Клинико лабораторная диагностика вирусных гепатитов

Особенности диагностики гепатита

Чем бы ни был вызван гепатит, разрушения, произведенные им, практически всегда одинаковы — клетки печени перестают выполнять свои функции и гибнут.

Самая распространенная группа гепатитов. Разрушения в клетках печени происходят из-за проникновения в организм специфических вирусов. Различают несколько форм вирусного гепатита — A, B, C, D, E и G.

А, В, D и Е проявляются относительно одинаково — диарея, тошнота и рвота, нарастающая слабость, боль в области желудка и правого подреберья, пожелтение кожных покровов и белков глаз, увеличение печени в размерах. Гепатиты С и G более коварны и нередко долгие годы единственным симптомом является непреходящая усталость.

Лабораторные методы диагностики являются основными при выявлении заболевания. Обязателен ПЦР-анализ на выявление фрагментов РНК вируса и иммунологическое исследование, определяющее наличие антител к вирусу. Также необходимо сделать биохимический анализ крови, определить уровень билирубина и ферментов (например, АлТ, АсТ).

Не только вирусы, но и токсины растительного и искусственного происхождения могут вызвать гепатит. Различные отравляющие вещества, яды, которые содержатся в растениях и грибах, способствуют гибели клеток печени. Диагностика гепатита этого типа проводится путем выявления уровня билирубина, альбумина и протромбина, а также ферментов.

Одним из проявлений лучевой болезни, которая возникает из-за радиационного воздействия, является лучевой гепатит. В клинической практике данное заболевание встречается редко. Чтобы возник риск развития этой болезни, человек должен достаточно долго (в течение 3-4 месяцев) получать дозы радиации, превышающие 400 рад. Главный лабораторный метод диагностики лучевого гепатита — биохимический анализ крови и анализ на билирубин.

Это редкая форма гепатита, и наука до сих пор не может объяснить, почему такое заболевание возникает. При аутоиммунном гепатите защитная система дает сбой и начинает атаковать клетки печени так, словно это чужеродные организмы. Данная форма гепатита часто сопровождает другие аутоиммунные заболевания, но может развиваться и самостоятельно. Для лабораторной диагностики аутоиммунного гепатита исследуется уровень гамма-глобулинов и IgG (болезнь можно заподозрить, если их показатели выше нормальных вдвое и больше), АсТ, АлТ.

Поскольку вирусные гепатиты распространены шире всего, остановимся на лабораторных методах их диагностики подробнее. Следует сказать, что именно анализ крови может дать больше всего информации об этом заболевании. Инструментальные методы (КТ, МРТ, УЗИ) для диагностики гепатита малоэффективны, они могут дать информацию о состоянии и структуре печени, но не о том, какой именно вирус поразил организм и как давно это произошло.

Общий и биохимический анализ крови . Для этого типа гепатита характерны низкий уровень лейкоцитов и высокая скорость оседания эритроцитов (СОЭ), пониженный альбумин и билирубин.
Выявление антител к вирусу . Антитела к вирусу гепатита А Анти-НАV IgM можно обнаружить в самом начале заболевания, при появлении первых симптомов, сразу после окончания инкубационного периода. Самый надежный метод диагностики — ПЦР-анализ, позволяющий побнаружить в сыворотке крови антитела даже тогда, когда их концентрация ничтожно мала. Более того, метод ПЦР дает информацию о том, когда именно произошло заражение.
Анализ на определение РНК вируса . ПЦР-анализ дает возможность обнаружить и фрагменты РНК вируса гепатита А.

Общий и биохимический анализ крови . Как и при гепатите А, этот анализ позволяет оценить изменения в работе и состоянии печени.
Анализ на антигены. HBsAg — самый ранний маркер этого вируса, его можно обнаружить уже в инкубационном периоде. Количественное определение этого антигена используют не только для подтверждения диагноза, но и для определения стадии — острой или хронической.
Анализ на антитела к антигенам вирус а. Наличие антител к HB-core Ag может говорить о том, что человек когда-то переболел гепатитом В, поскольку эти антитела сохраняются в крови еще очень долго после выздоровления, иногда — всю жизнь.

Общий и биохимический анализ крови.
Анализ на антитела . При проведении выявляется наличие антител IgM.
Анализ на определение РНК вируса . Проводится методом ПЦР, позволяет выявить болезнь на ранней стадии и избежать ее перехода в хроническую форму.
Определение интерлейкина 28 бета . Анализ, проводится методом ПЦР, позволяет спрогнозировать возможную эффективность лечения.

Общий и биохимический анализ крови.
Определение антител к антигенам. В момент, когда заболевание находится в острой стадии, анализ показывает высокое содержание антител IgM. После этого в течение какого-то времени могут быть обнаружены другие антитела — IgG.
Определение РНК вируса. При помощи ПЦР-метода РНК вируса можно обнаружить даже при его малой концентрации. Анализ дает информацию не только о типе вируса, но и о стадии болезни.

Общий и биохимический анализ крови.
Анализ на определение антител. Это основной лабораторный метод диагностики гепатита Е. Он показывает наличие антител IgM и IgG.

Лабораторные исследования — крайне важная часть диагностики гепатита, и если у вас есть подозрение на это заболевание, необходимо срочно сдать анализы. От их результатов зависит схема и эффективность лечения гепатита.

Очень часто диагностика гепатита включает в себя не только лабораторные, но и инструментальные исследования — как правило, УЗИ печени. Однако этот метод считается лишь вспомогательным.

Лабораторная диагностика гепатитов

Гепатит - это воспалительный процесс, который затрагивает ткани печени. Наиболее распространенная причина гепатита - вирусная инфекция. Различные вирусы гепатита имеют общую черту - гепатотоксичность. Вирусы поражают гепатоциты и нарушают их функцию. Некоторые формы гепатитов не сильно опасны для организмов, а некоторые виды могут привести к циррозу и злокачественному росту. Это еще раз подтверждает важность их своевременной и качественной диагностики.

К сожалению, не всегда заболевание сразу проявляется клиническими симптомами. Иногда, болезнь длительное время протекает без проявлений. Лабораторные методы необходимо проводить, если пациент находится в группе риска или есть хоть малейшее подозрение наличия гепатита. Чем раньше поставлен диагноз, тем эффективнее лечение.

Данный вид гепатита протекает остро и коротко, сопровождается интоксикацией и имеет доброкачественный характер. Чаще встречается в детском возрасте, может формировать эпидемиологический очаг. Заразиться можно от больного человека или носителя вируса. Путь передачи возбудителя - контактно-бытовой. Вирус разносится с помощью грязных рук, с продуктами или через воду. Иммунитет после гепатита А пожизненный и стойкий.

Типичное течение гепатита А протекает в виде 5 циклов. Вначале наблюдается инкубационный период, дальше протекает начальный, желтушный, постжелтушный период и реконвалесценция. Начало патологии можно заметить по острому подъему температуры, с которым сочетаются слабость и общее недомогание, головная боль, тошнота, сниженный аппетит, ощущение тяжести в области печени. Через несколько дней симптомы проходят т сохраняется лишь незначительная слабость. Во время желтушного периода состояние пациента является стабильным. Наблюдается увеличение печени, иногда - селезенки. Постепенно, желтуха проходит и вместе с этим исчезает симптоматика. В период реконвалесценции происходит восстановление всех показателей и нормализация размеров печени. Болезнь может иметь типичное и атипичное течение, проходит в легкой, средней или тяжелой форме.

Диагностика гепатита А основана на оценке клинической картины, данных эпидемиологического анализа, лабораторных исследований. Диагностика гепатита бывает специфической и неспецифической. Выявление антител - специфическая диагностика, которая позволяет точно определить наличие болезни. Для этого определяется РНК вируса в ПЦР и специфические анти-ВГА IgM в ИФА. Антитела класса IgG оцениваются в динамике и диагноз ставится в зависимости от роста этого показателя. Неспецифические методы определяют тяжесть болезни, дают возможность прогнозировать ситуацию и корректировать лечение. К ним относятся ферменты печени, показатели свертываемости крови и её белкового состава.

Патология может быть хронической или острой. Передается парентеральным путем. Существуют различные формы болезни, от легкого носительства до хронической формы. Может возникнуть цирроз, рак печени. Пути передачи - через кровь пациента, при манипуляциях, использовании грязных инструментов, различных инвазивных манипуляциях и исследованиях. Вирус передается при половом контакте, а также от матери к ребенку.

Клинически гепатит В протекает в 4 периода: инкубационный, период до желтухи, разгар и этап реконвалесценции. Симптомы неспецифические и включают в себя слабость, тошноту, сонливость. Иногда, болезнь начинается с потемнения мочи и обесцвечивания каловых масс. Пациенты жалуются на боль в области печени, зуд кожи, метеоризм. С появлением желтухи состояние становится более тяжелым, нарастает интоксикация, наблюдается сыпь. Болезнь может быть легкой или тяжелой, различают острое, затяжное и хроническое течение.

Диагностика гепатита В базируется на клинической картине, эпидемиологических данных. Необходимо установит контакт с носителем. Неспецифический биохимический показатель - снижение тимоловой пробы. Специфические анализы - определение антигенов HBsAg, HBeAg. Также, о наличии гепатита говорят антитела антиНВс, IgM и IgG, анти-НВе. Необходимо проводить дифференциальную диагностику, чтобы отличить гепатит В от других вирусных поражений печени.

Один из особо злокачественных вирусных гепатитов. Это проявляется в его клинической картине, которая проявляется в полной мере на поздних стадиях, а также в наличии тяжелых осложнений. Путь передачи вируса - переливание крови, использование зараженных инструментов, выполнение стоматологических, косметических и других инвазивных процедур.

Инкубационный период при гепатите С может быть от нескольких дней до 5-6 месяцев. Пациент ощущает усталость и раздражительность, снижается работоспособность и аппетит. Иногда наблюдается изменение цвета мочи и кала: моча становится темной, а каловые массы - обесцвеченными. Гепатит с редко сопровождается пожелтением кожных покровов. Есть типичная и атипичная форма процесса, а также острое и хроническое течение.

Для диагностики гепатита С применяется метод ИФА. Он показывает наличие специфических антител к различным элементам вируса. С помощью полимеразно-цепной реакции можно обнаружить РНК вируса.

Данная группа гепатитов встречается у пациентов после переливания крови, у наркоманов, которые используют инъекционный путь введения веществ, у пациентов, которые проходят гемодиализ.

Спектр клинических симптомов широк - от острого течения до бессимптомного носительства. Может наблюдаться повышение температуры тела, нарушение пищеварения, плохое самочувствие, усталость. В некоторых случаях наблюдается увеличение размеров печени и селезенки. Различают острое. затяжное и хроническое течение. В сыворотке крови повышается уровень и активность трансаминаз (АлАТ и АсАТ). Билирубин при данном виде гепатита остается в норме. Специфическая диагностика подразумевает обнаружение РНК вируса, для чего проводится ПЦР. Иммуноферментный анализ позволяет определить антитела к поверхностному протеину Е2 НGV.

Источник данного вида гепатита - больной пациент, который имеет типичную или атипичную форму патологии. Путь передачи вируса - фекально-оральный, через зараженную воду, продукты, контакт. Вспышки заболевания наблюдаются осенью и зимой. Как правило, болеют люди молодого возраста, от 15 до 30 лет.

От недели до 1,5 - 2 месяца наблюдается инкубационный период. В это время симптомов не наблюдается. Клиническая картина начинается с обычной усталости и вялости. Постепенно пропадает аппетит, появляется тошнота, болезненные ощущения в животе. Потом появляется и нарастает желтуха. Когда она проходит, состояние пациента не становится легче. Удерживается слабость и нежелание принимать пищу, по прежнему беспокоит тяжесть в области печени. Может зудеть кожа и изредка появляется субфебрильная температура. Течение патологии, чаще всего, острое. Хронический гепатит не формируется при этой форме.

Диагностика на стадии клинических проявлений заключается в изучении биохимического анализа. В 5-10 раз увеличиваются показатели трансаминаз. Тимоловая проба не повышается или растет незначительно. Точно установить диагноз гепатита Е возможно после обнаружения в крови антител к вирусу. Обращают внимание на класс IgM, для чего проводят иммуноферментный анализ. Также проводят полимеразно-цепную реакцию, чтобы обнаружить РНК вируса.

Диагностика гепатита, независимо от его вида происходит комплексно: оценивается клиническая картина, данные инструментальных методов. Лабораторные методы играют ключевую роль и постановка диагноза возможна только после их результатов, но другие методики позволяют установить степень тяжести и характер течения.

В динамике, анализ пересдается. Это необходимо, чтобы оценить качество лечения, назначить другую схему препарата или продолжать выбранную тактику.

Как подготовиться к сдаче анализов?

Лабораторная диагностика гепатитов рекомендована пациентам:

у которых наблюдаются симптомы данной патологии, которые не соответствуют другим болезням.
обязательно стоит провериться, если был контакт с носителем вируса;
беспричинный застой желчи;
повышение уровня трансаминаз или билирубина;
опыт употребления инъекционных наркотиков - тоже причина пройти диагностику;
анализ входит в программу перед беременностью, вакцинацией от гепатита, а также перед операцией;
отдельная группа пациентов - те, кому переливали кровь, сотрудники детских учреждений и заведения общественного питания. Для них этот анализ является обязательным.

Особенной подготовки анализу не требуется. Для диагностики нужна венозная кровь, которую собирают натощак. Желательно исключить из рациона жирную пищу, спиртное и продукты оранжевого цвета, так как они влияют на показатели работы печени. Перед сдачей анализов посоветуйтесь с лечащим врачом на предмет употребления лекарственных средств.

Забор биологического материала для анализа происходит в лабораторных условиях, в медицинском учреждении. Желательно, чтобы в клинике использовались качественные реактивы и современное оборудование, так как это делает результат более точным. На руке затягивается жгут, чтобы ограничить приток крови. Место укола обрабатывается, далее происходит пункция вены и забор крови. Место укола обрабатывают дезинфицирующим средством. Результаты анализа готовы на следующие сутки. Данный метод диагностики применяют в динамике, для оценки качества лечения и назначения новых тактик.

Расшифровка результатов зависит от вида анализа. Он может быть качественным (подтверждает или исключает наличие вируса), а может быть количественным ( говорит о форме болезни, характере течения, эффективности терапии). Результаты исследования оценивает инфекционист.

Отрицательный результат анализа говорит об отсутствии вируса в крови. Еще во время инкубационного периода антиген проявляется в сыворотке, поэтому результаты обладают высокой точностью. Может наблюдаться низкий уровень антител, ниже порогового значения, что также говорит о том, что анализ отрицательный.

Положительный результат требует повторного исследования. Высокий уровень антител может наблюдаться после недавней острой формы со стертыми симптомами. Также, антитела говорят об острой или хронической форме болезни, носительстве. На основе специфического и неспецифических методов диагностики назначается лечение и проводится его контроль.

Лаборатория АО "СЗЦДМ" предлагает услуги, обеспечивающие комплексное и преемственное лабораторное обследование пациента

Диагностика В медицинских центрах АО "СЗЦДМ" проводят качественные диагностические исследования всего организма

Лечение Наши медицинские центры ориентированы на обслуживание пациентов в амбулаторном режиме и объединены единым подходом к обследованию и лечению пациентов.

Реабилитация Реабилитация - это действия, направленные на всестороннюю помощь больному человеку или инвалиду для достижения им максимально возможной полноценности, в том числе и социальной или экономической.

Выезд на дом Внимание! Действует акция "Выезд на дом - 0 рублей"

Профосмотры АО "СЗЦДМ" проводит профилактические осмотры работников, которые включают в себя - комплексы лечебных и профилактических мероприятий, проводимых для выявления отклонений в состоянии здоровья, профилактики развития и распространения заболеваний.

Автореферат диссертации по медицине на тему Алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита C у доноров крови

На правах рукописи

ШУБИНА ЮЛИЯ ФЕДОРОВНА

АЛГОРИТМ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА

С У ДОНОРОВ КРОВИ

14.00.46 - клиническая лабораторная диагностика

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении выс: профессионального образования «Российский государственный медицин университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развит

доктор медицинских наук, профессор

Научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В. Склифосов« Департамента здравоохранения г. Москвы.

диссертационного совета Д 208.072.08 при ГОУ ВПО РГМУ Росздрава по ад 117997, Москва, ул. Островитянова, д.1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО России! государственного медицинского университета по адресу: 117997, Москва, Островитянова, д.1.

Тогузов Руслан Тимофеевич

Семененко Татьяна Анатольевна

Кафарская Людмила Ивановна

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

Вирусный гепатит С - кровяная вирусная инфекционная болезнь с контактным механизмом передачи. Она характеризуется преимущественным поражением печени и является социальнозначимой инфекционной патологией. На долю вирусного гепатита С в структуре вирусных гепатитов в нашей стране приходится от 5 до 15 % случаев [Онищенко Г .И., 2008].

Возбудитель заболевания - РНК-содержащий вирус. Источником инфекции являются люди, больные острым и хроническим гепатитом С, и вирусоносители. Вирус гепатита С (HCV) передается парентеральным путем. Один из способов передачи - трансмиссивное заражение при проведении гемотрансфузий.

Частота носительства возбудителя гепатита С у доноров крови достигает 7% [Дашкова Н.Г., Расницын С.П., и др., 2005]. Это обуславливает необходимость лабораторного тестирования крови доноров для выявления возможных вирусоносителей гепатита С и выбраковки гемопродукции, заготовленной от этих доноров.

Существовавший до последнего времени алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С в крови доноров включал определение антител к вирусу гепатита С путем иммуноферментного анализа и проведение подтверждающего теста - иммунологического блотинга, метода выявления антител к отдельным антигенам возбудителя. Проведенные в последнее время исследования [Дашкова Н.Г., 2006; Карслян JI.C., 2007] указывают на недостаточность использования данных методов. Они не обеспечивают максимальную безопасность реципиентов от заражения вирусным гепатитом С и не позволяют с высокой степенью надежности оценить возможность сохранения заготовленной гемопродукции от лиц, сомнительные результаты первичного обследования которых не связаны с указанным выше вирусом.

Поэтому разработка усовершенствованного алгоритма лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови и ее компонентов является актуальной, так как адекватная схема диагностики снижает риск развития посттрансфузионного вирусного гепатита С у реципиентов, по результатам

лабораторных исследований решается вопрос о возможности использования заготовленной от донора гемопродукции, и способствует сохранению кадровых доноров.

Разработать рациональный алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови и ее компонентов в соответствии с современными достижениями в области лабораторных исследований для снижения риска его трансфузионно-трансмиссивной передачи.

1. Обобщить данные о риске развития посттрансфузионного вирусного гепатита С.

2. Провести мониторинг выявления вирусного гепатита С у доноров крови и ее компонентов в зависимости от используемых методов лабораторной диагностики.

3. Усовершенствовать алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С в крови доноров в соответствии с использованием современных доступных методов.

4. Разработать алгоритм выбраковки гемопродукции по результатам лабораторного обследования донорской крови на наличие маркеров вирусного гепатита С.

5. Оценить медико-экономическую эффективность внедрения разработанного алгоритма лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови и ее компонентов.

Разработан алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови, впервые включающий процедуру повторного серологического контроля крови доноров с неоднозначными значениями по результатам первичного лабораторного скрининга и процедуру тестирования всех серонегативных на антитела к вирусу гепатита С образцов на наличие РНК вируса гепатита С (ПСУ). Разработан алгоритм выбраковки и использования заготовленной от доноров гемопродукции по итогам лабораторного

тестирования на наличие маркеров вирусного гепатита С. Рассчитаны уровни выявляемое™ вирусного гепатита С среди доноров крови г. Москвы за 20002008 гг. Рассчитан остаточный риск трансфузионно-трансмиссивной передачи вирусного гепатита С в г. Москве.

Практическая значимость исследования

Алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови, включающий повторное обследование доноров через 1-3 месяца и РНК-тестирование серонегативных на антитела к вирусу гепатита С (апй-НСУ) образцов сыворотки крови, снижает риск инфицирования реципиентов при переливании компонентов крови.

Предложенный алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови позволяет сократить количество ложноположительных результатов исследования и использовать гемопродукцию, заготовленную от неинфицированных доноров.

Разработанные методические основы вычисления остаточного риска трансфузионно-трансмиссивной передачи вирусного гепатита С могут быть использованы на станциях переливания крови.

Положения, выносимые на защиту

1. Введение повторного серологического контроля через 1-3 месяца крови доноров с неопределенными или сомнительными результатами скринингового лабораторного исследования на наличие маркеров вирусного гепатита С позволяет снизить риск инфицирования реципиентов при применении компонентов крови.

2. Внедрение тестирования крови доноров на наличие РНК вируса гепатита С позволяет уменьшить остаточный риск инфицирования гепатитом С потенциальных реципиентов.

3. Алгоритм лабораторной диагностики вирусного гепатита С в крови доноров, включающий повторное обследование доноров через 1-3 месяца и РНК-тестирование, позволяет увеличить безопасность гемотрансфузий и минимизировать получение ложноположительных результатов.

4. Разработанный алгоритм выбраковки гемопродукции по результатам лабораторного обследования донорской крови на наличие маркеров вирусного гепатита С позволяет сохранить пригодные к использованию компоненты крови.

5. Медико-экономическая эффективность внедрения разработанного алгоритма лабораторной диагностики вирусного гепатита С у доноров крови и ее компонентов заключается в снижении остаточного риска посттрансфузионного инфицирования ВГС, уменьшении заболеваемости в данном спектре патологии и сокращении затрат на лечение.

Внедрение результатов исследования

Методика расчета относительного риска развития трансфузионно-трансмиссивной передачи ВГС используется централизованной клинико-диагностической лабораторией станции переливания крови ДЗ. г. Москвы для оценки качества заготовленной гемопродукции.

Результаты полученные в ходе диссертационного исследования используются в процессе обучения врачей и биологов клинико-диагностических лабораторий на циклах усовершенствования и профессиональной переподготовки на кафедре клинической лабораторной диагностики ФУВ ГОУ ВПО РГМУ Росздрава.

Апробация состоялась 23 марта 2009 г. на совместном заседании кафедры клинической лабораторной диагностики ФУВ, ПНИЛ нуклеинового и белкового обмена ГОУ ВПО РГМУ Росздрава и централизованной клинико-диагностической лаборатории (ЦКДЛ) станции переливания крови Департамента здравоохранения г. Москвы.

По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ.

Личный вклад автора

Автор провел повторное серологическое обследование 99 доноров. При этом выполнил 256 исследований методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) и 58 методом линейного иммунологического блотинга. В период с 2005 по 2008 г выполнил 3250 исследований методом ИФА, 4826 методом хемилюминесцентного иммунохимического анализа на микрочастицах, 568 методом линейного иммунологического блотинга. Внедрил метод тестировании РНК HCV на анализаторе Cobas Amplicor, проанализировав при этом 4248 образцов сыворотки крови доноров. Провел мониторинг выявляемое™ вирусного гепатита С у доноров крови СПК ДЗ г. Москвы за 2000-2008 гг. Рассчитал остаточный риск трансфузионно-трансмиссивной передачи вирусного гепатита С в период до и после внедрения исследования крови доноров на наличие РНК HCV. Автором проведена статистическая обработка и анализ полученных результатов.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 113 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и библиографического списка, включающего 113 отечественных и 63 иностранных источника. Работа иллюстрирована И таблицами и 10 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на кафедре КЛД ФУВ ГОУ ВПО РГМУ Росздрава (зав. кафедрой, д.м.н., проф. Р.Т. Тогузов). Практическая часть работы проводилась на базе централизованной клинико-диагностической лаборатории станции переливания крови ДЗ г. Москвы (главный врач - д.м.н., проф. Майорова О. А., зав. ЦКДЛ- к.м.н. Тарасенко О. А.).

В исследование включены образцы крови, полученные при аллогенных донациях цельной крови, процедурах тромбоцит- и плазмафереза, проведенных на станции переливания крови и в 15 отделениях переливания крови лечебно-профилактических учреждений ДЗ г. Москвы.

Всего исследовано 164522 образца от 84396 доноров.

Из исследования были исключены гемолизированные и хилезные образцы сыворотки крови. Всего исключено 74 образца.

Лабораторные исследования выполнены с соблюдением действующего законодательства по обеспечению контроля качества лабораторных исследований с использованием тест-систем и контрольных материалов, разрешенных к применению на территории РФ.

Выявление маркеров вирусного гепатита С проводилось с использованием следующих методов:

Ретроспективный анализа выявляемое™ вирусного гепатита С у доноров проведен с использованием базы данных единого донорского центра СПК ДЗ г. Москвы. Проанализированы 341952 карты доноров за период с 01.01.2000 по 31.12.2008 г.

Оригинальные данные для повторного анализа могут быть получены в информационной базе единого донорского центра г. Москвы и архиве ЦКДЛ станции переливания крови ДЗ г. Москвы.

Статистическая обработка результатов при оценке полученных данных проводилась общепринятыми методами математической статистики с использованием программы Statistica 6.0 (Statsoft, США) и статистического пакета программы Excel 2003 (Microsoft, США).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Лабораторная диагностика ВГС у доноров крови ее компонентов регламентирована Российским законодательством и направлена на обеспечение безопасности гемотрансфузии.

В 1996 году в систему скрининга донорской крови на наличие трансфузионно-трансмиссивных инфекций было внедрено исследование на антитела к вирусу гепатита С. С этого момента произошло значительное совершенствование методов и алгоритмов лабораторной диагностики, усовершенствование методик и переход на автоматические методы анализа.

К началу данного исследования алгоритм лабораторной диагностики ВГС у доноров крови включал две постановки ИФА на наличие anti-HCV. Первая постановка проводилась для всех без исключения исследуемых образцов, вторая постановка проводилась в тот же день при получении положительных или сомнительных результатов для исключения технических ошибок анализа и

увеличения надежности полученных данных. Для подтверждения наличия инфекции, все положительные в двух постановках ИФА образцы дополнительно тестировались более чувствительным методом линейного иммунохимического блотинга для определения антител к специфическим белкам НСУ.

Основная задача при обследовании доноров на вирусные инфекции -снижение вероятности инфицирования потенциальных реципиентов. Современное законодательство регламентирует определение в крови доноров уровня АЛТ и антител к вирусу гепатита С, однако они не являются универсальными маркерами заболевания.

На каждом этапе развития инфекционного процесса присутствуют различные маркеры вирусного гепатита С, как неспецифические АЛТ, так и специфические - антитела к НСУ, вирусная РНК (рисунок 1).

Рисунок 1. Маркеры вирусного гепатита С в различные периоды инфекционного процесса.

проводить комплексное исследование маркеров ВГС крови доноров с использованием различных методов, искать новые подходы и алгоритмы лабораторной диагностики.

Процедура повторного серологического контроля

Длительность периода (в среднем 66 дней) сероконверсии, то есть периода от момента заражения до выявления апй-НСУ при вирусном гепатите С и аналитическая ограниченность современных методов лабораторной диагностики привели к необходимости поиска и внедрения новых подходов при скрининге донорской крови на ВГС. В частности, была предложена процедура повторного серологического контроля доноров.

Появление сомнительных результатов может быть связано с недостаточным уровнем антител у инфицированных пациентов на данном этапе заболевания, или наличием перекрестных реакций с другими антигенами при отсутствии выявляемой патологии. Повторное обследование доноров через промежуток времени от 1 до 3 месяцев значительно повышает вероятность появления определяемого уровня апй-НСУ у лиц с наличием инфекции.

которые расценивались как неспецифическая реакция на апИ-НСУ. Эти лица также были отстранены от донорства и направлены на клиническое обследование.

Эффективность внедрения повторного лабораторного обследования доноров на наличие маркеров вирусного гепатита С представлена на рисунке 2.

Неспецифическая реакция на апй'-НСУ 24%

Рисунок 2. Результаты повторного серологического контроля на маркеры ВГС.

После клинического обследования 24 доноров с неспецифической реакцией, двум из них был поставлен диагноз ВГС, у остальных диагноз остался неопределенным.

Результаты лабораторного исследования определяют алгоритм

дальнейшего использования заготовленной гемопродукции. Из всех

компонентов крови наибольший срок годности имеет свежезамороженная

плазма. Она подвергается глубокой заморозке и обязательному хранению

(карантинизации) до 3-х месяцев. По результатам проведенного повторного

серологического контроля плазма 70 доноров с отрицательной серологической

реакцией на ВГС была карантинизирована и впоследствии реализована, плазма

остальных 29 доноров забракована и утилизирована.

Внедрение процедуры повторного серологического контроля позволило в 2007 году возвратить в донорский контингент 70 человек, у которых был получен отрицательный результат в ходе обследования на antí-HCV, что составило 0,19 % от общего числа (37250) доноров плазмы и крови. Плазма крови этих доноров была использована для гемотрансфузии.

В то же время, доноры с положительной реакцией на anti-HCV (5 человек, 0,013%) получили абсолютный отвод от донорства, а все компоненты крови были утилизированы.

Согласно алгоритму, который использовался ранее, и был регламентирован приказами Минздрава РФ, карангинизированные и не подлежащие карантинизации компоненты крови доноров с сомнительными результатами исследований на ВГС могли быть использованы для реципиентов.

Читайте также: