Электронная микроскопия в диагностике вирусных болезней

Инфекционные болезни — это заболевания, вызванные проникновением в организм бактерий, грибков или вирусов. Самая важная часть диагностики инфекций — это определение возбудителя и его концентрации. Для этих целей используются разнообразные лабораторные методы, которые позволяют выяснить, чем именно и как давно атакован организм, а в некоторых случаях — спрогнозировать эффективность лечения тем или иным препаратом.

Особенности диагностики инфекционных заболеваний

В клинической практике данный тип заболеваний встречается очень часто. Именно они, по данным Всемирной организации здравоохранения, становятся причиной 26% всех смертей. В список самых распространенных инфекционных заболеваний входят инфекционная пневмония и другие воспалительные заболевания дыхательных путей, гепатит, ВИЧ, туберкулез, малярия, воспаления органов половой системы и мочевыводящих путей, гистоплазмоз, ротавирусные инфекционные заболевания, ветряная оспа, герпес, вирус папилломы человека и еще несколько десятков болезней. Хотя бы раз в жизни каждый из нас сталкивается с инфекционными заболеваниями и необходимостью быстрой постановки диагноза.

Все инфекционные болезни делятся на пять типов — прионные, вирусные, бактериальные, протозойные и грибковые поражения. Далее будут рассмотрены последние четыре типа как наиболее распространенные. Разные возбудители иногда могут вызывать одно и то же заболевание. В частности, пневмония может быть результатом как вирусной, так и бактериальной инфекции. Лечение зависит не от проявлений, а от возбудителя болезни. Противовирусные препараты бесполезны в борьбе с бактериями и грибками, антибиотики не действуют на вирусы. Поэтому основная задача лабораторной диагностики инфекционных заболеваний — выявление типа возбудителя.

Способы лабораторной диагностики инфекционных болезней можно разделить на два типа: неспецифические и специфические методы.

К неспецифическим относятся общий анализ крови и исследование соотношения ее белковых фракций, печеночные пробы, общий анализ мочи и кала. Эти методы не дают информации о виде возбудителя, но позволяют узнать, в какой мере болезнь затронула органы и системы организма, что именно в их работе нарушено и насколько далеко зашел процесс.

Специфические — вирусологический и бактериологический методы, микроскопическое исследование возбудителей, анализы на антигены и антитела — направлены непосредственно на обнаружение возбудителя.

Современная медицина располагает множеством методов выделения возбудителей бактериальной инфекции:

Бактериоскопический . Исследуется окрашенный специальным образом мазок.

Бактериологический . Биоматериал высеивается в питательную среду, и через некоторое время специалист исследует колонию бактерий, выросшую в ней.

Биологический . Направлен на определение патогенности микроорганизмов.

Серологический . Выявляет антитела и антигены в сыворотке крови — особые вещества, которые вырабатываются организмом при контакте с возбудителем определенной болезни.

Чаще всего для исследований используют кровь или сыворотку крови, реже — слюну, мочу, кал, клетки эпителия (мазок и соскоб) и другой биоматериал.

В лабораторной диагностике вирусных заболеваний используются:

Вирусологическое исследование . Световая и электронная микроскопия дает возможность выявить наличие вирусных включений и сами вирусы и идентифицировать их.

Серологическое исследование для обнаружения антител и антигенов. Этот метод дает возможность быстро выявить агрессора, как и в случае с бактериальными инфекциями. Для диагностики используются разнообразные способы исследования материала — реакции гемадсорбции, гемагглютинации или метод непрямой иммунофлюоресценции. Имунноблоттинг, в частности, позволяет выявлять антитела сразу к нескольким инфекциям и считается современным и точным диагностическим методом.

Молекулярно-генетические методы . Последнее слово в лабораторной диагностике. Позволяют обнаружить вирус даже тогда, когда его концентрация ничтожно мала — то есть на самых ранних стадиях. Самым известным из этих методов является ПЦР, при которой фрагмент вируса многократно копируется до тех пор, пока специалист не получит достаточно материала для определения типа вируса и его изначальной концентрации.

Для выявления вирусов обычно требуется сделать анализ крови.

Так называют инфекции, вызванные простейшими паразитами, например, амебами. Малярия, амёбиаз, токсоплазмоз, лямблиоз, трихомониаз, сонная болезнь — вот неполный список самых распространенных протозойных инфекций. Лабораторная диагностика таких заболеваний включает в себя следующие методы:

Микроскопический . Простейшие паразиты выявляются путем исследования под микроскопом окрашенных образцов биоматериала. Самый простой и надежный метод для многих возбудителей.

Культуральный . Посев биоматериала в питательную следу для дальнейшего исследования размножившихся простейших. У этого метода есть существенный недостаток: результатов нужно ждать долго, сам процесс может занять не менее 5-6-ти дней.

Серологический . Используют редко ввиду малой информативности.

Аллергический . Также не является распространенным. Кожные аллергопробы делают для того, чтобы подтвердить лейшманиоз и токсоплазмоз. Это вспомогательный диагностический метод.

В качестве биоматериала для исследований в основном используется кровь, иногда — – кал или моча.

Микроскопическое исследование . Препарат окрашивается и рассматривается под мощным микроскопом. Посредством иммунофлюоресцентной микроскопии исследуется проба, помеченная флюоресцеинами — специальным красителем. Наиболее быстрый способ выявления грибка по сравнению с другими методами.

Культуральный . Происходит посев пробы на питательную среду и дальнейшее исследование полученной в результате колонии грибков.

Серологический . Используется для выявления грибковых поражений, однако для микозов он считается не особенно точным.

Гибридизация нуклеиновых кислот . Самый современный способ выявления грибковых инфекций, его применяют для идентификации основных возбудителей системных микозов. Из культуры извлекается РНК и вносится особым способом помеченная молекула ДНК. Если в пробе наличествует один из основных патогенных грибков, ДНК объединится с его РНК, создав легко различимую структуру. Несомненным преимуществом метода является возможность определить инфекцию на самых ранних стадиях.

Биоматериалом для исследований являются клетки кожи, волос и ногтей, клетки слизистых оболочек (мазок или соскоб), мокрота, моча, секрет простаты, сперма, грудное молоко.

Современные методики диагностики инфекций позволяет выявить их на начальном этапе, Чем раньше болезнь будет обнаружена, тем проще ее вылечить. Поэтому сдавать анализы на инфекции желательно регулярно, даже если вы ни на что не жалуетесь и не замечаете никаких перемен в самочувствии.



Пе­ред сда­чей био­ма­те­ри­а­ла для ис­сле­до­ва­ний иног­да тре­бу­ет­ся опре­де­лен­ная под­го­тов­ка. Так, кровь обыч­но сда­ют с ут­ра, на­то­щак, а пе­ред за­бо­ром маз­ка не ре­ко­мен­ду­ет­ся при­ни­мать душ. Эти тре­бо­ва­ния очень важ­ны: они обес­пе­чи­ва­ют точ­ность ре­зуль­та­та, по­это­му узнай­те у вра­ча за­ра­нее о под­го­то­ви­тель­ных ме­рах и точ­но сле­дуй­те всем его ре­ко­мен­да­ци­ям.

Взятие и вид материала

1 . Время взятия: взятие материала следует проводить в остром периоде инфекции, а в случае серологических исследований также после 2–4 нед. (с целью выявления динамики изменений концентрации антител).

2 . Вид, способ взятия и транспортировка материала: зависит от клинической формы инфекции и этиологического фактора, а также от используемого диагностического метода →табл. 28.2-1 и ниже.

Таблица 28.2-1. Вид, правила взятия и транспортировки клинического материала для вирусологических исследований

Локализация инфекции a

Материал, инструкция взятия

Наиболее частый этиологический фактор

смывы из носа (раствор Хенкса) или мазок из горла (сделайте взятие тампоном на транспортную систему с раствором Хенкса), сыворотка

аденовирусы, энтеровирусы, вирус гриппа и парагриппа, корь

культивирование, IFA, определение антител

нижние дыхательные пути

мазок из горла — как указано выше

вирус гриппа и парагриппа, риновирусы, RSV

смывы — больной неоднократно полощет горло раствором Хенкса, сыворотка

кожа, слизистые оболочки

содержание пузырей (в закрытом капилляре), соскобы (в пробирке), мазок из шейки матки, выделения из влагалища, кал, сыворотка

HSV, VZV, энтеровирусы

препарат из соскобов, полученный методом Tzanck, IFA, культивирование, PCR, определение антител

высыпания другой морфологии

соскоб с экзантем

энтеровирусы, вирус кори, вирус краснухи, аденовирус, парвовирус В19

культивирование, определение антител, PCR

мазок из горла (сделайте взятие на среду Хенкса), кал, моча

менингит, энцефалит, миелит

мазок из горла (следует сделать взятие тампоном на среду Хенкса)

энтеровирусы, вирус кори

культивирование, PCR, IFA, определение антител в сыворотке и PMR

кал, мазок из ануса (следует сделать взятие тампоном на среду Хенкса)

PMR (1–3 мл в сухую, стерильную пробирку)

HSV, VZV, вирус клещевого энцефалита, арбовирусы, аденовирусы, вирус эпидемического паротита, вирус кори, энтеровирусы

биоптат головного мозга — на практике выполняется исследование PMR

арбовирусы, вирус бешенства, герпесвирусы, JC вирус

микроскопическое исследование, PCR, IFA

мазок из горла (1–3 мл в сухую стерильную пробирку)

электронная микроскопия, EIA, ELISA, LAT

кал (набранный в стерильную сухую пробирку), может быть мазок из ануса (помещен в 2 мл 0,9 % NaCl)

аденовирус 40/41, норовирусы, ротавирусы

сыворотка (5–10 мл крови, взятой натощак в сухую стерильную пробирку с антикоагулянтом, не используйте ватные или корковые пробки, пробки из лигнина)

HAV, HBV, HCV и другие

гистологическое исследование и IFA, PCR, RT PCR, гибридизация

HBV, HCV и другие

гистологическое исследование и IFA, PCR, RT-PCR, гибридизация

мазок из конъюнктивы (сделайте взятие тампоном на среду Хенкса), соскобы роговицы

аденовирусы, HSV, VZV

перикардиальная жидкость, биоптат сердечной мышцы, кал, сыворотка

культивирование, определение антител

a При некоторых системных инфекциях, сопровождающихся виремией, следует сделать взятие мочи (корь, краснуха, CMV) или цельной крови (корь, CMV) с целью культивирования вируса (корь) или выявление его антигенов в лейкоцитах (напр., CMV). С целью диагностики инфицирования HIV следует отправить сыворотку (EIA или ELISA, Western blot).

CMV — цитомегаловирус, HAV — вирус гепатита A, HBV — вирус гепатита B, HCV — вирус гепатита C, HSV — вирус простого герпеса, IFA — метод иммунофлюоресцентного исследования, LAT — латекс-агглютинация, PCR — метод полимеразной цепной реакции, PMR — спинномозговая жидкость (ликвор), RSV — респираторно-синцитиальный вирус, RT PCR — метод цепной полимеразной реакции с обратной транскрипцией, VZV — вирус ветряной оспы и опоясывающего лишая

Методы идентификации вирусов

1 . Электронная микроскопия: позволяет непосредственно выявлять частицы вируса во взятом материале (напр., кал); модификацией метода позволяющей повысить чувствительность является иммуномикроскопия. Доступна лишь в нескольких лабораториях в специализированных центрах. Взятие и транспортировка материала →см. ниже.

2 . Культивирование: позволяет увеличить количество и подтвердить присутствие вирусов во взятой пробе ( мазки берут в транспортную систему со средой для культивирования клеток [раствор Хенкса] или 0,9 % NaCl, жидкость из пузырьков на коже — в закрытом капилляре, образцы тканей, соскобы — в сухих пробирках. Спинномозговая жидкость , смывы , полученные с использованием раствора Хенкса, кал, цельная кровь с гепарином, моча ). Вирус размножают в соответствующих клеточных культурах или в куриных эмбрионах (напр., вирус гриппа), а затем идентифицируют на основе цитопатического эффекта или с использованием специфических антител (выявление антигена) или молекулярными методами. Взятие материала следует осуществлять в чистый, стерильный, плотно закрываемый контейнер без консервантов →табл. 28.2-1. Использование транспортных систем для культивирования бактерий может сделать невозможным выделение вирусов. Образцы тканей следует поместить в небольшом количестве 0,9 % NaCl или раствора Хенкса. Материал следует пересылать в лабораторию при темп. 2–4 °C. Перед культивированием образец можно хранить 3 . Серологические методы: в клинической практике играют основную роль в вирусологической диагностике. Выявляют вирусные антигены в клиническом образце, а также специфические антитела классов IgM и IgG в сыворотке или повышение их титра (обычно ≥4-кратное) в т. н. парных сыворотках (один образец, взятый в острой фазе болезни, а другой — в период восстановления после 2–4 недель).

1) выявление антител (EIA, ИФА (ELISA), вестерн-блот, иммунохроматография);

а) сыворотка (1–2 мл) — без гемолиза, следует сделать стерильный взятие в плотно закрытую пробирку; до 48 ч от взятия хранить и перевозить образцы в условиях холода (5±3 °С); если это невозможно см. переслать как можно быстрее при комнатной темп. (21±4 °С). Если образец будет храниться >48 ч его следует заморозить. Перевозить в условиях, предотвращающих размораживание.

в) спинномозговая жидкость (≈1 мл) — следует сделать стерильный взятие в плотно закрытую пробирку; правила хранения и транспортировки как в случае сыворотки (см. выше). Определение специфических антител в спинномозговой жидкости всегда нужно проводить параллельно с их определением в сыворотке, взятой в это же время.

2) выявление вирусных антигенов (иммунофлюоресценция [IFA], EIA, ELISA, латекс-агглютинация [LAT]):

а) мазок или смывы из носоглотки (с целью идентификации вирусов дыхательной системы, кори и т. п.) — следует сделать взятие стерильным тампоном, увлажнённым 0,9 % NaCl или раствором Хенкса, а затем поместить тампон в плотно закрытой стерильной пробирке с 1–1,5 мл раствора Хенкса. Кончик тампона не должен быть сухим. Материал следует доставить в лабораторию сразу после взятия. При идентификации вирусов дыхательной системы, материалом для исследования могут быть также приготовленные и переданные в лабораторию препараты для микроскопии, фиксированные ацетоном.

б) цельная кровь — следует набрать 6‑10 мл в стерильную пробирку с антикоагулянтом и немедленно отправить в лабораторию;

в) моча — наберите 10–50 мл в стерильный контейнер и отправьте в лабораторию сразу после взятия;

г) кал → табл. 28.2-1; хранение и транспортировка как при культивации;

д) биоптат ткани — сразу после взятия поместите образец ткани в стерильный стеклянный контейнер, между тампонами, увлажненными 0,9 % NaCl. Доставьте как можно быстрее в лабораторию (

4 . Молекулярные методы (выявляют геном вируса или его специфические фрагменты): взятие материала следует произвести в стерильные плотно закрытые пробирки или контейнеры. Вид материала:

1) цельная кровь (≈3 мл) — следует сделать взятие с антикоагулянтом (лучше всего с ЭДТА, не используйте гепарин , который является неспецифическим ингибитором PCR). Если образец доставляется в лабораторию в течение 24 ч, то допустимо транспортировать его при комнатной температуре (21±4 °C), но, если позже (до 5 дней), рекомендуется хранение и транспортировка в холодильнике при темп. (5±3 °С).

2) спинномозговая жидкость (1–2 мл) — после взятия образец следует доставить в лабораторию как можно быстрее, лучше всего — на холоду при темп. (5±3 °С). Если её невозможно доставить в лабораторию в течение 24 ч её следует заморозить и транспортировать в условиях, которые препятствуют размораживанию.

3) сыворотка (2–3 мл) — кровь нужно центрифугировать после взятия как можно быстрее, а сыворотку немедленно отправить в лабораторию (см. спинномозговая жидкость). Если не можете доставить сыворотку сразу после взятия см. действуйте аналогично, как со спинномозговой жидкостью.

4) моча (10–20 мл) — следует сделать взятие из первой струи через 2 ч после последнего мочеиспускания (лучше всего — утром). Образец следует доставить в лабораторию так быстро, насколько это возможно (до нескольких часов можно транспортировать при комнатной темп., если дольше, следует поместить её при темп. 5±3 °С и доставить как можно быстрее).

5) биоптаты тканей (≥0,2 г) — взятие следует выполнить в стерильную пробирку или в контейнер со стерильным 0,9 % NaCl; хранение и транспортировка аналогично моче. При необходимости длительного хранения аналогично спинномозговой жидкости.

6) бронхоальвеолярные смывы (1–2 мл жидкости с БАЛ) — хранение и транспортировка аналогично сыворотке.


ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ , комплекс методов исследования, позволяющих распознать этиологию вирусного заболевания и изучить его возбудителя.

Осн. этапами В. и. являются выделение вируса от больных и павших животных (взятие, консервирование, пересылка и подготовка материала, заражение им животных, куриных эмбрионов, культуры клеток); титрование вирусов для определения их кол-ва в исследуемых материалах; культивирование вирусов на восприимчивых домашних и лабораторных животных, особенно на развивающихся куриных эмбрионах и культурах тканей (гл. обр. первичнотрипсинизированных).

С помощью морфологич. методов выявляют элементарные тельца, внутриклеточные включения (напр., Бабеша — Негри при бешенстве, Боллингера при оспе птиц). Иммунохимич. методы (гл. обр. метод флуоресцирующих антител) позволяют определить специфич. вирусный антиген в заражённых [зараженных] клетках тканевой культуры или органов и тканей инфицир. животных. С помощью серологич. методов проводят видовую и группоспецифич. идентификацию вируса и антител в сыворотках переболевших животных. С этой целью используют реакции нейтрализации, РСК, реакцию гемагглютинации, задержки гемагглютинации, диффузионной преципитации, торможения гемадсорбции. Реакция нейтрализации позволяет улавливать антигенные различия сходных между собой вирусов даже в пределах одноимённой [одноименной] группы. РСК применяют для обнаружения вирусных антигенов в материалах от больных и павших животных, идентификации выделенного вируса, изучения антигенных связей между различными вирусами и определения антител у переболевших животных. Реакции гемагглютинации и задержки гемагглютинации широко применяют в В. и. для диагностич. целей и типирования возбудителей болезни Ньюкасла, гриппа птиц, парагриппа и нек-рых аденовирусов; непрямую реакцию гемагглютинации используют для выявления адено- и миксовирусов, хламидий. Реакцией прицепитации в агаре изучают антигенную структуру вирусов, выявляют антитела в сыворотке и антигены в исследуемом материале. Реакцию гемадсорбции применяют для предварительной индикации и титрования вирусов в культуре клеток, особенно тех, к-рые не вызывают цитопатич. действия. Гемадсорбция наступает раньше проявления цитопатогенного действия, поэтому её [ее] используют как ранний метод предварительной индикации вирусов. Гемадсорбция островковая (адсорбция эритроцитов на отдельных участках монослоя клеток) типична для гриппа свиней, эпидемич. паротита; диффузная (адсорбция эритроцитов на клетках всего монослоя)— для классич. чумы кур, болезни Ньюкасла, афр. чумы свиней и др. Методы очистки и концентрации вирусов используют при изучении физич., химич. и морфологич. свойств вирусов. Фазовые системы, образованные полимерами, используют для концентрации вирусов из больших объёмов [объемов] вируссодержащих жидкостей, выделения нуклеиновых к-т вирусов. Радиобиологич. методы применяют в В. и. для изучения распределения и локализации вирусов (антител) в организме и особенно для изучения процессов онтогенеза вирусов. С помощью электронной микроскопии обнаруживают вирионы в исследуемом материале и специфич. конгломераты вирусов и антител (иммунная электронная микроскопия). Иммуноэлектроосмофорез обусловлен одновременным встречным движением в геле агара антигена и антитела в результате разной величины электрич. заряда с образованием комплекса антиген — антитело в виде линии преципитации и последующей его денатурацией. Метод применяют при изучении антигенной структуры вируса. Изоэлектрич. фокусирование основано на способности белков переходить в инертное (в отношении электрофоретич. подвижности), а затем агрегированное состояние в изоэлектрич. точке. Метод применяют для изучения белков вирусов. При иммуноферментативном методе происходит присоединение фермента к антителам с последующим образованием комплекса фермент — антитело — антиген, к-рый выявляют в клетке с помощью цитохимич. реакции на фермент (пероксидазу, щелочную и кислую фосфотазу, глюкозооксидазу). Метод используют с диагностич. целью для выявления вирусных антигенов в культурах клеток, мазках-отпечатках, криостатных срезах, а также для изучения тонкой структуры антигенов вируса, патогенеза вирусных болезней и др. См. также Вирусоскопия .

Лит.: Тихоненко Т. И., Методические основы биохимии вирусов, М., 1973, с. 152—58; Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний, пер. с англ., ред. Э. Леннет и Н. Шмидт, М., 1974.

3 Глотов А.Г., Глотова Т.И. Сальмонеллез крупного рогатого скота на молочных комплексах (Обзор. Часть 1)

Представлены новые данные о роли бактерии Salmonella dublin в возникновении экономически значимых болезней крупного рогатого скота (КРС) на молочных комплексах. Способность устанавливать пожизненную инфекцию у переболевших животных с бессимптомным носительством, периодами бактериемии и выделения возбудителя во внешнюю среду, создает проблемы при проведении контрольных мероприятий. Важным является факт повышения устойчивости бактерий к противомикробным препаратам. Вирулентность бактерии зависит от наличия плазмиды Spv. Наличие этого гена повышает устойчивость бактерии к антибиотикам и способствует появлению резистентных штаммов бактерии, а генетическая передача между различными серотипами приводит к циркуляции в стаде животных высоковирулентных штаммов S. dublin и S. typhimurium. К инфицированию восприимчивы телята до 6 месяцев и взрослые животные, у которых бактерия вызывает энтериты, системную форму инфекции, приводящую к возникновению артритов, энцефалитов, пневмоний и абортов. Инфекция носит энзоотический характер и проявляется циклично. Стационарность энзоотических очагов поддерживается животными-бактерионосителями, выделяющими сальмонелл в концентрации до 1014 КОЕ/г в день с фекалиями и 102/мл – 105/мл с молоком и молозивом. Возбудитель имеет те же органы-мишени желудочно-кишечного, респираторного трактов и репродуктивной системы животных, что и возбудители вирусных инфекций, а общность патогенетических механизмов приводит к сходству клинических и патологоанатомических признаков болезней, затрудняющих дифференциальную клиническую диагностику, планирование и эффективность противоэпизоотических мероприятий. В первой части приведены и обсуждаются современные сведения о возбудителе инфекции, эпизоотологические данные и патогенез болезни. Ключевые слова: крупный рогатый скот, молочные комплексы, бактерии, Salmonella dublin, бактерионосительство, клинические признаки, дифференциальная диагностика, профилактические мероприятия.

ПРАКТИКА: ОПЫТ, ПРОБЛЕМЫ, ПЕРСПЕКТИВЫ

8 Кочиш И.И., Смоленский В.И., Нуралиев Е.Р., Кочиш О.И. Комплексная программа обеспечения биологической безопасности промышленных птицеводческих хозяйств яичного направления
Авторы дают научное обоснование эффективности комплексного применения дезинфицирующих средств нового поколения для дезинфекции питьевой воды, уничтожения насекомых, клещей и гельминтов на промышленных птицефабриках Республики Казахстан и Российской Федерации. На основании проведенных исследований предложена комплексная программа ветеринарно-санитарной профилактики, адаптированная к условиям птицефабрик яичного направления, позволяющая повысить технологические и экономические показатели. Реализация ее позволила существенно ограничить или полностью отказаться от использования антибиотиков и других лекарственных средств, что положительно сказалось на качестве продуктов, их стоимости и рентабельности. Ключевые слова: промышленное птицеводство, дезинфекция, дезинсекция, дезакаризация, дезинвазия, экономический эффект.

ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ

14 Сибгатуллова А.К., Нефедьева М.В., Кудряшов Д.А., Власов М.Е., Титов И.А. Анализ генетических маркеров изменчивости изолятов вируса африканской чумы свиней, выделенных на территории Российской Федерации

Африканская чума свиней – контагиозное заболевание диких и домашних свиней вирусной этиологии. Болезнь наносит существенный экономический ущерб свиноводству Российской Федерации, поскольку для нее не разработана эффективная вакцина, позволяющая создать протективный иммунитет у животных. В результате проведенных исследований получены первичные нуклеотидные последовательности и проведен филогенетический анализ ряда маркерных генов, применяемых для расширенного генотипирования штаммов и изолятов вируса АЧС: B602L; EP402R; I73R/I329L. Ключевые слова: вирус африканской чумы свиней, генотипирование, секвенирование, маркерные гены, мультигенные семейства, филогенетический анализ.

20 Гафарова И.Э., Лисицына Е.С., Савочкина Ю.А., Кириллова Н.В., Чернова С.В., Беренс Т.Т., Ильина Е.Н. Обнаружение провирусной ДНК вируса лейкоза крупного рогатого скота методом ПЦР

В статье представлены данные по разработке диагностикума для обнаружения провирусной ДНК вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени. В работе использовали 140 образцов цельной крови крупного рогатого скота (КРС), полученных из неблагополучных по ВЛКРС хозяйств. Все анализируемые образцы тестировали в реакции иммунодиффузии в агаровом геле (РИД). Для оценки качества диагностикума использовали такие параметры как линейность, эффективность, прецизионность, аналитическая чувствительность и специфичность. В результате установили, что разработанная нами тест-система обладает высокой чувствительностью (500 гэ/мл), специфичностью (100 %) и воспроизводимостью. Коэффициент вариации результатов при исследовании биологического материала на наличие провирусной ДНК ВЛКРС не превышает 1,3 %. Эффективность метода составила 99,95 %. Полученные при сравнении гематологического теста, РИД и ПЦР данные свидетельствуют, что тест-система может быть рекомендована к использованию для исследования биологического материала животных на наличие ВЛКРС. В свою очередь, комплексное применение этих методов позволит повысить эффективность диагностики лейкоза крупного рогатого скота и тем самым значительно снизит вероятность передачи инфекции здоровым животным. Ключевые слова: вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), полимеразная цепная реакция (ПЦР), реакция иммунодиффузии в агаровом геле (РИД), провирусная ДНК.

27 Рябчикова Е.И., Филипенко М.Л., Афонюшкин В.Н., Хоменко Ю.С. К вопросу о роли электронной микроскопии в своевременном выявлении новых инфекций кур и свиней

Использование методов молекулярной диагностики инфекционных болезней сельскохозяйственных животных и птицы существенно упростило диагностику вирусных заболеваний. Тем не менее сокращение для этой цели традиционных методов, таких как электронная микроскопия, патогистологические исследования, существенно ухудшило возможности обнаружения новых инфекций. В данной работе обобщены результаты электронно-микроскопических исследований образцов биоматериала птиц и свиней, отобранных при появлении новых нозологий. Описаны случаи обнаружения вирусных частиц с морфологическими характеристиками флавивирусов, коронавирусов, рабдовирусов, астровирусов, цирковирусов и т.д., с последующим анализом их роли в развитии патологий. Сравнительный анализ преимуществ и недостатков методов молекулярной диагностики инфекций и электронной микроскопии образцов биоматериала позволяет сделать вывод, что наличие работоспособной лаборатории электронной микроскопии в каждом крупном регионе РФ является ключевым элементом для первичного выявления новых инфекций. Ключевые слова: электронная микроскопия, эмерджентные инфекции птиц и свиней, флавивирусы, парвовирусы, рабдовирусы, патологоанатомический мониторинг.

ИНВАЗИОННЫЕ БОЛЕЗНИ

32 Василевич Ф.И., Зиновьева О.Е., Каплич В.М. Эколого-биологические особенности кровососущих мошек (Diptera: simuliidae) центральной нечерноземной зоны России

В водотоках Центральной нечерноземной зоны России развиваются личинки и куколки 25 видов мошек 10 родов. Из них 20 относятся к числу кровососущих насекомых. Наиболее активными и широко распространенными кровососами животных являются B. chelevini (ИД=26,1; ИВ=75,0), B. erythrocephala (ИД=16,6; ИВ=68,0), S. pusilla (ИД=13,7; ИВ=58,0), S. promorsitans (ИД=13,2; ИВ=64,5), S. nigra (ИД=9,9; ИВ=46,0). Ключевые слова: кровососущие мошки, проточные водоемы, личинки, куколки, имаго.

38 Сафиуллин Р.Т., Чалышева Э.И., Краснобаев Ю.В. Эффективность препарата Вирукилл 260 против ооцист кокцидий птиц

Испытывали эффективность препарата Вирукилл 260 в разных концентрациях по сравнению с 4%-ным раствором Фенола при кокцидиозе цыплят-бройлеров 14-суточного возраста. Интенсэффективность Вирукилла 260 в 0,5%-ной концентрации против спорулированных ооцист Eimeria spp. птиц составила 94,15 %, в 1%-ной – 97,6 и в 2%-ной – 98,17 %, а базового препарата Фенол в 4%-ной концентрации – 88,75 %. Цыплята, которых заражали спорулированными ооцистами кокцидий в дозе 2000 на 1 мл задаваемой суспензии, не обработанной дезинфектантом, во все сроки эксперимента выделяли с фекалиями большое количество ооцист (в среднем 64880 экз. в 1 г помета). В результате, их продуктивность была на 26,58 % ниже, чем незараженных бройлеров. Ключевые слова: цыплята, кокцидиозы, ооцисты, искусственное заражение, копроскопия, метод Дарлинга, камера Мак Мастера, Вирукилл 260, Фенол, интенсэффективность.

АКУШЕРСТВО, ГИНЕКОЛОГИЯ

43 Урошевич М., Вучинич М., Шахинович Р., Дробняк Д. Влияние гонадотропных гормонов на сервис-период и количество детенышей в помете крольчихи

Результаты эксперимента, трехкратно повторенного на 300 крольчихах, подтвердили, что сыворотка жеребых кобыл и Фоллигон при применении этому виду животных улучшают репродуктивные функции (сокращается длительность беременности и сервис-период, повышаются плодовитость, а также выживаемость приплода). Ключевые слова: гормоны, кролики, репродукция, сыворотка жеребых кобыл, фоллигон.

ЗООГИГИЕНА, САНИТАРИЯ, ЭКОЛОГИЯ

47 Тюрин В.Г., Мысова Г.А., Бирюков К.Н., Потемкина Н.Н., Кочиш О.И., Кротков А.С. Гранулированные органоминеральные удобрения пролонгированного действия из отходов животноводства

Изучали санитарно-бактериологические параметры гранулированного органоминерального удобрения из отходов животноводства. Установили, что высушивание и гранулирование смеси минеральных веществ с навозом и другими органическими компонентами (опилками, соломой) позволяет получать удобрение пролонгированного действия, соответствующее требованиям действующих нормативных документов. Ключевые слова: органоминеральное удобрение, отходы животноводства, санитарно-бактериологическое состояние.

50 Кулач П.В., Шопинская М.И., Нитяга И.М., Захаров А.В. Препарат Вапусан 2000Р для дезинфекции холодильных камер мясоперерабатывающего предприятия

В статье приведены данные по изучению дезинфицирующей активности препарата Вапусан 2000Р при обработке холодильных камер мясоперерабатывающего предприятия. В ходе исследования в холодильной камере была выявлена высокая зараженность стен и пола спорами плесневых грибов, что является следствием нарушения требований действующих санитарных правил для холодильников, в т.ч. режима эксплуатации камер. Установлено, что препарат Вапусан 2000Р при дезинфекции в помещении с температурой выше минус 11,9 0С в концентрации 1 % и экспозиции 1 ч обладает ярко выраженной активностью в отношении плесневых грибов и дрожжей. Ключевые слова: дезинфекция, холодильные камеры, мясоперерабатывающее предприятие, плесневые грибы.

НЕЗАРАЗНЫЕ БОЛЕЗНИ

54 Трошин Е.И., Шувалова Л.А., Широбокова Т.А., Васильев Ю.Г. Влияние светодиодов на продуктивность дойных коров

57 Барышев В.А., Попова О.С., Рогачева Е.В. Новые аспекты лечения телят c диареей

Для изучения лечебного эффекта нового фитосорбционного комплекса в одном из хозяйств Ленинградской области из 2 – 3-месячных телят с диареей сформировали две группы (по 30 голов в каждой). Исходно их масса тела составляла соответственно 79,2±8,53 и 81,6±9,42 кг. Животным опытной группы применяли перорально фитосорбционный комплекс в дозе 120 г/гол. (1,5 г/кг массы тела), а контрольной – выпаивали препарат Антидиарейко в дозе 100 г/гол. по схеме, принятой в хозяйстве. За время лечения у телят опытной группы количество эритроцитов в крови возросло на 12,97 %, концентрация гемоглобина – на 22,55 %, глюкозы – на 15,18 %, общего белка – на 2,63 %, а также фагоцитарная активность – на 10,42 %, бактерицидная активность – на 3,07 % и лизоцимная активность – на 34,15 % на фоне снижения числа лейкоцитов на 14,81 % по сравнению с контролем. Таким образом, фитосорбционный комплекс показал высокий терапевтический эффект посредством снижения интоксикации и ликвидации воспалительного процесса в организме телят с диареей. Ключевые слова: бактерицидная активность, гемоглобин, глюкоза, диарея, лейкоциты, лизоцимная активность, общий анализ крови, телята, фагоцитарная активность, эритроциты.

60 Кадиков И.Р., Бикташев Р.У., Конюхова В.А., Папуниди К.Х., Закирова Г.Ш., Губеева Е.Г. Применение шунгита и цеолита цыплятам-бройлерам на фоне отравления тяжелыми металлами

В статье приведены данные о продуктивности цыплят-бройлеров кросса Кобб-500 на фоне контаминации комбикормов тяжелыми металлами (0,5 ПДК кадмия и 0,5 ПДК свинца) и применения шунгита и цеолита как отдельно, так и комбинированно в соотношении 1:1 в дозах 0,25 и 0,5 %. Новизной исследований является высокая дисперсность (1 – 6 мкм) сорбентов. Представлены биохимические показатели сыворотки крови, концентрация кадмия, свинца, меди, цинка, железа, марганца, кобальта, никеля в печени и мышечной ткани цыплят. Установлено, что шунгит и цеолит как отдельно, так и в комбинации в дозе 0,5 % способствуют повышению продуктивности цыплят-бройлеров. Ключевые слова: цыплята-бройлеры, рационы, кадмий, свинец, шунгит, цеолит, печень, мышцы, кровь.

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Copyright © Иммунитет и инфекции