновения других ЗППП, включая ВИЧ.
Симптомы гонореи схожи с симптомами хламидиоза, еще одного распространенного ЗППП. Хламидиоз и гонорея требуют различного лечения. Рекомендуется одновременно с тестом на Neisseria gonorrhoeae провести и тест на Chlamydia trachomatis. Возможно также одновременное инфицирование гонококком и хламидией, тогда оба заболевания лечатся одновременно.

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, дерматовенеролог, гинеколог, инфекционист.

За звучной аббревиатурой ПЦР скрывается сложная и не слишком понятная для рядового пациента расшифровка — полимеразная цепная реакция. Что же такое ПЦР-диагностика, на чем она основана и почему в последнее время ее стали считать самой перспективной технологией в постановке диагнозов, касающихся инфекционных и вирусных заболеваний? Мы расскажем о преимуществах ПЦР-метода, его особенностях и этапах проведения.

ПЦР-диагностика: что это такое?

Диагностика методом ПЦР существует чуть более 30 лет. Значительно эволюционировав за это время, она зарекомендовала себя как один из наиболее точных способов выявления инфекций. В основе метода лежит принцип многократного увеличения микроскопических концентраций фрагментов ДНК возбудителя в биологической пробе пациента в искусственных условиях. В результате сложного процесса, называемого амплификацией, под воздействием ферментов и изменения температуры (от 50 до 95°С) из одной молекулы ДНК образуется две. При этом происходит копирование участка ДНК, который присутствует только у того вида патогенного микроорганизма, который интересует врача.

Цикл образования новой молекулы ДНК занимает всего около 3 минут, а тридцати-сорока циклов вполне достаточно, чтобы получить количество молекул, необходимое для достоверного визуального определения методом электрофореза.

Кроме амплификации, то есть простого увеличения числа копий молекулы ДНК, с помощью ПЦР можно производить и другие манипуляции с генетическим материалом, например, сращивать фрагменты ДНК, вводить мутации и т.д. Это позволяет использовать ПЦР не только для диагностики инфекционных и генетических заболеваний, но и для установления отцовства, клонирования и выделения новых генов.

ПЦР-диагностика проводится в специальных лабораториях с помощью амплификационного оборудования. На сегодня существует множество различных модификаций ПЦР, включая технологии с использованием не только ДНК, но и фрагментов рибонуклеиновой кислоты (РНК). В некоторых из них амплификация осуществляется при постоянной температуре, и для их проведения специальное оборудование не требуется.

Еще одна популярная модификация ПЦР — мультиплексная амплификация (МПА), которая позволяет проводить исследование сразу нескольких изучаемых фрагментов в одной пробирке. Это не только ускоряет и удешевляет проведение анализа, но и позволяет рассматривать одни фрагменты, получившиеся в результате реакции, в качестве положительных маркеров для других, что еще больше увеличивает точность исследования методом ПЦР.

В клинической медицине ПЦР-диагностика является одним из наиболее востребованных методов анализа в самых разных сферах:

Прямое определение возбудителя инфекции. Некоторые традиционные методы, такие как иммуноферментный анализ (ИФА), выделяют только белки-маркеры, которые являются продуктом жизнедеятельности возбудителей инфекции, а потому только косвенно указывают на присутствие микроорганизмов. Наличие специфического участка в ДНК, выявленное с помощью ПЦР, безошибочно или почти безошибочно указывает на присутствие конкретной инфекции.
Высокая специфичность метода . Она обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется фрагмент ДНК, характерный только для конкретного возбудителя инфекции. Специфичность исключает возможность ложных результатов анализа, тогда как в иммунологических методах исследований ошибки вполне вероятны из-за перекрестной реакции антигенов.
Высокая чувствительность . При помощи ПЦР-диагностики можно выявить присутствие в организме даже единичных клеток вирусов или бактерий в тех случаях, когда обычными методами сделать это практически невозможно. ПРЦ определяет наличие всего 10–100 клеток в пробе, тогда как иммунологическими и микроскопическими тестами можно определить наличие инфекции при количестве клеток не менее 103–105.
Универсальность . Сходство состава всех ДНК или РНК дает возможность применять универсальные методы лабораторных исследований, диагностируя сразу несколько возбудителей из одной биологической пробы.
Скорость получения результатов . Поскольку для проведения ПЦР-диагностики не нужен посев и выделение культуры возбудителя, то и большого количества времени на нее не требуется. Весь цикл — от забора биоматериала до получения результатов — занимает 4–5 часов.
Диагностика латентных инфекций . ПЦР-методом диагностируются трудно культивируемые и некультивируемые формы микроорганизмов, встречающиеся в тех случаях, когда заболевание протекает в скрытой форме.

Методом ПЦР можно выявлять возбудителей инфекции не только в организме человека, но и в почве, воде, продуктах питания.

Тем не менее не стоит думать, что ПЦР-диагностика не имеет недостатков. У нее есть свои ограничения, но их количество настолько незначительно, что не может отрицательно повлиять на популярность и эффективность метода:

Вероятность амплификации ДНК не только живого, но и погибшего микроорганизма . При проведении ПЦР-диагностики для контроля эффективности лечения необходимо соблюдать определенные требования. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка времени (1–2 месяца), за который происходит полное исчезновение возбудителя инфекции в организме.
Возможность возникновения перекрестной реакции . Подбор фрагментов ДНК (праймеров) осуществляется на основе знаний о генетическом строении конкретного микроорганизма. Но теоретически такой же фрагмент может присутствовать и у других микроорганизмов, геном которых на сегодняшний день еще не расшифрован. Их присутствие в пробе может привести к ложноположительному результату анализа.
Изменчивость микроорганизмов . Эта способность возбудителей к мутации иногда приводит к тому, что некоторые их штаммы становятся неуловимыми в процессе ПЦР-анализа.

Чтобы уменьшить риски, разработаны стандарты объемов испытаний тест-систем ПЦР-диагностики, включающие проверку на перекрестные реакции и тестирование всех известных штаммов конкретного возбудителя.

ПЦР-диагностика проводится в специальной лаборатории в несколько этапов.

Забор биоматериала . Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть:
- Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови.
- Моча . Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций.
- Мокрота . Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15–20 мг.
- Кровь, сыворотка, плазма . С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь (1–1,5 мл), собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Хранить биоматериал можно не более суток при температуре 4°С. Замораживать кровь категорически запрещается.
- Биологические жидкости . К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости. Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1–1,5 мл в стерильные пробирки.
- Биоптаты , т.е. материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2–3 мм 3 .
Хранение и транспортировка биоматериала . Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Если необходимо длительное хранение, то пробы помещают в холодильник с температурой 2–8°С на срок не более одних суток. Допустимо хранение некоторых биоматериалов в течение двух недель в замороженном виде при температуре -20°С. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено. Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов.
Выделение ДНК из образца . Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором.
Проведение ПЦР . Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2–3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные , включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные , не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе.
Регистрация результатов . Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35–40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате.
Интерпретация результатов исследования . Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций. На основании количественного результата можно сделать вывод о степени активности заболевания и определить характер лечения.

Цена ПЦР-диагностики зависит от того, на какую конкретно инфекцию пациент планирует проверяться, от вида анализируемого материала, методики тестирования — качественной или количественной. Цена за определение одной инфекции составляет от 200 до 800 рублей в разных клиниках. Кроме того, к стоимости анализа добавится и плата за забор биоматериала — около 400 рублей. Средняя стоимость ПЦР-диагностики разных видов приведена в таблице 1.

Таблица 1 . Примерные цены на анализы ПЦР в Москве

Название анализа	Цена, руб.
Определение ДНК хламидия	750
Определение ДНК микоплазмы хоминис	540
Определение микоплазмы гениталиум	350
Определение ДНК уреаплазмы	350
Гонококк, определение ДНК	350
Определение ДНК герпеса (разные типы)	350–600
Определение ДНК кандиды	570
Вирус краснухи, определение РНК	800
Дифференцированное определение ДНК ВПЧ (разные типы)	350–1900 [1]

Вы можете добавить к заказу еще тесты в течение 7 дней

Гонококк, или Neisseria gonorrhoeae — бактерия, которая вызывает одно из самых распространенных венерических заболеваний — гонорею (гонококковую инфекцию). Чаще всего болезнь передается половым путем. Крайне редко гонорея способна передаваться контактно-бытовым путем: при несоблюдении правил личной гигиены возможно заражение детей от ухаживающих за ними взрослых.

У женщин и мужчин заболевание в половине случаев может протекать бессимптомно и обнаруживается случайно, например, при профилактическом обследовании. Из наблюдающихся симптомов отмечают выделения из уретры или половых путей, боль и жжение при мочеиспускании. При переходе инфекции в хроническую форму симптомы становятся скудными.

Длительная и особенно хроническая гонорея опасна поражениями мочевого пузыря, почек, простаты и яичек у мужчин, матки и маточных труб у женщин. Гонорея может быть причиной бесплодия. Поэтому своевременная диагностика и лечение гонореи являются важной задачей как для пациента, так и его лечащего врача. Существует несколько видов исследований на выявление гонореи (микробиологический метод, методы амплификации нуклеиновых кислот). Точным и эффективным является метод диагностики с помощью ПЦР в реальном времени, основанный на выделении ДНК возбудителя.

В каких случаях обычно назначают исследование

При признаках воспалительного процесса урогенитального тракта и репродуктивной системы и при наличии показаний назначают исследование отделяемого прямой кишки, ротоглотки, конъюнктивы.
При наличии симптомов, подозрительных в отношении ИППП у мужчин и женщин.
При подготовке к беременности.
При обследовании женщин во время беременности (троекратно: при постановке на учет по беременности, при сроке беременности 27–30 недель и 36–40 недель).
При предстоящих оперативных вмешательствах на половых органах и органах малого таза.
Для контроля излеченности (через месяц после окончания лечения).

Что именно определяют в процессе анализа

Анализ на гонорею у женщин и мужчин определяет наличие или отсутствия в биологическом материале пациента ДНК Neisseria gonorrhoeae.

Что означают результаты теста

Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии заболевания.

Сроки выполнения теста

Результат исследования можно получить через 1–2 дня после сдачи анализа.

Подготовка к анализу

Как сдать анализ на гонорею? Для взятия биологического материала необходимо обратиться в медицинский офис. Подготовка к анализу зависит от того, какой именно биологический материал (соскоб из цервикального канала, мазок из уретры и т. д.) будет исследован.

Выберите требуемый вид биоматериала

Соскобы из урогенитального тракта не берутся в течение суток после местной терапии (свечи, мази, спринцевания), после полового контакта и во время менструации у женщин. После кольпоскопии, интравагинального УЗИ должно пройти 48 часов. В случае наличия признаков острого воспаления необходимость взятия мазка определяется лечащим врачом. Если необходимо получить соскоб из уретры, то перед взятием материала нужно не мочиться 1,5 - 2 часа. Если исследование назначается для контроля излеченности, то взятие материала на исследование методом ПЦР возможно не ранее, чем через 28 дней после окончания приема антибиотиков, на микробиологические исследования не ранее,чем через 14 дней.