Есть ли бактериофаг против хеликобактер

Владельцы патента RU 2253675:

Изобретение относится к области медицинской вирусологии и микробиологии. Предложен новый штамм бактериофага Helicobacter pylori №МЦКМ F-07. Штамм, обладающий литической активностью в отношении бактерий Helicobacter pylori. Предложен также способ получения противогастритного и противоязвенного средства на основе нового штамма бактериофага. Способ предусматривает получение очищенной суспензии бактериофага Helicobacter pylori №МЦКМ F-07 с литической активностью 10 9 БОЕ/мл и добавление в нее раствора 1% хинозола. Кроме того, в данное средство можно дополнительно вводить сорбит и желатозу, а полученную смесь замораживают и лиофилизируют. Предложенное изобретение позволяет получать высокоэффективное противоязвенное и противогастритное средство, которое может быть использовано в медицине. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии, а именно к выявлению нового специфического штамма бактериофага для получения противогастритного и противоязвенного средства.

Известна роль бактерий Helicobacter pylori в патогенезе поражений желудка и двенадцатиперсной кишки. При исследованиях, проведенных у пациентов с острыми гастритами или обострениями хронической патологии, выявлено большое число бактерий, локализующихся в участках воспаления, обычно в антральной части. Проникая через слой слизи, Helicobacter pylori прикрепляются к эпителиальным клеткам (чаще в области межклеточных ходов), проникают в крипты и железы слизистой оболочки. Активность бактерий приводит к разрушению слизистого слоя и обусловливает контакт желудочного сока со стенкой органа. Антигены микроорганизмов стимулируют миграцию нейтрофилов и способствуют развитию острого воспаления. Локализация Helicobacter pylori в области межклеточных ходов обусловлена хемотаксисом к местам выхода мочевины и гемина, образующихся из разрушающегося гемоглобина эритроцитов в микроциркуляторном русле. Под действием бактериальной уреазы мочевина превращается в аммиак, повреждающий слизистую оболочку желудка и двенадцатиперсной кишки.

Известны штамм бактериофага Bacteriophagum salmonellae, обладающий противосальмонелезной активностью (Патент РФ №2080384, МПК С 12 N 7/00, опубл. 27.05.97); штамм бактериофага Enterobacter aerogenes для диагностики, профилактики и лечения инфекции, вызываемой Enterobacter aerogenes (Авторское свидетельство СССР №1685998, МПК С 12 N 7/00, опубл. 23.10.91); штамм бактериофага Pseudomonas aeruginosa ГНЦ ПМ №02, используемый при изготовлении поливалентного препарата против синегнойной палочки (Патент РФ №2113476, МПК С 12 N 7/ 00, опубл. 20.06.98).

Однако вышеуказанные штаммы бактериофагов не обладают литической активностью в отношении бактерий Helicobacter pylori.

Штаммов бактериофагов Helicobacter pylori, используемых для получения противогастритного и противоязвенного средства, в настоящее время не известно (объект изобретения на штамм прототипа не имеет).

Известно, что для лечения гастритов или язвенных болезней, обусловленных деятельностью Helicobacter pylori, используют такие антибиотики, как метронидазол и фуразолидон, или амоксиклав, цефокситин и эритромицин. или тетрациклин (М.Д.Машковский. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1987, часть 2, - с.157, 183, 246, 293).

Однако применение препаратов-антибиотиков сопряжено с различными побочными эффектами (Белобородова Н.В., Богданов М.Б. и Черненькая Т.В. Алгоритмы антибиотикотерапии. Руководство для врачей. - М., 1999, с.17):

- появление резистентных (антибиотикоустойчивых) бактерий Helicobacter pylori при длительном применении антибиотиков;

- развитие дисбактериозов, усугубляющих гастрит и язвенную болезнь желудка и двенадцатиперсной кишки.

Наиболее близким аналогом (прототипом) является способ получения жидкой и сухой препаративной формы "Стрептофагин" на основе бактериофага, включающий получение очищенной суспензии фага Streptococcus bovis путем стерилизующей фильтрации с последующей фасовкой жидкого препарата и его герметизацией. Для получения сухой формы к суспензии добавляют сульфат аммония и пищевые сорбенты с последующей лиофильной сушкой препарата (Патент РФ №2059723, МПК С 12 N 7/00, опубл. 10.05.96).

Однако вышеуказанные препараты на основе бактериофага Streptococcus bovis не обладают литической активностью в отношении бактерий Helicobacter pylori.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является штамм бактериофага Helicobacter pylori, обладающий литической активностью в отношении патогенных бактерий Helicobacter pylori, а также способ получения противогастритной и противоязвенной препаративной жидкой и сухой формы на его основе, обеспечивающей лечение гастрита и язвы желудка без применения антибиотикотерапии.

Указанный технический результат достигается получением штамма бактериофага Helicobacter pylori (авторское название НР-7Ф-Х).

Указанный технический результат достигается также разработкой способа получения противогастритного и противоязвенного средства, включающего получение очищенной суспензии бактериофага и введение в него дополнительных компонентов, согласно изобретению в качестве очищенной суспензии бактериофага используют суспензию бактериофага Helicobacter pylori (НР-7Ф-Х) №МЦКМ F-07 с литической активностью не менее 10 9 БОЕ/мл, а в качестве дополнительных компонентов используют раствор хинозола при следующем конечном содержании ингредиентов полученного средства, мас.%:

очищенная суспензия бактериофага Helicobacter

pylori с литической активностью 10 9 БОЕ/мл 10,0-20,0

1%-ный раствор хинозола 0,5-1,0

вода ocтальное до 100%

Кроме того, в средство дополнительно вводят сорбит и желатозу, полученную смесь замораживают со скоростью 0,1-3,0°С в минуту до температуры ниже температуры стеклования аморфной фазы, оставшейся после кристаллизации льда, а процесс сушки средства производят лиофилизацией при следующем конечном содержании компонентов в сухом средстве, мас.%:

сухая масса бактерифага остальное до 100%

Желатоза - частично гидролизованная желатина (белок), обладающая амфотерными свойствами, которая является стабилизатором для биологически активных компонентов биопрепарата. Желатоза разрешена к использованию в пищевой и фармацевтической промышленности.

Сорбит обладают стабилизирующими и защитными свойствами в процессе сушки и хранения биологически активных веществ.

Хинозол - мелкокристаллический порошок лимонно-желтого цвета является антибиотиком, обладающим антибактериальной и противогрибковой активностью, малотоксичен.

Штамм бактериофага Helicobacter pylori (авторское название НР-7Ф-X) выделен из спонтанно лизировавшейся культуры Helicobacter pylori в процессе наработки ее биомассы на Колумбиа агаре при ее биохимических исследованиях. Штамм фага НР-7Ф-Х депонирован в Коллекции Межрегионального центра коррекции микроценоза человека (г.Новосибирск) под номером №МЦКМ F-07.

Проведена селекция штамма в течение 27 пассажей в присутствии 1,0 мг/мл хинозола, который можно использовать в качестве бактериостатика при получении препаративной формы.

Химический состав фага НР-7Ф-Х. Для оценки типа нуклеиновой кислоты очищенную суспензию фага окрашивают акридиновым оранжевым. Характер флуоресценции образцов при ультрафиолетовом облучении свидетельствовал о том, что фаг НР-7Ф-Х содержит ДНК. Белковый состав вириона исследован на основе электрофореза в 10%-ном полиакриламидиом геле. Выявлено 7 белков с молекулярными массами (в килодальтонах): 70; 67; 59; 47; 38; 27 и 34.

Физико-химические свойства фага. Суспензия фата НР-7Ф-Х не инактивируется при температуре 60°С в течение 40 минут. Литическая активность фага не изменяется в пределах рН 5-9. Фаг устойчив к антибиотику хинозолу.

Морфология негативных колоний. Фаг НР-7Ф-Х на газоне индикаторного штамма Helicobacter pylori образует округлые с четким краем негативные колонии от 0,5 до 1,5 мм в диаметре.

Вирулентность. Из 147 исследованных культур Helicobacter pylori, полученных из биоптатов слизистой оболочки желудка и двенадцатиперсной кишки больных хроническим гастритом и язвенной болезнью, все они оказались чувствительны к данному фагу.

Скорость и степень адсорбции. При множественности инфекции, равной 0,5, и инкубации адсорбционной смеси при 39°С за 5 минут адсорбируется 97% фага.

Латентный период и урожай фага. Латентный период более 25 минут и менее 30 минут. Средний урожай фага составляет 70 фаговых частиц на одну клетку. Титр фага в нативном фаголизате варьирует в пределах 10 10 БОЕ/мл.

Способ размножения. Размножается на бактериальных клетках Helicobacter pylori на твердой питательной среде Колумбиа агаре и на жидкой питательной среде.

Способ хранения. Суспензия фага (НР-7Ф-Х) хранится в жидком виде 1 год и лиофильном (сухом) виде при температуре +(2-10)°С в течение 2-х лет.

Для практического использования на базе фага (НР-7Ф-Х) созданы жидкая и сухая препаративные формы.

Пример 1. Приготовление жидкой формы препарата на основе штамма бактериофага Helicobacter pylori (НР-7Ф-Х)

Вначале берут культуру Helicobacter pylori, полученную из биоптатов слизистой оболочки желудка и двенадцатиперсной кишки больных хроническим гастритом и язвенной болезнью и производят ее посев на поверхность питательной среды, содержащей Колумбиа агар с 10%-ной сывороткой лошадиной крови и ингибиторами роста посторонней микрофлоры. Оптимальный состав газовой смеси: N₂ 85-87%; О₂ 5%; СО₂ 8-10% (микроаэрофильные условия). Культивирование производят в течение 4-х суток в микроаэрофильных условиях при температуре 37°С. В результате культивирования в течение 2-х суток появляются мелкие колонии размером менее 0,5 мм, гладкие, блестящие, выпуклые, прозрачные. На третьи сутки рост бактериальных клеток максимальный, колонии имеют размер 1 мм. По истечении 4-х суток колонии пересевают на новые (свежие) питательные среды или используют в качестве посевного материала для наработки бактерий Helicobacter pylori в суспензии на жидкой среде следующего состава. В 1 литре дистиллированной воды растворяют, (г): триптический гидролизат кормовых дрожжей 30,0; натрия пируват 0,2; натрия метабисульфит 0,2; железо сернокислое закисное 0,2; натрия глютамат 1,3; натрий хлористый 4,0; агар 10,0; натрий углекислый 0,15; до рН 7,2. Раствор кипятят 2-3 минуты, отфильтровывают через ватный фильтр, стерилизуют при 1 атм (121°С) в течение 20 минут и охлаждают до +37°С. В культуральную среду вносят посевную дозу Helicobacter pylori до конечной концентрации 5·10 7 КОЕ/мл и выращивают в микроаэрофильных условиях (состав газовой смеси: N₂ 85-87%; О₂ 5%; СО₂ 8-10%) при температуре 37°С до концентрации не менее 10 9 КОЕ/мл. После этого в биомассу бактерий вводят суспензию бактериофага Helicobacter pylori (НР-7Ф) с концентрацией фага 10 6 БОЕ мл и культивируют в том же режиме в течение 24 часов до полного лизиса бактериальной популяции. Суспензию центрифугируют 20 минут при 8000 об/мин и фильтруют. Концентрация фага составляет 10 10 БОЕ/мл. Перед фасовкой в препарат вводят 1%-ный раствор хинозола при следующем конечном содержании ингредиентов полученного средства, мас.%:

очищенная суспензия бактериофага Нelicobacter

pylori с литической активностью 10 10 БОЕ/мл 10,0-20,0

1%-ный раствор хинозола 0,5-1,0

вода остальное до 100%

Далее жидкую форму бактериофага фасуют в стерильных условиях и хранят при температуре +(2-10)°С.

Пример 2. Получение сухой формы препарата на основе жидкой формы бактериофага Helicobacter pylori (НР-7Ф-Х)

Стерильную вируссодержащую жидкость получают, как в примере 1. К стерильной вируссодержащей жидкости и со специфической активностью не менее 10 10 БОЕ/мл при непрерывном перемешивании одновременно вводят сорбит (5,0 мас.%), стерильные водные растворы 25%-ной желатозы (мол. вес 3000) до конечной концентрации (5,0 мас.%). Полученный жидкий полуфабрикат препарата разливают в ампулы по 0,5 мл в каждую и замораживают при температуре -60°С в течение 18 часов. Продукт лиофильно высушивают в течение 48 часов в стерильных условиях при следующем конечном содержании компонентов в сухом средстве, мас.%:

сухая масса бактерифагa ocтальное до 100%

После окончания сушки ампулы заполняют инертным газом (аргоном) и запаивают.

Ниже в таблице приведены данные по хранению жидкой и сухой препаративных форм фага Helicobacter pylori (НР-7Ф-Х) №МЦКМ F-07.

Таблица
Данные по хранению заявляемых препаративных форм фага Н. Pylori
Показатель	Температура хранения, °С	Препаративная форма фага
Жидкая, БОЕ/мл	Сухая, БОЕ/г
Лигич. активность фагов после приготовления препарата	+(4-7)	4,5·10 9	2,5·10 9
Литич. активность фагов после 1 года хранения	+(4-7)	1,0·10 9	2,0·10 9
Литич. активность фагов после 2-х летнего хранения	-(4-7)	0	8,5·10 8

Из таблицы видно, что жидкая препаративная форма фага сохраняет литическую активность в течение 1 года, а сухая - в течение 2-х лет.

Исследование препарата фага на животных. В эксперименте на животных (свиньях) воспроизведен гастрит путем введения микроорганизмов Helicobacter pylori в желудок указанным животным. Лечение животных осуществлялось путем смешивания с кормом (отруби) препаративной формы фага Helicobacter pylori (НР-7Ф-Х) в дозе 1 г препарата на 1 кг корма и скармливания его животным в течение 1 недели. Вскрытие одной группы животных до лечения и другой группы после лечения показало высокую эффективность действия как жидкой, так и сухой формы заявляемого препарата.

1. Штамм бактериофага Helicobacter pylori, депонированный в коллекции Межрегионального центра коррекции микроценоза человека (МЦКМЧ) под регистрационным номером МЦКМ F-07, обладающий литической активностью в отношении бактерий Helicobacter pylori.

2. Способ получения противогастритного и противоязвенного средства, включающий получение очищенной суспензии бактериофага и введение в него дополнительных компонентов, отличающийся тем, что в качестве очищенной суспензии бактериофага используют суспензию бактериофага Helicobacter pylori №МЦКМ F-07 по п.1 с литической активностью не менее 10 9 БОЕ/мл, а в качестве дополнительных компонентов используют раствор хинозола при следующем конечном содержании ингредиентов полученного средства, мас.%:

Очищенная суспензия бактериофага Helicobacter

pylori с литической активностью 10 9 БОЕ/мл 10,0-20,0

1%-ный Раствор хинозола 0,5-1,0

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что в средство дополнительно вводят сорбит и желатозу, полученную смесь замораживают со скоростью 0,1-3,0°С/мин до температуры ниже температуры стеклования аморфной фазы, оставшейся после кристаллизации льда, а процесс сушки средства производят лиофилизацией при следующем конечном содержании компонентов в сухом средстве, мас.%:

Этот пост продолжает тему вредных и полезных микробов. Сегодня обсудим знаменитого Helicobacter pylori.

И вот ответы –

Что же это за паразит такой, от которого то ли нужно лечиться – то ли нет?

Многие знают, что Helicobacter pylori – это вредный микроб, создающий угрозы гастрита (у всех), язвенной болезни (у 10-15%) и рака желудка (у 1%)? Эрадикация этой бактерии вошла в трехкомпонентную терапию гастрита и язвы и во все учебники.

Произошло это благодаря самоотверженному эксперименту гастроэнтеролога Барри Маршалла, выпившего в 1984 году культуру Helicobacter pylori, чтобы доказать ее роль в развитии гастрита. До тех пор считалось, что гастрит – это психосоматическое заболевание. Он дождался полной клинической картины, сделал ФГДС, получив объективное подтверждение воспаления слизистой, после чего принял антибиотики и благополучно избавился от недуга.

Спустя 20 лет Барри Маршал за свое открытие получил Нобелевскую премию по физиологии и медицине. С тех пор на хеликобактера обрушились тонны антибиотиков. Многие рекомендовали и рекомендуют профилактическую эрадикацию этого микроба. В результате — сегодня количество носителей helicobacter (а человек – единственный носитель этой бактерии на планете) снижается, особенно в развитых странах, где большое внимание уделяется гигиене питания и эрадикации этой бактерии.

Врачи приветствуют эту тенденцию – частота выявления диагнозов гастрита, язв и опухолей желудка пошла на спад. Но есть еще одна, неудобная, корреляция.

Одновременно с исчезновением хеликобактера резко повысилась частота таких заболеваний:

гастроэзофагеальный рефлюкс синдром
эзофагит и рак пищевода
пищевые аллергии и астма

Пока связь между этими явлениями не доказана, и исследователи сильно расходятся во мнениях.

Ретроспективные исследования показывают, что у детей, растущих без helicobacter pylori, чаще случаются атопические дерматиты, сезонные аллергические риниты и непереносимость глютена. Кроме того, появились данные о том, что хеликобактер воздействует на наш аппетит, регулируя выработку грелина, а его эрадикация повышает частоту гиперлипидемии у пациентов с язвой.

" target="_blank" >Мета-анализ 19 клинических исследований, изучавших связь наличия helicobacter pylori и болезней пищевода, показал, что колонизация слизистой хеликобактером защищает пищевод от воспаления и перерождения. Есть гипотеза, что хеликобактер снижает рефлюкс кислоты, что является фактором риска как рака пищевода, так и астмы.

Теперь оказалось, что helicobacter pylori – это не только патоген, но и симбионт. Эта бактерия – старинный партнер нашей иммунной системы. Helicobactor – единственная бактерия из всей нашей флоры ЖКТ, которая идеально приспособлена к жизни на слизистой желудка.

У остальных бактерий это получается значительно хуже из-за:

высокой кислотности
активной перистальтики
плохой доступности питательных веществ
высокой активности иммунной системы
конкуренции с микробами пищи

Однако, у хеликобактера есть ряд инструментов, позволяющих ему преодолеть каждую из этих проблем, например:

Хеликобактер активно подавляет кислотность вокруг себя, гидролизуя мочевину до аммиака, а также меня регуляцию собственных генов в ответ на низкий pH. Так, например, способность быстро перемещаться у хеликобактера, оказавшегося в условиях кислой среды, резко улучшается.

Обычно хеликобактер живет в самой слизи слизистой оболочки и с эпителиальными клетками не контактирует, но если такой контакт происходит, то иммунная система его чувствует, и слизистая оболочка инфильтрируется иммунными клетками. Однако, так как только небольшое количество бактерий повреждает эпителиоциты – сила иммунного ответа не очень большая, меньше, чем при обычной пищевой токсикоинфекции. Поэтому, обычно взаимоотношения хеликобактера с иммунной системой для человека протекают незаметно.

Этот деликатный баланс отчасти связан с неинвазивным поведением хеликобактера, а отчасти с тем, что его внешние молекулы (липополисахариды) эволюционировали таким образом, чтобы не вызывать сильной реакции со стороны иммунной системы хозяина. Хитрость заключается в том, что эти молекулы изменены так, чтобы напоминать иммунной системе собственные антигены человека (некоторые эритроцитарные антигены), что вызывает толерантность.

Перебираясь на новые места обитания древний человек включал в свой рацион новые продукты, и хеликобактеру приходилось адаптироваться к этим условиях.

считает Barry Marshall, открывший патогенные свойства хеликобактера. Известно, что как и многие хронические инфекции, helicobacter передаваясь от родителям детям или между членами семьи, снижает свою вирулентность, что отражается в том, что у большинства людей он вызывает лишь незначительное воспаление.

В экспериментах на мышах показано, что заражение хеликобактером в первые дни жизни вызывает толерантность иммунной системы к этой бактерии. А также защищает животное от аллергенов, вызывающих астму, во взрослом возрасте.

Экспериментально это подтверждается тем, что заражение новорожденных мышей хеликобактером формирует у них толерантность к этой бактерии, что проявляется отсутствие гистопатологических изменений на слизистой желудка. Мы прожили вместе с helicobacter pylori как минимум 60000 лет, и наши предки из Африки разнесли его по всему миру. В течение всего это времени человек уживался с бактерий, колонизировавшей его желудок и обладавшей серьезными вирулентными факторами.

Как развивались и развиваются отношения между человеком и хеликобактером – еще только предстоит изучить, но уже сейчас понятно, что:

Хеликобактер покидает людей – в развитых странах количество носителей уменьшается
Иммунная система человека не привыкла жить без хеликобактера

Так что теперь человеку теперь нужно адаптироваться к исчезновению давно знакомого микроба. И пока разгораются споры о том, чего от хеликобактера больше – пользы или вреда, предлагаю ориентироваться на самый авторитетный источник в мире по этому вопросу — Maastrich IV / Florence Consensus Report от 2012 года.

В этом документе есть несколько рекомендаций категории 1А (высшая категория в доказательной медицине):

В странах с высокой частотой хеликобактерной инфекцией у пациентов с диспепсией неясного генеза следует провести лабораторные тесты на Helicobacter и в случае положительного результата — провести эрадикацию.
Если у человека есть диспепсия и хеликобактер, то эрадикация поможет ему избавиться от симптомов с вероятностью 8.3% (одному из 12 человек). Это лучший эффект, доступный сегодня для таких пациентов.
Эрадикация никак не сказывается на гастроэзофагеальной рефлюксной болезни.
Эрадикацию следуют выполнять всем пациентам с лимфомой желудка (MALT)
Эрадикация может помочь от железо-дефицитной анемии неясного генеза
Антигенный тест в стуле не уступает по эффективности дыхательному тесту (в хорошей лаборатории). Оба теста годятся для контроля эрадикации.
В регионах с низкой резистентностью хеликобактера к кларитромицину начинать эрадикацию следует с режимов, содержащих кларитромицин. Четырехкомпонентная терапия с висмутом тоже годится.
Увеличение длительности лечения с 7 до 10-14 дней повышает эффективность эрадикации на 5%
Режимы ИПП-кларитромицин-метронидазол и ИПП-кларитромицин-амоксициллин эквивалентны по эффективности
Если первая линия с кларитромицином не помогла — следующая линия должна содержать либо четырехкомпонентную схему с висмутом, либо тройную терапию с левофлоксацином
В случае неосложненной дуоденальной язвы не требуется длительное применение ИПП после курса эрадикации
Эрадикация хеликобактера — самый эффективный метод консервативной профилактики рака желудка, особенно, если успеть ее сделать до появления первых неопластических очагов
Эрадикация существенно снижает воспаление слизистой желудка и даже может вернуть слизистую из атрофии обратно к нормальному состоянию

Само по себе наличие helicobacter pylori на слизистой желудка не является показанием к лечению антибиотиками, тем более к их самостоятельному приему. Если есть сомнения — обращайтесь к гастроэнтерологу.

Показалось интересным или полезным — подпишитесь на анонсы новых статей в наших пабликах ВКонтакте и Фейсбуке.

Место бактериофагов в терапии инфекционных заболеваний желудочно-кишечного тракта

Наиболее дискутабельным остается вопрос о целесообразности использования антимикробных препаратов (АМП) в лечении бактериальных ОКИ у детей. Назначая АМП в этих случаях, врач ожидает: уменьшения выраженности клинических симптомов, сокращения продолжительности заболевания, снижения частоты развития осложнений, прекращения выделения возбудителя, предупреждения дальнейшего распространения инфекции [4, 5].

В то же время доказано, что использование антибиотиков далеко не всегда является эффективным и безопасным при бактериальной диарее. Так, при энтерогеморрагическом эшерихиозе применение АМП приводит к массивному высвобождению шигаподобного токсина, следовательно, увеличивает риск развития гемолитико-уремического синдрома [6].

Назначение АМП при бактериальных диареях в значительном проценте случаев не только не приводит к санации макроорганизма от возбудителя, а, наоборот, способствует продолжительной персистенции бактериального агента в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ) вследствие не только подавляющего влияния на аутохтонную микробиоту кишечника, но и прямого иммуносупрессивного действия [7, 8]. По данным отечественных и зарубежных исследователей, затяжное реконвалесцентное бактериовыделение сальмонелл формируется у значительного числа пациентов, получавших антибиотики в острую фазу инфекции, по сравнению с лицами, использующими исключительно
патогенетическую терапию [9, 10].

Экономический ущерб, наносимый возникновением антибиотикорезистентных форм бактерий, исчисляется десятками и сотнями миллионов долларов. Например, в странах Евросоюза он составляет как минимум 1,5 млрд. евро в год [11]. В сложившейся ситуации альтернативу АМП в терапии бактериальных диарей могут составить бактериофаги [12, 13].

Необходимо отметить, что в медицинском сообществе в настоящее время присутствует две полярные точки зрения на роль и место бактериофагов в терапии инфекционных заболеваний. Часть специалистов, ориентируясь на зарубежные протоколы и гадлайны, считают использование бактериофагов архаичным и небезопасным наследием прошлых десятилетий советской медицины; другие – широко применяют препараты фагов в своей клинической практике без каких-либо сомнений и при этом не опираются на исследования чувствительности и эффективности терапии.

Автору пришлось неоднократно беседовать с представителями обеих групп специалистов, и оказалось, что в большинстве случаев мало кто из них мог правильно ответить на вопрос, что представляют собой бактериофаги и каков их механизм действия. Бактериофаги – это вирусы, избирательно поражающие бактериальные клетки. В первую очередь необходимо понимать, что бактериофаги – это древние обитатели планеты и каждый грамм почвы, каждый кубический сантиметр воды и воздуха, продукты питания,
растения, животные содержат миллионы фаговых частиц (от 10 до 100 млн). Фаговые частицы в огромном количестве содержатся на кожных покровах, слизистых оболочках и в открытых полостях организма человека. Бактериофаги – самые вездесущие и наиболее распространенные существа на Земле, их насчитывают 1030–1032. Доказано, что бактериофаги играют важную роль в эволюции бактерий и реализации их патогенных свойств. Фаги способствуют формированию генетического разнообразия бактерий [14–16].

Выделяют вирулентные и умеренные бактериофаги. Вирулентные фаги: заражение бактерий ими всегда заканчивается разрушением бактерий и высвобождением зрелых фаговых частиц, готовых к поражению новых бактериальных клеток, – литический эффект. Умеренные бактериофаги: генетический материал фагов включается в хромосомы бактерий, такие фаги называются профагами и вызывают лизогенный эффект (лизогенную конверсию). Умеренные фаги интегрируются в бактериальную хромосому и размножаются синхронно с клеткой хозяина, не вызывая лизиса долгое время. Умеренные фаги могут переносить хозяйские гены (гены бактериальной клетки) от одной
бактериальной клетки к другой (фаговая трансдукция).

В настоящее время доказано, что множество факторов вирулентности у патогенных и условно-патогенных бактерий закодировано с помощью профаговых генов.
Так у Vibrio cholerae, Clostridium botulinum продукция токсинов обусловлена профагами [15, 16].

Бактериофаги – это высокоэффективные иммунобиологические препараты антимикробного действия, применяются для лечения и профилактики бактериальных инфекций, в том числе инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи. Антимикробный эффект бактериофагов обусловлен внедрением фага в бактериальную клетку с последующим его размножением и лизисом инфицированной клетки. Вышедшие во внешнюю среду в результате лизиса бактериофаги повторно инфицируют и лизируют другие бактериальные клетки, действуя до полного уничтожения патогенных бактерий в очаге воспаления [14–17]. В настоящее время описано 13 семейств бактериофагов,
подразделенных более чем на 140 родов, содержащих более 5300 видов.

Бактериофаги широко применялись для лечения разных заболеваний с 1920-х годов как в СССР, так и зарубежных странах. Символично, что в 1930–1932 гг. Моррисон впервые применил массовую фаготерапию во время эпидемии холеры в Индии, затем долгие годы ученые считали, что с помощью бактериофагов можно управлять эпидемическим процессом при холере, однако эти мировоззрения оказались ошибочными [18].

Однако с 1940–1950-х годов производство и применение фагов на Западе практически прекратились. Препараты бактериофагов на сегодняшний день производятся лишь в России, Грузии и Польше. Однако в настоящее время интерес к бактериофагам возрождается во всем мире. Так, в 2006 г. Управление по контролю за продуктами и лекарствами Соединенных Штатов разрешило использование бактериофагов Listeria monocytogenes в качестве антимикробного компонента в сырах, а в 2007 г. – во всех готовых к употреблению продуктах. Препарат выпускается компанией Intralytix Inc. (США) и представляет собой смесь из шести фагов, активных в отношении L. monocytogenes. По инициативе этой же компании в 2008 г. была завершена I фаза клинических исследований препарата бактериофагов, содержащего восемь фагов, специфически лизирующих Pseudomonas aeruginosa, S. aureus и E. coli. Показана безопасность этого препарата при лечении венозных язв [18]. В августе 2009 г. корпорацией Nestlé Nutrition (Швейцария) в Бангладеш были инициированы клинические исследования по изучению безопасности и эффективности применения бактериофага E. coli в терапии ОКИ у детей в возрасте от 6 до 60 мес [19].

В настоящее время бактериофаги используются в качестве АМП при разных бактериальных инфекциях: желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), ЛОР-органов, органа зрения, дыхательных путей, урогенитального тракта, генерализованных септических заболеваний, ожоговых ранах, хирургических инфекциях; для профилактики инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи [20].

Фаги проникают через эпителиальные барьеры слизистых оболочек с помощью рецепторзависимого транспорта, активно осуществляемого специализированными клетками иммунной системы (М-клетками, бокаловидными) и, возможно, клетками эпителия кишечника и других отделов ЖКТ. Бактериофаг, введенный любым способом, поступает в общий ток крови, в крови не задерживается и адсорбируется тканями, оседая в первую очередь в лимфатических узлах, печени и селезенке. Выводится фаг из организма через кишечник и почки. После перорального приема фаговые частицы обнаруживаются через 1 ч в образцах крови, через 1–1,5 ч – на поверхности ожоговых ран и в бронхиальном содержимом, через 2 ч – в ликворе и моче. После однократного приема больными пациентами фаги выделялись с мочой в течение 5–6 сут с постепенным уменьшением титра. Гематоэнцефалический барьер не является барьером для проникновения фагов в центральную нервную систему. Необходимо отметить, что
скорость транслокации фагов, так же как и бактерий из ЖКТ в кровь, может существенно меняться в разных физиологических состояниях. При воспалительном ответе транслокация бактерий и, вероятно, фагов из кишечника значительно увеличивается [18].

Бактериофаги, используемые в составе лечебно-профилактических препаратов, должны иметь литический цикл развития (т.е. быть вирулентными), вследствие которого происходит гибель бактериальной клетки-мишени. По определенным участкам генов, кодирующим белок капсида бактериофага, можно быстро и с известной долей вероятности определить его принадлежность к семействам литических фагов.

В 1920–1940 гг. в Канаде и США бактериофаги широко использовались для лечения дизентерии, брюшного тифа и сальмонеллеза. Причем большинство исследователей показали их хорошую клиническую эффективность, в первую очередь снижение смертности на 30% и более по сравнению с группой сравнения [18].

Традиционной формой выпуска бактериофагов является жидкий препарат (кроме таблетированных форм кишечных фагов), поэтому фаги используют для приема через рот, в виде клизм, аппликаций, орошений, введения в полости ран, вагины, носа, а также путем введения в дренированные полости – брюшную, плевральную, мочевого пузыря, почечной лоханки [18, 20].

Препараты бактериофагов при энтеральном и ректальном пути введения безопасны и нетоксичны для человека. Они не имеют противопоказаний к применению, кроме аллергических реакций, и могут быть использованы в сочетании с любыми другими лекарственными средствами. Препараты бактериофагов можно назначать беременным, кормящим матерям и детям, начиная с раннего возраста [17, 18, 20, 21]; они эффективны в монотерапии, но могут быть также использованы и в комбинации с антибиотиками [22]. Необходимо отметить, что в раннем детском возрасте (до 3–4 мес) использовать бактериофаги можно только по строгим показаниям, учитывая значимую частоту аллергических и диарейных побочных реакций у детей данной возрастной группы. Следует отметить, что побочные реакции в результате употребления фагов обычно связаны с массивным распадом бактериальных клеток с выделением эндотоксина под действием бактериофага. Нивелировать данные нежелательные явления можно при помощи включения в комплекс терапии энтеросорбентов. При использовании фагов в сочетании с терапевтическими дозами АМП отсутствует негативное воздействие
этих препаратов на развитие бактериофагов, но отмечается взаимное потенцирование их терапевтического эффекта. Установлено, что воздействие фагов на антибиотикоустойчивые штаммы бактерий может быть более активным по сравнению с воздействием на антибиотикочувствительные штаммы того же вида [18, 23].

Следовательно, показания к использованию бактериофагов при ОКИ можно сформулировать следующим образом:
• в качестве монотерапии – при стертых и легких формах инвазивных ОКИ;
• в сочетании с антибактериальной терапией или последовательно – при среднетяжелых и тяжелых формах ОКИ в период обратного развития симптомов;
• при бактериовыделении (у реконвалесцентных или транзиторных бактерионосителей);
• в комплексе терапии энтероколитов условно-патогенной и стафилококковой этиологии у детей раннего возраста;
• для коррекции нарушений микробиоценоза кишечника.

Дозы бактериофагов в зависимости от возраста приведены в табл. 1, 2. Бактериофаги назначаются 2–3 раза в сутки. Поскольку при приеме жидких препаратов бактериофагов перорально происходит частичная инактивация бактериофагов кислой средой желудка, целесообразно производить препараты бактериофагов в таблетках с кислотоустойчивыми капсулами и суппозиториях. В табл. 3 представлены бактериофаги, используемые в Российской Федерации для терапии и профилактики инфекционных диарей.

Очень актуальным является исследование В.Г.Акимкина, посвященное купированию продолжительной нозокомиальной вспышки сальмонеллеза в Главном военном клиническом госпитале им. Н.Н.Бурденко, с использованием адаптированного сальмонеллезного бактериофага как в виде монотерапии, так и в комплексе с АМП фторхинолонового ряда [13, 26]. Таким образом, практика использования лечебнопрофилактических бактериофагов показала необходимость осуществления бактериологического мониторинга за возможными изменениями фаголизабильности по отношению к выделяемым культурам сальмонелл в стационаре. Доказано, что регулярная передача на производство свежевыделенных штаммов возбудителей ОКИ способствует повышению литической активности и расширению диапазона действия препаратов бактериофагов [26–28].

Применение бактериофагов по эпидемиологическим показаниям при ОКИ

Бактериофаги находят свое применение и с профилактической целью при чрезвычайных ситуациях природного характера (наводнения и т.д.), в очагах бактериальной инфекции, в первую очередь шигеллеза, сальмонеллеза и брюшного тифа, заболеваний, вызванных условно-патогенными возбудителями (протеем, синегнойной палочкой) [20].

В эпидемических очагах (шигеллеза, сальмонеллеза) бактериофаги применяют для фагирования детей, посещающих детские дошкольные учреждения, и работников пищевых предприятий, водопроводных и коммунальных сооружений и др. Фагирование всех общавшихся с источником ОКИ проводят при неблагоприятных санитарных условиях в очаге, а также при оставлении больного на дому. В качестве профилактики препараты фагов принимают ежедневно в виде разовой возрастной дозы: детям в возрасте от 1 года до 3-х лет – по 1 таблетке; от 3–8 лет – по 2 таблетки; взрослым – по 3 таблетки. Продолжительность приема как правило определяется
условиями эпидситуации.

Читайте также: