Цисты лямблий препарат с люголем

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Корниенко Елена Александровна, Минина С. Н., Фадина С. А., Лобода Т. Б.

Инвазированность лямблиями среди детей в мире составляет, по данным ВОЗ, 15-20%. В России ежегодно регистрируется более 130 тыс. случаев лямблиоза , из которых более 70% составляют дети в возрасте до 14 лет. Проведенное авторами осбледование 124 детей с лямблиозом показало, что лямблиоз у детей всегда вызывает формирование хронического дуоденита, в 55% случаев с лимфостазом, в 45% с атрофией слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки. Хронический дуоденит при лямблиозе в 40% сопровождается дуоденогастральным рефлюксом, в 88% развитием лактазной недостаточности, в 81% функциональными расстройствами билиарной системы и во всех случаях нарушением микробиоценоза кишечника. Наряду с клиническими проявлениями болезни ученые изучили иммунологические изменения у детей с лямблиозом , а также оценили информативность различных методик диагностики, эффективность медикаментозного лечения. Авторы продемонстрировали, что монотерапия любым из противолямблиозных препаратов (метронидазол, нифуратель, альбендазол) имеет низкую эффективность. Мощным комплексным действием на многие звенья патогенеза лямблиоза обладают Saccharomyces boulardii .

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Корниенко Елена Александровна, Минина С. Н., Фадина С. А., Лобода Т. Б.

Clinical picture, diagnostics and treatment of giardiasis in children

According to the WHO, giardiasis incidence rate in children in the world is 15 to 20%. In Russia, over 130,000 cases of giardiasis are registered annually, of which children under 14 years account for more than 70%. The study of 124 children with giardiasis conducted by the authors has shown that giardiasis in children always triggers development of chronic duodenitis, in 55% of cases that coupled with lymphostasis, in 45% that with atrophy of duodenum mucous lining. In 40% of cases, chronic duodenitis with giardiasis is accompanied with duodenogastric reflux, in 88% with development of lactase deficiency, in 81% by functional biliary system distress and in all cases with intestinal tract microbiocenosis distress. Along with clinical manifestations of the disease, the researchers have studied immunological modifications in children with giardiasis , and have evaluated the information content of various diagnostic techniques, efficiency of medication. The authors have demonstrated that monotherapy with any of antigiardiasis drugs (metronidazole, nifuratel, albendozole) has low efficiency. Saccharomyces boulardii have a powerful comprehensive effect on many links of giardiasis pathogenesis.

Е.А. Корниенко1, С.Н. Минина2, С.А. Фадина2, Т.Б. Лобода2

1 Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия

2 Детская городская клиническая больница № 5 им. Н.Ф. Филатова, Санкт-Петербург

Клиника, диагностика и лечение лямблиоза у детей

Корниенко Елена Александровна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой гастроэнтерологии факультета повышения квалификации и переподготовки врачей Санкт-Петербургской педиатрической медицинской академии, президент Санкт-Петербурского педиатрического научного общества гастроэнтерологов

Адрес: 192289, Санкт-Петербург, ул. Бухарестская, д. 134, тел.: (812) 701-65-74 Статья поступила: 10.03.2009 г., принята к печати: 14.07.2009 г.

Инвазированность лямблиями среди детей в мире составляет, по данным ВОЗ, 15-20%. В России ежегодно регистрируется более 130 тыс. случаев лямблиоза, из которых более 70% составляют дети в возрасте до 14 лет. Проведенное авторами осбледование 124 детей с лямблиозом показало, что лямблиоз у детей всегда вызывает формирование хронического дуоденита, в 55% случаев с лимфостазом, в 45% — с атрофией слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки. Хронический дуоденит при лямблиозе в 40% сопровождается дуоденогастральным рефлюксом, в 88% — развитием лактазной недостаточности, в 81% — функциональными расстройствами билиарной системы и во всех случаях — нарушением микробиоценоза кишечника. Наряду с клиническими проявлениями болезни ученые изучили иммунологические изменения у детей с лямблиозом, а также оценили информативность различных методик диагностики, эффективность медикаментозного лечения. Авторы продемонстрировали, что монотерапия любым из противо-лямблиозных препаратов (метронидазол, нифуратель, альбендазол) имеет низкую эффективность. Мощным комплексным действием на многие звенья патогенеза лямблиоза обладают Saccharomyces Ьои1аг^\\.

Ключевые слова: лямблиоз, инвазия, копроскопия, Saccharomyces Ьои1аг^\\.

Лямблиоз (син.: Gardiasis) — наиболее широко распространенная протозойная патология у детей. Согласно определению ВОЗ, под лямблиозом подразумевается любой случай инвазии лямблиями, как клинически явный, так и бессимптомный.

По данным ВОЗ, инвазированность лямблиями среди детского населения в мире составляет 15-20% [1]. Лямблиоз выявляется во всех странах мира, но наиболее распространен в странах Африки, Азии и Северной

E.A. Kornienko1, S.N. Minina2, S.A. Fadina2, T.B. Loboda2

1 Saint-Petersburg State Pediatrics Medical Academy

2 Children's City Clinical Hospital No. 5 Named After N.F. Filatov, Saint-Petersburg

Clinical picture, diagnostics and treatment of giardiasis in children

According to the WHO, giardiasis incidence rate in children in the world is 15 to 20%. In Russia, over 130,000 cases of giardiasis are registered annually, of which children under 14 years account for more than 70%. The study of 124 children with giardiasis conducted by the authors has shown that giardiasis in children always triggers development of chronic duodenitis, in 55% of cases that coupled with lymphostasis, in 45% — that with atrophy of duodenum mucous lining. In 40% of cases, chronic duodenitis with giardiasis is accompanied with duodenogastric reflux, in 88% — with development of lactase deficiency, in 81% — by functional biliary system distress and in all cases with intestinal tract microbiocenosis distress. Along with clinical manifestations of the disease, the researchers have studied immunological modifications in children with giardiasis, and have evaluated the information content of various diagnostic techniques, efficiency of medication. The authors have demonstrated that monotherapy with any of antigiardiasis drugs (metronidazole, nifuratel, albendozole) has low efficiency. Saccharomyces boulardii have a powerful comprehensive effect on many links of giardiasis pathogenesis.

Key words: giardiasis, infestation, scatoscopy, Saccharomyces boulardii.

ПАТОГЕНЕЗ И ПАТОМОРФОЛОГИЯ

Представители рода Giardia trophozoites в настоящее время классифицированы в 3 вида на основе морфологических критериев: G. muris, G. agilis и G. intestinalis, а среди G. intestinalis выделяют около десятка подвидов. Патогенной для человека и большинства млекопитающих считается только G. lamblia. Доказательств того, что

2 других вида могут вызывать заболевания у людей, нет. G. muris инфицирует главным образом грызунов, птиц и рептилий, а G. agilis найдена только у амфибий. Различные штаммы G. intestinalis, включая G. lamblia, в настоящее время типированы с помощью изофер-ментного анализа, полимеразной цепной реакции (ПЦР), реакции экцистации in vitro и культурального метода. Эти исследования обнаружили внутривидовые различия паразита, а изоэлектронное выделение белка трофозои-да из 10 человеческих и животных источников подтвер-

дило гетерогенность в этих подвидах. Полученные данные ставят под сомнение возможность заражения человека G. intestinalis от животных.

Расшифровкой генома лямблий занимались ученые из Лаборатории морской биологии штата Массачусетс, США. В ходе экспериментов H. Morrison и ее коллегам удалось обнаружить несколько особых белков G. lamblia, которые могут служить потенциальной мишенью для воздействия лекарств. По строению эти белки значительно отличаются от человеческих, поэтому прицельно воздействующие на них лекарственные препараты, если таковые будут созданы, станут безопасны для человека [4]. Еще одно важное наблюдение касалось генов, с помощью которых лямблии могут уклоняться от иммунных атак организма хозяина. Это происходит вследствие постоянного изменения белков, расположенных на поверхности клетки. Гены, кодирующие эти белки у лямблий, разбросаны по всему геному, тогда как у других паразитов они концентрируются в одном месте [4]. Вероятно, этим свойством можно объяснить хроническое течение паразитоза у большинства больных.

Таким образом, морфологически лямблиоз всегда сопровождается хроническим дуоденитом, у половины детей — с признаками атрофии ворсин, у трети — с углублением крипт, практически во всех случаях имеется увеличение

ПЕДИАТРИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ /2009/ ТОМ 6/ № 4

Рис. 1. Морфологическая картина слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки при лямблиозе

Дуоденит, развивающийся при лямблиозе, сопровождается не только воспалительными и атрофическими изменениями слизистой оболочки, но и спазмом и дис-

Рис. 2. Частота изменений микробиоценоза кишечника при лямблиозе

Назначение и область применения

1. Принцип методики

2. Чувствительность метода

3. Оборудование и материалы

5. Приготовление рабочих растворов реактивов

6. Отбор и хранение проб

7. Ход исследования

8. Оценка результатов исследования

Дополнение к разделу 6. Отбор и хранение проб

Дополнение к разделу 7. Ход исследования

Приложение 1. Схема методики санитарно-паразитологического

исследования воды (последовательность операций)

Приложение 2. Цисты патогенных кишечных простейших и яйца

гельминтов, определяемые методикой

санитарно-паразитологического исследования воды

Приложение 3. Яйца гельминтов, определяемые методикой

санитарно-паразитологического исследования воды

Настоящие методические указания являются первым опытом методического обеспечения контроля качества воды питьевой, плавательных бассейнов и источников хозяйственно-питьевого водоснабжения по паразитологическим показателям, вновь внедренным в:

- СанПиН "Требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества" 2.1.4.559-96;

- СанПиН "Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды плавательных бассейнов" 2.1.2.568-96;

- СанПиН "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации" 3.2.563-96, разработанных в развитие Закона РСФСР "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" и предназначенных для паразитологов городских, районных, областных, краевых и республиканских центров госсанэпиднадзора и специалистов ведомственных лабораторий, осуществляющих контроль качества воды систем централизованного водоснабжения.

Методика предназначена для обнаружения цист патогенных простейших кишечника и яиц гельминтов в воде при осуществлении контроля качества воды по паразитологическим показателям в источниках хозяйственно-питьевого водоснабжения (поверхностных водоемах, ручьях, каптажах, колодцах, артезианских скважинах, в распределительной сети систем коммунального водоснабжения и плавательных бассейнах).

Цисты патогенных простейших кишечника и яйца гельминтов обнаруживаются при микроскопическом исследовании осадка, получаемого после центрифугирования не менее 4-кратно разведенного раствора флотанта, в который искомые паразитарные агенты попадают из осадка, смываемого с мембранных фильтров после фильтрации через них определенных объемов исследуемой воды. Осаждение цист простейших и яиц гельминтов происходит за счет резкого снижения плотности флотанта, которая после разведения становится ниже таковой паразитарных агентов.

Паразитарные патогены (цисты лямблий, амебы дизентерийной, балантидия кишечного, яйца гельминтов) могут быть обнаружены при содержании их в количестве не менее 1 экземпляра в 25 дм3 воды из водоисточников и в 50 дм3 воды питьевой.

3.1. Устройство для вакуумной фильтрации через мембранные фильтры: стационарное устройство, используемое для бактериологических и химических исследований в лабораториях водоочистных станций и центров ГСЭН (фильтровальный аппарат АФ, выпускаемый заводами Минжилкомхоза РФ; фильтровальный аппарат типа Рублевского или другой аналогичный; при отсутствии указанных стационарных установок может быть использован аппарат Гольдмана, колбы для фильтрования под вакуумом номинальной вместимостью 2000-5000 мл (ГОСТ 6514-63), водоструйный насос (ГОСТ 10696-75) или насос Комовского, а в полевых условиях - ручной велосипедный насос (или другой с алогичными свойствами).

3.2. Мембранные фильтры с размером пор 1-4 микрон и диаметром мембранного диска, соответствующим размерам фильтровальной ячейки фильтровального устройства, - обычно 35 +- 2 мм (фильтры мембранные нитроцеллюлозные N 6 Мытищинской экспериментальной фабрики ультрафильтров; фильтрующие мембраны Владипор марки МФА-МА N 10 Казанского ПО "Тасма", "Миллипор", "Прагопор", "Сарториус" или другие с аналогичными свойствами).

3.3. Лабораторная центрифуга, обеспечивающая 1500-2500 об./мин (600-650 g), позволяющая центрифугировать пробы воды объемом 10 мл (типа ОПН-3, ОПН-8, ЦЛС-31М со сменным ротором).

3.4. Холодильник электрический или газовый, поддерживающий температуру 4-6°С.

3.5. Термостат электрический с автоматическим терморегулятором и термометром с ценой деления 0,2°С (ТС-80 или аналогичный).

3.6. Микроскоп биологический (типа МБИ, "БИОЛАМ" и др.), снабженный препаратоводителем (типа СТ-12) и обеспечивающий увеличение от 50 до 900 крат.

3.7. Осветитель ОИ-19 для микроскопа или другой аналогичный.

3.8. Весы лабораторные для взвешивания в диапазоне 50 мг - 20 г (равноплечные ручные /аптекарские/ с разновесами, ВЛР-200 г или др.).

3.9. Денсиметры (ареометры типа I (АI) с пределами измерения от 1,000 до 1,400 кг/м3 (ГОСТ 1300-74).

3.10. Дозаторы пипеточные ПI-0,1, ПI-0,5, ПI-1,0 мл (ТУ 64-339-81).

3.11. Пинцет анатомический.

3.12. Кисти мягкие (из волоса белки, колонка или соболя) для живописи, NN 12-18.

3.13. Стаканы стеклянные высокие с носиком (ВН) номинальной вместимостью 50-100 мл (ГОСТ 10394-63).

3.14. Пробирки центрифужные градуированные (ПЦГ) емкостью 10 мл (ГОСТ 1770-64).

3.15. Стекла предметные 25 х 75 мм.

3.16. Стекла покровные 18 х 18, 24 х 24 мм (ГОСТ 6672-59).

3.17. Чашки биологические (Петри) по ГОСТу 25336-82.

3.18. Часы песочные на 3-5 мин или часы сигнальные.

3.19. Штативы лабораторные для пробирок (ТУ 64-1-707-80).

3.20. Емкости для отбора проб воды из нейтрального материала, пригодные для обеззараживания принятыми методами: канистры пластмассовые, емкостью 20-25 л, стеклянные бутылки, фляги молочные металлические емкостью 30-35 л, эмалированные бидоны.

3.21. Цилиндры измерительные с носиком 1-00, 1-25, 1-500 (ГОСТ 1770-74).

3.22. Колба 2-50-2, 2-100-2, 1-1000 (ГОСТ 1770-74).

3.23. Капельница для многократной дозировки по Манну (ГОСТ 9876-61).

3.24. Широкогорлые стеклянные или пластиковые флаконы емкостью 100-500 мл с притертыми или завинчивающимися крышками.

3.26. Иглы препаровальные.

4.1. Формальдегид 40%-ный (продажный).

4.2. Сульфат цинка семиводный (ZnSO4 х 7Н2O), х.ч.

4.3. Сахароза, ч.д.а.

4.4. Сульфат магния (MgSO4), ч.д.а.

4.5. Тиосульфат натрия по ГОСТу 244-76.

4.6. Вода дистиллированная по ГОСТу 6709-72.

4.7. Натрий хлористый, х.ч. (ГОСТ 4233-77).

4.8. Йод кристаллический, х.ч.

4.9. Калий йодистый (KJ), х.ч.

4.10. Эозин сухой, х.ч.

4.11. Метиленовый синий сухой, х.ч.

4.12. Кислота молочная, х.ч.

4.14. Пепсин (возможен искусственный).

4.16. Натрий двууглекислый, ч.д.а.

4.17. Спирт этиловый ректифицированный по ГОСТу 5962-67.

5.1. Флотанты, любой из 3-х названных:

- 33%-ный водный раствор семиводного сульфата цинка: 331 г семиводного сульфата цинка (ZnSO4 х 7H2O) растворяют в 1 дм3 кипящей дистиллированной воды;

- 30%-ный водный раствор сахарозы: 300 г сахарозы ч.д.а. растворяют в 1 дм горячей дистиллированной воды;

- раствор, состоящий из смеси насыщенных растворов сульфата магния, тиосульфата натрия и дистиллированной воды, соотношение компонентов 3:3:1.

После приготовления флотанта и снижения его температуры до 18°С контролируют его удельную плотность ареометром. Для выделения цист простейших и яиц гельминтов, представляющих непосредственную опасность заражения человека при заглатывании с водой, удельная плотность флотанта должна быть 1,3. Если величина этого показателя ниже, ее нужно откорректировать, добавляя более концентрированные растворы соответствующих веществ.

5.2. 2%-ный раствор Люголя: 1 г йода кристаллического и 2 г калия йодистого растворяют в 100 мл дистиллированной воды (первым растворяют калий йодистый), выдерживают в темноте при 37°С в течение 3 суток, после чего используют в работе.

5.3. 2%-ный водный раствор формалина: 1 часть продажного 40%-ного формальдегида растворяют в 20 частях дистиллированной воды.

5.4. Жидкость Барбагалло: приготовляют 3% формалина на физиологическом растворе (0,85%) хлорида натрия.

5.5. Приготовляют 1%-ный водный раствор эозина.

5.6. Приготовляют раствор, состоящий из 1 части метиленового синего и 50 000 частей дистиллированной воды.

5.7. Приготовляют смесь, состоящую из 0,5 г панкреатина, двууглекислой соды - 0,9 г, дистиллированной воды - 5 мл.

Отбор проб воды производится в чистые (желательно стерильные) емкости. Большие емкости - молочные фляги, металлические ведра и пр. могут быть предварительно обработаны путем обжига их внутренней поверхности с использованием этилового спирта.

Пробы необходимого объема могут доставляться в паразитологическую лабораторию без обработки или в целях облегчения их транспортирования - после предварительной обработки - концентрирования материала путем фильтрования на месте отбора проб, в лаборатории водопроводной станции и др. Пробы, не прошедшие предварительную обработку, могут храниться при температуре 15-20°С не более 2-х суток.

Питьевая вода исследуется в объеме 50 дм3; вода водоисточников - в объеме 25 дм3.

Исследуемый объем воды с помощью фильтровального устройства пропускает через мембранные фильтры (см. п.3.2). По мере замедления процесса фильтрации из-за загрязнения фильтра его заменяют новым, а использованные фильтры с осадком помещают в широкогорлую емкость (стаканчики ВН) с помощью стерильного пинцета и заливают исследуемой водой в количестве 10-50 мл для сохранения их во влажном состоянии.

По окончании фильтрации всей пробы осуществляется смыв осадка с фильтров. Каждый фильтр стерильным пинцетом опускается в стаканчик с дистиллированной водой; придерживая пинцетом фильтр, осторожно смывают осадок при помощи мягкой кисточки, затем фильтр еще раз прополаскивают в другой порции дистиллированной воды. По окончании отмывки всех фильтров кисточку также тщательно прополаскивают в небольшом объеме дистиллированной воды (5-10 мл). Процедура отмывки фильтров и кисточки требует особой тщательности во избежание возможных потерь цист простейших и яиц гельминтов.

Весь полученный смыв центрифугируют в пробирках емкостью 10 мл в течение 5 мин при 1500 об./мин (600g). Надосадочную жидкость сливают. При отсутствии необходимости определения жизнеспособных цист и яиц гельминтов осадок ресуспендируют в 6-8 мл 2%-ного водного формалина. Если предполагается определение жизнеспособности паразитарных патогенов, к осадку добавляют воду. Суспензии вновь центрифугируют в прежнем режиме, после чего удаляют надосадочную жидкость, а к осадку добавляют 3 мл одного из флотантов (предпочтительнее 33%-ный водный раствор семиводного сульфата цинка). Центрифугируют 5 мин при 2000 об./мин, после чего надосадочную жидкость переливают в центрифужную пробирку, разбавляют в 4 раза и более дистиллированной водой. Центрифугируют в прежнем режиме, удаляют надосадочную жидкость, а из осадка готовят препараты на предметных стеклах.

В зависимости от задач исследования препарат либо не окрашивают, либо подвергают окраске. Если нужно провести подсчет паразитарных агентов без определения их жизнеспособности или требуется визуальное определение вероятной жизнеспособности цист кишечных простейших и яиц гельминтов, препарат не окрашивается или его окрашивают 1 каплей 2%-ного раствора Люголя. Вероятную жизнеспособность цист лямблий можно определять, окрашивая препарат 1 каплей 1%-ного водного эозина.

Готовые препараты накрывают покровным стеклом и микроскопируют с использованием 100-600-кратного увеличения (объективы - 10х, 40х, окуляры - 10х, 15х) сухой оптической системы или водной иммерсии. Таким образом микроскопируется весь объем полученного осадка. При необходимости проводят визуальную оценку вероятной жизнеспособности цист лямблий и других простейших, а также яиц гельминтов.

При микроскопии подсчитывают число паразитарных патогенов во всем объеме осадка, что соответствует их числу во всей исследованной пробе, пересчитывают на содержание их в 1 л (дм3), одновременно определяют систематическую принадлежность обнаруживаемых паразитических организмов; идентификация их проводится по следующим признакам.

Цисты лямблий - овальная форма, размеры 10-14 микрон в длину и 6-10 микрон в ширину; незрелые цисты содержат 2 ядра, зрелые - 4; ядра находятся у переднего полюса цисты. Оболочка цисты отчетливо выражена и большей частью отстает от протоплазмы, что является одним из характерных отличий цист лямблий от цист других простейших. Внутри цисты вдоль по средней линии проходят две опорные нити - аксостили; в косом или поперечном направлении лежат характерные парабазальные тела (2 - в незрелых и 4 - в зрелых цистах), нередко заметен сложно свернутый жгутиковый аппарат.

Цисты амебы дизентерийной - округлая, редко овальная форма, размеры от 10 до 16 микрон; молодые цисты содержат 1-2 ядра с центрально расположенной звездчатой кариосомой, зрелые цисты содержат 4-6 ядер; в зрелых четырехядерных и незрелых двухядерных цистах ядра расположены в различных плоскостях; оболочка цист двухконтурная в виде светлого прозрачного ободка. Одноядерные цисты почти всегда содержат в большом количестве гликоген, который в виде крупной вакуоли с нерезкими очертаниями занимает обычно больше половины цисты и раствором Люголя окрашивается в темно-коричневый цвет.

Цисты балантидия кишечного - правильная круглая форма. Плотная двухконтурная оболочка. Средний размер около 50 микрон. Внутри цист имеется крупное бобовидное ядро. Протоплазма однородна, гликоген в ней распылен равномерно. Под оболочкой в некоторых цистах заметно углубление, представляющее собой редуцированный цитостом - органеллу, соответствующую началу пищеварительной трубки многоклеточных. Ресничный покров отсутствует. Ниже приводятся признаки, по которым идентифицируются яйца гельминтов, представляющих непосредственную угрозу заражения человека при заглатывании их с водой.

Яйца аскариды человеческой (свиной) - оплодотворенные яйца овальной или шаровидной формы. Наружная оболочка крупнобугристая, толстая, коричневого цвета (иногда встречаются яйца без наружной бугристой оболочки). Размер яиц 50-70 х 40-50 микрон. Яйцеклетка мелкозернистая и шаровидная, расположена в центре яйца.

Инвазионное яйцо (способное заразить при заглатывании), находящееся на последней стадии созревания, содержит внутри живую подвижную личинку, свернувшуюся кольцевидно или перекрестно.

Яйца токсокары (аскариды собачьей) - почти круглые, 65-75 микрон в диаметре, с нежноячеистой наружной толстой оболочкой темно-коричневого цвета, внутри яйца видна округлая зародышевая клетка. Зрелые инвазионные яйца содержат внутри подвижную свернувшуюся кольцом или перекрестно личинку.

Яйца власоглава - симметричные, имеют лимонообразную или бочонкообразную форму. Оболочка темно-коричневая, толстая. На обоих полюсах имеются светлоокрашенные пробковидные образования. Размеры яиц 50-54 х 23-26 микрон. В зрелых инвазионных яйцах видна подвижная личинка.

Яйца острицы - асимметричные. Одна сторона заметно уплощена, другая выпукла. Размеры 50-60 х 30-32 микрон. Оболочка тонкая, гладкая и бесцветная. Яйца могут быть на различных стадиях созревания, до головастикоподобной личинки включительно.

Яйца цепня карликового - оболочка яйца бесцветная, тонкая, гладкая. Форма овальная. Размер яиц 40 х 50 микрон, эмбриофора (зародыш) почти шаровидная (29 х 30 микрон), с длинными нитевидными придатками на полюсах.

Онкосферы тениид - овальная форма, размеры 31-40 х 2-30 микрон; имеют тонкую наружную оболочку и толстую радиально-исчерченную внутреннюю оболочку темно-коричневого цвета. Внутри онкосферы находится зародыш-эмбриофора с шестью зародышевыми крючьями.

Оценка вероятной жизнеспособности цист патогенных простейших и яиц гельминтов визуально проводится по следующим критериям, подтверждающим жизнеспособность:

- целостность наружной оболочки (отсутствие ее разрывов, вдавлений, выбухания, сморщивания);

- четкая внутренняя структура цисты или яйца: для цист - четко видны ядра, отсутствует зернистость (для цист лямблий дополнительно должны быть видны аксостили, жгутиковый аппарат, медиальное тело); для яиц гельминтов - наличие дробящейся зародышевой клетки или подвижной личинки (для аскарид, токсокар, власоглавов, остриц), попарное расположение зародышевых крючьев у живых и беспорядочное у мертвых онкосфер тениид и яиц карликового цепня;

- при окраске препарата 1%-ным водным раствором эозина жизнеспособные цисты лямблий не воспринимают окраску в течение первых 5 минут, мертвые окрашиваются сразу же в розовый цвет. Поэтому указанную окраску следует использовать до микроскопии только в том случае, когда на изучение препарата потребуется не более 5 минут. Часто просмотр мазка длится 15-30 минут, тогда 1%-ный водный эозин можно вводить аккуратно, не сдвигая препарат, под покровное стекло пипеткой в точке, где при предварительном просмотре уже обнаружены цисты лямблий;

- жизнеспособность онкосфер тениид и яиц аскарид, содержащих личинку, определяют путем окрашивания препарата смесью, содержащей метиленовый синий. Живые онкосферы и личинки, находящиеся внутри яиц аскарид, не окрашиваются в течение первых 15 минут. Мертвые окрашиваются сразу в синий цвет;

- жизнеспособность онкосфер тениид можно также определить по движению зародышей при воздействии на них пищеварительными ферментами. Для этого исследуемый осадок, содержащий онкосферы, помещают на часовое стекло в искусственный дуоденальный сок (см. п.5.7). Стекло ставят в термостат при 36-38°С на 4 часа. Живые зародыши освобождаются от оболочек, а мертвые - нет.

Оболочки жизнеспособных онкосфер растворяются также в подкисленном пепсине и в щелочном растворе трипсина через 6-8 часов при температуре 38°С.

В случае, если первичная обработка воды пробы (фильтрование) проводилась вне паразитологической лаборатории, использованные фильтры помещают в широкогорлый флакон, добавляют 10-15 мл исходной воды; закрывают флакон завинчивающейся или притертой крышкой, маркируют, указывая дату, место отбора, количество профильтрованной воды, и транспортируют в паразитологическую лабораторию для дальнейшего исследования. При невозможности исследования в день отбора материал хранят при 4°С не более суток; при отсутствии необходимости определения жизнеспособности цист кишечных простейших и яиц гельминтов материал хранят не более 3-4 суток после добавления в него формальдегида с таким расчетом, чтобы концентрация его в суспензии составила 2%.

Перед началом фильтрации мембранные фильтры должны быть подвергнуты 10-минутному кипячению в дистиллированной воде для удаления посторонних частиц из пор фильтров, препятствующих оптимальному проведению процесса фильтрации.

Схема выполнения методики санитарно-паразитологического исследования воды и изображения, определяемых с ее помощью цист кишечных патогенных простейших и яиц гельминтов, представлены в приложениях 1, 2, 3.

Цель исследований: определить терапевтическую эффективность отечественного антигельминтного препарата Тронцил в форме таблеток для лечения лямблиоза у собак. В статье представлен анализ литературных данных по распространению лямблиоза у человека, собак и кошек в РФ и за рубежом, и рекомендуемые средства терапии; приведены результаты опытов по использованию отечественного комбинированного антигельминтного препарата Тронцил в форме таблеток при терапии лямблиоза у собак.

Материалы и методы: в условиях собачьего приюта отобрали 20 особей, в фекалиях которых были обнаружены цисты лямблий Giardia spp. Для выявления цист возбудителя применяли ПЦР-диагностику полученных проб фекалий. С этой целью использовали тест-систему лаборатории ИЗОГЕН GenPak DNA PCR test - для обнаружения ДНК лямблий в биологических пробах человека и животных методом полимеразной цепной реакции. Детекцию PCR продукта проводили методом электрофореза в агаровом геле с бромистым этидием под УФ светом с длиной волны 320 нм. По наличию специфического фрагмента амплификации определённого размера судили о присутствии ДНК возбудителя в анализируемом образце.

Комплексный лекарственный препарат Тронцил задавали собакам, заражённым возбудителем лямблиоза, в течение 3-х дней подряд в дозе 1 таблетка на 10 кг массы животного.

Результаты и обсуждение: получена высокая эффективность при терапии лямблиоза, отмечено прекращение выделения цист собаками опытной группы. Одним из основных преимуществ препарата Тронцил является его большая эффективность по сравнению с применяемым для терапии лямблиоза препаратом метронидазол. Препарат Тронцил обеспечил большую степень безопасности. Нет никаких предупреждений и противопоказаний к препарату Тронцил. Его можно давать даже щенкам, начиная с 6-недельного возраста. Терапия с использованием препарата Тронцил может оказаться и очень полезным диагностическим инструментом в том смысле, что она часто используется для исключения гельминтозов и лямблиоза у собак с хронической диареей. Обычно, достаточно 3-х дневного курса терапии.

Ключевые слова: собаки, дети, лямблиоз, диагностика, терапия, противопаразитарный препарат, эффективность.

Лямблиоз - антропо-зоонозная инвазия, протекающая в клинической форме преимущественно с поражением различных отделов кишечника. Возбудителем лямблиоза является кишечное жгутиковое простейшее - Lamblia duodenalis, который распространён во всём мире и поражает всех позвоночных, включая человека. Лямблиоз широко распространён среди крыс, мышей, кроликов, собак, кошек, крупного рогатого скота (особенно телят), свиней и других видов животных. По данным Всемирной организации здравоохранения, ежегодно лямблиями заражаются около 200 млн. человек (страны Азии, Африки, Латинской Америки). Из них клинически лямблиоз проявляется у 500 тыс. человек (0,25%). В США и Великобритании лямблиоз относится к числу наиболее часто регистрируемых кишечных паразитов человека. Поражённость жителей, выявленная при массовых обследованиях, составляла в США 10-20%, Бразилии - 18%, Италии - 5,2%, Франции - 5,8%, Испании - 10,4%, Польше - 8%. По данным официальной отчётности в РФ в последние годы наблюдается рост заболеваемости лямблиозом. Регистрируется более 130 тысяч случаев лямблиоза в год, из них 70% составляют дети в возрасте до 14 лет [1]. Интенсивный показатель на 100 тысяч населения - 350 случаев среди детей [3]. В Российской Федерации регистрируется более 130 тысяч случаев лямблиоза в год, из них 70% составляют дети в возрасте до 14 лет [1]. Лямблиоз широко регистрируется во многих городах России, в странах Прибалтики, на Украине, в Молдавии, в странах Средней Азии и Закавказья. За рубежом - в США, Швеции, Англии, Франции и других странах регистрировались эпидемические

вспышки лямблиоза [4]. Источником заражения служит человек или животное, однако человеку принадлежит ведущая роль. Зараженные человек и животные выделяют зрелые цисты. Период выделения у человека цист начинается в среднем на 9-12-й день после заражения и может длиться многие месяцы. В 1 г фекалий содержится до 22 млн. жизнеспособных цист, а в среднем - 1,8 млн. цист. Механизм передачи инфекции - фекально-оральный, пути распространения возбудителя - контактный, пищевой, водный. Для лечения лямблиоза у человека используют обычно фуразолидон, метронидазол в комплексе с нистатином [7], трихопол, БАД танаксол и др.

У собак лямблиоз вызывает Giardia (Lamblia) spp. - один из наиболее распространённых паразитов этого вида животных, сходный по своим биологическим характеристикам с возбудителем лямблиоза у животных других видов и человека. Заболевание протекает в виде носительства, острых и хронических (рецидивирующих) нарушений со стороны различных органов и систем. Чаще всего данную инвазию сопровождают поражения тонкой кишки, что у части больных сопровождается аллергическими и неврологическими симптомами.

При лечении лямблиоза у собак основной целью является избавление кишечного тракта от цист. Ранее не было эффективных препаратов для препятствия выделению этого микроорганизма. Приходилось выбирать между препаратами с недостаточной эффективностью и препаратами с сильными побочными эффектами. Независимо от вида используемого лечения некоторые собаки ему не поддаются. В некоторых случаях лямблии становятся устойчивыми к определенному препарату или препаратам. Для лечения цистоизоспорозов применяют нитрофурановые

и сульфаниламидные препараты, ме ронидазол, химкокцид, ампролиум и другие кокцидиостатики. В теченииe многих лет метронидазол был лучшим препаратом для лечения лямблиоза у собак, но к нему возможна резистентность, В больших дозах метронидазол может вызвать серьезные неврологические нарушения. В терапии применяются также препараты на основе тинидазола, фуразолидона, мепакрина, некоторые препараты группы бензилмендазолов, (фенбендазола и оксифенбендазола). Многочисленные исследования, проведённые зарубежными авторами Barr S.C, Bowman D.D. et al. [9], Payne p. et al. [14]. Bowman D., Liotta J. et al. [2, 11]. Barutzki D., Schimmel A. et al. [10] Merle E., Olson M.E. et al. [12] Montoya A., Dado D. . et al. [13] относительно возможности применения комбинации празиквантела, пирантела памоата и фебантела для лечения гиардиоза (лямблиоза) у собак показали высокую эффективность . Учитывая важность и актуальность проблемы терапии лямблиоза у собак, а также данные, полученные зарубежными авторами на протяжении многих лет, целью наших исследований мы поставили изучение терапевтической эффективности отечественного антигельминтного препарата Тронцил в качестве средства для лечения лямблиоза у собак.

Данную работу проводили в период 2010-2011 гг. в условиях собачьего приюта Московской области. По результатам осмотра собак в течение первых семи дней эксперимента были отобраны 20 особей, в фекалиях которых обнаруживались цисты Giardia spp. Животные были разделены на две группы по 10 животных в каждой (при формировании групп пользовались методом пар-аналогов, оценивая собак по следующим параметрам: фенотипические признаки, возраст, масса, пол). Собаки первой группы получали препарат Тронцил в течение 3 дней в терапевтической дозе: 1 таблетка на 10 кг массы животного. Вторая группа была контрольной и животные не получали препарат. Животных содержали индивидуально в металлических клетках с деревянным настилом. Собаки во время проведения эксперимента не имели доступа друг к другу для предотвращения контаминации. В помещениях поддерживалась нормальная температура и влажность, ежедневно проводилась их уборка. Каждый день проводился клинический осмотр собак, оценивалось общее состояние и физиологические показатели. Фекалии собак собирали, подвергали необходимой обработке, данные

образцы хранили до завершения опыта в пластиковых контейнерах. Наличие цист Giardia spp. в пробах фекалий собак определяли с помощью флотационного метода с дальнейшим исследованием мазков фазово­контрастной микроскопией. Также для выявления цист возбудителя применяли ПЦР - диагностику полученных проб фекалий. С этой целью использовали тест-систему лаборатории ИЗОГЕН GenPak DNA PCR test - для обнаружения ДНК Giardia Lamblia инфекционных заболеваний в биологических пробах человека и животных методом полимеразной цепной реакции. Детекцию PCR продукта проводили методом электрофореза в агарозном геле с бромистым этидием под УФ светом с длинной волны 320 нм. По наличию специфического фрагмента амплификации определенного размера судили о присутствии ДНК возбудителя в анализируемом образце.

При использовании препарата Тронцил выделение цист Giardia spp. у собак прекратилось. Необходимо отметить, что, начиная с 6-х суток после окончания применения препарата, у некоторых собак из опытной группы обнаруживали цисты возбудителя. Данный феномен можно объяснить возникновением реинфекции, так как препатентный период у собак незначительный и может составлять порядка 5 дней. Выполнение зоогигиенических требований: купание животного и влажная уборка помещения, где в период терапии находится собака, значительно влияют на эффективность лечения. В пробах фекалий собак из контрольной группы методом ПЦР-диагностики в течение всего эксперимента обнаруживали присутствие возбудителя лямблиоза. Однако флотационный метод с фазово-контрастной микроскопией в некоторых случаях не выявлял цисты лямблий, что связанно с недостаточной чувствительностью метода, который не определяет цисты при их содержании ниже 10 тыс. на 1 грамм фекалий.

Высокую эффективность в элиминации возбудителя лямблиоза из организма собак показали различные комбинации пирантела, фебантела и празиквантела, в частности лекарственный препарат Тронцил. При использовании комплексного лекарственного препарата Тронцил в течение 3-х дней подряд в дозе 1 таблетка на 10 кг массы животного собакам, заражённым возбудителем лямблиоза, удалось добиться высокой эффективности при терапии данного заболевания, исключить

выделение цист собаками опытной группы. Одним из основных преимуществ препарата Тронцил является его большая эффективность по сравнению с препаратом метронидазол. Этот препарат обеспечивает большую степень безопасности. Нет никаких предупреждений и противопоказаний к препарату Тронцил. Его можно давать даже щенкам, начиная с 6-недельного возраста. Терапия с использованием препаратаТронцил может оказаться очень полезным диагностическим инструментом, так как она часто используется для исключения гельминтозов и лямблиоза у собак с хронической диареей. Обычно, достаточно 3-дневного курса терапии препаратом Тронцил, хотя иногда требуется повторное лечение. Неплохо также пролечить им бессимптомную собаку с положительным анализом в ситуации, когда собак в доме несколько, с тем, чтобы избежать заражения внешней среды.

1. Авдюхина Т.И., Константинова Т.Н., Кучеря Т.В., Горбунова Ю.П. Лямблиоз. //Учебное пособие. - Российская медицинская академия последипломного образования М.: РМАПО. Издание 3-е. 2003. - 34 С.

2. Боуман Д., Лиотта Дж. Терапия манифестной формы лямблиоза у собак. // Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние животные. М.: Колос, 2010. - №2 - С. 48 - 49.

3. Авдюхина Т.И. Лямблиоз. Клиническая паразитология //сост. А.Я. Лысенко, М.Г. Владимова, А.В. Кондрашин, под ред. А.Я. Лысенко. - Женева: ВОЗ, 2002. - глава 18. - С. 231 - 240.

4. Потапенко А.Я. Лямблиоз. Малая медицинская энциклопедия в 6 т. - М.: Медицинская энциклопедия, 1991- 96.-Т. З.-С. 158- 159.

5. Соловьёв М.М. Биология лямблий и взаимоотношения их с организмом хозяина (обзор литературы). // Медицинская паразитология и паразитарные болезни 1968. - № 6. - С. 720-726.

6. Соловьёв М.М. Строение и биология лямблий, их взаимоотношения с организмом хозяина. //Автореф. дис. д-ра биолог, наук. - М., 1973. - 42 с.

8. Шкаренко А.В. Лямблиоз у собак // <Электронный ресурс>- Режим

9. Barr S.C, Bowman D.D, Frongillo M.F., Joseph S.L. Efficacy of a drug combination of praziquantel, pyrantel pamoate, and febantel against giardiasis in dogs.Am. J. Vet.. Res. 1998, Sep. -59 (9). - P.1134-1136.

10. Barutzki D., Schimmel A., Schaper R. Efficacy of pyrantel embonate, febantel and praziquantel against Giardia spp. in naturally infected dogs. Giardia: the cosmopolitan parasite. Leverkusen, Germany, 2002, pp. 177 - 180.

11. Bowman D., Liotta J., Ulrich M., Charles S., Heine J., Schaper R. Treatment of naturally occurring, asymptomatic Giardia sp. in dogs with Drontal Plus flavour tablets. Parasitol. Res., 2009. - Suppl. 1. -V. 105. - P. 125-134.

12. Merle E., Olson M.E., Heine J. Synergistic effect of febantel and pyrantel embonate in eliminatin of Giardia in a gerbil model. Parasitol. Res., 2009. Aug; 105 Suppl 1:-P. 135-140.

13. Montoya A., Dado D., Mateo M., Espinosa C., Miro G. Efficacy of Drontal Flavour Plus (50 mg praziquatel, 144 mg pyrantel embonate, 150 mg febantel per tablet) against Giardia sp. in naturally infected dogs. Parasitol. Res. 2008. - V 103 (5). - P.l 141-1144.

14. Payene P., Dryden M., Ridley R., et al. Evaluation of the efficacy of Drontal Plus and Giardia Vax to eliminate cysts shedding in dogs naturally infected with Giardia spp. //JAWA. J.Am. Vet. Med. Assoc. 2002. - V. 220 (3). - P. 330-333.

Статья опубликована в Российском паразитологическом журнале: Том 36 Выпуск 2\2016, С. 229-233

лям
21.11.2016, 985 просмотров.