Иммуноглобулины и сыворотки для лечения и профилактики инфекционных болезней

При необходимости экстренного создания иммунитета, а также для лечения уже развивающейся инфекции используют сывороточные препараты - иммунные сыворотки и иммуноглобулины, действующим началом которых являются специфические антитела готовые антитела. Эти препараты обеспечивают развитие искусственного пассивного иммунитета, что определяет область их использования – профилактика и лечение инфекционных заболеваний.

Обычно сывороточные препараты вводят парентерально, что обуславливает быстрое развитие невосприимчивости, но оно длится не долго (около 2-3 нед).

Иммунные сывороткиполучают или от иммунизированных животных(гетерологичные сыворотки), или переболевших, а также вакцинированных людей(гомологичные сыворотки).

1. Гетерологичные сыворотки готовят путем гипериммунизации чаще всего лошадей, т.е. путем многократного введения животным больших доз антигена по разработанной схеме. На пике антителообразования у иммунных животных забирают кровь, освобождают е от форменных элементов и фибрина, фильтруют и стандартизируют по концентрации антител (антитоксинов, агглютининов, вируснейтрализующих антител и т.д.), содержанию белка и другим свойствам. Полученная таким образом нативная иммунная сыворотка содержит много балластных белков, и имеют относительно низкую концентрацию антител. Поэтому из нее получаютиммуноглобулиныпутем выделения, очистки и концентрирования их ферментативным способом в сочетании диализом (“Диаферм”), осаждением спиртом на холоде, хроматографией или иными способами. Предпочтительнее использование глобулиновых фракций, которые содержат не более 20% всех белков, содержащихся в сыворотке. Однако гетерологичные сыворотки иммуногены для человека. Иммуноглобулины содержат меньше балластного белка и имеют более высокую концентрацию антител.

2. Препараты иммуноглобулинов, полученные из человеческой крови, для человека не иммуногены и в этом их преимущество перед гетерологичными сыворотками и глобулинами.

Гомологичные сывороткиготовят из донорской или плацентарной крови, предварительно смешивают сыворотки, полученные из крови разных лиц, и поэтому концентрация в них антител невелика. Для получения препаратов иммуноглобулинов (гомологичных) с повышенным содержанием антител производят предварительный отбор сырья – используют сыворотки реконвалесцентов или доноров, подвергнутых иммунизации. Такие препараты чаще используют для групп риска: новорожденных, тяжелобольных и т.п.

Разработаны также методы получения активных фрагментов иммуноглобулинов, активных центров (детерминант) иммуноглобулинов (так называемые доменные иммуноглобулины). Их преимущество заключается в незначительно белковой нагрузке, более высоких специфичности и эффективности препаратов. Для получениягомологичных иммуноглобулинов и их фрагментов используют кровь иммунных (переболевших, вакцинированных) людей или специально вакцинированных доноров, а также плацентарную и абортную кровь.

Иммунные сыворотки, иммуноглобулины и их фрагменты подразделяются на:

1. Антитоксические - сыворотки против дифтерии, столбняка, ботулизма, газовой гангрены, т.е. сыворотки, содержащие в качестве антител антитоксины, которые нейтрализуют специфические токсины.

2. Антибактериальные - сыворотки, содержащие агглютинины, преципитины, комплементсвязывающие и другие антитела к возбудителям таких болезней, как брюшной тиф, дизентерия, чума, коклюш и др.

3. Противовирусные - сыворотки (коревая, гриппозная, антирабическая и др.), содержащие вируснейтрализующие, комплементсвязывающие и другие противовирусные антитела.

Сывороточные препараты также можно разделить на:

1. Нормальные сыворотки – получают из крови нескольких тысяч доноров и используют для профилактики респираторных инфекций у детей, для профилактики гепатита А, эпидемического паротита, кори, ветряной оспы. Они содержат кроме специфичных антител и большое кол-во других иммуноглобулинов.

2. Иммунные сыворотки – содержат иммуноглобулины направленного действия (антистафилококковый, против синегнойной палочки). Их получают путем очистки от неспецифических антител.

Иммунные сыворотки и извлекаемые из них специфические активные фракции – иммуноглобулины – это препараты, которые содержат готовые антитела и используются для создания пассивного иммунитета в короткие сроки. Для этого производят иммуноглобулины человека нормальные, специфические иммуноглобулины человека и гетерологичные специфические сыворотки и иммуноглобулины для профилактики и лечения инфекционных заболеваний.

Иммуноглобулины человека нормальные извлекают из пула плазмы крови, полученной не менее чем от 1000 здоровых людей. В них присутствуют в различных концентрациях антитела против возбудителей кори, гриппа, полиомиелита, коклюша, дифтерии и других инфекций. Уровень антител в препаратах колеблется в зависимости от эпидемической ситуации в регионах, где производятся препараты. Благодаря наличию в препаратах иммуноглобулина факторов системы комплемента, цитокинов, применение иммуноглобулинов может усиливать неспецифическую резистентность организма.

Специфические иммуноглобулины человека для профилактики и лечения инфекционных заболеванийполучают из крови людей, перенесших определенное инфекционное заболевание или иммунизированных соответствующим вакцинным препаратом. Уровень антител в препаратах специфического иммуноглобулина должен быть в 6-10 раз выше по сравнению с концентрацией антител в нормальном иммуноглобулине. Иммуноглобулины, получаемые из крови человека, отличаются от сывороточных препаратов животного происхождения тем, что, не являясь для человеческого организма чужеродными, практически нереактогенны. При введении таких препаратов человеку антитела циркулируют в организме значительно дольше, чем антитела гетерогенных сывороток, обеспечивая состояние невосприимчивости в течение 4-5 недель. Например, применяются иммуноглобулин против вирусного гепатита В, иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита жидкий, иммуноглобулин противостолбнячный.

Гетерологичные специфические сыворотки и иммуноглобулины для профилактики и лечения инфекционных заболеваний получают из сыворотки крови животных, чаще лошади, иммунизированных определенной вакциной. Гетерологичные препараты должны быть максимально очищены от балластных белков и подвергнуты концентрации. Например, применяются сыворотка противодифтерийная лошадиная концентрированная очищенная жидкая, сыворотка противостолбнячная лошадиная очищенная концентрированная, иммуноглобулин антирабический из сыворотки крови лошади жидкий.

Применяют иммунные сыворотки и иммуноглобулины для экстренной профилактики заболеваний с коротким инкубационным периодом, а также для лечения уже развившихся болезней. После внутривенного введения сывороток состояние иммунитета наступает практически сразу после инъекции. После внутримышечного и подкожного введения состояние невосприимчивости наступает медленнее, по мере всасывания сыворотки из места инъекции. Концентрация антител в крови достигает максимума через 12-24 часа после инъекции.

Сывороточные препараты, получаемые из крови животных, имеют два существенных недостатка, связанных с гетерогенностью, т.е. чужеродностью для человека.

Первый недостаток заключается в том, что их введение в организм человека может сопровождаться различными негативными реакциями, связанными с сенсибилизирующим действием сывороточных белков. Наибольшую опасность представляют реакции немедленного типа – анафилактический шок, развивающийся, как правило, у лиц, получавших сыворотку ранее, то есть, уже сенсибилизированных к гетерогенному белку. Поэтому перед введением любых гетерогенных сывороток необходимо определять индивидуальную чувствительность организма к белкам данной сыворотки с помощью постановки специальной внутрикожной пробы.

Вторым недостатком гетерогенных сывороток является кратковременность обусловливаемого ими пассивного иммунитета, длительность которого ограничивается 1-2 неделями. Выведение антител из организма происходит как за счет естественного процесса распада белков введенной сыворотки, так и образования антител к белкам введенной сыворотки, являющейся для организма чужеродным антигеном. После повторного введения сыворотки длительность пребывания антител в организме еще более сокращается в результате действия ранее образовавшихся антител к белкам введенной сыворотки.

Полный текст:

Начальник лаборатории анатоксинов и антитоксических препаратов Испытательного центра экспертизы качества МИБП, канд. мед. наук

эксперт 1-й категории лаборатории анатоксинов и антитоксических препаратов Испытательного центра

экспертизы качества МИБП

Ведущий эксперт лаборатории вирусных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП

лавный эксперт управления экспертизы противобактериальных МИБП Центра экспертизы и контроля
МИБП, д-р мед. наук, профессор

4. Борисевич ИВ, Черникова НК, Марков ВИ, Краснянский ВП, Борисевич СВ, Рождественский ЕВ. Опыт клинического применения специфического иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей в качестве средства экстренной профилактики лихорадки Эбола. Вопросы вирусологии 2017; 62(1): 25-9.

5. Борисевич ИВ, Потрываева НВ, Мельников СА, Евсеев АА, Краснянский ВП, Максимов ВА. Получение иммуноглобулина к вирусу Марбург на основе сыворотки крови лошадей. Вопросы вирусологии 2008; 53(1): 39-41.

6. Краснянский ВП, Градобоев ВН, Борисевич ИВ, Потрываева НВ, Лебединская ЕВ, Черникова НК, Тиманькова ГД. Разработка и изучение свойств иммуноглобулина против лихорадки Ласса. Вопросы вирусологии 1997; 42(4): 168-71.

7. Михайлов ВВ, Борисевич ИВ, Тиманькова ГД, Краснянский ВП, Потрываева НВ, Лебединская ЕВ, Черникова НК. Препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки Эбола, из сыворотки крови лошадей, жидкий (иммуноглобулин Эбола). Патент Российской Федерации № 2130318 C1; 1996.

8. Краснянский ВП, Михайлов ВВ, Лукин ЕП, Борисевич ИВ, Потрываева НВ, Мельников СА и др. Препарат, содержащий иммуноглобулин против венесуэльского энцефаломиелита лошадей из сыворотки крови лошадей жидкий (иммуноглобулин лошадиный ВЭЛ). Патент Российской Федерации № 2261113 C1; 2003.

9. Хмелев АЛ, Борисевич ИВ, Черникова НК, Махлай АА, Михайлов ВВ, Яковлев АК и др. Оценка безопасности профилактического использования иммуноглобулинов против вирусных геморрагических лихорадок из сывороток крови лошадей. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии 2012; (6): 103-6.

10. Хмелев АЛ, Борисевич ИВ, Пантюхов ВБ, Пирожков АП, Сыромятникова СИ, Шатохина ИВ и др. Использование морских свинок для оценки эффективности гетерологичного иммуноглобулина против боливийской геморрагической лихорадки. Вопросы вирусологии 2009; 54(4): 42-4.

11. Борисевич ИВ, Михайлов ВВ, Хамитов РА, Краснянский ВП, Черникова НК, Евсеев АА, Миронов АН. Использование обезьян для доклинической оценки специфических средств профилактики и лечения геморрагических лихорадок Эбола и Ласса. В кн.: Организм и окружающая среда: жизнеобеспечение и защита человека в экстремальных условиях. Мат. российской конференции. 2000. С. 210.

15. Комиссаров АВ, Жучихин ЮС, Васильев ПГ, Климов ВИ, Луб МЮ, Нестеров ЮЕ и др. Сравнительное изучение качества препаратов противосибиреязвенного глобулина, полученных при создании производства в НИИ микробиологии МО РФ и выпускаемых ранее в Тбилиском НИИ вакцин и сывороток. В кн.: Диагностика, лечение и профилактика инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария. Мат. юбилейной научной конференции, посвященной 50-летию Центра военно-технических проблем биологической защиты НИИ микробиологии МО РФ. 1999. С. 95-6.

16. Пименов ЕВ, Комиссаров АВ, Луб МЮ, Васильев ПГ, Жучихин ЮС, Комоско ГВ и др. Освоение и усовершенствование технологии производства глобулина противосибиреязвенного лошадиного жидкого для медицинских целей. В кн.: Диагностика, лечение и профилактика опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеринария. Материалы юбилейной научной конференции, посвященной 70-летию НИИ микробиологии МО РФ. 1998. С. 326-7.

17. Комиссаров АВ, Комоско ГВ, Лещенко АА, Луб МЮ, Пименов ЕВ, Дармов ИВ и др. Изучение процесса стерилизующей фильтрации жидкого противосибиреязвенного лошадиного глобулина. Биотехнология 2002. (2): 66-74.

18. Шевцов АН, Борисевич ИВ, Дармов ИВ, Кожухов ВВ, Луб МЮ, Козлова ТН и др. Сывороточный иммунобиологический препарат для профилактики и лечения сибирской язвы. Биотехнология 2011; (1): 42.

26. Гординская НМ, Дука АМ, Акмайкина НЗ. Опыт работы и особенности организации и проведения противоэпидемических мероприятий при подозрении на анаэробную инфекцию в стационарах. Дальневосточный журнал инфекционной патологии 2008; (12): 153-5.

29. Begg N. Manual for the management and control of diphtheria in the European Region. Expanded programme on immunization. Copenhagen: WHO; 1994.

31. Logina I, Donaghy M. Diphtheritic polyneuropathy: a clinical study and comparison with Guillain-Barré syndrome. J Neurol Neurosurg Psychiatry 1999; 67(4): 433-8.

32. Both L, White J, Mandal S, Efstratiou A. Access to diphtheria antitoxin for therapy and diagnostics. Euro Surveill. 2014; 19(24): pii: 20830.

35. Корженкова МП, Малышев НА, Берко АИ, Арсеньев ВА. Дифтерия (клиника, диагностика, лечение). Методические рекомендации. М.: 2008.

36. Трихлеб ВИ, Палатная ЛО, Выговская ОВ, Трохимович ЛП, Арсентьева НВ. Ботулизм: особенности современного течения. Случаи из практики. Актуальная инфектология 2015; 4(9): 88-93.

37. Иванова ЛА, Гарас МН, Болтенков ВЛ, Гук ЛИ. Случай пищевого ботулизма у подростков. Актуальная инфектология 2015; 3(8): 56-63.

38. Богадельников ИВ, Прокудина ЛИ, Бобрышева АВ, Бездольная ТН, Хамид Фазель, Крюгер ЕА и др. Столбняк забыт, но не исчез. Здоровье ребенка 2012; 2(37): 42-9.

39. Гординская НМ, Дука АМ, Акмайкина НЗ. Опыт работы и особенности организации и проведения противоэпидемических мероприятий при подозрении на анаэробную инфекцию в стационарах. Дальневосточный журнал инфекционной патологии 2008; 12: 153-5.

40. Борисевич ИВ, Авдеева ЖИ, Алпатова НА, Давыдов ДС, Гайдерова ЛА, Горбунов МА и др. Медицинские иммунобиологические препараты. Справочник. Т. 2. Иммуноглобулины человека, сыворотки и иммуноглобулины гетерологичные, моноклональные антитела, пробиотики, бактериофаги, аллергены, цитокины (вводимые людям). М. 2011. С. 81-103.

41. Супотницкий МВ, Елапов АА, Борисевич ИВ, Кудашева ЭЮ, Климов ВИ, Лебединская ЕВ и др. Препараты крови человека и животных в аспекте показателей качества, эффективности и безопасности. Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение 2015; (3): 33-48.

42. Снегирева ИИ, Романов БК, Озерецковский НА. Безопасность применения препаратов крови по данным пострегистрационного мониторинга. Успехи современного естествознания 2015; (5): 146-51.

44. Борисевич ИВ, Кудашева ЭЮ, Перелыгина ОВ, Миронов АН, Меркулов ВА, Бондарев ВП и др. Состояние проблемы стандартизации специфических иммуноглобулинов и антитоксических сывороток. Медицинская иммунология 2015; 17(5): 379.

Перелыгина О.В., Комаровская Е.И., Мухачева А.В., Саяпина Л.В., Обухов Ю.И., Бондарев В.П. Гетерологичные сывороточные препараты в практике современной медицины. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2017;17(1):41-47.

Perelygina O.V., Komarovskaya E.I., Mukhacheva A.V., Sayapina L.V., Obukhov Y.I., Bondarev V.P. Clinical experience with heterologous serum products. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2017;17(1):41-47. (In Russ.)

Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.

Иммуноглобулины

В нормальном иммуноглобулине присутствуют антитела к вирусам гриппа, кори, гепатитов A и B, ветряной оспы, краснухи, полиомиелита, возбудителям дифтерии, столбняка, антитела к стрептококку, стафилококку, пневмококку, менингококку, многим представителям энтеробактерий и другим микроорганизмам и их токсинам. Уровень антител в препаратах колеблется в зависимости от эпидемиологической ситуации в регионах, где происходит сбор материала для производства препаратов. Пригодность препаратов нормального иммуноглобулина для профилактики и лечения инфекционных болезней контролируется по уровню нормальных антител, при этом учитывается один вид антивирусных и один вид антибактериальных антител.
Благодаря наличию в препаратах иммуноглобулина факторов неспецифического иммунитета (факторов системы комплемента, цитокинов) применение иммуноглобулина может усиливать неспецифическую резистентность организма.
Нормальный иммуноглобулин извлекают из пула плазмы крови, полученной не менее чем от 1000 здоровых людей. В состав нормального иммуноглобулина входит до 95% IgG. Антитела к ВИЧ, вирусу гепатита C и HbS-антигену должны отсутствовать. Отечественные препараты не содержат мертиолата, антибиотиков и других консервантов.

Коммерческие препараты иммуноглобулина для местного введения обладают антикомплементарной активностью в связи с присутствием в них белковых агрегатов, имеющих константу седиментации 9-14S. такие препараты не используют для внутривенного введения, так как белковые агрегаты связывают большое количество сывороточного комплемента. Фиксируясь на клеточной мембране с помощью Fc-фрагментов иммуноглобулина, они разрушают клетки с высвобождением биологически активных веществ.
Для снижения антикомплементарной активности применяют различные способы предотвращения образования белковых агрегатов и их удаления, а также методы ферментативного расщепления или изменения структуры Fc-фрагментов, ответственных за побочное действие иммуноглобулинов. Для предупреждения агрегирования используют различного рода стабилизаторы, пригодные для внутривенного введения (полиэтиленгликоль, человеческий сывороточный альбумин, химически модифицированный желатин, сахара).

Иммуноглобулин нормальный для внутривенного введения
Нормальный иммуноглобулин для внутривенного введения (Россия) содержит 4,5-5,5% белка, электорофоретически однороден, в нем нет IgA, он содержит свыше 95% мономеров IgG, 0-5% димеров и не более 0,5% полимеров. В качестве стабилизатора используют мальтозу (9-10%). Концентрация антител выше, чем в плазме, в 8 раз и более. Минимально допустимый уровень антител к α-стафилолизину составляет 2 МЕ/мл, к вирусу кори – 25 МЕ/мл, к HBsAg – 1 МЕ/мл. препарат стерилен, безвреден, апирогенен и нетоксичен.
Нормальный иммуноглобулин для внутривенного введения применяют для лечения тяжелых форм бактериально-токсических и вирусных инфекций, послеоперационных осложнений, сопровождающихся септицемией. Детям препарат вводят по 3-4 мл/кг (не более 25 мл) внутривенно капельно со скоростью 8-10 капель в 1 мин ежедневно в течение 3-5 сут. Непосредственно перед введением иммуноглобулин разводят 0,9% раствором натрия хлорида или 5% раствором глюкозы (из расчета 1:4). Взрослым вводят по 25-50 мл внутривенно капельно со скоростью до 40 капель в 1 мин в течение 1-3 суток. Препарат перед введением не разводят. Нельзя превышать скорость введения препарата ввиду угрозы развития коллапса. Препарат совместим с другими лекарственными средствами. Выпускается во флаконах по 25-50 мл.
Наряду с методами, применяемыми для контроля иммуноглобулинов для внутримышечного введения, ВОЗ рекомендует контролировать препараты для внутривенного введения на гипотензивную активность (определение содержания активатора прекалликреина), антикомплементарную активность и содержание гемагглютининов.
Крайне редкими осложнениями, возникающими при внутривенном введении иммуноглобулина, могут быть сосудистые и анафилактические реакции, анемия, гипербилирубинемия, ретикулоцитоз, лихорадка, острая почечная недостаточность, асептический менингит.
В России зарегистрированы препараты иммуноглобулина для внутривенного введения: Биавен ВИ (Италия), веноглобулин (Франция), Вигам-ликвид (Великобритания), Интраглобин (Германия), Хумаглобин (Венгрия). Последний препарат отличается от других иммуноглобулинов для внутривенного введения высоким содержанием IgM.

Сывороточные препараты содержат антитела, специфически связывающие и нейтрализующие определенные бактерии, вирусы, токсины.

Сыворотки используют для лечения, экстренной профилактики и диагностики инфекционных заболеваний. Различают лечебно-профилактические и диагностические сыворотки.

Лечебно-профилактические сыворотки применяют для создания пассивного искусственно приобретенного иммунитета и делят на противовирусные, антибактериальные и антитоксические. К диагностическим сывороткам относятся агглютинирующие, преципитирующие, гемолитические, антивирусные и антитоксические сыворотки. Преимущество сывороток перед вакцинами в том, что они сразу же после введения создают иммунитет (12 – 24 час). Недостаток– непродолжительный иммунитет, т.к. антитела - чужеродные белки, которые быстро (через 1 – 2 недели) выводятся из организма.

Лечебно-профилактические сыворотки получают из крови гипериммунизированных животных (лошадей) и из крови людей (донорской, плацентарной, абортивной), переболевших или иммунизированных.

Диагностические сыворотки получают из крови иммунизированных кроликов.

Для получения антитоксических сывороток проводят гипериммунизацию (многократное введение) лошадей токсинами. Иммунизацию проводят подкожно или внутривенно возрастающими дозами антигена с определенными интервалами времени между инъекциями. Вначале вводят анатоксин, а через 4 – 5 дней – токсин. Антитоксические сыворотки используют для создания антитоксического иммунитета, т.е. для лечения и профилактики токсинемических инфекций (ботулизма, столбняка, газовой гангрены, дифтерии).

Для получения антибактериальных сывороток проводят гипериммунизацию вакцинными штаммами бактерий или убитыми бактериями. Они содержат антитела с агглютинирующими и лизирующими свойствами. Это нетитруемые препараты. Малоэффективны.

Для получения противовирусных сывороток проводят гипериммунизацию штаммами вирусов.

Сыворотки очищают различными методами, концентрируют, стерилизуют и определяют ее активность (титр антител).

Активность антитоксических сывороток выражают в Международных единицах (МЕ). Активность сыворотки отражает ее способность нейтрализовать определенную дозу токсина. Это условно взятая величина для каждого вида сыворотки. Например, для дифтерийной сыворотки 1 МЕ – это наименьшее количество сыворотки, которое нейтрализует 100 DLM дифтерийного токсина для морской свинки.

Сыворотки представляют собой прозрачные жидкости, бледно- желтого цвета. Выпускают в ампулах. Сыворотки, так же как и вакцины, после производства проходят государственный контроль в соответствии с инструкциями Министерства здравоохранения. Сыворотки контролируют на стерильность, безвредность, количество белка, прозрачность и активность (титр антител). Сыворотки вводят подкожно, внутримышечно, реже - внутривенно или в спинномозговой канал. Вводят сыворотки по методу Безредке для предупреждения анафилактического шока и сывороточной болезни.

Из сывороток получают иммуноглобулины путем водно-спиртового извлечения (очистки). Иммуноглобулины – это очищенные и концентрированные иммунные сыворотки.

Иммуноглобулины, как и иммунные сыворотки бывают гомологичными и гетерологичными. Гомологичные получают из крови людей, гетерологичные – из крови животных. Иммуноглобулины из крови человека бывают 2-х видов: 1) противокоревой (нормальный) иммуноглобулин – получают из донорской, плацентарной или абортивной крови здоровых людей, которая содержит антитела против вируса кори, вирусов гриппа, гепатита, полиомиелита, против коклюша и некоторых других бактериальных и вирусных инфекций; 2) иммуноглобулины направленного действия – получают из крови переболевших людей и добровольцев, которых иммунизируют против определенной инфекции; они содержат повышенные концентрации специфических антител и применяются с лечебной целью; получают иммуноглобулины направленного действия против гриппа, бешенства, оспы, клещевого энцефалита, столбняка и стафилококковых инфекций.

Гетерологичные иммуноглобулины: иммуноглобулины лошадиные против бешенства (антирабический g-глобулин), клещевого энцефалита, лихорадки Эбола, японского энцефалита, сибирской язвы; иммуноглобулины из сыворотки крови волов для лечения лептоспироза.

Гомологичные сывороточные препараты широко применяют для профилактики и лечения вирусного гепатита, кори, для лечения ботулизма, столбняка, стафилококковых инфекций, клещевого энцефалита, гепатита В. и др.

Гетерологичные сыворотки – это лошадиные сыворотки против ботулизма, газовой гангрены, дифтерии, столбняка.

Применение гомологичных сывороток и иммуноглобулинов предпочтительнее (лучше), так как антитела более длительно находятся в организме (4 – 5 недель) и не вызывают сильных побочных реакций, как гетерологичные. Гетерологичные препараты быстро выводятся из организма (через 1 – 2 недели) и вызывают побочные эффекты. Они имеют строго ограниченное применение из-за опасности аллергических осложнений.

ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ – препараты, которые стимулируют, ингибируют или регулируют иммунные реакции. Они воздействуют на активность иммунокомпетентных клеток, процессы образования иммунных факторов. К ним относятся интерферон, интерлейкины, миелопептиды, вещества тимуса, а также химические вещества: декарис, циклоспорин А; препараты микробного происхождения: продигиозан, пирогенал, мурамилпептид. Иммуномодуляторы назначают при опухолях, первичных и вторичных иммунодефицитах, аутоиммунных заболеваниях.

часть 1. общая микробиология

Методы лабораторной диагностики бактериальных инфекций. Бактерии – возбудители кишечных инфекций. Характеристика кишечной палочки и ее значение для макроорганизма. Заболевания, вызываемые кишечной палочкой. Принципы их лабораторной диагностики, лечения и профилактики.

Для диагностики инфекционных болезней в настоящее время широко используют лабораторные методы исследования. К ним относятся следующие методы:

3. Биологические (биопроба).

Выбор методов исследования зависит от предварительного диагноза заболевания.

Материалом для исследования может быть кровь, спинномозговая жидкость, мокрота, кал, моча, желчь, рвотные массы, слизь из зева, носа, отделяемое уретры, шейки матки, пунктаты органов, и.т.д, что зависит от характера, формы, периода болезни.

Микросопический метод основан на микроскопии мазков приготовленных из патологического материала. Мазки могут быть нативными, фиксированными и окрашенными.

Преимущество метода : простота и быстрота получения результата (30-60 минут).

1) частая невозможность видовой идентификации возбудителей (например, патогенных энтеробактерий);

2) необходимость достаточного количества возбудителя в исследуемом материале.

Метод в большинстве случаев является ориентировочным. Однако в диагностике некоторых инфекций (например, менингита, лептоспироза, возвратного тифа, сифилиса) этот метод может быть основным.

Достоверность метода повышается при проведении иммунофлюоресцентного исследования. Этот метод основан на обработке препаратов из исследуемого материала специальными сыворотками, содержащими антитела к возбудителю, меченные флюорохромами. Меченые антитела соединяются с соответствующим антигеном, который выявляется. Под люминесцентным микроскопом вокруг этих комплексов видна зона свечения.

В настоящее время этот метод широко применяется для обнаружения различных микроорганизмов в патологическом материале.

Микробиологический метод основан на выделении чистой культуры возбудителя из патологического материала и ее идентификации. Выделение проводят путем его посева на соответствующие питательные среды. Идентификацию чистых культур проводят по морфологическим, культуральным, биохимическим, антигенным, токсигенным и другим признакам.

1) высокая информативность и достоверность;

2) возможность определения in чувствительности выделенной культуры к антибиотикам и назначения рациональной химиотерапии;

3) возможность выявления бактерионосителей среди различных групп населения;

4) возможность расшифровки эпидемиологической цепочки (источник инфекции, пути ее передачи) на основании идентификации био-, серо-, фаговаров возбудителей.

Недостаток метода : длительность исследования (от 2-4 дней до 3-4 недель - 2 месяцев).

Метод является основным в диагностике большинства инфекций.

Биологический метод основан на заражении исследуемым материалом лабораторных животных с целью выделения и идентификации чистой культуры возбудителя (или его токсина), а также для постановки диагноза по клинической картине заболевания.

1) возможность выделения возбудителя, когда он не растет или плохо культивируется на искусственных питательных средах (например, возбудители туляремии, риккетсиозов, хламидиозов);

2) возможность выделения возбудителя при обильном загрязнении патологического материала посторонней микрофлорой;

3) возможность дифференциации патогенных микроорганизмов (например, возбудителей эндемического и эпидемического риккетсиозов) и определение их вирулентности;

4) возможность изучить иммунитет и эффективность лечебно-профилактических препаратов.

гибель лабораторных животных (в результате инфекционного процесса или специального умерщвления).

Биопроба на животных применяется главным образом при зоонозах, а также для обнаружения токсинов ( например, ботулинического).

Серологический метод направлен на обнаружение антител в сыворотке больного (серодиагностика) и на выявление антигенов возбудителей (сероидентификация) непосредственно в исследуемом материале.

Для серодиагностики и сероидентификации применяются различные высокочувствительные иммунологические реакции: агглютинации, РНГА,РСК, преципитации,иммунофлюоресценции, иммуноферментный, радиоиммунный анализ.

При серодиагностике в качестве антигенов используют живые культуры микроорганизмов или диагностикумы – убитые взвеси микроорганизмов или экстракты из них, полученные химическим путем.

Для сероидентификации возбудителей применяют диагностические сыворотки с высоким содержанием антител и выраженной специфичностью.

Преимущества серологического метода:

1) является одним из основных в диагностике вирусных инфекций и риккетсиозов (в связи с трудностями выделения и идентификации этих возбудителей);

2) быстрота получения результатов;

3) высокая чувствительность;

4) позволяет оценить эффективность вакцинопрофилактики;

5) позволяет провести эпидемиологический анализ инфекциооной заболеваемости.

Основной недостаток метода: относительная достоверность, так как могут быть положительные результаты серологических исследований не только у больных, но и у лиц, перенесших соответствующую инфекцию в прошлом (анамнестическая реакция) или у получавших профилактические прививки (прививочная реакция).

Возможны ложноположительные результаты при идентификации антигенов возбудителей в связи с широким антигенным родством между родами и видами внутри каждого семейства и даже среди различных семейств.

В целом серологический метод в лабораторной практике чаще имеет вспомогательное значение и не может заменить бактериологическое исследование.

Аллергический метод основан на выявлении повышенной чувствительности организма к специфическому аллергену, которым является возбудитель заболевания. Для выявления такой чувствительности ставят кожно-аллергические пробы. Человеку, у которого предполагают наличие заболевания, сопровождающегося аллергией (туберкулез, бруцеллез, туляремия, сап, сибирская язва и др.), вводят внутрикожно малые количества аллергена из возбудителя данной инфекции (убитые микробные клетки или извлеченные из них антигенные комплексы или продукты жизнедеятельности возбудителя). При наличии инфекционной аллергии через 24-72 часа возникает воспалительная реакция в виде гиперемии, инфильтрата, отека кожи. В основе положительной кожной реакции лежит клеточная реакция ГЗТ, которая отражает специфическую повышенную чувствительность организма к инфекционному аллергену. Она возникает в результате текущего, перенесенного заболевания, вакцинации или инфицирования организма.

Кроме кожно-аллергических проб используются методы аллергодиагностики in vitro (реакции лейкоцитолиза, торможения миграции лейкоцитов, лимфобласттрансформации), позволяющие оценить состояние специфической сенсибилизации лейкоцитов крови в отношении определенного антигена.

Преимущество аллергического метода: высокая специфичность.

1) положительные реакции наблюдаются не только у больных, но у переболевших или ранее иммунизированных против этих инфекций лиц;

2) внутрикожные пробы способствуют нежелательной дополнительной сенсибилизации организма (методы аллергодиагностики in vitro лишены этого недостатка;

3) метод применим в диагностике заболеваний, сопровождающихся аллергией к возбудителю, то есть имеет ограниченное использование.

В последнее время используется новая группа методов-молекулярно-генетические. Они применяются для идентификации некоторых прихотливых бактерий (например, легионелл, хламидий), а также гонококков, микобактерий и др. Эти методы основаны на идентификации ДНК. К ним относятся:

а) метод гибридизации нуклеиновых кислот; основан на способности ДНК (и РНК) специфически соединяться (гибридизироваться) с комплементарными фрагментами искусственно созданных нитей ДНК (и РНК), меченных изотопами или ферментами (пероксидазой или щелочной фосфатазой). В дальнейшем образцы исследуют различными методами (например, ИФА).

б) полимеразная цепная реакция (ПЦР) основана на многократном образовании копий определенного участка ДНК с получением большого количества изучаемого фрагмента ДНК даже в том случае, если в распоряжении имелась всего одна исходная молекула геномной ДНК. Идентификацию копий ДНК проводят методом электрофореза.

1) высокая специфичность и чувствительность;