Ифа тест-системы на туляремию

Francisella tularensis IgM

Иммуноферментный тест-набор SERION ELISA classic Francisella tularensis IgG и IgM это качественные и количественные тесты для выявления антител человека к липополисахарину(LPS) туляремии в сыворотке или плазме. Тесты предназначены для диагностики туляремии, контроля успешности прививки, для определения статуса перед прививкой для избежания нанесения ущерба прививкой, а также для поддержания эпидемиологических разработок.

Туляремия– это передающийся человеку зооноз, вызванный бактерией Francisella tularensis, который проявляется в различных клинических картинах болезни. Поскольку картина жалоб у животных похожа на чуму и болезнь часто поражает зайцев и диких кроликов, её также называют заячьей чумой. Также в народе курсируют названия чума грызунов, лемминговая лихорадка или болезнь Паринода. Возбудителем Francisella tularensis(прежнее название также Pasteurella tularensis) является грамотрицательная плеоморфная бактерия. Три клинически существенные формы из всего четырёх подвидов серологически практически не различаются. Эпидемиологически, биохимически и генотипно можно различить два типа:
Francisella tularensis biovar tularensis(типA) высоковирулентен. Если не подвергать инфекцию лечению, она дает высокую смертность. Francisella tularensis biovar holarctica (типB) намного менее вирулентен, однако может давать также тяжелую клиническую картину. Естественным резервуаром возбудителя Francisella tularensis являются различные мелкие млекопитающие, как напр. зайцы, кролики, мыши, крысы или белки.
Возбудитель был также уже обнаружен и в пробах грунта и водоёмах и может там, в зависимости от климатических условий, долгое время сохраняться. Заражение человека может происходить через прямой контакт через кожу или слизистую инфицированных животных или их испражнения. Также передаточным звеном могут быть эктопаразиты. Ещё одним потенциальным путем заражения может быть употребление в пищу зараженного и не достаточно хорошо проваренного мяса и ингаляция инфицированной пыли. Передача заболевания от человека человеку маловероятна и пока такие случаи не известны.

Туляремия встречается во всем северном полушарии между30-м и 71-м северным градусом широты, особенно в скандинавских странах, России, Японии, Китае, США и Канаде. Заражаются чаще сельские жители. В Германии туляремия считается редким инфекционным заболеванием. Первые симптомы туляремии проявляются в основном на2-й– 5-й день после инфицирования. Инкубационный период в зависимости от дозы заражения, пути заражения и от вирулентности подвида возбудителя может колебаться от1 до21 дней. Наряду с классическими симптомами, такими как лихорадка, вялость, а также
мускульные боли и боли в конечностях клиническая картина туляремии может быть очень разнообразна. Клинически различают следующие формы:

• Язвенно-желёзная: кожные язвы с региональными увеличениями лимфатических узлов(LKS)
• Желёзная: региональные увеличения лимфатических узлов без кожных язв
• Глазно-желёзная: конъюктивит с увеличением лимфатических узлов в районе уха
• Рото-глоточная: стоматит, фарингит(воспаление глотки), тонзилит (воспаление миндалин), увеличение шейных лимфоузлов
• Кишечная: боли в животе, понос и рвота
• Лёгочная: первичное заболевание лёгких и плевры
• Тифоидная: первичное лихорадочное заболевание с сепсисом

Ингаляция возбудителя часто ведет к лёгочным проявлениям(напр. воспаление лёгких) или к септической, сходной с тифом картине заболевания. Инфицирование через пищеварительный тракт может привести к рвоте, болям в животе и поносу. Выявление культуры из периферической крови, мазков и биопсийного материала сложно и может длиться несколько недель. Поскольку речь идет об острозаразном
возбудителе, такую диагностику проводят только специализированные лаборатории. По этой причине идентификация происходит чаще всего непрямым способом через иммунологические и молекулярные методы. Серологическое подтверждение через увеличение специфических антител может быть проведено
при помощи теста ELISA.

Вовремя распознанное заболевание туляремии можно успешно лечить антибиотиками. Непролеченная инфекция возбудителем типа А ведет к отказу многих систем органов и поражению центральной нервной системы и в40% случаев к смерти; в случае применения лечения смертность составляет примерно1%.
Инфицирование возбудителем типа В протекает при всех путях заражения более мягко и с низким смертельным исходом. Из-за высокой заразности возбудителя а также многочисленных возможностей его
распространения, многие страны проводили опыты по использованию возбудителя
в качестве биологического оружия.

Тесты SERION ELISA classicFrancisella tularensis IgG или IgM позволяют количественное определение человеческихIgG- илиIgM-антител в сыворотке или плазме к липополисахарину(LPS) туляремии Francisella tularensis ssp. holarctica (вид LVS).

Преимущества тест-систем для ИФА производства Virion\ Serion:

Инфекционная панель SERION ELISA classic Зоонозные инфекции

SERION ELISA classic Borrelia burgdorferi

Каталожный №	Возбудитель,класс иммуноглобулинов	Название заболевания	Детальная информация
ESR121G	Borrelia burgdorferi IgG	Боррелиоз, Болезнь Лайма	Иммуноферментный тест для качественного и количественного определения антител человека к вирусам Borrelia burgdorferi sensu lato в сыворотке, плазме или спинномозговой жидкости.
ESR121M	Borrelia burgdorferi IgM	Боррелиоз, Болезнь Лайма	Иммуноферментный тест для качественного и количественного определения антител человека к вирусам Borrelia burgdorferi sensu lato в сыворотке, плазме или спинномозговой жидкости.

SERION ELISA classic Brucella

Каталожный №	Возбудитель,класс иммуноглобулинов	Название заболевания	Детальная информация
ESR116A	Brucella IgA	Бруцеллез	иммуноферментный тест для качественного и количественного определения антител человека всех гуманпатогенних видов Brucella в сыворотке или плазме
ESR116G	Brucella IgG	Бруцеллез	иммуноферментный тест для качественного и количественного определения антител человека всех гуманпатогенних видов Brucella в сыворотке или плазме
ESR116M	Brucella IgM	Бруцеллез	иммуноферментный тест для качественного и количественного определения антител человека всех гуманпатогенних видов Brucella в сыворотке или плазме

SERION ELISA classic Coxiella burnetii Phase 1

Каталожный №	Возбудитель,класс иммуноглобулинов	Название заболевания	Детальная информация
ESR1311A	Coxiella burnetii phase 1 IgA	Ку-лихорадка	иммуноферментный тест для выявления антител человека в сыворотке или плазме к Coxiella burnetii в фазе 1
ESR1311G	Coxiella burnetii phase 1 IgG	Ку-лихорадка	иммуноферментный тест для выявления антител человека в сыворотке или плазме к Coxiella burnetii в фазе 1

SERION ELISA classic Coxiella burnetii Phase 2

Каталожный №	Возбудитель,класс иммуноглобулинов	Название заболевания	Детальная информация
ESR1312G	Coxiella burnetii phase 2 IgG	Ку-лихорадка	иммуноферментный тест для выявления антител человека в сыворотке или плазме к Coxiella burnetii в фазе 2
ESR1312M	Coxiella burnetii phase 2 IgM	Ку-лихорадка	иммуноферментный тест для выявления антител человека в сыворотке или плазме к Coxiella burnetii в фазе 2

SERION ELISA classic Echinococcus IgG

Каталожный №	Возбудитель,класс иммуноглобулинов	Название заболевания	Детальная информация
ESR107G	Echinococcus IgG	Эхинококкоз	качественный и количественный тест для выявления антител человека к Echinococcus granulosus и Echinococcus multilocularis (эхинококкоза) в сыворотке или плазме

SERION ELISA classic Francisella tularensis

Каталожный №	Возбудитель,класс иммуноглобулинов	Название заболевания	Детальная информация
ESR142G	Francisella tularensis IgG	Туляремия	качественный и количественный иммуноферментный тест для выявления человеческих антител в сыворотке или плазме к липополисахаридов (LPS) франциселл туляремии
ESR142M	Francisella tularensis IgM	Туляремия	качественный и количественный иммуноферментный тест для выявления человеческих антител в сыворотке или плазме к липополисахаридов (LPS) франциселл туляремии

SERION ELISA classic Leishmania IgG

Каталожный №	Возбудитель,класс иммуноглобулинов	Название заболевания	Детальная информация
ESR147G	Leishmania IgG	Лейшманиоз	качественный и количественный иммуноферментный тест для выявления человеческих антител IgG в сыворотке или плазме к лейшмании

SERION ELISA classic Leptospira

Каталожный №	Возбудитель,класс иммуноглобулинов	Название заболевания	Детальная информация
ESR125G	Leptospira IgG	Лептоспироз	качественный и количественный иммуноферментный тест для выявления видоспецифических антител человека к вирусу Leptospira ssp в сыворотке или плазме
ESR125M	Leptospira IgM	Лептоспироз	качественный и количественный иммуноферментный тест для выявления видоспецифических антител человека к вирусу Leptospira ssp в сыворотке или плазме

SERION ELISA classic Yersinia

Полный текст:

Цель. Сравнительный анализ серологических методов выявления возбудителя туляремии и их оценка. Материалы и методы. Использованы экспериментальные диагностические наборы и тест-системы для постановки серологических методов: реакции непрямой гемагглютинации (РНГА); реакции иммунофлуоресценции (РИФ); иммуноферментного анализа (ИФА) традиционного с использованием микропланшет; ИФА после селективного концентрирования возбудителя туляремии на магноиммуносорбенте (МИС); реакции микрогравиметрического анализа (МГА) на основе пьезобиосенсоров (ПБ) и поверхностного плазмонного резонанса (ППР). Эксперименты проводили с гомологичными штаммами туляремийного микроба (тест-штаммами) и со штаммами гетерологичных микроорганизмов в модельных опытах на водопроводной воде, контаминированной различной концентрацией патогена. Результаты. Определены параметры каждого диагностического метода и дана оценка по показателям: чувствительности (при работе с чистыми культурами (тест-штаммами), загрязненными пробами больших объемов), специфичности, времени постановки и учета результатов, информативности, определения режимов постановки и учета. Заключение. Вышеперечисленные методы диагностики имеют свои достоинства и недостатки, поэтому при выборе того или иного метода исследователь должен руководствоваться своими целями. Так, для скрининговых исследований целесообразно проводить постановку ИФА, РИФ, РНГА; при выявлении возбудителя в больших объемах и загрязненных пробах эффективно применение селективного концентрирования на МИС с последующей постановкой ИФА; для выявления незначительных объемов проб и учета реакции в реальном времени возможно применение МГА и ППР.

355035, Ставрополь, ул. Советская, 13-15, р.т. (8652)26-03-12

1. Ермолаева Т.Н., Калмыкова Е.Н., Шашканова О.Ю. Пьезокварцевые биосенсоры для анализа объектов окружающей среды, пищевых продуктов и для клинической диагностики. Российский химический журнал, 2008, 3 (2): 17-29.

3. Кальной С.М., Жарникова И.В., Дикова С.П., Ляпустина Л.В., Ковалев Д.А., Писаренко С.В., Жарникова Т.В., Куличенко А.Н. Заявка № 2012114858/10, 13.04.2012. Способ получения микрогравиметрического иммуносенсора. Патент РФ № 2510830, 10.04.2014. Бюл. № 10.

4. Тюменцева И.С., Жарникова И.В., Афанасьев Е.Н. и др. Научно-методические разработки биотехнологий производства иммунобиологических препаратов для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний и детекции их возбудителей. Биопрепараты. Профилактика. Диагностика. Лечение, 2015, 4: 21-26.

5. Тюменцева И.С., Афанасьев Е.Н., Старцева О.Л., Курчева С.А., Жарникова И.В., Гаркуша Ю.Ю., Жданова Е.В., Кальной С.М. Разработка стандартных условий биотехнологии производства иммуномагнитного сорбента для экспресс-диагностики опасных инфекционных заболеваний. Технологии живых систем. 2017, 2: 52-58.

6. Тюменцева И.С., Курчева С.А., Афанасьев Е.Н., Жарникова И.В., Жданова Е.В., Старцева О.Е., Гаркуша Ю.Ю., Семирчева А.А. Особенности пробоподготовки с использованием иммуномагнитного сорбента при исследовании полевого материала на наличие возбудителя чумы. Военно-медицинский журнал. 2018, 339 (5): 42-46.

7. Хаиров С.Г., Юсупов О.Ю., Яникова Э.А. Заявка № 2012101543/10, 17.01.2012. Способ получения эритроцитарного антительного овисного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с целью индикации овисного антигена в биоматериале. Патент РФ № 2509306, 10.03.2014. Бюл. № 7.

8. Gall D., Nielsen K., Forbes L. et al. Alidation of the fluorescence polarization assay and comparison to other serological assays for the detection of serum antibodies to Brucella abortus in bison. J. Wildl. Dis. 2000, 36 (3): 76-469.

9. Pohanka M., Skladal B. Piezoelectric Immunosensor for the Direct and Rapid Detection of Francisella tularensis. Foilia Microbiol. 2007, 52 (4): 325-330.

10. Sting R., Ortmann G. Erfahrungen mit einfachen ELISA-Testsystemes fur die Brucellose — Serologie bei Rind, Schaf und Ziege. Berlin. Und munch. Wochenschr 2000, 113 (1): 22-28.

Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.

За звучной аббревиатурой ПЦР скрывается сложная и не слишком понятная для рядового пациента расшифровка — полимеразная цепная реакция. Что же такое ПЦР-диагностика, на чем она основана и почему в последнее время ее стали считать самой перспективной технологией в постановке диагнозов, касающихся инфекционных и вирусных заболеваний? Мы расскажем о преимуществах ПЦР-метода, его особенностях и этапах проведения.

ПЦР-диагностика: что это такое?

Диагностика методом ПЦР существует чуть более 30 лет. Значительно эволюционировав за это время, она зарекомендовала себя как один из наиболее точных способов выявления инфекций. В основе метода лежит принцип многократного увеличения микроскопических концентраций фрагментов ДНК возбудителя в биологической пробе пациента в искусственных условиях. В результате сложного процесса, называемого амплификацией, под воздействием ферментов и изменения температуры (от 50 до 95°С) из одной молекулы ДНК образуется две. При этом происходит копирование участка ДНК, который присутствует только у того вида патогенного микроорганизма, который интересует врача.

Цикл образования новой молекулы ДНК занимает всего около 3 минут, а тридцати-сорока циклов вполне достаточно, чтобы получить количество молекул, необходимое для достоверного визуального определения методом электрофореза.

Кроме амплификации, то есть простого увеличения числа копий молекулы ДНК, с помощью ПЦР можно производить и другие манипуляции с генетическим материалом, например, сращивать фрагменты ДНК, вводить мутации и т.д. Это позволяет использовать ПЦР не только для диагностики инфекционных и генетических заболеваний, но и для установления отцовства, клонирования и выделения новых генов.

ПЦР-диагностика проводится в специальных лабораториях с помощью амплификационного оборудования. На сегодня существует множество различных модификаций ПЦР, включая технологии с использованием не только ДНК, но и фрагментов рибонуклеиновой кислоты (РНК). В некоторых из них амплификация осуществляется при постоянной температуре, и для их проведения специальное оборудование не требуется.

Еще одна популярная модификация ПЦР — мультиплексная амплификация (МПА), которая позволяет проводить исследование сразу нескольких изучаемых фрагментов в одной пробирке. Это не только ускоряет и удешевляет проведение анализа, но и позволяет рассматривать одни фрагменты, получившиеся в результате реакции, в качестве положительных маркеров для других, что еще больше увеличивает точность исследования методом ПЦР.

В клинической медицине ПЦР-диагностика является одним из наиболее востребованных методов анализа в самых разных сферах:

Прямое определение возбудителя инфекции. Некоторые традиционные методы, такие как иммуноферментный анализ (ИФА), выделяют только белки-маркеры, которые являются продуктом жизнедеятельности возбудителей инфекции, а потому только косвенно указывают на присутствие микроорганизмов. Наличие специфического участка в ДНК, выявленное с помощью ПЦР, безошибочно или почти безошибочно указывает на присутствие конкретной инфекции.
Высокая специфичность метода . Она обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется фрагмент ДНК, характерный только для конкретного возбудителя инфекции. Специфичность исключает возможность ложных результатов анализа, тогда как в иммунологических методах исследований ошибки вполне вероятны из-за перекрестной реакции антигенов.
Высокая чувствительность . При помощи ПЦР-диагностики можно выявить присутствие в организме даже единичных клеток вирусов или бактерий в тех случаях, когда обычными методами сделать это практически невозможно. ПРЦ определяет наличие всего 10–100 клеток в пробе, тогда как иммунологическими и микроскопическими тестами можно определить наличие инфекции при количестве клеток не менее 103–105.
Универсальность . Сходство состава всех ДНК или РНК дает возможность применять универсальные методы лабораторных исследований, диагностируя сразу несколько возбудителей из одной биологической пробы.
Скорость получения результатов . Поскольку для проведения ПЦР-диагностики не нужен посев и выделение культуры возбудителя, то и большого количества времени на нее не требуется. Весь цикл — от забора биоматериала до получения результатов — занимает 4–5 часов.
Диагностика латентных инфекций . ПЦР-методом диагностируются трудно культивируемые и некультивируемые формы микроорганизмов, встречающиеся в тех случаях, когда заболевание протекает в скрытой форме.

Методом ПЦР можно выявлять возбудителей инфекции не только в организме человека, но и в почве, воде, продуктах питания.

Тем не менее не стоит думать, что ПЦР-диагностика не имеет недостатков. У нее есть свои ограничения, но их количество настолько незначительно, что не может отрицательно повлиять на популярность и эффективность метода:

Вероятность амплификации ДНК не только живого, но и погибшего микроорганизма . При проведении ПЦР-диагностики для контроля эффективности лечения необходимо соблюдать определенные требования. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка времени (1–2 месяца), за который происходит полное исчезновение возбудителя инфекции в организме.
Возможность возникновения перекрестной реакции . Подбор фрагментов ДНК (праймеров) осуществляется на основе знаний о генетическом строении конкретного микроорганизма. Но теоретически такой же фрагмент может присутствовать и у других микроорганизмов, геном которых на сегодняшний день еще не расшифрован. Их присутствие в пробе может привести к ложноположительному результату анализа.
Изменчивость микроорганизмов . Эта способность возбудителей к мутации иногда приводит к тому, что некоторые их штаммы становятся неуловимыми в процессе ПЦР-анализа.

Чтобы уменьшить риски, разработаны стандарты объемов испытаний тест-систем ПЦР-диагностики, включающие проверку на перекрестные реакции и тестирование всех известных штаммов конкретного возбудителя.

ПЦР-диагностика проводится в специальной лаборатории в несколько этапов.

Забор биоматериала . Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть:
- Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови.
- Моча . Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций.
- Мокрота . Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15–20 мг.
- Кровь, сыворотка, плазма . С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь (1–1,5 мл), собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Хранить биоматериал можно не более суток при температуре 4°С. Замораживать кровь категорически запрещается.
- Биологические жидкости . К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости. Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1–1,5 мл в стерильные пробирки.
- Биоптаты , т.е. материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2–3 мм 3 .
Хранение и транспортировка биоматериала . Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Если необходимо длительное хранение, то пробы помещают в холодильник с температурой 2–8°С на срок не более одних суток. Допустимо хранение некоторых биоматериалов в течение двух недель в замороженном виде при температуре -20°С. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено. Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов.
Выделение ДНК из образца . Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором.
Проведение ПЦР . Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2–3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные , включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные , не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе.
Регистрация результатов . Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35–40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате.
Интерпретация результатов исследования . Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций. На основании количественного результата можно сделать вывод о степени активности заболевания и определить характер лечения.

Цена ПЦР-диагностики зависит от того, на какую конкретно инфекцию пациент планирует проверяться, от вида анализируемого материала, методики тестирования — качественной или количественной. Цена за определение одной инфекции составляет от 200 до 800 рублей в разных клиниках. Кроме того, к стоимости анализа добавится и плата за забор биоматериала — около 400 рублей. Средняя стоимость ПЦР-диагностики разных видов приведена в таблице 1.

Таблица 1 . Примерные цены на анализы ПЦР в Москве

Название анализа	Цена, руб.
Определение ДНК хламидия	750
Определение ДНК микоплазмы хоминис	540
Определение микоплазмы гениталиум	350
Определение ДНК уреаплазмы	350
Гонококк, определение ДНК	350
Определение ДНК герпеса (разные типы)	350–600
Определение ДНК кандиды	570
Вирус краснухи, определение РНК	800
Дифференцированное определение ДНК ВПЧ (разные типы)	350–1900 [1]

Читайте также: