Тест на определение гриппа h1n1

• Форма выпуска: вариант 1: индивидуальная упаковка / 1 исследование; вариант 2: набор / 10 исследований
• Назначение: тест иммунохроматографический для выявления вирусов гриппа А и В в респираторных выделениях

Инструкция по применению

Регистрационное удостоверение: №ФСР 2012/13624 от 29.06.2012

Возбудителем гриппа является вирус, который поражает, главным образом, верхние дыхательные пути – нос, горло, бронхи, реже – лёгкие. Заболевание обычно длится одну-две недели и характеризуется высокой температурой, миалгией, головной болью, недомоганием, сухим кашлем, болью в горле и ринитом.

Для детей, пожилых людей и людей, страдающих заболеваниями лёгких, почек, сердца, диабетом, раком, грипп представляет серьёзную опасность. Эта инфекция может вызвать осложнения основных заболеваний, пневмонию и смерть.

Заболевание человека вызывают, как правило, два типа гриппа – тип А (подтипы H3N2 и H1N1) и тип В. Причиной смертей от гриппа чаще всего является вирус А подтипа H3N2.

Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализируемый образец жидкого биологического материала абсорбируется поглощающим участком тест-полоски. При наличии в образце вируса гриппа А и/или вируса гриппа В они вступают в реакцию с нанесенными на стартовую зону специфическими моноклональными антителами против вируса гриппа А и специфическими моноклональными антителами против вируса гриппа B, меченными окрашенными частицами, и продолжают движение с током жидкости. В соответствующих аналитических зонах тест-полоски происходит взаимодействие со специфическими моноклональными антителами против вируса гриппа А и/или вируса гриппа В, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием окрашенных иммунных комплексов.

В контрольной зоне тест-полоски специфический окрашенный иммунный комплекс образуется независимо от наличия в тестируемом биологическом материале вируса гриппа А и/или вируса гриппа В.

В том случае, если в анализируемом образце присутствует вирус гриппа А и вирус гриппа В, на тест-полоске образуются три параллельные окрашенные линии (красная и синяя аналитические, обозначенные буквой Т, и зеленая контрольная, обозначенная буквой С), что указывает на положительный результат анализа по вирусам обоих типов. В случае отсутствия в анализируемом образце вируса гриппа А и вируса гриппа В на тест-полоске образуется одна зелёная контрольная линия (С), что указывает на отрицательный результат анализа по вирусам обоих типов.

Кассеты с тест-полосками и одноразовые пластиковые пипетки упакованы в индивидуальные вакуумные упаковки из фольги алюминиевой, содержащие пакетики с силика-гелем.

• одноразовые резиновые или пластиковые перчатки;
• часы или таймер.

Использованные тесты и остатки биологического материала должны быть помещены в специальный контейнер для санитарных отходов.

Свежесобранный биологический материал (респираторные выделения из носовой полости человека), не содержащий консерванты.

Образцы респираторных выделений до определения можно хранить при температуре 2–4°С не более 8 ч.

Перед анализом образцы респираторных выделений должны быть доведены до комнатной температуры.

1. Ввести стерильный ватный тампон на зонде приблизительно на 3 см в одну ноздрю и, вращая его, взять мазок со стенок носового хода (рис. 1-1).

2. Внести в одноразовую пластиковую пробирку из флакона с крышкой-капельницей 15 капель буфера для растворения образца (рис. 1-2).

1. Взять мазок со стенок носового хода	2. Внести 15 капель раствора для образца	3. Вращать тампон в пробирке, выжать жидкость

3. Поместить тампон с образцом в пробирку, смыть образец, вращая тампон по стенкам пробирки минимум 10 раз. Выдавить жидкость из тампона, сдавливая его стенками пробирки (рис. 1-3). Выбросить тампон.

1	2

6. Через 10 мин визуально оценить результат реакции.

Выявление в тестовом окошке кассеты одной зеленой контрольной линии (С) свидетельствует об отрицательном результате анализа по обоим типам вируса, т.е. указывает на отсутствие в анализируемом образце респираторных выделений вирусов гриппа А и В (рис. 3-1).

Выявление в тестовом окошке кассеты трёх параллельных окрашенных линий (зеленой, красной и синей) свидетельствует о положительном результате анализа по обоим типам вируса, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце респираторных выделений вирусов гриппа А и В (рис. 3-2). Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных окрашенных линий (зеленой и красной) свидетельствует о положительном результате анализа по вирусу гриппа А, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце респираторных выделений вируса гриппа А и отсутствие вируса гриппа В (рис. 3-3). Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных окрашенных линий (зеленой и синей) свидетельствует о положительном результате анализа по вирусу гриппа В, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце респираторных выделений вируса гриппа В и отсутствие вируса гриппа А (рис. 3-4). Интенсивность окраски красной и синей аналитических линии может меняться в зависимости от концентраций, соответственно, вируса гриппа А и вируса гриппа В в образце.

235 грн. /упаковка

Минимальная сумма заказа — 120 грн.

• Условия оплаты и доставки
• График работы
• Адрес и контакты

Быстрый тест для диагностики Гриппа CITO TEST

CITO TEST Грипп. Экспресс-тест является быстрым тестом для качественного выявления антигенов вирусов гриппа типа А и типа В в мазках из носа с целью диагностики гриппа. Тест на грипп предназначен для самоконтроля и производится компанией Фармаско (Украина), Качественный экспресс-тест на грипп, прост в использовании, результат всего за 10 минут.

Грипп является острым респираторным вирусным заболеванием с капельным механизмом передачи, характеризующаяся острым началом, преимущественным поражением верхних дыхательных путей и общей интоксикацией. На сегодня грипп считается самым распространенным инфекционным заболеванием, и ежегодно напоминает о себе в холодное время года. каждый сезон гриппуют миллионы взрослых и детей во всем мире, а сотни тысяч заболевших умирают от осложнений.
Вирус гриппа легко меняется, поэтому ежегодно появляются новые его штаммы, с которыми иммунная система населения мира еще не встречалась. Инфекция способна охватить огромные массы населения в короткие сроки - большой город охватывается заболеванием за 1,5-2 недели, огромная страна - за 3-4 недели.
Инфекции благоприятные люди всех возрастов, особенно с ослабленным иммунитетом. Переохлаждение, стресс, нервные потрясения, эмоциональное и физическое перенапряжение злоупотребления алкоголем способствуют снижению иммунитета и ослаблению защитных функций организма. Дети, старше 65 лет, беременные и лица, имеющие хронические болезни, относятся к группам риска, поскольку у них развитие неблагоприятных последствий заболевания очень высок.

Осложнения, развивающиеся вследствие гриппа, представляет серьезную угрозу здоровью и жизни человека. К ним относятся пневмонии, синуситы, отиты, менингиты, осложнения хронических заболеваний и другие. Чтобы избежать осложнений, необходимо своевременно диагностировать грипп и обратиться к врачу за помощью.

Более подробную консультацию по тест системам и условий покупки можно узнать связавшись с нами.

Быстрый тест для диагностики гриппа является качественным быстрым анализом с визуальным учетом результатов тестирования. Принцип работы теста базируется на связке антител с антигеном специфическим путем. Во время тестирования образец вступает в реакцию с реагентами, которые были заранее нанесены и высушенные на мембрану теста. Затем смесь мигрирует вдоль теста под действием капиллярных сил. В случае положительного результата реагенты, которые присутствуют в результативной участке теста, будут захватывать смесь, в результате чего образуются красная и / или голубая тестовая линии. Смесь будет продолжать двигаться вдоль мембраны в направлении контрольного участка где всегда появляется зеленая контрольная линия. Наличие контрольной линии служит подтверждением достаточного количества использованного образца, заполнение капилляров мембраны, а также как внутренний контроль качества использованного образца, заполнение капилляров мембраны, а также как внутренний контроль качества для реагентов.

Предостережение к применению тест-системы на вирус гриппа.
- Для самоконтроля.
- Не использовать после истечения срока годности, указанного на упаковке.
- не использовать в случае повреждения целостности упаковки.
- Образцы мазков могут считаться потенциально опасными и обращаться с ними следует как с инфицированным материалом. В случае забора мазка посторонним лицом ей необходимо надеть одноразовые перчатки.
- После использования тест следует уничтожить в контейнере для отходов.
- Использовать для тестирования только комплектующие, предоставленные с тестом.

Забор и подготовка образца для тестирования на грипп.

Шаг 1. Вынуть ватный тампон из упаковки. Запрокинуть голову назад, высоко подняв подбородок. Ввести стерильный тампон в одну ноздрю и осторожно вращать его несколько раз, касаясь к стенкам носа, для того, чтобы получить максимальное количество клеток, а не только слизи. После этого вынуть тампон с ноздри.
Шаг 2. Снять колпачок с флакона-капельницы и расположить тампон с образцом в флаконе. Перемешать жидкость с помощью тампона, энергично вращая его во флаконе не менее 10 раз.
Шаг 3. Сжать стенки флакона для того, чтобы получить максимальное количество жидкости из тампона. Вынуть и выбросить тампон. Закрыть флакон крышкой.

1. Вынуть тест с запаянной упаковки непосредственно перед проведением тестирования. Обратить внимание, что тест-кассета имеет два окошка (см рис.2).

5. Подождать появления цветных линий в окошке результата. В зависимости от концентрации вируса тестовые линии можно наблюдать через 5 минут после внесения образца. Конечный результат необходимо оценить на 10 минуте. Не принимать во внимание появление линий после 10 минут.

Хранение и стабильность тест системы.
Тест стабилен до истечения срока годности, указанного на упаковке. Не открывать запаянную упаковку до начала анализа. Хранить тест упакованным при температуре 2˚-30 ° С.

Ограничения по применению теста на грипп.
1. Тест следует использовать в течение 2:00 после открытия запаянной упаковке.
2. Тест предоставляет лишь предварительный диагноз гриппа А или В. заключительный диагноз должен быть установлен врачом после оценки всех клинических и лабораторных данных.
3. Материалом для исследования могут быть только мазки из носа. Использование других образцов (слюна, мокрота или моча) не предусмотрено. Качество анализа зависит от качества забора и приготовления образца клинического материала.
4. Отрицательный результат теста можно получить, если количество образца недостаточная или содержание антигенов ниже порогового уровня чувствительности теста.

Вирус гриппа типа А (H1N1), как и сезонный грипп передается воздушно-капельным путем при разговоре, чихании, кашле. Предотвратить заражение помогут следующие мероприятия:
- избегать контакта с людьми с имеющимися симптомами гриппа (пытаться держать дистанцию ​​в 1 м, если это возможно);
- не касаться рта и носа;
- Часто мыть руки водой с мылом или спиртовым раствором (особенно при дотрагивании рта и носа или потенциально контаминированных поверхностей);
- избегать тесного контакта с лицами, которые, вероятно, больные,
- избегать мест с большим скоплением людей, если это возможно;
- Проветривать помещения;
- Соблюдать здорового образа жизни: спать достаточное количество времени, употреблять здоровую пищу, делать физические упражнения.

Комплектация CITO TEST Грипп:

- Тест-кассета с реагентом - 1 шт.
- Пробирка с растворителем - 1 шт.
- Стерильный тампон (канюля) - 1 шт.
- Инструкция на Украинском языке.

ного выявления вируса гриппа А и/или вируса гриппа В в респираторных выделениях человека.

Возбудителем гриппа является вирус, который поражает, главным образом, верхние

дыхательные пути – нос, горло, бронхи, реже – легкие. Заболевание обычно длится од- ну-две недели и характеризуется высокой температурой, миалгией, головной болью, не- домоганием, сухим кашлем, болью в горле и ринитом.

Для детей, пожилых людей и людей, страдающих заболеваниями легких, почек, серд- ца, диабетом, раком, грипп представляет серьезную опасность. Эта инфекция может вы- звать осложнения основных заболеваний, пневмонию и смерть. Заболевание человека вызывают, как правило, два типа гриппа – тип А (подтипы H3N2 и H1N1) и тип В. Причиной смертей от гриппа чаще всего является вирус А подтипа H3N2.

Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализи-

руемый образец жидкого биологического материала абсорбируется поглощающим участ-

ком тест-полоски. При наличии в образце вируса гриппа А и/или вируса гриппа В они

вступают в реакцию с нанесенными на стартовую зону специфическими моноклональны-

ми антителами против вируса гриппа А и специфическими моноклональными антителами

против вируса гриппа B, меченными окрашенными частицами, и продолжают движение с

током жидкости. В соответствующих аналитических зонах тест-полоски происходит вза-

имодействие со специфическими моноклональными антителами против вируса гриппа А

и/или вируса гриппа В, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием

окрашенных иммунных комплексов.

В контрольной зоне тест-полоски специфический окрашенный иммунный комплекс

образуется независимо от наличия в тестируемом биологическом материале вируса грип- па А и/или вируса гриппа В.

В том случае, если в анализируемом образце присутствует вирус гриппа А и вирус грип-

па В, на тест-полоске образуются три параллельные окрашенные линии (красная и синяя

аналитические, обозначенные буквой Т, и зеленая контрольная, обозначенная буквой С),

что указывает на положительный результат анализа по вирусам обоих типов. В случае от-

сутствия в анализируемом образце вируса гриппа А и вируса гриппа В на тест-полоске об-

разуется одна зеленая контрольная линия (С), что указывает на отрицательный результат

анализа по вирусам обоих типов.

из пластика белого цвета – 1 шт.;

• флакон с крышкой-капельницей, содержащий буфер для растворения образца –

• одноразовые пластиковые пробирки – 1 шт.,

• стерильные ватные тампоны на зонде – 1 шт.,

• одноразовые пластиковые пипетки – 1 шт.,

• этикетки на клеевой основе для маркировки пробирок пользователем – 1 шт.,

Кассеты с тест-полосками и одноразовые пластиковые пипетки упакованы в индиви-

дуальные вакуумные упаковки из фольги алюминиевой, содержащие пакетики с силика-гелем.

НЕОБХОДИМЫЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ,

НЕ ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА

• одноразовые резиновые или пластиковые перчатки;

• часы или таймер.

и 99% по вирусу типа В.

по вирусу типа В.

• Время проведения анализа – 10 мин.

гриппа А и/или вируса гриппа В в респираторных выделениях человека.

При проведении определения следует надевать одноразовые резиновые или пластико-

вые перчатки, т.к. исследуемые образцы биологического материала следует рассматривать

как потенциально инфицированные.

Использованные тесты и остатки биологического материала должны быть помещены

в специальный контейнер для санитарных отходов.

Свежесобранный биологический материал (респираторные выделения из носовой по-

лости человека), не содержащий консерванты.

Образцы респираторных выделений до определения можно хранить при температуре

2–4°С не более 8 ч.

Перед анализом образцы респираторных выделений должны быть доведены

Экспресс-диагностика на определения вируса гриппа

Заболели? Насморк, кашель, высокая температура, ломота в мышцах… это грипп или все-таки простуда. Узнайте сразу!

Зачем мне это?

Начальные симптомы гриппа могут быть схожи с ОРВИ, но лечение потребуется разное!

Определение вируса гриппа и его типа поможет избежать неправильного лечения и позволит врачу вовремя назначить соответствующую противовирусную терапию.

Опасность гриппа кроется в серьезных осложнениях. При тяжелом течении болезни часто возникают необратимые поражения сердечно-сосудистой системы, дыхательных органов, центральной нервной системы, провоцирующие заболевания сердца и сосудов, пневмонии, трахеобронхиты, менингоэнцефалиты. Поэтому в случае гриппа очень важно вовремя поставить правильный диагноз и начать правильное своевременное лечение.

Не ждите осложнений! Ранняя диагностика позволит принять необходимые меры вовремя.

Как проходит диагностика?

Стоимость экспресс-диагностики гриппа: 1 500 руб. (при вызове врача на дом услуга оплачивается дополнительно)

Телефон для записи (343) 238-08-08

В указанное Вами время Вам позвонит наш администратор с номера +7 (343) 283-08-08 для подтверждения приёма. Our administrator will call you from the number +7 (343) 283-08-08 for confirmation of reception. V uvedenýčaszavolámeVám z t. č. +7 (343) 283-08-08 pro potvrzení prohlídky. Notre administrateur vous contactera au moment fixé à partir du numéro de +7 343 283 08 08 pour confirmer le rendez-vous. Our administrator will call you from the number +7 (343) 283-08-08 for confirmation of reception. Our administrator will call you from the number +7 (343) 283-08-08 for confirmation of reception. Our administrator will call you from the number +7 (343) 283-08-08 for confirmation of reception. Zur verabredeten Zeit ruft Sie unser Administrator von Nummern +7 (343) 283-08-08 an, um den Termin zu bestätigen. 명확하게 서술된 시간에 우리의 행정관은 확인하기 위해 +73432830808 번호로 전화해 드리겠습니다. Yöneticimiz, resepsiyon onayı için sizi +7 (343) 283-08-08 numaralı telefondan arayacaktır.

Если Вы опоздали на приём менее, чем на 15 минут, то время приёма будет сокращено на время Вашего опоздания. If you are late for an appointment less than 15 minutes, the reception time will be reduced by the time you are late. V případězpoždění méně než 15 minut, doba prohlídky bude zkrácena o čas zpoždění. Si vous êtes en retard de moins de 15 minutes par rapport au rendez-vous fixé, votre temps de réception sera réduit tenant compte de votre retard. If you are late for an appointment less than 15 minutes, the reception time will be reduced by the time you are late. If you are late for an appointment less than 15 minutes, the reception time will be reduced by the time you are late. If you are late for an appointment less than 15 minutes, the reception time will be reduced by the time you are late. Wenn Sie zu einem Termin weniger als 15 Minuten zu spät kommen, wird die Empfangszeit für die Dauer Ihres Aufenthaltes verkürzt. 만약 15분 미만 늦으신다면 잔찰 시간은 지연 시간으로 줄일 겁니다. Randevunuza 15 dakika geçtiyseniz, geç kalma saatinizle resepsiyonun süresi kısalır.

Если Вы опоздали более, чем на 15 минут, Ваш приём будет отменён и перенесён на удобное для Вас время. If you are late more than 15 minutes, your appointment will be moved to a convenient time for you. V případě zpoždění vícenež 15 minut, prohlídka bude zrušena a přesunuta na zvolený termín. Si vous êtes en retard de plus de 15 minutes, votre rendez-vous sera annulé et rapporté à une date qui vous conviendrait. If you are late more than 15 minutes, your appointment will be moved to a convenient time for you. If you are late more than 15 minutes, your appointment will be moved to a convenient time for you. If you are late more than 15 minutes, your appointment will be moved to a convenient time for you. Wenn Sie zu einem Termin mehr als 15 Minuten zu spät kommen, wird ihr Termin storniert und zu einem für Sie günstigen Zeitpunkt übertragen. 만약 15분 이상 늦으신다면 진찰은 취소하고 편리한 시간으로 연기해 드리겠습니다. 15 dakikadan fazla gecikti iseniz, randevunuz sizin için uygun bir zamana taşınacaktır.

Событие появится в вашем личном кабинете в течение 15 минут.

Не удалось сделать запись. Пожалуйста, попробуйте позже. Please try again later. Se nepodařiloobjednat. Zkuste to prosímpozději. Échec de l'enregestrement de votre inscription. Veuillez essayer ultérieurement. Please try again later. Please try again later. Please try again later. Bitte versuchen Sie es später erneut. 진철의 시간을 정할 수 없습니다. 나중에 다시 시도해 주시기 바랍니다. Lütfen daha sonra tekrar deneyin.

В течение 2-х часов с номера +7 (343) 283-08-08 вам позвонит наш администратор и постарается вам помочь.

В течение 2-х часов с номера +7 (343) 283-08-08 вам позвонит наш администратор и постарается вам помочь.

Т.В. Гребенникова, Д.Е. Киреев, А.Д. Забережный, Т.И. Алипер

Грипп А – контагиозное вирусное заболевание, которое вызывает сезонные эпидемии, пандемии и эпизоотии с различным уровнем смертности в зависимости от вирулентности вирусных штаммов, вызвавших эпидемию (1).

Вирус гриппа А широко распространен в природе, инфицирует многие виды млекопитающих и птиц, в основном водного и околоводного комплекса. От диких птиц выделены вирусы со всеми известными сочетаниями поверхностных белков, при этом инфекция у диких птиц протекает в виде энтерита, без видимых признаков заболевания (3, 4). Это указывает на высокую степень адаптации вирусов гриппа А к диким птицам, которые являются естественными хозяевами вирусов гриппа. Вирус сохраняется в воде в течение длительного времени (6-8 месяцев), а водно-фекальный путь инфицирования является основным механизмом поддержания персистенции вируса гриппа в природе, откуда вирус проникает в популяции домашних животных.

Вирус гриппа А отличается высокой степенью вариабельности, особенно это касается поверхностных гликопротеинов вириона: гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA). Известно 16 антигенных подтипов НА (Н1-Н16) и 9 подтипов NA (N1-N9). Вирус гриппа обладает сегментированным геномом, состоящим из 8 сегментов, которые обладают высокой способностью к реассортации. Различные комбинации НА и NА способны привести к появлению высоковирулентных вирусов, вызывающих высокий процент смертности.

В 20 веке отмечены четыре пандемии: 1918 (H1N1), 1957 (H2N2), 1968 (H3N2) и 1977 (H1N1), причем две (1957 и 1968 гг.) были обусловлены новыми реассортантными вирусами, которые появились в результате реассортации генов вирусов гриппа птиц и человека. Свиньи могут служить промежуточным хозяином, обеспечивающим появление новых вирусов путем адаптации птичьих вирусов и/или реассортации между птичьими и человеческими вирусами (2). В результате этих процессов вирусы птиц смогут репродуцироваться в организме человека, а вирусы человека – в организме птиц. Существует гипотеза, что печально знаменитая "испанка" была вызвана вирусом гриппа свиней А H1N1 (5). За последние 45 лет описано свыше 30 эпизоотий среди домашних животных в ряде случаев сопровождающихся заболеванием людей, подчас с высокой смертностью.

Начиная с 1996 г. и до настоящего времени были отмечены случаи заражения человека подтипами H5 and H7 (3, 4). Наблюдается распространение гриппа птиц, вызванного вирусом H5N1, в странах Азии. С середины декабря 2003 года вспышки этого заболевания были подтверждены в Южной Корее, Вьетнаме, Лаосе, Таиланде, Японии, Камбодже, Филиппинах, Малайзии и Китае (7). При этом отмечался высокий уровень смертности среди людей, до 50% в случае заражения человека подтипом Н5. С января 2004 года во Вьетнаме и Тайланде зарегистрированы случаи с летальностью более 70%. В 2005 г. были зарегистрированы эпизоотии на территории Российской Федерации, вызванные вирусом гриппа H5N1. Считается, что подтипы Н5 и Н7 вируса гриппа А являются наиболее опасными с точки зрения возникновения пандемий.

Угроза возникновения новой пандемии, предупреждение заноса и распространения высоко патогенных вирусов гриппа на территории нашей страны требует проведения мониторинга среди людей, домашних и диких животных с использованием современных средств диагностики. Диагностика гриппа осуществляется вирусологическими, иммунологическими методами и молекулярными методами. Молекулярные методы диагностики являются чувствительными и специфичными для определения вируса гриппа А. Кроме того, сравнительно в короткий срок, можно получить информацию о возбудителе без предварительного культивирования. Молекулярные методы рекомендованы Всемирной Организации Здравоохранения и Международным Эпизоотическим Бюро как лабораторные тесты для определения вируса гриппа в биологических образцах и постановки диагноза (8, 9 ).

В НПО НАРВАК и лаборатории молекулярной диагностики института вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН разработан комплекс молекулярных методов для индикации и идентификации вируса гриппа А, а также дифференцирования его подтипов. Разработки основаны на современных молекулярных методах и подходах и мегут с успехом использоваться ветеринарными специалистами.

Тест-система для определения РНК вируса гриппа А методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Разработана тест-система для определения РНК вируса гриппа А методом ПЦР. Тест-система является универсальной для млекопитающих и птиц и позволяет определять РНК вируса гриппа А в различных биологических образцах (сыворотках крови, клоакальных смывах и органах) методом ПЦР. С использованием данной тест-системы можно определять РНК, а следовательно наличие вируса гриппа А 16 подтипов. Праймеры, разработанные для тест-системы, специфичны к гену белка нуклеокапсида вируса гриппа А всех известных подтипов и проверены с использованием компьютерных программ "Amplify 1.0", "Oligo 4.0". C использованием программы "ВioEdit" и BLASTN 2.2.3, на 300-400 вирусных геномах каждого подтипа было показано, что праймеры являются универсальными. Тест-система способна выявлять возбудитель гриппа А даже в случае множественных мутаций и реассортации генетического материала.

Тест-система может быть использована для скрининга биологических образцов у млекопитающих и птиц, которые предположительно могут являться носителями вируса гриппа А.

Тест-система для определения и дифференциации РНК вируса гриппа А подтипов Н5 и Н7 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Тест-система определения РНК двух подтипов вируса гриппа А – Н5 и Н7 в биологических образцах. Следовательно, тест-система позволяет не только определять два данных подтипа, но и дифференцировать их от других подтипов вируса гриппа А. Праймеры подобраны к различным участкам гена гемагглютинина и проверены с использованием компьютерных программ "Amplify 1.0", "Oligo 4.0". C использованием программы "ВioEdit" и BLASTN 2.2.3, на 300-400 вирусных геномах для каждого подтипа вируса гриппа А было показано, что даже в случае антигенного дрейфа внутри подтипа Н5 и Н7, или в случае штаммов с множественными мутациями, праймеры работают специфично. Тест-система способна выявлять возбудитель гриппа А подтипов Н5 и Н7 даже в случае множественных мутаций и реассортации генетического материала.

Тест-система для определения РНК вируса гриппа А подтипа Н5 методом ПЦР в реальном времени

Разработана тест-система ПЦР в реальном времени для определения РНК подтипа Н5 вируса гриппа А, а , следовательно наличие вируса гриппа А подтипа Н5. ПЦР в реальном времени является самой современной модификацией ПЦР. Это чувствительный, быстрый и более технологичный метод, который может быть использован для массового анализа образцов от млекопитающих и птиц на наличие РНК разных подтипов вируса гриппа А. Тест-система с успехом апробировалась при скрининге полевого материала, что позволяет рекомендовать ее для массового изучения образцов, полученных от животных и человека. Данный анализ был адаптирован к отечественным реагентам, что существенно для проведения массовых исследований.

С использованием разработанных тест-систем в 2005 г. было проведено исследование более 400 образцов клоакальных смывов, полученных от диких птиц Приморского края. Кроме того, тест-система была проверена на 350 образцах, полученных от диких птиц из Астрахани. Были проверены 150 проб от диких птиц в районе озера Чаны. Были также проверены 78 образцов, полученные из Новосибирской области во время эпизоотии. Исследовали образцы из Астрахани, Кургана, Калмыкии, Китайской Народной Республики, Сибири и других областей. Всего исследовано около 4000 образцов. Описанные тест-системы успешно прошли Государственные контрольные испытания и имеют сертификационные документы.

Разработка технологии микрочипов для диагностики гриппа.

Одной из современных технологий является создание микрочипов (биочипов), основанных на гибридизации нуклеиновых кислот. Данная технология разработана совместно НПО НАРВАК, НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН, НИИ молекулярной биологии им. Энгельгарда РАН для определения и дифференциации вируса гриппа А подтипов Н1-Н15, N1-N2 (6). Микрочип позволяет в короткое время (несколько часов) не только определить наличие вируса гриппа А, но и дифференцировать подтипы вируса гриппа. Технологически, анализ происходить следующим образом: с использованием разработанных универсальных праймеров, специфичных гену гемагглютинина вируса гриппа А, и гену нейраминидазы, получают амплификаты методом ПЦР с использованием РНК, выделенной из биологических образцов. После этого, проводится гибридизации на микрочипе, который содержит набор зондов, специфичных к каждому из подтипов и меченых флюоресцентным красителем. Если гибридизации не произошло, цвет нанесенного зонда не меняется. Если гибридизация произошла – изменяется цвет зонда. Считывание и документирование происходит с использованием специального прибора, который сравнивает каждый зонд с положительным и отрицательным контролем.

По затратам средств и времени один микрочип эквивалентен 17 реакциям (ПЦР). В результате применения микрочипа для анализа образцов из Новосибирской области в 2005 г. сразу было установлено, что это H5N1. Разработанные микрочипы проходят лабораторные испытания. Внедрение нового метода требует дополнительных испытаний, комиссионных испытаний и получения сертификационных документов.

Анализ первичной структуры генома вирусов гриппа (секвенирование)

Вирус гриппа генетически чрезвычайно изменчив и этим опасен. Изменения свойств вируса могут происходить как из-за изменения генов (мутации), так и в ходе обмена генами (реассортация). Поэтому всегда есть угроза появления опасных гибридов: в 1918 г. это был Н1N1, а сегодня это может быть Н5N1. Для лучшего понимания и прогнозирования ситуации, для изучения происхождения и эволюции штаммов вируса гриппа применяют метод секвенирования. Сегодня секвенирование фрагментов вирусного генома является уже обязательным требованием при возникновении новых или спорных вирусных вариантов. Для вируса гриппа установлено, что его патогенность связана с последовательностью аминокислотных остатков в т.н. "сайте протеолитического разрезания" гемагглютинина. Поэтому сегодня этот сайт всегда определяют у выделяемых вирусов гриппа. Раньше у птиц на территории России находили вирус подтипа Н5 с "сайтом протеолитического разрезания" как у низко патогенных штаммов. Сегодняшний вирус Н5N1 имеет "сайт протеолитического разрезания" такой же как у высоко патогенных штаммов и поэтому высоко патогенный для птиц.

Грипп остается непредсказуемой инфекцией в настоящее время. Мир может оказаться беззащитным перед новым высоко патогенным пандемическим вариантом, вероятность возникновения которого довольно велика. Поэтому только постоянный мониторинг с использованием современных средств диагностики позволит своевременно выявить, локализовать и обезвредить очаги инфекции.

В отделе молекулярной биологии НПО НАРВАК и в лаборатории молекулярной диагностики Института вирусологии им. Д. И. Ивановского постоянно проводятся молекулярные исследования вируса гриппа с использованием самых современных методик. Данные исследования могут существенно помочь практическим ветеринарным специалистам. Разработаны две тест-системы на основе ПЦР для определения РНК вируса гриппа А и дифференцирования двух подтипов Н5 и Н7 и тест-система для определения РНК вируса гриппа А подтипа Н5 методом ПЦР в реальном времени. Тест-системы успешно прошли комиссионные испытания в 2005 г., имеют все сертификационные документы и могут быть использованы в региональных ветлабораториях.

1. ЛьвовД.К. Жданов В. М. // Вопр. Вирусол. – 1982. –N 4. – С. 17-20

2. Brown, I. H., Harris P.A., McCauley J.W, Alexander D.J. .// J. Gen. Virol. – 1998. - Vol. 79. - Р. 2947–2955.

3. Capua I, Alexander DJ. // Acta Trop. - 2002 –Vol. 83. N° 1. – P. 1-6. Review.

4. Capua I, Mutinelli F, Pozza MD, Donatelli I, Puzelli S, Cancellotti FM . // Acta Trop. - 2002. – Vol. 83. - N 1. – P.7-11.

5. Fanning T.G., Slemons R.D., Red A.H., Janczewski T.A., Dean J., Taubenberg J.K. 1917 // Journal of Virology. – 2002. - Vol. 76. - No 15. - P. 7860-7862.

6. Fesenko Е. Е, D.Kireev, D.A. Gryadunov, D.A.Khodakov, A.I. Myznikova, V.M. Mikhailovich, T.V.Grebennikova, A.S. Zasedatelev.// Международный конгресс "Современные проблемы генетики". –Минск. – 2005

7. Li, Wang J. Smith G. J. D. // Nature. - 2004. – Vol. 430. - P. 209-213.

9. Recommended laboratory tests to identify avian influenza A virus in specimens from humans • WHO Geneva • June 2005.