Методы очистки и концентрации вирусов

ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ , комплекс методов исследования, позволяющих распознать этиологию вирусного заболевания и изучить его возбудителя.

Осн. этапами В. и. являются выделение вируса от больных и павших животных (взятие, консервирование, пересылка и подготовка материала, заражение им животных, куриных эмбрионов, культуры клеток); титрование вирусов для определения их кол-ва в исследуемых материалах; культивирование вирусов на восприимчивых домашних и лабораторных животных, особенно на развивающихся куриных эмбрионах и культурах тканей (гл. обр. первичнотрипсинизированных).

С помощью морфологич. методов выявляют элементарные тельца, внутриклеточные включения (напр., Бабеша — Негри при бешенстве, Боллингера при оспе птиц). Иммунохимич. методы (гл. обр. метод флуоресцирующих антител) позволяют определить специфич. вирусный антиген в заражённых [зараженных] клетках тканевой культуры или органов и тканей инфицир. животных. С помощью серологич. методов проводят видовую и группоспецифич. идентификацию вируса и антител в сыворотках переболевших животных. С этой целью используют реакции нейтрализации, РСК, реакцию гемагглютинации, задержки гемагглютинации, диффузионной преципитации, торможения гемадсорбции. Реакция нейтрализации позволяет улавливать антигенные различия сходных между собой вирусов даже в пределах одноимённой [одноименной] группы. РСК применяют для обнаружения вирусных антигенов в материалах от больных и павших животных, идентификации выделенного вируса, изучения антигенных связей между различными вирусами и определения антител у переболевших животных. Реакции гемагглютинации и задержки гемагглютинации широко применяют в В. и. для диагностич. целей и типирования возбудителей болезни Ньюкасла, гриппа птиц, парагриппа и нек-рых аденовирусов; непрямую реакцию гемагглютинации используют для выявления адено- и миксовирусов, хламидий. Реакцией прицепитации в агаре изучают антигенную структуру вирусов, выявляют антитела в сыворотке и антигены в исследуемом материале. Реакцию гемадсорбции применяют для предварительной индикации и титрования вирусов в культуре клеток, особенно тех, к-рые не вызывают цитопатич. действия. Гемадсорбция наступает раньше проявления цитопатогенного действия, поэтому её [ее] используют как ранний метод предварительной индикации вирусов. Гемадсорбция островковая (адсорбция эритроцитов на отдельных участках монослоя клеток) типична для гриппа свиней, эпидемич. паротита; диффузная (адсорбция эритроцитов на клетках всего монослоя)— для классич. чумы кур, болезни Ньюкасла, афр. чумы свиней и др. Методы очистки и концентрации вирусов используют при изучении физич., химич. и морфологич. свойств вирусов. Фазовые системы, образованные полимерами, используют для концентрации вирусов из больших объёмов [объемов] вируссодержащих жидкостей, выделения нуклеиновых к-т вирусов. Радиобиологич. методы применяют в В. и. для изучения распределения и локализации вирусов (антител) в организме и особенно для изучения процессов онтогенеза вирусов. С помощью электронной микроскопии обнаруживают вирионы в исследуемом материале и специфич. конгломераты вирусов и антител (иммунная электронная микроскопия). Иммуноэлектроосмофорез обусловлен одновременным встречным движением в геле агара антигена и антитела в результате разной величины электрич. заряда с образованием комплекса антиген — антитело в виде линии преципитации и последующей его денатурацией. Метод применяют при изучении антигенной структуры вируса. Изоэлектрич. фокусирование основано на способности белков переходить в инертное (в отношении электрофоретич. подвижности), а затем агрегированное состояние в изоэлектрич. точке. Метод применяют для изучения белков вирусов. При иммуноферментативном методе происходит присоединение фермента к антителам с последующим образованием комплекса фермент — антитело — антиген, к-рый выявляют в клетке с помощью цитохимич. реакции на фермент (пероксидазу, щелочную и кислую фосфотазу, глюкозооксидазу). Метод используют с диагностич. целью для выявления вирусных антигенов в культурах клеток, мазках-отпечатках, криостатных срезах, а также для изучения тонкой структуры антигенов вируса, патогенеза вирусных болезней и др. См. также Вирусоскопия .

Лит.: Тихоненко Т. И., Методические основы биохимии вирусов, М., 1973, с. 152—58; Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний, пер. с англ., ред. Э. Леннет и Н. Шмидт, М., 1974.

Автор работы: Пользователь скрыл имя, 15 Декабря 2012 в 11:09, курсовая работа

В процессе репродукции вируса в клетках происходит накопление его в тканях и жидкостях организма животных, однако в вируссодержащем материале доля вируса незначительна. Поэтому при проведении вирусологических исследований иногда приходится использовать специальные методы для очистки вируса от баластных веществ (остатков тканей, разрушенных клеток, микробов и т. д.), а иногда и концентрировать вирусы.

Меоды очистки вирусов.doc

Методы очистки и концентрации вирусов.

Очистку и концентрацию вирусов проводят с целью:

а) изучить морфологию вирусов;

б) получить очищенные антигены для серологических реакций;

в) получить высококачественные и эффективн ые вакцины.

Различают следующие методы очистки и концентрации вирусов:

I. Физические методы:

1. Термолизис. Применяется для очистки вирусов от тканевых
элементов и бактерий, широко используется в процессе подготовки
вируссодержащих суспензий из органов для вирусологических
исследований. С помощью этого метода освобождают вирусы из
клеток. Вначале готовят из органов суспензию растиранием в ступке
со стерильным песком, затем переносят в центрифужные пробирки
и несколько раз замораживают при низких температурах (-20, -
50° С) с последующими оттаиваниями при температуре 36-37° С в
термостате или при комнатной температуре. После последнего
оттаивания суспензию центрифугируют при 3-4 тыс. оборотов в
минуту 20-30 минут. Вирус будет находиться в надосадочной
жидкости. В дальнейшем из такой вируссодержащей жидкости
вирус можно концентрировать другими методами (например,
методом дифференциального центрифугирования и
ультрацентрифугированием).

2. Фильтрация вируссодержащего материала через
керамические, асбестовые и мембранные (градоколовые) фильтры.
При этом методе сначала материал фильтруют через различные бактериальные фильтры (Зейтца Шамберлана, Беркефельда) и очищают его от балластных веществ (бактерии, обрывки клеток и других частиц).
Затем фильтруют через мембранные фильтры с малыми размерами
пор. При этом вирусы остаются на фильтре (если размер пор меньше
размера вирусов). Затем фильтр измельчают или растирают с небольшим количеством стерильногофизраствора (или буфера), а затем центрифруют для осаждения частичек фильтра. Вирус будет сконцентрирован в надосадочной жидкости.

3. Дифференциальное центрифугирование. Методы центрифугирования основаны на разделении частиц по их массе. Обычно для центрифугирования используют охлажденный вируссодержащий жидкий материал и центрифуги с охлаждением. При дифференциальном

центрифугировании сначала центрифугируют материал при 3-4 тыс. оборотов в минуту 30 минут, надосадочную жидкость собирают в другую пробирку и вновь центрифугируют при более высоких оборотах (5-6 тыс.), жидкость сливают и для осаждения вируса центрифугируют уже затем при 30-60 тыс. оборотов в минуту. Осадок после этого центрифугирования ресуспендируют в небольшом количестве среды и используют в работе.

4. При центрифугировании в градиенте плотности используют разделение частиц по скорости седиментации в вязкой среде (обычно используют 20-60 % сахарозу и др.) и при этом образуются зоны, состоящие из .частиц одного типа.

5. Методы адсорбции вируса с последующей элюцией. Этот метод
основан на способности вирусов адсорбироваться, на поверхности
некоторых веществ или клеток, а в последующем удаляться
(элюировать) с сорбента при изменении условий (температуры,
рН среды и т. д.). В качестве сорбентов применяют гидроокись алюминия
гипс, некоторые бактерии (например, беспигментные штаммы
чудесной палочки), эритроциты.

В вирусологических лабораториях для очистки и концентрации
некоторых вирусов, таких как вирус гриппа в качестве сорбента используют эритроциты животных и птиц. На поверхности эритроцитов вирусы способны адсорбироваться при низкой температуре (+2, +4° С), а при повышении температуры до 37° С элюируют с поверхности эритроцитов в жидкость.

Обычно на эритроцитах адсорбируется до
95% вируса из среды, а элюирует 90-100%.

II . Химические методы

Методы осаждения вирусов химическими веществами :

I) Осаждение метанолом, который добавляют к охлажденной вирус-

содержащей жидкости при низких температурах до конечной Концентрации 35 %. Смесь оставляют на 4 часа при +4° С,

[Центрифугируют для осаждения, а затем растворяют в буферном растворе.

2) Осаждение вирусов в изоэлектрической точке.
Изоэлектрические точки большинства известных вирусов лежат в
диапозоне рН 3,5-6,5, т. к. вирусные белки в основном кислые. При этом
методе к вируссодержащей жидкости медленно при постоянном
помешивании добавляют 1 н раствор соляной кислоты при
температуре +4°С и доводят рН среды до изоэлектрической точки
данного вируса, смесь выдерживают на холоде несколько часов,
затем центрифугируют для осаждения 20-30 минут при 3-4 тыс.
оборотов, надосадочную жидкость сливают и осадок разводят в
слабощелочном буфере.

3) Осаждение солями и полиэтиленгликолем. Для осаждения вирусов обычно используют сернокислые соли магния, натрия и аммония. Наиболее широко применяется сульфат аммония.

К охлажденной вируссодержащей суспензии добавляют насыщенный раствор сернокислого аммония до определенной концентрации 35 %, а полиэтиленгликоля до концентрации 7,5 %,

перемешивают и оставляют на холоде на 16 часов, центрифугируют и осадок растворяют в фосфатном буфере.

4. Метод Ильенко: с использованием хлороформа или эфира. Метод пригоден для очистки вирусов от липидов и липоидов и применяется чаще для очистки нейротропных вирусов от мозговой ткани.

Из мозговой ткани готовят суспензию и к ней добавляют равный объем хлороформа или эфира, закрывают резиновой пробкой и тщательно встряхивают для хорошего перемешивания, выдерживают 2 часа в холодильнике при +4° С и центрифугируют 20-30 минут при 3-4 тыс. оборотов в минуту.

Если был добавлен эфир, вирус будет внизу, выше мозговая ткань и липиды, вверху эфир.

При добавлении хлороформа он будет находиться внизу, выше мозговая ткань и в верхнем слое вируссодержащая жидкость. Применяют этот метод для очистки только тех вирусов, которые являются нечувствительными к хлороформу и эфиру.

III биологические методы

Для очистки вируссодержашей жидкости от бактерий широко
применяют добавление к суспензии антибиотиков пенициллина и
стрептомицина, от плесеней и дрожжей добавляют нистатин.
Культивирование вирусов в злокачественных опухолях (осцит-
карцинома, саркома Крокера и др.), на куриных эмбрионах и в
культурах тканей позволяет очистить и накопить вирусы.

Патенты в данной категории

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложены способы очистки инактивированного вируса или фрагментированного вируса (варианты). Способы включают добавление препарата вируса к градиенту сахара и последующее центрифугирование для получения пиковой фракции. Затем осуществляют экстракцию пиковой фракции для получения очищенного вируса. При этом градиент сахара получают путем непрерывного ультрацентрифугирования первого и второго буферного раствора сахара. Причем первый буферный раствор сахара включает первый физиологический буфер, а второй буферный раствор сахара включает второй физиологический буфер, который является тем же или отличным от первого физиологического буфера. В одном варианте концентрация сахара в первом буферном растворе эквивалентна концентрации сахарозы от 35 до 50 мас.%, а концентрация сахара во втором буферном растворе эквивалентна концентрации сахарозы от 50 до 65 мас.%. При этом второй буферный раствор сахара имеет более высокую плотность, чем первый. В другом варианте способа плотность первого буферного раствора сахара составляет от 1,15 кг/л до 1,23 кг/л, а плотность второго - от 1,23 кг/л до 1,32 кг/л. Способы приводят к повышенному на 25% выходу вируса и минимизируют агрегацию вируса в сахарозной фракции пика. 2 н. и 24 з.п. ф-лы, 1 ил., 9 табл., 10 пр.

2503719
патент выдан:
опубликован: 10.01.2014 СПОСОБ ПРЕПАРАТИВНОГО ВЫДЕЛЕНИЯ ВИРУСОВ РАСТЕНИЙ

Изобретение относится к области биохимии. Проводят гомогенизацию тканей зараженного растения в нейтральном буферном растворе на основе 2-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]этансульфоновой кислоты (HEPES) в концентрации 0,02-0,03 М с добавлением ингибиторов растительных ферментов иодайетата натрия и фенилметилсульфонилфторида. Добавляют сахарозу. Осветляют полученный экстракт. Обрабатывают осветленный экстракт 4-6% Тритоном Х-100 для отделения вирусных частиц от клеточных компонентов. Выделяют вирусные частицы из осветленного экстракта посредством дифференциального центрифугирования или ультрацентрифугирования. Способ позволяет увеличить выход вирусных частиц, очищенных от растительных примесей, из 100 г навески свежих листьев в 2-3 раза. 4 ил., 4 пр.

2503718
патент выдан:
опубликован: 10.01.2014 СПОСОБ ОЧИСТКИ ВИРУСА ГРИППА

Изобретение относится к биотехнологии и описывает способ получения очищенного концентрата вируса гриппа, способ включает микрофильтрацию вирусосодержащей аллантоисной жидкости на фильтрующих элементах 0,1-0,2 мкм с дальнейшей диафильтрацией фосфатным буферным раствором, содержащим 0,25-0,5 М натрия хлорида, ЭДТА или цитрат натрия, концентрирование вируса гриппа на мембранах с порогом отсечения 300-500 кДа с последующей диафильтрацией фосфатным буферным раствором, содержащим 0,25-0,5 М натрия хлорида, ЭДТА или цитрат натрия, 0,02-0,002% анионного детергента и ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы, приготовленной на фосфатном буферном растворе, содержащем 0,25-0,5 М натрия хлорида, ЭДТА или цитрат натрия и 0,02-0,002% анионного детергента. Технический результат изобретения заключается в получении высокоочищенного концентрата вируса гриппа с выходом более 80%, оптимизации технологического процесса. 3 пр., 2 табл.

2493872
патент выдан:
опубликован: 27.09.2013 НОВЫЙ СПОСОБ ОТДЕЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУСНОЙ НАГРУЗКИ В ОБРАЗЦЕ ПАНКРЕАТИНА

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ выделения вирусной нагрузки из образца панкреатина предусматривает: приготовление опытного образца панкреатина, низкоскоростное центрифугирование, отделение твердого отложения, первое ультрацентрифугирование, отделение первой целевой фракции, второе ультрацентрифугирование и выделение вирусной нагрузки. Низкоскоростное центрифугирование проводят при относительной центробежной силе 8000-15000×g. Первое ультрацентрифугирование проводят при относительной центробежной силе 50000-150000×g, а второе ультрацентрифугирование при 150000-300000×g. Изобретение может быть использовано при изготовлении препаратов панкреатина. 13 з.п. ф-лы, 1 табл., 2 пр.

2491341
патент выдан:
опубликован: 27.08.2013 СПОСОБ ОЧИСТКИ, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ОЧИЩЕННОГО ВИРУСА ВЕЗИКУЛЯРНОГО СТОМАТИТА ИЗ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу очистки вируса везикулярного стоматита (ВВС) из жидкости клеточной культуры. Способ включает осветление жидкости клеточной культуры низкоскоростным центрифугированием при скорости ниже 10000 об/мин или при помощи модуля объемного фильтрования, размер пор которого составляет от 1,0 мкм до 4,5 мкм, с получением ВВС в надосадочной жидкости. Фильтруют надосадочную жидкость через фильтр с отверстиями размером от 0,2 до 0,45 мкм, и получают ВВС в отфильтрованном растворе. Загружают содержащий ВВС отфильтрованный раствор на анионообменный мембранный адсорбер, уравновешенный первым буферным солевым раствором. Первый буферный солевой раствор обладает ионной силой от 100 мМ до 400 мМ. Элюируют ВВС из анионообменного мембранного адсорбера вторым буферным солевым раствором. ВВС элюируется с мембранного адсорбера при добавлении второго буферного солевого раствора в одну стадию. Концентрация соли в одностадийной элюции составляет от 500 мМ до 750 мМ. Собирают элюированные фракции, содержащие ВВС. Очищают ВВС проточной фильтрацией вдоль направления потока (ПФ) с использованием мембраны, предел пропускания по которой от 300 кДа до 1000 кДа и получают ВВС в концентрате. Фильтруют содержащий ВВС концентрат через фильтр с отверстиями размером от 0,2 до 0,22 мкм и получают ВВС в отфильтрованном растворе. Способ очистки не включает использование человеческих эмбрионов. Предложенное изобретение позволяет получить ВВС высокой степени очистки с высоким выходом. 12 з.п. ф-лы, 8 ил., 33 табл., 12 пр.

2484135
патент выдан:
опубликован: 10.06.2013 СПОСОБ ОЧИСТКИ РЕКОМБИНАНТНЫХ АДЕНОВИРУСОВ МЛЕКОПИТАЮЩИХ И ЧЕЛОВЕКА

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу очистки рекомбинантных аденовирусов млекопитающих и человека. Способ включает накопление аденовируса в пермиссивной культуре клеток линии НЕК-293, сбор этих клеток, высвобождениие рекомбинантных аденовирусов за счет разрушения клеток путем перемораживания и их очистку. Используют рекомбинантный капсид-модифицированный аденовирус с модифицированным капсидным белком рlХ, несущим полисахарид-связывающий домен, который выбирают из группы, включающей целлюлозо-связывающий домен, декстран-связывающий домен. Производят посадку рекомбинантных капсид-модифицированных аденовирусов на полисахаридный носитель, который выбирают из группы, включающей целлюлозный носитель для связывания с целлюлозо-связывающим доменом, декстрановый носитель - для связывания с декстран-связывающим доменом. Инкубируют полученную смесь. Осуществляют процесс очистки, для чего полисахаридный носитель с аденовирусами осаждают центрифугированием, а полученный супернатант удаляют. Промывают осажденный полисахаридный носитель с аденовирусами промывочными буферами, после этого производят элюирование аденовирусов с полисахаридного носителя. Производят разделение полученной суспензии центрифугированием. Отбирают вируссодержащий супернатант и стабилизируют его. Предложенное изобретение позволяет получить биологически активный, хроматографически чистый и концентрированный аденовирусный препарат и сократить время его очистки. 14 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 табл., 4 пр.

2465327
патент выдан:
опубликован: 27.10.2012 СПОСОБ СТАБИЛИЗАЦИИ ВИРУСА НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ ДЛЯ ХРАНЕНИЯ В ВОДНОМ РАСТВОРЕ И СПОСОБ СОХРАНЕНИЯ ЕГО СТАБИЛЬНОСТИ

Изобретение относится к области биотехнологии. В частности, описан способ стабилизации вируса ньюкаслской болезни для хранения в водном растворе в течение 6 месяцев или более при температуре от -30°С до -10°С. Способ предусматривает приготовление водного раствора, содержащего вирус ньюкаслской болезни и сахарозу или трегалозу. При этом раствор содержит десять частей на миллион или меньше каждого из восстановителей, антиоксидантов, хлорида натрия, декстрана, маннита, сорбита, твина, глутамата, полиэтиленгликоля, хлорида кальция, фосфатидилхолина, глицина и фосфата, имеет рН 7-9 и осмотическое давление 250-300 миллиосмоль. Способ позволяет сохранять вирус при температуре от -30°С до -10°С в течение 6 месяцев и более. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 11 табл., 12 пр.

2458125
патент выдан:
опубликован: 10.08.2012 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИВОЙ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ВИРУСА ГРИППА

Изобретение относится к области медицины и касается способа получения живой культуральной гриппозной вакцины. Сущность изобретения включает способ получения вируссодержащей субстанции путем культивирования одного из холодоадаптированных реассортантов вируса гриппа с посевной дозой, имеющей множественность заражения не менее 0,0001 ЭИД 50 /кл в культуре клеток MDCK на микроносителях, имеющих концентрацию не менее 1 г/л, с использованием в качестве материала микроносителей пористого полипропилена, в поддерживающей бессывороточной питательной среде, содержащей протеолитический фермент в количестве 0,25-50,0 мкг/мл и стабилизирующую добавку, включающую сорбит, или сахарозу, или пептон из сои в концентрации 0,5-4,0 мас.%, сбор вируссодержащей жидкости после культивирования осуществляют не менее 2-х раз при достижении специфической активности вируса гриппа перед каждым сбором вируссодержащей жидкости не менее 7,0 lg ЭИД 50 /мл, концентрирование и очистку вирусной субстанции от балластных примесей, введение в очищенную субстанцию перед сушкой стабилизирующих добавок с использованием в качестве них или пролина, глицина, лактозы, глютаминовокислого натрия, сахарозы, желатина в конечной концентрации (1,5-5), (1,5-5), (1,5-10), (1,5-5), (5-30) и (1-10) мас.% соответственно, или сахарозы, желатозы и пептона из сои в конечной концентрации (1-8), (1-8) и (1-8) мас.% соответственно, или сорбита и желатозы в конечной концентрации (3-8) и (3-8) мас.% соответственно. Преимущество изобретения заключается в получении более термостабильной вакцины с более высоким выходом. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

2420314
патент выдан:
опубликован: 10.06.2011 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВИРИОННОГО АНТИГЕНА ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу получения вирионного антигена вируса клещевого энцефалита (КЭ) из антигенсодержащего материала, включающего, главным образом, антигенные частицы вируса КЭ мельче полноразмерных вирионов КЭ. Данный способ предусматривает центрифугирование антигенсодержащего материала, включающего, главным образом, антигенные частицы вируса КЭ мельче полноразмерных вирионов КЭ, с угловым ускорением не менее 15000 g. Предложенное изобретение позволяет получать вирионный антиген вируса КЭ из антигенсодержащего материала, включающего, главным образом, антигенные частицы вируса КЭ мельче полноразмерных вирионов КЭ. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.

2402606
патент выдан:
опубликован: 27.10.2010 НЕ СОДЕРЖАЩАЯ ЖИВОТНЫХ БЕЛКОВ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению питательных сред для культивирования клеток, и может быть использовано для значительного снижения вариаций продукции рекомбинантных белков, которые имеют место при культивировании клеток с использованием разных партий коммерчески доступного соевого гидролизата. Получают не содержащую животных белков среду для культивирования клеток путем дополнения сред, не содержащих животные белки, гидролизатом сои и дополнительно - биогенным амином в диапазоне 1-18 мг/л. Полученную среду используют для получения рекомбинантных белков, посредством процессов культивирования соответствующих клеток. Изобретение позволяет понизить контагиозность продукта, а также увеличить эффективность роста и продуктивность клеток. 3 н. и 9 з.п. ф-лы, 9 ил.

2383616
патент выдан:
опубликован: 10.03.2010 СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ ВИРУСА

2381272
патент выдан:
опубликован: 10.02.2010 УСТРОЙСТВО ДЛЯ ОЧИСТКИ ВИРИОННЫХ СТРУКТУР ФЛАВИВИРУСОВ

Изобретение относится к устройству для очистки вирусов и может быть использовано в микробиологической промышленности. Устройство включает последовательно размещенные катодный электродный сосуд, разделенные барьером катодную камеру накопления и анодную камеру накопления, анодный электродный сосуд. При этом катодный и анодный электродные сосуды отделены диализными пленками от катодной и анодной камер накопления соответственно. Между диализной пленкой, отделяющей анодную камеру накопления от анодного электродного сосуда, и анодным электродным сосудом введены последовательно расположенные буферная камера и блок геля агарозы с высокой степенью электроэндоосмоса. Изобретение позволяет снизить длительность электрофореза, получить высокоочищенные препараты вирионов флавивирусов. 4 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 ил.

2368660
патент выдан:
опубликован: 27.09.2009 СПОСОБ КОНЦЕНТРАЦИИ ВИРУСОВ ИЗ ЖИДКИХ СРЕД

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа концентрации вирусов из жидких сред. Способ включает адсорбцию вируса на гидрогеле метакриловой кислоты в концентрации не менее 2,0 мг/мл, сорбции при рН 5,0 от 20 минут до 24 часов при температуре от 4°С до 22°С и далее комплекс вирус-сорбент центрифугируют и вирус элюируют. Преимущество изобретения заключается в сокращении числа стадий и уменьшении времени концентрирования. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.

2349643
патент выдан:
опубликован: 20.03.2009 СПОСОБ КРУПНОМАСШТАБНОГО ПРОИЗВОДСТВА ВИРУСНОГО АНТИГЕНА

Изобретение относится к области вирусологии. Способ включает получение культуры адгезивных клеток и их выращивание. Далее проводят инфицирование клеток вирусом и инкубацию клеток. При этом плотность клеток биомассы культуры клеток, выращенных до слияния, увеличивают по крайней мере в 1,3 раза до или после инфицирования клеток вирусом. Способ позволяет обеспечивать повышение продуцирования вируса в малом объеме клеточной культуры. Изобретение может быть использовано в медицине и ветеринарии. 12 з.п. ф-лы, 4 табл.

2314344
патент выдан:
опубликован: 10.01.2008 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНОВ АДЕНОВИРУСОВ ПТИЦ

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и касается способа получения антигенов аденовирусов птиц. Способ предусматривает выращивание аденовирусов и очистку антигенов сорбционной хроматографией. Выращивание аленовирусов птиц проводят на эмбрионах птиц. Сорбционную хроматографию проводят в одну стадию, для чего супернатант после центрифугирования подкисляют до рН 4,5-5,0 и наносят на сорбент, который предварительно уравновешен буферным раствором до рН 4,5-5,0. Далее через колонку пропускают уравновешивающий буфер и проводят элюцию антигена с сорбента буферным раствором рН 9,0. Способ позволяет получать антиген аденовирусов птиц с выходом 94-97% и чистотой 94-96%. Предложенный способ может быть использован для получения препаратов антигенов аденовирусов птиц для диагностики и профилактики. 1 з. п. ф-лы. 2217496
патент выдан:
опубликован: 27.11.2003 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЦЕНТРАТА МИКРОБНЫХ КЛЕТОК В ПРОИЗВОДСТВЕ ЧУМНЫХ ВАКЦИН

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам получения вирусоподобных частиц (VLP) папилломавируса человека, используемых для создания вакцин. Способ включает трансформацию дрожжевой клетки молекулой ДНК, кодирующей L1 HPV или L1+L2 HPV, культивирование трансформированной клетки, сбор VLP из трансформированной клетки и очистку VLP с помощью стадии хроматографии. 2 з.п.ф-лы, 14 ил. 2206608
патент выдан:
опубликован: 20.06.2003 ВАКЦИННАЯ КОМПОЗИЦИЯ ПРОТИВ РЕПРОДУКТИВНОГО И РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ (PRRS) И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ, СПОСОБ ИММУНИЗАЦИИ СВИНЕЙ

Представлена авирулентная вакцина против репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS), которая эффективно иммунизирует свиней от этого заболевания, вместе со способом размножения вирусного возбудителя in vitro и способом аттенуирования вируса для вакцинного препарата. Использование вакцины позволяет избежать больших потерь в племенных стадах свиней и влиять на их репродуктивность. 3 с. и 11 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл. 2166327
патент выдан:
опубликован: 10.05.2001 СПОСОБ КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ ВИРУСА

Изобретение относится к прикладной вирусологии, конкретно к процессам выделения, очистки, модификации вирусов и вирусных препаратов, т.е. к процессам, связанным с концентрированием вирусов. При концентрировании вируса путем его связывания биоаффинным сорбентом, содержащим антитела к вирусу, иммобилизованные на полимерной основе, промывки и последующей десорбции, в качестве полимерной основы биоаффинного сорбента используют криогель поливинилового спирта с размером пор 0,04 - 2,0 мкм. Кроме того, биоаффинный сорбент может, согласно данному изобретению, содержать наряду с антителами иммобилизованные ферменты, модифицирующие вирус. Предлагаемый способ обладает преимуществами по сравнению с аналогами и прототипом; а) повышена эффективность способа; б) повышена универсальность. Изобретение может быть использовано как в научных исследованиях, так и при производстве вакцин и диагностикумов, а также в медицинской практике. 1 з.п. ф-лы. 2130069
патент выдан:
опубликован: 10.05.1999 СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ КЛЕЩЕВОГО ИЛИ ЯПОНСКОГО ЭНЦЕФАЛИТА ИЗ ВИРУСНОЙ СУСПЕНЗИИ

Изобретение относится к микробиологии, в частности к производству вакцинных препаратов. Способ приготовления вакцины против клещевого или японского энцефалита из вирусной суспензии включает несколько стадий. Инактивацию вирусной суспензии осуществляют раствором формальдегида. Затем очищают ее от клеточной ДНК сульфатом бария или каолином и инактивируют свободный формальдегид. Полученную вирусную суспензию повторно очищают от клеточной ДНК и других примесей протамин сульфатом с последующим ее центрифугированием и/или хроматографированием. Ресуспендированный осадок после центрифугирования или соответствующую хроматографическую фракцию стандартизируют по содержанию вирусного антигена и ДНК и используют для приготовления вакцины. Технический результат заключается в снижении риска заражения персонала и снижении содержания клеточной ДНК в вакцине. 1 з.п.ф-лы. 2120804
патент выдан:
опубликован: 27.10.1998 СПОСОБ СТЕРИЛИЗУЮЩЕЙ ОЧИСТКИ ВИРУССОДЕРЖАЩЕЙ СУСПЕНЗИИ

1. Способ стирилизующей очистки вируссодержащей суспензии, преимущественно вируса ящура, включающий эмульгирование в вируссодержащей суспензии хлороформа и отделение балластных примесей, отличающийся тем, что предварительно в вируссодержащую суспензию добавляют при перемешивании полигуанидин.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют полигуанидин мол.м. 20000 - 100000 Д.

Читайте также: