Диагностика гриппа птиц методом пцр

Т.В. Гребенникова, Д.Е. Киреев, А.Д. Забережный, Т.И. Алипер

Грипп А – контагиозное вирусное заболевание, которое вызывает сезонные эпидемии, пандемии и эпизоотии с различным уровнем смертности в зависимости от вирулентности вирусных штаммов, вызвавших эпидемию (1).

Вирус гриппа А широко распространен в природе, инфицирует многие виды млекопитающих и птиц, в основном водного и околоводного комплекса. От диких птиц выделены вирусы со всеми известными сочетаниями поверхностных белков, при этом инфекция у диких птиц протекает в виде энтерита, без видимых признаков заболевания (3, 4). Это указывает на высокую степень адаптации вирусов гриппа А к диким птицам, которые являются естественными хозяевами вирусов гриппа. Вирус сохраняется в воде в течение длительного времени (6-8 месяцев), а водно-фекальный путь инфицирования является основным механизмом поддержания персистенции вируса гриппа в природе, откуда вирус проникает в популяции домашних животных.

Вирус гриппа А отличается высокой степенью вариабельности, особенно это касается поверхностных гликопротеинов вириона: гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA). Известно 16 антигенных подтипов НА (Н1-Н16) и 9 подтипов NA (N1-N9). Вирус гриппа обладает сегментированным геномом, состоящим из 8 сегментов, которые обладают высокой способностью к реассортации. Различные комбинации НА и NА способны привести к появлению высоковирулентных вирусов, вызывающих высокий процент смертности.

В 20 веке отмечены четыре пандемии: 1918 (H1N1), 1957 (H2N2), 1968 (H3N2) и 1977 (H1N1), причем две (1957 и 1968 гг.) были обусловлены новыми реассортантными вирусами, которые появились в результате реассортации генов вирусов гриппа птиц и человека. Свиньи могут служить промежуточным хозяином, обеспечивающим появление новых вирусов путем адаптации птичьих вирусов и/или реассортации между птичьими и человеческими вирусами (2). В результате этих процессов вирусы птиц смогут репродуцироваться в организме человека, а вирусы человека – в организме птиц. Существует гипотеза, что печально знаменитая "испанка" была вызвана вирусом гриппа свиней А H1N1 (5). За последние 45 лет описано свыше 30 эпизоотий среди домашних животных в ряде случаев сопровождающихся заболеванием людей, подчас с высокой смертностью.

Начиная с 1996 г. и до настоящего времени были отмечены случаи заражения человека подтипами H5 and H7 (3, 4). Наблюдается распространение гриппа птиц, вызванного вирусом H5N1, в странах Азии. С середины декабря 2003 года вспышки этого заболевания были подтверждены в Южной Корее, Вьетнаме, Лаосе, Таиланде, Японии, Камбодже, Филиппинах, Малайзии и Китае (7). При этом отмечался высокий уровень смертности среди людей, до 50% в случае заражения человека подтипом Н5. С января 2004 года во Вьетнаме и Тайланде зарегистрированы случаи с летальностью более 70%. В 2005 г. были зарегистрированы эпизоотии на территории Российской Федерации, вызванные вирусом гриппа H5N1. Считается, что подтипы Н5 и Н7 вируса гриппа А являются наиболее опасными с точки зрения возникновения пандемий.

Угроза возникновения новой пандемии, предупреждение заноса и распространения высоко патогенных вирусов гриппа на территории нашей страны требует проведения мониторинга среди людей, домашних и диких животных с использованием современных средств диагностики. Диагностика гриппа осуществляется вирусологическими, иммунологическими методами и молекулярными методами. Молекулярные методы диагностики являются чувствительными и специфичными для определения вируса гриппа А. Кроме того, сравнительно в короткий срок, можно получить информацию о возбудителе без предварительного культивирования. Молекулярные методы рекомендованы Всемирной Организации Здравоохранения и Международным Эпизоотическим Бюро как лабораторные тесты для определения вируса гриппа в биологических образцах и постановки диагноза (8, 9 ).

В НПО НАРВАК и лаборатории молекулярной диагностики института вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН разработан комплекс молекулярных методов для индикации и идентификации вируса гриппа А, а также дифференцирования его подтипов. Разработки основаны на современных молекулярных методах и подходах и мегут с успехом использоваться ветеринарными специалистами.

Тест-система для определения РНК вируса гриппа А методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Разработана тест-система для определения РНК вируса гриппа А методом ПЦР. Тест-система является универсальной для млекопитающих и птиц и позволяет определять РНК вируса гриппа А в различных биологических образцах (сыворотках крови, клоакальных смывах и органах) методом ПЦР. С использованием данной тест-системы можно определять РНК, а следовательно наличие вируса гриппа А 16 подтипов. Праймеры, разработанные для тест-системы, специфичны к гену белка нуклеокапсида вируса гриппа А всех известных подтипов и проверены с использованием компьютерных программ "Amplify 1.0", "Oligo 4.0". C использованием программы "ВioEdit" и BLASTN 2.2.3, на 300-400 вирусных геномах каждого подтипа было показано, что праймеры являются универсальными. Тест-система способна выявлять возбудитель гриппа А даже в случае множественных мутаций и реассортации генетического материала.

Тест-система может быть использована для скрининга биологических образцов у млекопитающих и птиц, которые предположительно могут являться носителями вируса гриппа А.

Тест-система для определения и дифференциации РНК вируса гриппа А подтипов Н5 и Н7 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Тест-система определения РНК двух подтипов вируса гриппа А – Н5 и Н7 в биологических образцах. Следовательно, тест-система позволяет не только определять два данных подтипа, но и дифференцировать их от других подтипов вируса гриппа А. Праймеры подобраны к различным участкам гена гемагглютинина и проверены с использованием компьютерных программ "Amplify 1.0", "Oligo 4.0". C использованием программы "ВioEdit" и BLASTN 2.2.3, на 300-400 вирусных геномах для каждого подтипа вируса гриппа А было показано, что даже в случае антигенного дрейфа внутри подтипа Н5 и Н7, или в случае штаммов с множественными мутациями, праймеры работают специфично. Тест-система способна выявлять возбудитель гриппа А подтипов Н5 и Н7 даже в случае множественных мутаций и реассортации генетического материала.

Тест-система для определения РНК вируса гриппа А подтипа Н5 методом ПЦР в реальном времени

Разработана тест-система ПЦР в реальном времени для определения РНК подтипа Н5 вируса гриппа А, а , следовательно наличие вируса гриппа А подтипа Н5. ПЦР в реальном времени является самой современной модификацией ПЦР. Это чувствительный, быстрый и более технологичный метод, который может быть использован для массового анализа образцов от млекопитающих и птиц на наличие РНК разных подтипов вируса гриппа А. Тест-система с успехом апробировалась при скрининге полевого материала, что позволяет рекомендовать ее для массового изучения образцов, полученных от животных и человека. Данный анализ был адаптирован к отечественным реагентам, что существенно для проведения массовых исследований.

С использованием разработанных тест-систем в 2005 г. было проведено исследование более 400 образцов клоакальных смывов, полученных от диких птиц Приморского края. Кроме того, тест-система была проверена на 350 образцах, полученных от диких птиц из Астрахани. Были проверены 150 проб от диких птиц в районе озера Чаны. Были также проверены 78 образцов, полученные из Новосибирской области во время эпизоотии. Исследовали образцы из Астрахани, Кургана, Калмыкии, Китайской Народной Республики, Сибири и других областей. Всего исследовано около 4000 образцов. Описанные тест-системы успешно прошли Государственные контрольные испытания и имеют сертификационные документы.

Разработка технологии микрочипов для диагностики гриппа.

Одной из современных технологий является создание микрочипов (биочипов), основанных на гибридизации нуклеиновых кислот. Данная технология разработана совместно НПО НАРВАК, НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН, НИИ молекулярной биологии им. Энгельгарда РАН для определения и дифференциации вируса гриппа А подтипов Н1-Н15, N1-N2 (6). Микрочип позволяет в короткое время (несколько часов) не только определить наличие вируса гриппа А, но и дифференцировать подтипы вируса гриппа. Технологически, анализ происходить следующим образом: с использованием разработанных универсальных праймеров, специфичных гену гемагглютинина вируса гриппа А, и гену нейраминидазы, получают амплификаты методом ПЦР с использованием РНК, выделенной из биологических образцов. После этого, проводится гибридизации на микрочипе, который содержит набор зондов, специфичных к каждому из подтипов и меченых флюоресцентным красителем. Если гибридизации не произошло, цвет нанесенного зонда не меняется. Если гибридизация произошла – изменяется цвет зонда. Считывание и документирование происходит с использованием специального прибора, который сравнивает каждый зонд с положительным и отрицательным контролем.

По затратам средств и времени один микрочип эквивалентен 17 реакциям (ПЦР). В результате применения микрочипа для анализа образцов из Новосибирской области в 2005 г. сразу было установлено, что это H5N1. Разработанные микрочипы проходят лабораторные испытания. Внедрение нового метода требует дополнительных испытаний, комиссионных испытаний и получения сертификационных документов.

Анализ первичной структуры генома вирусов гриппа (секвенирование)

Вирус гриппа генетически чрезвычайно изменчив и этим опасен. Изменения свойств вируса могут происходить как из-за изменения генов (мутации), так и в ходе обмена генами (реассортация). Поэтому всегда есть угроза появления опасных гибридов: в 1918 г. это был Н1N1, а сегодня это может быть Н5N1. Для лучшего понимания и прогнозирования ситуации, для изучения происхождения и эволюции штаммов вируса гриппа применяют метод секвенирования. Сегодня секвенирование фрагментов вирусного генома является уже обязательным требованием при возникновении новых или спорных вирусных вариантов. Для вируса гриппа установлено, что его патогенность связана с последовательностью аминокислотных остатков в т.н. "сайте протеолитического разрезания" гемагглютинина. Поэтому сегодня этот сайт всегда определяют у выделяемых вирусов гриппа. Раньше у птиц на территории России находили вирус подтипа Н5 с "сайтом протеолитического разрезания" как у низко патогенных штаммов. Сегодняшний вирус Н5N1 имеет "сайт протеолитического разрезания" такой же как у высоко патогенных штаммов и поэтому высоко патогенный для птиц.

Грипп остается непредсказуемой инфекцией в настоящее время. Мир может оказаться беззащитным перед новым высоко патогенным пандемическим вариантом, вероятность возникновения которого довольно велика. Поэтому только постоянный мониторинг с использованием современных средств диагностики позволит своевременно выявить, локализовать и обезвредить очаги инфекции.

В отделе молекулярной биологии НПО НАРВАК и в лаборатории молекулярной диагностики Института вирусологии им. Д. И. Ивановского постоянно проводятся молекулярные исследования вируса гриппа с использованием самых современных методик. Данные исследования могут существенно помочь практическим ветеринарным специалистам. Разработаны две тест-системы на основе ПЦР для определения РНК вируса гриппа А и дифференцирования двух подтипов Н5 и Н7 и тест-система для определения РНК вируса гриппа А подтипа Н5 методом ПЦР в реальном времени. Тест-системы успешно прошли комиссионные испытания в 2005 г., имеют все сертификационные документы и могут быть использованы в региональных ветлабораториях.

1. ЛьвовД.К. Жданов В. М. // Вопр. Вирусол. – 1982. –N 4. – С. 17-20

2. Brown, I. H., Harris P.A., McCauley J.W, Alexander D.J. .// J. Gen. Virol. – 1998. - Vol. 79. - Р. 2947–2955.

3. Capua I, Alexander DJ. // Acta Trop. - 2002 –Vol. 83. N° 1. – P. 1-6. Review.

4. Capua I, Mutinelli F, Pozza MD, Donatelli I, Puzelli S, Cancellotti FM . // Acta Trop. - 2002. – Vol. 83. - N 1. – P.7-11.

5. Fanning T.G., Slemons R.D., Red A.H., Janczewski T.A., Dean J., Taubenberg J.K. 1917 // Journal of Virology. – 2002. - Vol. 76. - No 15. - P. 7860-7862.

6. Fesenko Е. Е, D.Kireev, D.A. Gryadunov, D.A.Khodakov, A.I. Myznikova, V.M. Mikhailovich, T.V.Grebennikova, A.S. Zasedatelev.// Международный конгресс "Современные проблемы генетики". –Минск. – 2005

7. Li, Wang J. Smith G. J. D. // Nature. - 2004. – Vol. 430. - P. 209-213.

9. Recommended laboratory tests to identify avian influenza A virus in specimens from humans • WHO Geneva • June 2005.

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Левченко Наталья Витальевна, Ефременко Виталий Иванович

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Левченко Наталья Витальевна, Ефременко Виталий Иванович

13. Biller, D.H. Vaginal vault prolapsed: identification and surgical options / D.H. Biller, G.W. Davila // Cleve Clin.J.Med. - 2005. - Vol.72, №4. - P. 1-8.

14. Lang, J.H. Estrogen levels and estrogen receptors in patients with stress urinary incontinence and pelvis organ prolapsed / J.H. Lang, L. Zhu, Z.J. Sun, J. Chen // Int. J. Gynecol.Obstet. - 2003. -Vol.80. - P 35-39.

15. Mouritsen, L. Classification and evaluation of prolapsed / L. Mouritsen // Best. Pract. Res. Clin. Ob-stet.Gynaecol. - 2005. - Vol.19. - P. 895-911.

16. Mouritsen, L. Symptoms, bother and POPQ in women referred with pelvic organ prolapsed / L. Mouritsen, J.P Larsen // Int. Urogynecol. J. Pelvic Floor Dysfunct. - 2003. - Vol.14. - P. 122-127.

17. Neuman, M. Advanced mesh implants for vaginal pelvic floor reconstruction: report of 150 Prolift operations / M. Neuman, M. Friedman // Abstract International Urogynecologi-

cal Association Congress, Cancun June 2006.

18. Perioperative outcomes of tension free vaginal mesh procedures following introduction to a teaching servis / M. Alperin, R. Ellison, G. Sutkin, PA. Moalli [et al.] // Abstract AUGS meeting 2007 in: Journal of Pelvic Medicine & Surgery. - 2007. -Vol.13, №.5. - P 308.

19. Reisenauer, C. Anatomical conditions for pelvic floor reconstruction with polypropylene implant and its application for the treatment of vaginal prolapsed / C. Reisenauer, A. Krischniak, U. Drews,

D. Wallwiener // European Journal of Obstetrics & Gynecology and reproductive Biology. -2007. -Vol.131. - P. 214-225.

20. Transvaginal mesh repair of pelvic organ prolapsed: short term outcomes from a prospective multicenter study / D. Altman, T. Vairynen, M. Ellstrom Engh, C. Falconer [et al.] // Abstract International Continence Society congress, Rotterdam, 2007.

ПРИМЕНЕНИЕ СЕТЧАТЫХ ЭНДОПРОТЕЗОВ

В ЛЕЧЕНИИ ПРОЛАПСА ГЕНИТАЛИЙ

С.А. ГАСПАРЯН, Е.П. АФАНАСОВА,

Проведен анализ результатов оперативного лечения с 2007 по 2009 год 85 больных женщин с простыми и осложненными формами пролапса гениталий с использованием синтетических материалов фирм -производителей АМС, Джонсон и Джонсон с целью определения эффективности хирургического лечения. Показана высокая эффективность реконструктивных пластических хирургических вмешательств с использованием синтетических сетчатых эндопротезов в лечении генитального пролапса, а также относительно низкая частота послеоперационных осложнений. Вопрос о преимуществах и недостатках использования синтетических эндопротезов различных фирм требует дальнейшего изучения.

Ключевые слова: системы РгоШ, Peridgi и Apodgi для реконструкции тазового дна, недифференцированная дисплазия соединительной ткани, интра- и послеоперационные осложнения

EXPERIENCE OF GENITALS PROLAPSE TREATMENT

USING RETICULAR ENDOPROSTHESES

GASPARYAN S.A., AFANASOVA E.P.,

Analysis of the results of 85 women treatment using AMS and Jonson & Jonson synthetic materials was made to study the effectiveness of surgical correction of simple and complicated forms of genitals prolapse. The data obtained showed the high efficiency of reconstructive plastic surgery in treatment of genitals prolapse using synthetic reticular endoprostheses, relatively low frequency of postoperative complications. Advantages and disadvantages of different synthetic endoprostheses require further accumulation of experience.

ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКА ВИРУСА ГРИППА ПТИЦ В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ, СОДЕРЖАЩИХ ПАТОГЕН В НИЗКИХ КОНЦЕНТРАЦИЯХ

Н.В. Левченко1, В.И. Ефременко2 Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт 2Ставропольская государственная медицинская академия

Левченко Наталья Витальевна, младший научный сотрудник Ставропольского научно-исследовательского противочумного института,

тел.: 89283217618; e-mail: efremenko26@mail.ru.

Ефременко Виталий Иванович, доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, заведующий кафедрой биологической химии СтГМА, тел.: 89624402261.

Проблема возникновения новых и возвращающихся инфекционных болезней, поражающих население государств, расположенных на различных континентах, до настоящего времени не теряет своей актуальности. К таким инфекциям относится грипп птиц, который в начале ХХ! века приобрел способность вызывать заболевания человека при контакте с больной птицей [1, 2,

5, 6, 9]. В 2009 году в 15 странах выявлено свыше 400 случаев тяжелых заболеваний человека с высокой летальностью, вызванной гриппом птиц H5N1, однако в нашей стране заболевание людей этой инфекцией не зарегистрировано [4]. Вместе с тем, начиная с 2005 года, в различных регионах России на путях миграции перелетных птиц отмечались быстро распространяющиеся эпизоотии среди дикой и домашней птицы, вызванные вирусом высокопатогенного гриппа птиц серотипа H5N1, что потребовало принятия эффективных противоэпидемических мер по защите от данного заболевания не только домашней птицы, но и людей [7]. Грипп птиц - высоко контагиозная энтеральная инфекция, способная инфицировать все виды пернатых с поражением у них паренхиматозных органов. Основными распространителями в природе вирусов гриппа птиц, в том числе высокопатогенных, считаются дикие мигрирующие утки, проявляющие к данному возбудителю относительную устойчивость и распространяющие инфекцию через фекальные массы в водоемы. В водоемах вирус сохраняется длительное время особенно при низкой температуре воды, при контакте с которой происходит заражение здоровой птицы [6]. При этом концентрация вируса гриппа птиц в воде водоемов зачастую бывает настолько низкой, что все известные лабораторные методы исследования не позволяют обнаружить его присутствия.

Цель исследования: разработка новых лабораторных диагностических систем, обеспечивающих выявление возбудителя гриппа птиц в объектах окружающей среды с низкой концентрацией патогена.

Материал и методы. Вирус гриппа птиц, депонированный в государственную коллекцию вирусов как Grebe / Novosibizsk / 29 / 05 (H5N1), выращенный роллерным способом в культуре клеток СПЭв и инактивированный p-пропиолактоном, а также иммунную асцитическую жидкость мышей, иммунизированных данным вирусом, получали из ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН в рамках совместно выполняемой научной темы. Специфические иммуноглобулины класса G (IgG) выделяли из асцитической жидкости фракционированием каприловой кислотой, затем ковалентно иммобилизировали на поверхность гранулированных магнитных иммуносорбентов, полученных нами на основе алюмосиликата с магнитным порошком и полиглюкином, активированных натрием перхлоратом за счет наличия в структуре сорбентов альдегидных групп. Данный сорбент имел удельную поверхность 66 м2/г, объем пор - 1,24 см3/г и их радиус - 38 нм и прочно связывал иммуноглобулины (IgG) против вируса гриппа птиц.

Статистическую обработку полученных результатов проводили, оценивая дисперсию, стандартное отклонение, доверительный интервал выборки из результатов эксперимента, с использованием компьютерной

программы Microsoft Office Excel, 2007.

Результаты и обсуждение. Традиционными методами выявить возбудитель гриппа птиц в водных объектах окружающей среды затруднительно в связи с тем, что его концентрация в водоеме значительно ниже порога чувствительности известных методов диагностики. Для обеспечения селективного концентрирования вируса гриппа птиц из проб большого объема водной среды использованы твердофазные магнитные иммуносорбенты (МИС). В предварительных исследованиях была показана возможность таких сорбентов концентрировать на своей поверхности инактивированный вирус гриппа птиц, находящийся в 5000 мл водопроводной воды, содержащей 10 нг и выше патогена. После концентрирования на МИС вирус специфически обнаруживали с использованием иммуноферментного анализа (ИФА) и ОТ-ПЦР [3]. Вместе с тем в открытых водоемах из-за очень низкой концентрации вируса в воде возникает необходимость его концентрирования в пробах, объем которых может достигать несколько сотен литров воды. С этой целью нами была сконструирована установка для микробиологического (вирусологического) мониторинга, на которую получен патент РФ на полезную модель [8].

Исследуемые опытные и контрольные взвеси в объеме 10 мкл наносили на предметное стекло и микроскопировали. Прибором, регистрирующим уровень свечения магнитных гранул, служил люми-

несцентный микроскоп ЛЮМАМ Р-8, оборудованный фотометрической насадкой ФМЭЛ-14. К насадке подсоединяли источник тока УБПВ-1 и вольтметр цифровой универсальный В7-76. Рабочее напряжение составляло 800-900 В, увеличение объектива х40 и окуляра х10. Применялись возбуждающие светофильтры БС-8-2, СЗС-7-2, ФС-1-6. Диаметр зонда фотометрической насадки, с площади которого выявляли уровень свечения МИС, составлял 0,5 мм. После обнаружения в поле зрения гранул сорбента закрывали полевую диафрагму и снимали цифровые показания уровня свечения 10-15 гранул на вольтметре. Определяли среднеарифметические значения величины флуоресценции опытных, контрольных гранул и пространства между ними - фона. Интенсивность флуоресценции МИС (М) представляла собой разницу между среднеарифметическими показателями уровня свечения гранул и фона: (М)=М гранул -М фона. За положительные принимались результаты, при которых уровень флуоресценции опытных гранул в 2 и более раз превышал аналогичный показатель контрольных.

В результате трехкратного испытания данного способа установлена возможность обнаружения низких концентраций антигенов вируса гриппа птиц в воде, которые концентрировались на поверхности МИС с последующим их выявлением методом КИФА. При этом отношение уровня флуоресценции опытных гранул МИС к контрольным составляло 2,1-2,3. Проведенные исследования показали возможность индикации вируса гриппа птиц с использованием МИС в КИФА, включая пробы внешней среды (вода) с очень низкой концентрацией патогена.

Дисперсия случайной выборки из результатов эксперимента по определению чувствительности МИС + КИФА (девять результатов с чувствительностью 10 нг/ мл, один - 5 нг/мл) составила 2,5, стандартное отклонение - 1,5811, доверительный интервал - 3,5764.

Наличие вируса гриппа птиц Н5Ж на МИС было подтверждено также в опытных пробах, в отличие от контрольных, при использовании ИФА и ОТ-ПЦР в соответствии с описанными нами ранее методическими приемами [3].

Дисперсия случайной выборки из результатов эксперимента по определению чувствительности МИС + ИФА (восемь результатов с чувствительностью 10 нг/ мл, два - 5 нг/мл) составила 4,4444, стандартное отклонение - 2,1082, доверительный интервал - 4,7687.

Дисперсия случайной выборки из результатов эксперимента по определению чувствительности МИС + ОТ-ПЦР (восемь результатов с чувствительностью 10 нг/мл, два - 5 нг/мл) составила 4,4444, стандартное отклонение - 2,1082, доверительный интервал -4,7687.

Заключение. Эффективный вирусологический мониторинг вируса гриппа птиц в водных объектах окружающей среды возможен лишь при сочетанном использовании магнитных иммуносорбентов и инди-

кационных методов количественного иммунофлуо-ресцентного анализа, иммуноферментного анализа, обратной транскрипции с последующей полимеразной цепной реакцией, одновременно сочетающих в себе способность осуществлять динамическое, селективное концентрирование патогена из загрязненных проб большого объема с высокой чувствительностью и специфичностью определения патогена.

1. Бектемиров, Т.А. Птичий грипп и возможная пандемия / Т.А. Бектемиров // Биопрепараты.

- 2005. - № 17. - С. 14-16.

2. Гендон, Ю.З. Эпизоотии гриппа птиц и борьба с ними / Ю.З. Гендон // Журн. микробиол. - 2006.

3. Ефременко, В.И. Экспериментальные данные по выявлению вируса гриппа птиц с помощью магнитных иммуносорбентов / В.И. Ефременко, Д.К. Львов, П.Г. Дерябин [и др.] // Вопросы вирусологии. - № 3. - 2008. - С. 43-45.

4. Крылов, П.С. Аминокислотные замены в гемаг-глютинине вируса гриппа подтипа H5, влияющие на антигенную специфичность и вирулентность вируса / П.С. Крылов, И.А. Руднева, Т.А. Тимофеева [и др.] // Вопр. вирусол. - 2009. -Т.54, № 5. - С. 14-19.

5. Липатов, А.С. Эволюция вирусов гриппа птиц H5N1 с 1997 по 2004 г. в Южной и ЮгоВосточной Азии / А.С. Липатов, Ю.А. Смирнов, Н.В. Каверин, РГ. Вебстер // Вопросы вирусологии. - 2005. - № 4. - С. 11-17.

6. Львов, Д.К. Популяционные взаимодействия в биологической системе: вирус гриппа А-дикие и домашние животные - человек; причины и последствия проникновения на территорию России высокопатогенного вируса гриппа A / H5N1 / Д.К. Львов // Журн. микробиол. - 2006.

7. Онищенко, Г.Г. Ситуации заболеваемости гриппом птиц в мире и в Российской Федерации. Совершенствование надзора и контроля за гриппом при подготовке к возможной пандемии / Г.Г. Онищенко // Журн. микробиол. -2006. - № 5. - С. 4-17.

8. Пат. 64784 РФ, МПК G01N 33/553, C12M 1/00. Установка для микробиологического мониторинга объектов водной среды / В.И. Ефременко, А.Л. Столяров, Э.М. Игуменов, А.М. Игуменов, Е.Н. Афанасьев, А.В. Таран, И.В. Жарникова, Н.В. Левченко, Т.В. Жарникова, С.А. Курчева (РФ). - № 2006144331; Заявлено 12.12.2006; Опубл. 10.07.2007 г. Бюл. №

9. Peiris, J.S. Avian influenza virus (H5N1): a threat to human health / J.S. Peiris, M.D. de Jong, Y Guan // Clin. Microbiol. Rev. - 2007. - Vol. 20. - P. 243267.

ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКА ВИРУСА ГРИППА

ПТИЦ В ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ,

В НИЗКИХ КОНЦЕНТРАЦИЯХ

Н.В. ЛЕВЧЕНКО, В.И. ЕФРЕМЕНКО

Разработаны диагностические тест-системы, обеспечивающие выявление вируса гриппа птиц в воде открытых водоемов, при контакте с которой происходит заражение здоровой птицы. При этом концентрация вируса в воде водоемов зачастую бывает настолько низкой, что все известные лабораторные методы исследования не позволяют обнаружить его присутствие.

Разработанные диагностические тест-системы позволяют с высокой специфичностью обнаруживать вирус гриппа птиц, присутствующий в 200 литрах воды в количестве 50 нг.

Ключевые слова: вирус гриппа птиц, магнитные иммуносорбенты, иммунобиологические и геннодиагностические системы

AVIAN INFLUENZA VIRUS EXPRESS DIAGNOSTICS

IN THE ENVIRONMENTAL SAMPLES WITH LOW

CONCENTRATION OF THE PATHOGEN

LEVCHENKO N.V., EFREMENKO V.I.

The authors have developed the diagnostic test-systems to detect avian influenza virus in the open water reservoirs if it contains the pathogen the healthy birds get infected by contact with open water. The virus concentration in an open water reservoirs frequently is so low that all known methods usually used do not allow detecting the presence of the virus.

These test systems are the magnetic immunosorbents which are selectively concentrated virus on its surface due to antigen-antibody reaction. Avian influenza virus isolation was performed by pumping of several hundred liters of liquid volume through the sorbents of the installation “AQUADIAMAG”.

Later the virus is detected by specific immunoglobulins labeled by flyuorestseinizotiotsiats during the quantitative immunofluorescent analysis, or labeled by enzyme - in ELISA and polymerase chain reaction with reverse transcription.

The above diagnostic test system allows a high specificity detection of 50 ng of avian influenza virus in 200 liters of water.

Key words: avian influenza virus, Magnetic immunosorbents, immunobiological and genetic diagnostic systems

ТАКТИКА АКТИВНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ТРОМБОЭМБОЛИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ ЭНДОПРОТЕЗИРОВАНИИ КРУПНЫХ СУСТАВОВ

А.В. Алабут Ростовский государственный медицинский университет

Частота симптомных тромбоэмболических осложнений при эндопротезировании тазобедренного сустава на фоне тромбопрофи-лактики составляет, по разным данным, от 1,3% до 3,4%, при эндопротезировании коленного сустава - от 1,7% до 2,8% [1]. Частота фатальных тромбоэмболий колеблется от 1% до 2,3%, нефатальные тромбозы развиваются в 7,9-15,2% случаев [4]. При эндопротезировании тазобедренного сустава среднее время до развития тромбоза глубоких вен ориентировочно составляет 21 день, до развития тромбоэмболии легочной артерии -34 дня [5]. При эндопротезировании коленного сустава среднее время до развития тромбоза глубоких вен - 20 дней, среднее время до развития тромбоэмболии легочной артерии значительно меньше - в среднем составляет 12 дней.

Алабут Анна Владимировна, травматолог-ортопед, кандидат медицинских наук, заведующая отделением ортопедии и реконструктивно-пластической хирургии Ростовского государственного медицинского университета, тел.: (863)2985182, 89185585182; e-mail: alabut@mail.ru.

Риск летальных исходов от тромбоэмболических осложнений после эндопротезирования тазобедренного сустава сохраняется достаточно высоким (4-20%) в течение шести месяцев [2]. Основные факторы риска смерти: пожилой возраст, мужской пол, низкая оценка физического статуса по шкале ASA (Американское общество анестезиологов) перед операцией, сердечно-сосудистые заболевания - являются довольно частыми в группе больных, которым показано эндопротезирование суставов нижних конечностей.

Цель исследования: разработка активной перио-перационной тактики ведения больных, направленной на уменьшение летальности от тромбоэмболических осложнений.

Материал и методы. Проведен анализ лечения 104 больных, которым выполнялось эндопротезирование коленного сустава, и 121 больного, которому выполняли замещение тазобедренного сустава. С целью активного выявления патологии сосудистого русла всем больным в предоперационном периоде выполняли триплексное исследование вен и ультразвуковое исследование артерий нижних конечностей. При выявлении патологии вен и артерий осуществлялись