Тест для определения к вирусу клещевого энцефалита

Антитела класса IgG к вирусу клещевого энцефалита – это специфические противовирусные белки-иммуноглобулины, вырабатываемые иммунной системой в ответ на инфицирование вирусом клещевого энцефалита и свидетельствующие о текущей либо перенесенной инфекции или об успешной вакцинации.

При положительном результате указывается концентрация обнаруженных антител, а также титр.

Антитела класса IgG к вирусу клещевого энцефалита (Encephalitis virus), иммуноглобулины класса G к вирусу клещевого энцефалита.

Синонимы английские

Anti-arboviral Encephalitis IgG, Encephalitis Virus Antibodies, IgG, Tick-borne encephalitis virus IgG (TBE virus IgG).

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Ед/мл (единица на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Клещевой энцефалит – это сезонное (весенне-летнее) вирусное заболевание, передающееся в основном с укусом клещей; поражает преимущественно центральную нервную систему.

Возбудитель клещевого энцефалита относится к арбовирусам, семейству флавивирусов, и подразделяется на три подвида: дальневосточный, центральноевропейский и сибирский. Основной переносчик энцефалита – иксодовые клещи. Кроме того, он передается через птиц, грызунов и хищников. Инкубационный период в среднем составляет 3-7 суток. Клинические проявления болезни разнообразны. Выделяют лихорадочную, менингеальную, менингоэнцефалитическую, полиомиелитическую и полирадикулоневритическую формы заболевания. Возможно длительное вирусоносительство в виде латентной, персистентной или хронической инфекции.

В ответ на инфицирование вирусом клещевого энцефалита или на вакцинацию против этого вируса иммунной системой вырабатываются специфические противовирусные антитела – белки-иммуноглобулины. Иммуноглобулины класса G возникают в крови спустя неделю после появления первых симптомов, достигают максимума через 1,5-2,5 месяца с момента инфицирования и сохраняются на протяжении всей жизни, обеспечивая стойкий иммунитет.

Для чего используется исследование?

• Для подтверждения диагноза "клещевой энцефалит" (как текущего, так и недавно перенесенного заболевания).
• Чтобы оценить иммунитет после перенесенного клещевого энцефалита или после вакцинации против него.
• Как часть дифференциальной диагностики при поражении центральной нервной системы (инфекционных менингитах и энцефалитах другого происхождения, эпилепсии, асептическом менингите, тромбозе артерий или вен головного мозга, инсульте, внутричерепном кровоизлиянии, фебрильных судорогах, ВИЧ, цистицеркозе, саркоидозе, сифилисе, карциноматозе мозговых оболочек, паранеопластическом энцефаломиелите и др.).

Когда назначается исследование?

• При подозрении на текущий или перенесенный клещевой энцефалит.
• При проведении вакцинации против клещевого энцефалита.

Что означают результаты?

Концентрация: 0 - 100 Ед/мл.

Причины положительного результата

• Наличие активного иммунитета вследствие ранее перенесенной инфекции или вакцинации (если тест на IgM к вирусу клещевого энцефалита отрицательный).
• Текущий или недавно перенесенный клещевой энцефалит (в сочетании с положительным тестом на IgM к вирусу клещевого энцефалита) при условии, что не проводилась вакцинация.
• Недавно проведенная вакцинация против вируса клещевого энцефалита.

Четырехкратное нарастание титра IgG-антител в парных сыворотках (в остром периоде инфекции и периоде выздоровления), а также повышение уровней IgG и IgM указывает на наличие клещевого энцефалита. Повышение титра IgG после введения вакцины свидетельствует о ее успешности.

Причины отрицательного результата

• Отсутствие недавнего инфицирования и, соответственно, иммунного ответа на вирус (если IgM к вирусу клещевого энцефалита не выявляются). Если есть подозрение на инфекцию, целесообразно назначить повторные анализы на IgM и IgG через 7-10 дней.
• Ранние стадии клещевого энцефалита (если уровень IgM повышен).
• Слабый иммунный ответ (или его отсутствие) на клещевой энцефалит вследствие нарушений иммунной системы (если IgM к вирусу клещевого энцефалита не выявляются).

Что может влиять на результат?

Наличие перекрестно-реагирующих антител к другим возбудителям рода флавивирусов (вирус лихорадки Западного Нила, вирус японского энцефалита и др.).

• Профилактикаклещевого энцефалита осуществляется двумя способами. Во-первых, это вакцинация, которая проводится при риске заражения клещевым энцефалитом, а во-вторых, ревакцинация по эпидемическим показаниям перед сезоном клещевого энцефалита.
• Тем, кто лечился гамма-глобулином в первые дни болезни, через 2-3 месяца необходимо дополнительное серологическое исследование в связи с тем, что такая терапия временно угнетает формирование иммунитета.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, невролог, терапевт, врач общей практики.

Набор реагентов ИФА ТС АГ ВКЭ Тест-система иммуноферментная для выявления антигена вируса клещевого энцефалита (Комплект № 1) включает следующие реагенты для проведения прямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА):
ИГ - иммуносорбент – иммуноглобулин класса G (крысиный) против вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) – аморфный порошок белого цвета, после растворения – прозрачная или слабоопалесцирующая бесцветная жидкость.
КА+ - контрольный положительный образец – антиген ВКЭ, экстрагированный из ткани мозга мышей, инфицированных ВКЭ, инактивированный бетапропиолактоном -аморфный порошок кремового цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесци-рующая светло-желтого цвета жидкость.
КА– - контрольный отрицательный образец – антиген из ткани мозга неинфицированных мышей, аморфный порошок кремового цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесцирующая светло-желтого цвета жидкость.
Конъюгат (концентрат) – иммуноглобулин класса G против ВКЭ (крысиный), конъюгированный с пероксидазой хрена, аморфный порошок белого цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесцирующая бесцветная жидкость.
КББ×20 - 20-кратный концентрат карбонатно-бикарбонатного буферного раствора для разведения ИГ – прозрачная бесцветная жидкость.
ФСБ-Т×25 – 25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином, раствор для промывания планшетов и приготовления раствора РР – прозрачная или слабо опалесцирующая бесцветная жидкость, в которой допускается выпадение кристаллов бело-го цвета, растворимых в течение 20-30 мин при температуре 37 ºС.
БСА - бычий сывороточный альбумин – стабилизатор – аморфный порошок от белого до светло-желтого цвета, после растворения в ФСБ-Т – прозрачная или слабо опалесциру-ющая светло-желтого цвета жидкость.
ЦБР - буферный раствор с перекисью водорода – раствор для разведения ТМБ – про-зрачная бесцветная жидкость.
ТМБ - концентрат тетраметилбензидина – хромоген – прозрачная бесцветная жид-кость.
Планшеты полистироловые 96-луночные монолитные для ИФА.

Комплект № 1 рассчитан на одновременное проведение 192 определений, включая контрольные.

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
Оборудование, материалы и реагенты (не включенные в состав набора), необ-ходимые для проведения анализа:
- многоканальный спектрофотометр, позволяющий измерять оптическую плотность содержимого лунок планшета при длине волны 450 нм;
- термостат, поддерживающий температуру (37±1) ºС;
- холодильник бытовой;
- промыватель для микропланшет, ручной или полуавтоматический;
- дозаторы (пипетки) переменного объема (механические или электронные): 8- или
12-канальные с объемом дозирования от 50 до 300 мкл и 1- канальные с объемом до-зирования от 10 до 100 мкл, от 100 до 1000 мкл и от 500 до 5000 мкл;
- наконечники для дозаторов соответствующей вместимости;
- шейкер (встряхиватель лабораторный медицинский V-3 типа вортекс);
- часы;
- бумага фильтровальная;
- перчатки резиновые хирургические;
- стаканы химические мерные или колбы мерные вместимостью 50 мл и 500 мл;
- цилиндры мерные вместимостью 25 мл, 100 мл, 500 мл;
- вода дистиллированная или вода очищенная;
- кислота серная концентрированная.
Вся посуда, используемая для постановки реакции, должна быть химически чистой и не содержать ионов тяжелых металлов. Следует избегать непосредственной близости с хлорсодержащими дезинфектантами, особенно на этапах приготовления ТМБ. Для отбора исследуемых образцов и реагентов тест-системы необходимо использовать автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5 %. Отбор реагентов следует произ-водить чистыми наконечниками для автоматических пипеток.

Подготовка исследуемого материала.

Обработка клещей.
Для испытания в ИФА пригодны лишь неповрежденные клещи. Клещей однократно промывают 70 % спиртом этиловым и 2-3 раза 0,9 % раствором натрия хлорида. Каждого клеща помещают в пробирку для микропроб вместимостью 0,5-1,5 мл, маркируют и хранят до исследования при температуре не выше минус 20 ºС не более 2 недель. Перед испытани-ем в ИФА готовят 10 % суспензию клеща: его растирают металлическим стержнем в той же пробирке, добавляют 0,2 мл РР (см. п. 4.4). Клеща, насосавшегося крови, растирают, добавляя РР в количестве, равном его объёму. Для ИФА берут 0,1 мл суспензии, остаток пробы хранят в той же пробирке и тех же условиях, что и клещей не более 2 недель.

Подготовка крови.
Кровь забирают из вены шприцем в количестве 2-5 мл, переносят в стерильную про-бирку, выдерживают 30-50 мин при температуре 37 оС или 1-2 ч при температуре 18-25 ºС для образования сгустка, затем центрифугируют 15-20 мин при 1500-2000 об/мин. Сыво-ротку отсасывают и помещают в стерильную пробирку, сгусток крови растирают в асепти-ческих условиях, добавляя равное ему по объёму количество РР. Затем центрифугируют при том же режиме, что и кровь. Надосадочную жидкость переносят в стерильную пробир-ку.
Приготовленные пробы маркируют и хранят до исследования при температуре от 2 до 8 оС не более 1 недели или при температуре не выше минус 20 ºС не более 3 мес. В зависимости от цели исследования в ИФА могут быть испытаны как неразведенные пробы сывороток и сгустков крови, так и в разведениях (например, от 1:2 до 1:8).

Подготовка мозговой суспензии.
Для исследования мозга инфицированных животных (или мозговой ткани людей, взятой в случае летального исхода) необходимо приготовить 1 % мозговую суспензию на РР. Суспензию центрифугируют при 3000-6000 об/мин в течение 20-30 мин, надосадочную жидкость переносят в стерильную пробирку, маркируют и хранят до исследования также как пробы крови. В ИФА проверяют как неразведенную суспензию, так и в разведении 1:10 и выше.

Подготовка культуральной жидкости.
Культуральную жидкость зараженных клеточных культур перед испытанием в ИФА освобождают от клеток центрифугированием при 3000-6000 об/мин в течение 20-30 мин. В ИФА исследуют как неразведенные пробы, так и в разведении 1:2 и более.
Подготовка растворов и реагентов (для проведения анализа на одном планшете).

Набор перед использованием необходимо выдержать не менее 30 мин при температу-ре от 18 до 25 °C.

Раствор для разведения ИГ (КББ).
0,5 мл КББ×20 разводят в 9,5 мл воды очищенной или дистиллированной (далее воды). Хранение: неиспользованный концентрат КББ×20 хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 7 сут.

Иммуносорбент (ИГ).
Рабочее разведение ИГ указано на ампуле.
Содержимое ампулы с ИГ растворяют в 1 мл воды (время растворения 1,5 мин при температуре 20-25 оС), затем разводят в КББ (см. п. 4.1) до разведения, указанного на ампу-ле (например: 1:20 – 0,5 мл ИГ и 9,5 мл КББ).
Хранение: неиспользованный растворенный ИГ хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 оС не более 7 сут.

Раствор для промывания планшетов и приготовления РР (ФСБ-Т).
Содержимое флакона с концентратом ФСБ-Т×25 разводят в 480 мл воды. В случае вы-падения осадка концентрат ФСБ-Т×25 предварительно прогревают в течение 20-30 мин при температуре 37 ºС до полного растворения осадка.
Хранение: при температуре от 2 до 8 ºС не более 2 сут или при температуре не выше минус 10 оС не более 14 сут.

Рабочий раствор (РР) для разведения образцов, конъюгата, КА+, КА–.
В 50 мл ФСБ-Т (см. п. 4.3) растворяют навеску 0,5 г стабилизатора БСА (время рас-творения 20 мин при помешивании при температуре 20-25 ºС).
Хранение: при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 7 сут.

Подготовка контрольных образцов.
Содержимое ампул с КА+ и КА– растворяют в 0,5 мл воды (время растворения 1,5 мин при температуре 20-25 ºС), затем готовят рабочее разведение каждого контрольного образ-ца в РР (см. п. 4.4) так, как указано на ампуле (например: 1:200 – 0,01 мл антигена и 2 мл РР).
Хранение: неиспользованные растворенные контрольные образцы хранят при темпе-ратуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 14 сут (рекомендуется разлить на аликвоты в микропробирки для исключения повторного замораживания-оттаивания).

Рабочее разведение конъюгата.
Содержимое ампулы с конъюгатом растворяют в 0,5 мл воды (время растворения
1,5 мин при температуре 20-25 ºС), затем разводят на РР (см. п. 4.4) так, как указано на ам-пуле (например: 1:40 – 0,25 мл конъюгата и 9,75 мл РР). Рабочее разведение конъюгата го-товят не ранее чем за 30 мин до использования.
Хранение: оставшийся не использованным растворенный конъюгат хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 14 сут.

Подготовка рабочего раствора ТМБ.
Рабочий раствор хромогена готовят непосредственно перед использованием, соединяя 2,5 мл концентрата ТМБ и 10 мл ЦБР (разведение 1:5), тщательно перемешивают. Смесь готовят в чистой посуде, избегая контакта раствора с металлом, воздействия интенсивного источника света и близости с хлорсодержащими веществами.
Хранение: при температуре 18-25 ºС не более 15 мин в защищенном от света месте.
4.8. Стоп-реагент (кислота серная концентрации 2 моль/л) в набор не включен, гото-вится дополнительно: к 9 мл воды добавляют 1,2 мл концентрированной кислоты серной.

Проведение иммуноферментного анализа.

Внесение контрольных и исследуемых образцов.
В две лунки планшета вносят по 100 мкл КА+ (в рабочем разведении), в три лунки – КА– (в рабочем разведении), в две лунки – по 100 мкл раствора РР – контроль конъюгата.
В остальные лунки планшета (кроме 12А) вносят по 100 мкл исследуемых образцов. Планшет закрывают и помещают на 1-2 ч при температуре (37±1) ºС или на 18-25 ч при температуре от 2 до 8 ºС, после чего планшеты промывают (см. п.5.1).

Внесение конъюгата.
В каждую лунку планшета, кроме 12А, вносят по 100 мкл раствора конъюгата в рабочем разведении. Планшет закрывают и помещают на 45-60 мин при температуре (37±1) ºС, затем отмывают 5 раз, остатки влаги удаляют (см. п.5.1).

Внесение хромогена и стоп-реагента.
Во все лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора ТМБ. Планшет выдерживают в защищенном от света месте при температуре 18-25 ºС в течение 5-7 мин до появления интенсивного голубого окрашивания в лунке с КА+, после чего в лунки вносят по 50 мкл стоп-реагента (п. 4.8).

Теплые майские деньки многие предпочитают проводить на природе. Кто-то едет жарить шашлык на дачу, кто-то отправляется гулять в лес. Там-то человека и подстерегает опасность, исходящая от маленького и незаметного насекомого – клеща. Сами по себе эти маленькие паучки для человека не опасны, чего нельзя сказать о клещевом энцефалите или клещевом боррелиозе (болезнь Лайма) – вирусных инфекциях, которую переносят клещи.

Впервые вирус клещевого энцефалита ученые обнаружили в 1937 году в мозге умерших, а также в крови и спинномозговой жидкости больных людей, клещей и диких позвоночных животных Сибири, Урала и Дальнего Востока. Вирусологи хорошо изучили эпидемиологию и клиническую картинку данного вируса. Они установили, что для клещевого энцефалита характерна лихорадка, интоксикация и поражение серого вещества головного мозга (энцефалит) и/или оболочек головного и спинного мозга (менингит и менингоэнцефалит), что в свою очередь может привести к стойким неврологическим и психиатрическим осложнениям и даже к смерти больного.

Естественным резервуаром вируса и его источником являются более 130 видов различных теплокровных диких и домашних животных и птиц: грызуны, зайцы, насекомоядные, хищники и копытные. Клещи заражаются от животных-носителей вируса и при укусе передают вирус человеку.

Обычно болезнь начинается с лихорадки, которая продолжается неделю и сопровождается головной болью, болью в мышцах, тошнотой, рвотой и общим недомоганием. Затем наступает восьмидневная ремиссия, после которой у некоторых больных следует вторая фаза заболевания, сопровождающаяся поражением центральной нервной системы, включая менингит (лихорадка, сильная головная боль, ригидность мышц шеи) и/или энцефалит (различные нарушения сознания, расстройства чувствительности, моторные нарушения вплоть до паралича). Однако бывают и противоположные случаи, когда после укуса инфицированного клеща болезнь у человека не развивается, а напротив он вырабатывает иммунитет к клещевому энцефалиту.

Еще одно опасное заболевание, передающее через укус клеща - клещевой боррелиоз или, иначе говоря, болезнь Лайма. В отличие от клещевого энцефалита все вышеперечисленные симптомы проявляются у человека не сразу, а спустя 3-6 недель после контакта с зараженным насекомым. Кроме того, при болезни Лайма на месте укуса клеща появляется красное пятнышко (эритема), на которое люди часто не обращают внимания.

Как в первом, так и во втором случае на течение заболевания во многом влияет скорость диагностики. Иными словами, чем быстрее подтвержден факт укуса именно зараженным клещом, и чем быстрее начато лечение, тем больше шансов избежать необратимых изменений в организме и спасти жизнь человека.

Однако одной только клинической картины для подтверждения клещевого энцефалита и/или болезни Лайма мало. Присутствие вируса должно также подтвердить серологическое исследование - анализ на определение антител или антигенов в сыворотке крови больных, основанное на реакции иммунитета. Проблема в том, что сразу после укуса клеща анализ сдавать нет смысла, ведь антитела к вирусу клещевого энцефалита в крови появятся только через 2 недели после возможного заражения, к клещевому боррелиозу – через 3-4. Выходом может быть исследование на инфекцию самого клеща, однако не все пострадавшие имеют возможность оперативно привести насекомое в лабораторию.

Однако теперь эти проблему может решить новая совместная разработка томских и новосибирских микробиологов, а также ООО "УМИУМ" – экспресс-тест на клещевой энцефалит и болезнь Лайма. Его можно использовать и для удаления присосавшегося насекомого с поверхности тела, и для его последующего анализа.

"Устройство состоит из вилочки для удаления клеща, цилиндра и поршня пластикового шприца, небольшой шайбы из керамики и специального вещества, пробирки с водой, а также тест-полоски с антителами вируса клещевого энцефалита и болезни Лайма", - сообщил агентству "Интерфакс-Сибирь" заместитель директора ООО "УМИУМ" Александр Мягков.

По его словам, для проведения теста клещ с помощью вилочки помещается в цилиндр, где размалывается между шайбой и поршнем. Далее в цилиндр добавляется несколько капель воды, после чего полученная смесь выдавливается на тест-полоску.

"Полоска похожа на тест на беременность: появление первой полосы означает правильность проведения теста, появление второй - наличие энцефалита, третьей - наличие болезни Лайма", - пояснил собеседник агентства.

При этом он подчеркнул, что проведение экспресс-теста не освобождает пострадавшего от посещения пункта серопрофилактики, где даже перемолотый клещ будет использован для проведения полноценного анализа.

"Экспресс-тест создается для охотников, путешественников и всех, кто бывает в лесу", - отметил Мягков.

Он сообщил, что в настоящее время сибирский экспресс-тест на клещевой энцефалит и болезнь Лайма не имеет аналогов в России.

"Есть подобное устройство в Польше, но там система перемалывая клеща является открытой, с помощью зубочистки, поэтому Роспотребнадзор запретил их продажи в нашей стране. Кроме того, их система стоит 15 евро, а наша - 100 рублей", - уточнил собеседник агентства.

Он отметил, что в текущем сезоне разработчики протестируют 1 тыс. устройств, после чего планируют получить разрешение на их производство и продажу.

"Мы предполагаем что, в продажу экспресс-тест поступит в 2014 году", - добавил он.

Между тем, несмотря на появление таких высокотехнологичных устройств для удаления клещей и диагностики клещевого энцефалита и болезни Лайма, не стоит забывать о профилактике этих опасных заболеваний.

В настоящее время самой надежной превентивной мерой защиты от заражения клещевым энцефалитом является вакцинация. Обязательной вакцинации подлежат люди, работающие в эндемичных очагах (лесники, геологи, охотники). Все остальные могут сделать прививку за свой счет. Также укуса клеща помогут избежать специальные спреи, которые разбрызгиваются на одежду перед походом в лес, а также самоосмотры после выхода из леса.

Если укуса клеща избежать не удалось, то в качестве экстренной профилактики человеку вводят иммуноглобулин или йодантипирин. Причем, чем быстрее пострадавший обратиться за помощью, тем больше будет эффективность лечения.

Информация об исследовании

Клещевой энцефалит – менингоэнцефалит - вирусная инфекция нервной системы поражает не только человека, но и других млекопитающих. Вирус может инфицировать мозг, мозговые оболочки или то и другое вместе (менингоэнцефалит). Клещевой энцефалит - природноочаговое заболевание распространённое в России в основном в Сибири, Урале и на Дальном Востоке. В природе вирус имеет хозяина - клеща.
Этиология: возбудитель вирус клещевого энцефалита - член семейства флавивирусов (род flavivirius).

Выделяют 3 разновидности вируса:
1.Дальневосточный подвид
2.Центральноевропейский подвид
3.Возбудитель двухволнового менингоэнцефалита

Вирионы возбудителя клещевого энцефалита имеют сферическую форму с диаметром 40-50 нм. Внутренним компонентом является нуклеокапсид. Вирус длительное время сохраняется при низких температурах (оптимальный режим - 60 градусов и ниже). Быстро инактивируется при комнатной температуре.
Эпидемиология. Основными переносчикам вируса являются иксодовые клещи (Ixodes persulcatus, Ixodes nicinus). Во всех природных очагах вирус циркулирует между клещами и дикими животными (главным образом грызунами и птицами), которые являются дополнительным резервуаром. В антропурических очагах (местности сильно изменённые деятельностью человека) резервуаром могут служить домащние животные - козы и коровы. Вирус клещевого энцефалита может передоваться клещами трансовариально через яйцеклетки их потомству.

Пути передачи.
- Трансмисивный путь - через укус клеща.
- Алиментарный путь - при употреблении в пищу сырого молока и молочных продуктов инфецированных коз и коров.
Максимальный подъём заболеваемости в мае-июне. Второй менее выраженный подъём заболеваемости регистрируется в августе-сентябре, что сязанно с активностью и численностью клещей.
Клиническая картина.
Инкубационный период: при укусе клеща длится от 1-й до 2-х-3-х недель, при алиментарном способе заражения 4-7 дней. Клещевой энцефалит начинается внезапно с лихорадки, интоксикации. Температура тела повышается до 38-39 градусов. Больных беспокоят сильная головная боль, слабость, тошнота, рвота, нарушение сна. Характерен внешний вид больного — кожа лица, шеи, верхней половины грудной клетки, коньюктивы — гиперемированы, склеры инъецированы. Заболевание может завершиться в 3-5 дней.
Такая форма называется лихорадочной. Является одной из самых частых, но редко диагностируется. Поражение нервной системы при этой форме отсутствует. Менингиальная форма клещевого энцефалита характеризуется общемозговым синдромом, появляются регидность мышц затылка, симптомы Кернига и Брудзинского. Изменения в цереброспинальной жидкости свидетельствует о серозном менингите. Лихорадка длиться 10-14 дней.
Менингоэнцефалитическая форма протекает значительно тяжелее. Больной становиться вялым, заторможенным, сонливым. Усиливаются головные боли, тошнота, рвота, нередко наблюдается бред, галлюцинации, психомоторное возбуждение, нарушение сознания, у некоторых больных могут быть судороги, эпилептиформные припадки. Поражаются нервы иннервирующие лицевую и глазодвигательную мускулатуру и другие черепномозговые нервы.
Полирадикулоневритическая форма протекает с поражением периферических нервов и корешков с болями по ходу нервных стволов, нарушением чувствительности.
Полиэнцефаломиелитическая форма - наблюдаются проявления полимиелитического синдрома в виде симптома ‘’свисающей головы’’, ’’опущенных надплечий’’, ’’свисающих вдоль тела рук’’. Также периодически возникают подёргивания мышц фибриллярного или фасцикулярного характера. Полиэнцефаломиелитические нарушения могут сочетаться с проводниковыми, обычно пирамидными, вялые парезы рук и спастические ног. Комбинации амиотрофии и гиперфлексии в пределах одной паретической конечности.
Одним из методов диагностики клещевого энцефалита является ПЦР.
ПЦР (полимеразная цепная реакция) - это метод, который позволяет найти в исследуемом клиническом материале небольшой участок генетической информации (ДНК) любого организма среди огромного количества других участков и многократно размножить его.

Достоинства метода:
-Более высокая чувствительность по сравнению с другими методами
-Высокая специфичность метода
-Позволяет выявить возбудитель в малом количестве пробы
-Позволяет выявить только живые микроорганизмы
-Является ранним контролем результатов проведенного лечения
-Скорость проведения анализов

Показания к исследованию.
-Выявление возбудителя при латентном и бессимптомном течении воспалительного процесса .
-Является единственным подтверждающим тестом, так как другие методы лабораторной диагностики (микроскопия и бактериологический) обладают более низкой чувствительностью по сравнению с ПЦР .
-Контроль эффективности проведенного лечения.

УДК: 616:578.7
Год издания: 2005

РАЗРАБОТКА ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ КЛАССА М И G К ВИРУСУ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА НЕПРЯМЫМ МЕТОДОМ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ АНТИТЕЛ

Самойлова Т.И., Зинкевич Н.А., Михайлова А.А., Вотяков В.И., Петкевич А.С.
Рубрики: 76.03.41
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Тема НИР: Провести эпидемиологический мониторинг новых и актуальных в РБ арбовирусных инфекций
Сроки выполнения НИР: январь 2003 г. – декабрь 2005 г.
Научный руководитель: академик РАМН и НАН РБ, профессор В.И. Вотяков
Источник финансирования: Министерство здравоохранения

Быстрая диагностика клещевого энцефалита (КЭ) особенно актуальна в связи с тем, что это заболевание, как и другие арбовирусные инфекции проходит под другими диагнозами или не диагностируются.

Нами разработана тест-система для определения антител класса М и G к вирусу клещевого энцефалита непрямым методом флуоресцирующих антител (нМФА) в сыворотках крови больных людей. Основой тест-системы является антиген, содержащийся в фиксированных клетках перевиваемой культуры BGM, зараженной вирусом КЭ, содержащейся в лунках предметных стекол. Основным свойством тест-системы является способность выявлять антитела класса М и G в сыворотках крови больных за счет свойств антигена специфически связываться с гомологичными антителами. Выявление связавшихся с антигенами антител проводится с помощью антивидовой сыворотки, меченой флуоресцеинизотиоционатом (ФИТЦ) (иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих) и содержащей антитела к иммуноглобулинам М и G (Ig M и G) человека. Учет реакции проводят с помощью люминесцентного микроскопа.

Тест-система выпускается в комплекте с реагентами, необходимыми для постановки нМФА и соответствующими положительными и отрицательными контролями. Препарат с антигенсодержащими клетками представляет собой предметное стекло, содержащее 8 лунок с зараженными клетками. В качестве положительного контроля используется иммунная асцитическая жидкость (ИАЖ), содержащая антитела (IgM и IgG) к вирусу КЭ, которая получена путем иммунизации белых мышей вируссодержащей суспензией. Отрицательным контролем служит асцитическая жидкость (АЖ), не содержащая антител к вирусам. Так же в комплект входят иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие против IgM и IgG белых мышей и иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие против IgM и IgG человека, которые представляют собой антитела, меченные ФИТЦ (коммерческие препараты НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, г. Москва).

На первом этапе работы проводили восстановление штамма вируса КЭ. Для этого готовили 10%-ую вируссодержащую суспензию из мозга и заражали ею белых мышей. На высоте проявления клинических признаков заболевания животных усыпляли эфиром, извлекали мозг и готовили вируссодержащую суспензию на среде ДМЕМ, которую использовали для инфицирования клеток BGM. Инкубировали 5-6 суток при температуре +37оС. Микроскопировали ежедневно.

Для получения антигенсодержащих препаратов инфицировали монослой 2-х суточной культуры клеток BGM и инкубировали при температуре +37оС. После максимального накопления в клетках вирусспецифических белков, контролируемых нМФА (72-96 часов) монослой клеток переводили в суспензию и доводили их концентрацию до 2 млн./мл. Полученную суспензию инфицированных клеток наносили в лунки предметных стекол, фиксировали ледяным ацетоном и обеззараживали под ультрафиолетовыми лампами.

ИАЖ, содержащую IgM и IgG к вирусу КЭ, получали путем иммунизации белых мышей вируссодержащей суспензией по разработанной нами схеме иммунизации. При накоплении достаточного количества асцитической жидкости производили ее забор, путем пункции брюшной полости белых мышей. Для получения АЖ, не содержащей антител к вирусам, иммунизацию осуществляли нормальной мозговой суспензией, приготовленной из мозга здоровых белых мышей. Качество и специфичность ИАЖ контролировали в РСК.

Разработанная нами тест-система для экспресс-диагностики КЭ позволяет диагностировать заболевание в короткие сроки и ускорить постановку этиологического диагноза, учитывая многообразие симптомов проявления арбовирусных инфекций.

Область применения: клиническая и лабораторная диагностика
Рекомендации по использованию: препарат предназначен для серологической диагностики КЭ и может применяться в лабораториях ЛПУ РБ
Предложения по сотрудничеству: дальнейшее усовершенствования разработанных диагностических препаратов с привлечением специалистов медико-биологического профиля