В какие сроки делать пцр на вич

Кому нужны тесты на ВИЧ?

ВИЧ - это вирус. В отличие от людей, вирусы не знают, что такое дискриминация. Вирусу безразличен пол, возраст, социальное положение и сексуальная ориентация - все, что нужно ВИЧ - это возможность проникнуть в организм. Не существует "групп риска", существуют ситуации, которые являются потенциально опасными с точки зрения передачи ВИЧ:

• Вагинальный или анальный секс без презерватива.
• Оральный секс, только если вы были принимающим партнером.
• Инъекционный прием наркотиков при помощи иглы, шприца или посуды, которыми ранее пользовались другие люди.

Если вас беспокоит возможность передачи ВИЧ, то до обращения в кабинет тестирования вам может потребоваться информация о риске заражения, а также о самих тестах.

Зачем идти в кабинет тестирования

Люди решают пройти тестирование на ВИЧ по самым разным причинам:

• Знание о своем положительном ВИЧ-статусе может помочь людям вовремя получить медицинскую помощь, которая способна предотвратить серьезные и угрожающие жизни заболевания. Например, при наличии ВИЧ-инфекции некоторые инфекции, например сифилис, должны лечиться по-другому. Также при наличии ВИЧ очень важно следить за иммунным статусом и другими показателями, что позволяет вовремя назначить необходимое противовирусное лечение, и предотвратить развитие СПИДа.
• Знание об отсутствии у себя инфекции, может помочь человеку принять решение о том, как сделать свое поведение наиболее безопасным в отношении ВИЧ. Также для человека может быть важно, знать о наличии у себя ВИЧ, так как его волнует безопасность сексуального партнера.
• Диагностика ВИЧ-инфекции позволяет предотвратить передачу ВИЧ ребенку во время беременности.
• Для некоторых людей знание о своем ВИЧ-статусе, пусть даже положительном, может быть менее страшным, чем постоянное беспокойство и навязчивые мысли о возможном заражении. В любом случае, сдача анализа позволяет положить конец мучительной неопределенности, и принимать решения о своей дальнейшей жизни на основе знаний о состоянии своего здоровья.

Причины отказа от тестирования

У человека также могут быть причины для того, чтобы не сдавать тест. Он может быть уверен, что в его жизни не было рискованных в отношении ВИЧ ситуаций. Также у человека могут быть более личные причины для отказа от теста. Для многих людей стресс, вызванный знанием о ВИЧ-инфекции, а также возможное влияние диагноза на отношения с окружающими и образ жизни может быть гораздо более пугающим, чем незнание ВИЧ-статуса. Некоторые люди опасаются разглашения тайны диагноза. Также они могут беспокоиться о возможной дискриминации, с которой приходиться сталкиваться ВИЧ-положительным людям.

Подобные вопросы беспокоят большинство людей. Каждый самостоятельно решает, что для него важнее: страх возможного диагноза или преимущества тестирования на ВИЧ. В подобной ситуации человеку может потребоваться консультирование, или обращение на телефон доверия, где ему помогут в принятии решения. Достижения и прогресс медицины в области лечения ВИЧ-инфекции являются главным доводом в пользу теста на ВИЧ. Из истории эпидемии СПИДа давно известно, что чем шире доступ к медицинскому уходу и препаратам для лечения ВИЧ-инфекции, тем большее количество людей принимают решение о тестировании на ВИЧ. Принимая решение сделать анализ, стоит подумать о том, какие возможности есть у человека после получения положительного результата. Будет ли ему предоставлено консультирование и психологическая поддержка? Сможет ли он обратиться на специализированный телефон доверия? Есть ли в его городе группы поддержки и взаимопомощи, а также другие ресурсы для ВИЧ-положительных?

Если ВИЧ-инфекция неизлечима и вакцины не существует, есть ли смысл узнавать о том, что у тебя ВИЧ?

Даже если у человека есть ВИЧ, он может позаботиться о том, чтобы сохранить свое здоровье. Хотя на сегодняшний день невозможно полностью избавить человека от ВИЧ, существуют способы замедлить развитие ВИЧ-инфекции, а также излечить или предотвратить опасные заболевания.

Если был риск заражения ВИЧ, когда можно сделать тест?

Иммуноферментный анализ (ИФА), который используется для диагностики ВИЧ, может показать результат только через несколько недель после инфицирования. Данный тип анализа определяет не сам вирус, а антитела к нему. У некоторых людей антитела присутствуют в крови в достаточном количестве уже через 2 недели. Тем не менее, у большинства образование антител (сероконверсия) занимает больше времени. Чтобы результат теста был достаточно достоверен, необходимо, чтобы прошло около 3 месяцев после рискованной ситуации. После 3 месяцев тест ИФА достоверен у 95-98% людей, то есть у подавляющего большинства. Иногда образование антител занимает больше времени - от 3 до 6 месяцев.

Если результат теста отрицательный через 3 месяца, обязательно ли делать повторный тест через 6 месяцев?

У подавляющего большинства людей тест вполне достоверен через 3 месяца (у большинства антитела появляются еще раньше). Можно полностью исключить возможность заражения, сдав анализ через 6 месяцев. Тем не менее, для многих людей ожидание результатов теста является очень тяжелым переживанием. Если у человека не было очень рискованных контактов с заведомо ВИЧ-положительным партнером, то вероятность, что он окажется среди тех немногих людей, чей тест недостоверен через 3 месяца ничтожно мала. Учитывая стресс, с которым связано тестирование в повторном тесте часто нет необходимости. Тем не менее, окончательное решение все равно остается за человеком.

Как долго нужно ждать результатов теста?

Это зависит от особенностей лаборатории, в которой проводиться тестирование. Тест ИФА можно сделать в течение этого же дня, но в большинстве лабораторий этот срок может составлять от 1-2 дней до 2 недель. Учитывая, что ожидание результатов может быть весьма нерпиятным периодом, лучше всего уточнить этот вопрос заранее, до сдачи анализа. Также можно узнать, не повлияют ли на сроки теста выходные дни и праздничные дни.

Где лучше сделать тест?

В различных регионах ситуация с кабинетами тестирования может отличаться. Тестирование бывает двух видов: конфиденциальное и анонимное. Если вы делаете тест конфиденциально, то сотрудникам лаборатории будет известно ваше имя, но следует учесть, что они не могут сообщить его куда-либо, так как это будет нарушением врачебной тайны. В анонимных кабинетах тестирования вы не сообщаете своего имени, а вам присваивается номер или имя по которым вы сможете узнать результат теста. Учитывая существующие предрассудки в отношении ВИЧ, многим людям комфортнее, если они делают тест анонимно.

В некоторых кабинетах тестирования существует до- и послетестовое консультирование, в других подобная услуга до сих пор отсутствует. Люди, решившие узнать свой ВИЧ-статус часто нуждаются в психологической поддержке, не говоря уже о дополнительной информации о тестировании и ВИЧ. Необходимо уточнить будет ли у вас возможность получить консультацию до и после теста. Также вы можете узнать, существуют ли в вашем городе телефоны доверия и горячие линии по ВИЧ/СПИДу, на которых вы можете анонимно получить любую интересующую вас информацию.

Если результат отрицательный, значит больше волноваться не надо?

Если тест был сделан через достаточный период времени, в течение которого у вас не было опасных контактов, это значит, вы ВИЧ-отрицательны. Тем не менее, тестирование на ВИЧ и профилактика - это не одно и то же. Недостаточно просто регулярно сдавать анализ, если ваше поведение остается рискованным, то через какое-то время результат теста может оказаться положительным. По счастью, пути передачи ВИЧ изучены лучше, чем у любого другого вируса. Получение отрицательного результата - это хороший повод узнать как можно больше о профилактике ВИЧ, и принять решение о том, как снизить для себя риск заражения.

Насколько достоверен положительный результат теста?

Иногда у ИФА бывают ложноположительные результаты (примерно в 1% случаев), причиной подобного результата может быть беременность, различные вирусные инфекции, а также простая случайность. После получения положительного результата необходим более точный тест - иммуноблот, по результатам которого и ставится диагноз. Положительный результат иммуноблота после положительного ИФА достоверен на 99,9% - это максимальная точность для любого медицинского теста. Если иммуноблот отрицательный, значит, первый тест был ложноположительным, и на самом деле ВИЧ у человека нет.

Что такое неопределенный результат?

Если ИФА бывает положительным или отрицательным, то иммуноблот может быть положительным, отрицательным или неопределенным. Неопределенный результат иммуноблота, т.е. наличие в иммуноблоте хотя бы одного белка к вирусу, может наблюдаться, если заражение произошло недавно и в крови еще мало антител к ВИЧ, в этом случае иммуноблот станет положительным через некоторое время. Также неопределенный результат может появиться при отсутствии ВИЧ-инфекции при гепатите, некоторых хронических заболеваниях обменного характера, или при беременности. В этом случае, либо иммуноблот станет отрицательным, либо будет обнаружена причина неопределенного результата.

Есть ли тест, который можно сделать раньше?

Диагностика ВИЧ-инфекции производиться только с помощью тестов, определяющих антитела. Помимо этого есть тест полимеразной цепной реакции (ПЦР), который определяет генетический материал самого вируса, поэтому он достаточно достоверен через 10 дней после возможного заражения. Иногда люди делают тест ПЦР, т. к. для них тяжело ждать 3 месяца, в других случаях его может назначить врач, например его делают детям, рожденным от ВИЧ-положительных матерей. Тем не менее, несмотря на высокую чувствительность и надежность, были зафиксированы случаи ложноположительных и ложноотрицательных результатов ПЦР. По этой причине, даже если был сделан ПЦР, может понадобиться подтверждающее тестирование методом ИФА.

Если мой партнер сделал тест на ВИЧ, зачем делать тест мне?

Результат теста партнера не всегда говорит о вашем статусе. У вашего партнера может быть ВИЧ, при этом вы могли остаться ВИЧ-отрицательным даже после опасного секса. Также при отсутствии ВИЧ у постоянного сексуального партнера, вирус мог передаться вам во время других случаев рискованного поведения. Если речь идет о стабильных отношениях, то зачастую тестирование рекомендуется обоим партнером одновременно.

Что делать, если результат теста отрицательный, но до сих пор есть симптомы?

Прежде всего, обратитесь к врачу по поводу всех своих симптомов. Их причиной может быть все, что угодно помимо ВИЧ-инфекции. Единственным достоверным способом диагностики ВИЧ является тестирование. Даже опытный врач не может определить ВИЧ-инфекцию по симптомам. Если прошло уже достаточно времени и результат повторного анализа отрицательный, то у вас нет ВИЧ, независимо от наличия или отсутствия симптомов. Тем не менее, подобные переживании могут быть симптомом СПИДофобии, и в этом случае следует уделить больше внимания своему психологическому здоровью.

Что делать, если все-таки будет обнаружен ВИЧ?

Следует помнить, что ВИЧ и СПИД - это не одно и то же. Если у вас обнаружат ВИЧ это значит, что в вашем теле присутствует вирус, от которого на данный момент вы не сможете полностью избавиться. СПИД - это лишь одна из стадий ВИЧ-инфекции, во время которой у людей действительно начинаются серьезные проблемы со здоровьем, тем не менее существуют медикаменты, которые способны замедлить развитие ВИЧ-инфекции и избавить человека от СПИДа. У большинства людей, живущих с ВИЧ, не наблюдается никаких симптомов, они могут продолжать вести привычный образ жизни. Тем не менее, диагноз ВИЧ-инфекция может привести к психологическим проблемам, человеку может потребоваться много времени, чтобы научиться жить с ВИЧ.

Для переключения в режим для слабовидящих нажмите Ctrl+

ВИЧ (вирус иммунодефицита человека) может годами не выдавать своего присутствия. Он коварно пользуется человеческой беспечностью, проникая внутрь организма нового хозяина и длительное время атакуя свою жертву изнутри. Эффективное оружие в борьбе и сдерживании этого микроскопического врага — профилактика и диагностика. Поэтому следует своевременно сдавать назначенные анализы на ВИЧ, даже если они кажутся вам излишними.

Диагностика ВИЧ и СПИД — задача первоочередной важности

После попадания в пораженную клетку, вирусный фермент — обратная транскриптаза — синтезирует соответствующий ей участок ДНК, а затем достраивает вторую комплементарную цепь. Зараженная ДНК проникает в ядро лимфоцита и встраивается в его генный аппарат. Далее ВИЧ либо сразу использует клетку как донорский материал, выделяя из нее участки с вирусным кодом, либо, оставшись в форме провируса, позволяет инфицированной клетке размножаться, вкладывая в новые клетки свое вирусное потомство. Позже провирус, передавшийся новым клеткам CD4, пробуждается и уже тогда начинает дробить их на вирусные фрагменты.

С момента заражения иммунная клетка начинает снижать свою функциональную активность, а после расщепления вирусом погибает. ВИЧ-инфекция, распространяясь по организму, за десяток лет уменьшает количество Т-хелперов с 400–1900 (в норме) до 200 и менее [1] , что соответствует стадии СПИДа. Больной становится беспомощным при атаке любых микроорганизмов и вирусов. Даже привычные для организма сапрофиты на коже и внутренних органах могут привести к смерти.

ВИЧ-инфекция относится к медленно текущим заболеваниям. От первой до фатальной, четвертой стадии, проходит 10 и более лет [2] .

• Инкубационная стадия — период от проникновения вируса в организм до выработки в крови человека антител (протеинов иммунной системы) к ВИЧ. Анализы будут отрицательны, но человек уже заразен. Инкубационный период может длиться до трех месяцев (чаще — около месяца).
• На этапе первичных проявлений отмечается резкое повышение количества вируса в крови и ответная выработка антител в количестве, достаточном для выявления лабораторным путем. Большинство ВИЧ-положительных пациентов при этом чувствуют себя нормально. Но часть заболевших фиксируют симптомы, похожие на грипп: повышается температура, увеличиваются лимфатические узлы, беспокоят головная боль и слабость. Через пару недель недомогание проходит само, без лечения. Длительность стадии — порядка двух–трех недель.
• Бессимптомная (или субклиническая) — фаза затяжной борьбы иммунной системы с вирусом с постепенной победой последнего (без соответствующего лечения). Количество лимфоцитов снижается, а вирусных частиц — неуклонно растет. К концу данного периода у инфицированных отмечается увеличение лимфатических узлов, общее недомогание. На фоне чрезмерно ослабленного иммунитета проявляются признаки оппортунистических инфекций, которым ВИЧ, словно троянский конь, отрывает прямой доступ к незащищенному организму. В дальнейшем эти условно-патогенные вирусы и клеточные организмы, вполне безвредные при нормальном иммунитете, становятся виновниками смерти 90% ВИЧ-инфицированных людей [3] . Стадия при отсутствии терапии длится приблизительно от 6 до 19 месяцев, иногда дольше [4] .
• Заключительная стадия — СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита). Название закрепилось вследствие того, что изначально заболевание выявлялось именно на этом необратимом этапе, имеющем явные патологические признаки. Взрослые пациенты умирали от бактерий, вирусов и грибков, с которыми справляется даже неокрепшая иммунная система детей первых лет жизни. Это позволило врачам сделать логичное предположение о том, что снижение защитных свойств организма вызвано внешними причинами, т.е. приобретено извне.
  В стадии СПИДа анализ крови на ВИЧ показывает очень низкое количество CD4 T, пациент страдает от запущенной формы оппортунистических инфекций, онкологии или энцефалопатии (поражение нервных клеток мозга, вызывающее слабоумие).

ВИЧ присутствует во всех биологических жидкостях организма инфицированного человека. Но в слезах, потовых выделениях и моче ВИЧ-положительного лица наличие вирусных частиц настолько мало, что не способно вызвать инфицирование [5] . Угрозу заражения представляют кровь, сперма, вагинальные выделения и грудное молоко, в которых концентрация ВИЧ наиболее высокая. В этой связи существуют 3 способа передачи вируса иммунодефицита:

1. Заражение половым путем , т.е. при незащищенном сексуальном контакте (анальном, вагинальном, реже — оральном). Риск заражения увеличивается при нарушениях целостности слизистой оболочки (ранки, язвы, трещинки), контактирующей с источником ВИЧ. До 20 раз больше вероятность передачи ВИЧ человеку, имеющему на момент контакта воспаления или поражение другой инфекцией. Вероятность заражения женщины от инфицированного мужчины втрое выше, чем наоборот.
2. Паренетальное, или заражение через контакт с кровью , возможно несколькими путями. При использовании общих игл и шприцев при употреблении наркотиков, нестерильных медицинских и других колющих и режущих предметов (например, при нанесении татуировок, мезотерапии и сходных косметических процедурах, удалении кутикулы при маникюре), донорстве инфицированных органов, семенной жидкости, крови и ее компонентов. Наиболее высок риск для наркоманов, т.к. при медицинских и косметических процедурах регламентировано использование одноразовых или продезинфицированных инструментов и приборов, а донорская кровь и сперма тщательно проверяется.
3. Вертикальный путь передачи — от ВИЧ-инфицированной матери к ребенку внутриутробно (через плаценту), во время родов (если ребенок получит травмы кожи), а также при кормлении грудью (через ранки в ротовой полости ребенка). Благодаря своевременной и регулярной антиретровирусной терапии риск инфицирования новорожденного возможно свести к нулю.

Итак, вирус не передается бытовым, воздушно-капельным путем, при поцелуях, совместном употреблении пищи и напитков, в сауне или бассейне, а также при укусах кровососущих насекомых [6] . ВИЧ погибает при температуре 56°С в течение 30 минут, при нагревании до 100°С — мгновенно [7] . Вирус не выдерживает воздействия спирта, перекиси водорода, хлорамина и других дезинфицирующих средств.

По данным ВОЗ [8] , в 2015 году вирус иммунодефицита человека унес более миллиона жизней. В течение указанного года вдвое большее число людей заразились ВИЧ, а общая численность ВИЧ-инфицированных составила примерно 36,7 миллионов (две трети из них — жители африканского континента).

35 миллионов жертв числятся за смертоносной инфекцией с момента ее открытия (80-е годы). Вместе с тем за период с 2000 по 2015 гг число новых ВИЧ-инфицированных уменьшилось на 35%. Потенциально около 8 миллионов человек были спасены в результате профилактики, диагностики и оказания медикаментозной помощи.

Даже на сегодняшний день, при наличии высокой технической оснащенности и доступности анализов, о своем ВИЧ-статусе знают лишь порядка 60% больных на планете [10] . Максимально полный охват человечества диагностикой на ВИЧ/СПИД — верный путь к снижению новых случаев инфицирования.

Косвенно на наличие ВИЧ-положительного статуса может указать и общий анализ крови (из пальца) — отклонение от нормы лейкоцитов, эритроцитов и, главное, лимфоцитов в исследуемом биоматериале должно вызвать подозрение на инфекцию и потребовать дополнительного анализа.

Кроме того, ВОЗ активно разрабатывает программы самодиагностики по слюне, моче, сперме. Самотестирование не отличается высокой точностью, но оправдано в районах с высоким уровнем заражения и недостаточной медицинской оснащенностью.

Итак, достаточно достоверно выявить наличие ВИЧ помогает исследование венозной крови, проводимое двумя основными способами.

Более распространен метод ИФА (иммуноферментный анализ) , позволяющий определить количественное содержание вируса-возбудителя в сыворотке крови. ИФА на ВИЧ-инфекцию определяет антитела к обеим разновидностям вируса (ВИЧ 1/2).

Для определения ВИЧ кровь пациента соединяется с белком, в котором содержится вирус в несколько подходов. При многократной стойкой реакции сыворотки крови с реагентом и выработке антител выносится положительное заключение. ИФА-скрининг производится повторно для перепроверки, и только при двух положительных заключениях следует вывод о присутствии вируса иммунодефицита. Но так как достоверность метода составляет до 98% [11] (невозможно исключить ложноположительные и ложноотрицательные результаты), для подтверждения диагноза назначается анализ методом иммуноблота.

Иммунный блоттинг — более дорогой и точный путь определения ВИЧ, сочетающий в себе ИФА с предварительным разделением белков вируса электрофорезом. У метода высокая чувствительность (99,3–99,7%) и специфичность (99,7%) [12] .

Раз в квартал диагностику на ВИЧ проходят медики. Регулярно проверяются доноры крови, спермы, яйцеклеток и сданные ими биоматериалы. Так, часть сданной крови тут же подвергается исследованию, повторно ее проверяют через 3 месяца хранения и только после этого используют для переливания.

Забор крови на ВИЧ производится у будущих матерей (3 раза в течение беременности) и отцов (однократно), т.к. выявление положительного ВИЧ-статуса при лечении позволит родить здорового малыша.

Результаты скрининга на ВИЧ в обязательном порядке требуются при оформлении пациента в стационар, призыва на военную службу, а также в случаях оформления права на временное проживание и вида на жительство для иностранных граждан. Назначение анализа на вирус последует и при нахождении у человека других половых инфекций, облегчающих проникновение ВИЧ в организм.

Кроме того, каждый человек вправе обратиться к диагностике в случае попадания в рискованную ситуацию, например, при незащищенном половом акте или сомнениях в стерильности введенных инъекций.

Каждые три месяца рекомендуется проверяться на ВИЧ людям из групп повышенного риска: употребляющим наркотики, имеющим многочисленные случайные связи и гомосексуальные связи, постоянным партнерам ВИЧ-положительного лица.

Помимо специализированных СПИД-центров и кожно-венерических диспансеров, кровь на ВИЧ берут в государственных поликлиниках и больницах, частных медучреждениях и клинических лабораториях.

По медицинским показаниям в государственных учреждениях тестирование проводится бесплатно, но результат предоставляется не ранее чем через полторы недели. Платная услуга оказывается в случаях, когда требуется срочное установление ВИЧ-статуса (например, при неплановой госпитализации), при анонимной сдаче анализа (кроме СПИД-центра), в платных центрах. Средняя цена платного иммуноферментного анализа на ВИЧ — от 700 рублей (включая затраты на забор крови). Методом иммуноблота — от 3500 рублей.

Кроме того, из-за повышенной чувствительности, такие тесты выдают до 5% ложноположительных результатов [13] . Поэтому эксперты рекомендуют все же производить столь важные анализы в лабораторных условиях (с многократным повторением) и с участием врача, который сможет корректно преподнести полученные данные пациенту.

Достоверность диагностики зависит от стадии инфицирования. Так, на начальном этапе заражения ИФА не покажет признаков заражения. А с учетом того, что длительность латентной фазы колеблется от двух недель до полугода, полное исключение инфекции подтверждается двукратным отрицательным тестированием (примерно через 6 недель после рисковой ситуации и повторно через три месяца).

В общих случаях анализы на ВИЧ берутся при предоставлении удостоверения личности (для учета инфицированных и исключения факта подлога результата). Вместе с тем каждый желающий имеет право сдать анализы анонимно (с присвоением кода, по которому идентифицируются результаты). Подготовка к тестированию включает воздержание от половой жизни, жирной, соленой пищи, алкоголя и курения как минимум на сутки. Кровь сдается утром натощак.

Забор биоматериала (достаточно 5 мл) производится из вены.

Обычно в платной клинике пациента знакомят с результатами ИФА-тестирования на следующий день после забора. В государственных учреждениях пациент может томиться в ожидании результата до полутора недель (если кровь направляется на исследование не сразу, а по мере накопления определенного количества пробирок и возникла потребность перепроверки результатов).

На исследование методом иммуноблота (для подтверждения или опровержения двойного ИФА) потребуется еще 3–10 дней [14] . Для этого анализы направляются в референс-лабораторию (СПИД-центр), где сыворотка снова подвергается двойной ИФА-проверке с другой тест-системой (отличающейся по составу антигенов и антител). И в случае подтверждения подозрений, проводится верификация методом иммуноблота.

При отрицательном результате ИФА антиген р24 и антитела к ВИЧ 1/2 не обнаруживаются. Положительное заключение делается при выявлении специфических антител.

Возможен также ложноположительный результат, обусловленный беременностью, ошибками медперсонала и техники. Он также встречается на фоне аутоиммунных заболеваний, инфицирования герпесом, гепатитами и даже гриппом.

При иммунном блоттинге о положительном результате свидетельствует наличие гликопротеинов вирусов gp160, gp120, gp41.

Отрицательный результат анализа методом иммуноблота ставится при отсутствии данных белков-индикаторов ВИЧ.

Сочетание ИФА и иммуноблота дают 99,9% [15] достоверности. При положительном результате ИФА, но отрицательном — методом иммуноблота (не выявлен ни один из трех гликопротеинов ВИЧ), результат признается сомнительным или неопределенным. В таких случаях может быть назначено исследование методом ПЦР [16] — полимеразной цепной реакции (эффективен через 4 недели после предполагаемого заражения [17] ). В ходе анализа вирусу создаются условия для лабораторного размножения — при высокой концентрации ДНК или РНК вирус легко обнаружить. Исследование носит вспомогательное значение. Может быть назначено как в целях диагностики (выявление ДНК или РНК ВИЧ), так и в целях контроля заболевания (количественное определение РНК ВИЧ) [18] .

Сдача анализа на ВИЧ может вызывать страх, если перед тестированием невольно припоминаются случаи, несущие потенциальную угрозу: незащищенные половые связи, инъекции, недавнее посещение салона татуажа, лечение у сомнительного стоматолога. Но чем сильнее этот страх, тем важнее пройти исследование. Если реакция дважды окажется отрицательной — опасения развеются, в противном случае — у пациента будет возможность быстро начать антиретровирусную терапию, обезопасить партнера, свести к минимуму риск инфицирования ребенка от ВИЧ-положительной матери.

🔊 Прослушать пост

ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой метод молекулярной генетики, который позволяет анализировать любую короткую последовательность ДНК (или РНК) даже в образцах, содержащих только мельчайшие количества ДНК или РНК, тем самым определив наличие/отсутствие патогенного возбудителя (определить, например есть ли в человеке вирус ВИЧ или гепатита Б или микобактерии туберкулёза). ПЦР используется для воспроизведения/умножения/клонирования (амплификации) выбранных участков ДНК или РНК для анализа.

Метод ПЦР настолько прост, что его может поставить даже школьник)

Раньше амплификация ДНК включала клонирование сегментов, представляющих интерес, в векторы для экспрессии в бактериях и занимала недели. Но теперь, когда ПЦР делается в пробирках, требуется всего несколько часов. ПЦР является высокоэффективной, так что из ДНК может быть сделано огромное количество копий.

Последовательность ДНК и соответствие нуклеотидов.

Более того, ПЦР использует те же молекулы, которые природа использует для копирования ДНК:

То есть ПЦР — это такая техника при которой частицы ДНК (иногда РНК) умножаются в определенном растворе или на специальной поверхности, где они могут быть депонированы.

ПЦР — это метод, с помощью которого учёные могут находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл.

Ключом к пониманию ПЦР является знание о том, что каждый человек, животное, растение, паразит, бактерия или вирус содержит генетический материал — ДНК (или РНК) последовательности (нуклеотидные последовательности или кусочки ДНК (или РНК)), которые уникальны для каждого индивидуума. То есть, если образец содержит сегменты ДНК или РНК,

задача ПЦР как метода — умножить (амплифицировать), сделать как можно больше их копий, чтобы можно было идентифицировать кому они могут принадлежать (определенному человеку, животному или патогенному организму), даже если есть только следы наличия ДНК/РНК.

Однако ПЦР-амплификация является лишь частью диагностического теста. После проведения амплификации амплифицированные сегменты необходимо сравнить с другими нуклеотидными сегментами, но уже из известного источника (например, конкретного человека, животного или патогенного организма). Это сравнение уникальных сегментов часто выполняется путем размещения нуклеотидных последовательностей, сгенерированных ПЦР, рядом с известными нуклеотидными последовательностями от людей, патогенов или других источников в специальном геле.

В 1983 году Кари Муллис разработал основные этапы по амплификации ДНК-последовательностей. Он и Майкл Смит были удостоены Нобелевской премии за создание ПЦР в 1993 году.

ПЦР проводится в одной пробирке с соответствующими химическими веществами и при определенной температуре нагревания.

Необходимы следующие реагенты или химикаты:

• Образец, содержащий нуклеотидную последовательность (из крови, волос, гноя, кожи и т. д.).
• ДНК-праймеры: короткая одноцепочечная ДНК, которая присоединена к нуклеотидным последовательностям, которая способствует синтезу комплементарной цепи нуклеотидов.
• ДНК-полимераза: фермент, который, когда ДНК связывается с праймером, спускается по фрагменту ДНК с добавлением структурных блоков ДНК для образования комплементарных пар оснований и, таким образом, синтезирует комплементарную нуклеотидную цепь ДНК (введение термостойкой ДНК-полимеразы, Taq-полимеразы , полученной из термостойких бактерий, заметно улучшает способность к ПЦР).
• Большой избыток структурных блоков ДНК, называемых нуклеотидами (аденин, тимидин, цитозин и гуанин, сокращенные как: A, T, C и G соответственно) в растворе. Когда эти блоки соединены вместе, они образуют нуклеотидную последовательность или одну нить ДНК. Когда эти строительные блоки связывают свой комплементарный строительный блок слабыми водородными связями (например, A будет связываться только с T и G только с C) образуется комплементарная нуклеотидная последовательность ДНК, которая связана с исходной одноцепочечной ДНК. Когда связывание завершается, комплементарная ДНК с двойной цепью образуется в определенной последовательности.

Он верит в астрологию, но не верит, что ВИЧ вызывает СПИД.)

Затем полимеразно-цепная реакция начинается с сегмента ДНК из образца, который помещается в пробирку с указанными выше реагентами. Раствор нагревают до 94°С. Нагревание разрушает водородные связи, которые позволяют образовывать комплементарные цепи ДНК, поэтому в смеси существуют только одиночные нити (это называется денатурацией двухцепочечной ДНК).

Этапы ПЦР

Смеси дают остыть до 54°C. При этой температуре ДНК-праймеры и ДНК-полимераза связываются с отдельной одноцепочечной ДНК (это называется отжигом ДНК). Поскольку строительных блоки в избытке (высокая концентрация) в смеси, полимераза использует их для создания новых комплементарных нитей ДНК (называемых расширением ДНК), и этот процесс происходит быстрее при 72°C. Этот процесс создает новую двухцепочечную молекулу ДНК из каждой из одиночных нитей исходной молекулы.

Этот цикл повторяется примерно 40 раз в машине, называемой термическим циклером (термосайклером), который автоматически повторяет циклы нагрева-охлаждения, при этом количество каждой последовательности ДНК удваивается каждый раз, когда цикл нагрева-охлаждения завершается. То, что изначально было одним коротким сегментом ДНК, можно было увеличить до примерно 100 миллиардов копий после 40 циклов удвоения.

Тест на ПЦР является основой для ряда тестов, которые могут отвечать на многие различные медицинские вопросы, которые помогают врачам диагностировать и лечить пациентов. Например, тесты ПЦР могут обнаруживать и идентифицировать патогенные организмы у пациентов, особенно тех, которые трудно культивировать (например, ВИЧ и другие вирусы и некоторые грибы).

Одни врачи назначают ПЦР-тесты, чтобы помочь диагностировать генетические заболевания, в то время как другие врачи используют ПЦР для обнаружения биологических родственных отношений, таких как идентификация родителей детей. ПЦР-тесты также используются для идентификации и характеристики генетических мутаций и перегруппировок, обнаруженных при определенных раковых заболеваниях.

Тем не менее, ПЦР-тесты были модифицированы и внедрены во многие аспекты научных исследований, включая эволюционную биологию, генетическую отпечатку пальцев, судебно-медицинские исследования и многие другие.

Обратно-транскриптазный ПЦР (RT-PCR) — это тест на ПЦР, который предназначен для обнаружения и измерения количества РНК. Хотя первоначальные тесты ПЦР амплифицировали ДНК, многие вирусы и другие биологические компоненты (например, митохондрии) используют РНК в качестве своего генетического материала. RT-PCR отличается от обычной ПЦР сначала взятием РНК и превращением нити РНК в нить ДНК. Это делается по существу тем же самым методом для ПЦР, описанным выше, за исключением использования фермента, называемого обратной транскриптазой, вместо ДНК-полимеразы.

Обратная транскриптаза позволяет перевести одну нить РНК в комплементарную цепь ДНК. Как только эта реакция происходит, рутинный метод ПЦР можно затем использовать для амплификации ДНК. RT-PCR используется для обнаружения и изучения многих РНК-вирусов. RT-PCR не следует путать с другим вариантом ПЦР, называемым ПЦР в реальном времени (реал-тайм).

ПЦР в реальном времени представляет собой вариацию ПЦР, которая позволяет анализировать амплифицированную ДНК в течение обычных 40 циклов процедуры. Хотя процедура аналогична обычной ПЦР с циклированием, ПЦР реального времени использует флуоресцентные красители, прикрепленные к некоторым из строительных блоков или небольших нуклеотидных нитей. В зависимости от используемого метода флуоресценция возникает, когда образуются амплифицированные нити ДНК. Количество флуоресценции можно измерить на протяжении 40 циклов и позволяет исследователям измерять определенные продукты и их количества во время циклов амплификации.

Это часто позволяет исследователям или техническим специалистам пропускать гель-электрофорез или другие вторичные процедуры, необходимые для анализа продуктов ПЦР, тем самым обеспечивая более быстрые результаты. ПЦР в реальном времени и RT-PCR являются вариациями или модификациями исходного теста ПЦР. Тем не менее, существует еще много вариантов (не менее 25), которые существуют и используются для решения конкретных проблем. Все они имеют разные названия, такие как сборка ПЦР, ПЦР с горячим началом, мультиплексная ПЦР, твердотельная ПЦР и многие другие.

ПЦР будет развиваться и дальше, чтобы помочь ответить на многие другие вопросы в медицине, биологии и других областях науки.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — метод умножения генетического материала вируса, анализ, который определяет генетический материал вируса — РНК или ДНК ВИЧ.

Если вирус содержится в минимальном значении, то в результате реакции это количество многократно увеличивается. Поэтому ПЦР имеет высокое диагностическое значение.

Обычно этот тест используется для определения ВИЧ в донорской крови или для раннего определения наличия ВИЧ в организме до выработки специфических антител к ВИЧ. Специфические антитела определяют обычные тесты на ВИЧ (ИФА), но только через 1-3, редко 12 месяцев после заражения. А с помощью ПЦР можно дать достаточно точный ответ через 14 дней с достоверностью 98% и даже через 5 дней, но тогда достоверность будет 80%. ПЦР на ВИЧ — это дорогой и более трудоемкий анализ, чем ИФА, поэтому его используют не всем подряд, а только по особым показаниям (доноры, пострадавшие от медицинской аварии с ВИЧ-инфицированным) или платно.

Это метод определения комплиментарного участка ДНК в геноме клетки лимфоцита пораженного ВИЧ. Т.е. определяется не сам вирус, а материал, который вирус встраивает в клетку. В ядре клетки уже будет храниться его ДНК из которой он потом будет считываться и размножаться (копировать самого себя).

Количественный ПЦР анализ на РНК ВИЧ — определяет количество копий РНК вируса в крови (для определения вируса в клетках используют ПЦР ДНК, например у детей). Делается только у ВИЧ-инфицированных, для контроля лечения, определения выраженности процесса развития болезни, эффективности лечения.

ВИЧ с помощью ПЦР можно обнаружить через 4-14 дней после заражения. Отрицательный результат ПЦР на ВИЧ достоверен после 14 дней после рискованного контакта, но по действующим нормативам всё равно требуется обследование с помощью ИФА.

РНК обычно используется в количественных тестах для оценки вирусной нагрузки у диагностированных лиц, например, для оценки эффективности терапии.

ДНК — в мононуклеарных клетках, например, для диагностики у детей, там, где антитела к ВИЧ матерей мешает использовать метод ИФА.

И тот и другой тест могут быть и количественными, и качественными.

И тот, и другой можно в особых случаях применить диагностики, но с учетом конкретных ограничений, которые накладывают технические параметры системы, т.е. по назначению врача.

Но если были допущены ошибки со стороны персонала медицинского учреждения , ТО ПЦР может быть ложноположительным, более чем в 2% случаев.

Для исследования на ВИЧ методом ПЦР сдаётся кровь из вены, желательно (но необязательно) утром натощак.

Москва: ЦМД (2450 руб.), ИАКИ (2300 руб.). Санкт-Петербург: СПб СПИД-центр. Екатеринбург: КДЛ (2480 руб.). Самара: СитиЛаб (1400 руб.). Краснодар: КДЛ (3000 руб.). Минск: Республиканский центр гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья. Киев: Первая Независимая Лаборатория.

Около 1,5-3 тыс. руб. в зависимости от региона.

Через 14 дней после заражения достоверность ПЦР на ВИЧ составляет 100%, с 4-5 дня — достоверность 80%.

Технически 4-6 часов, но в реальности зависит от организации работы лаборатории и обычно результат выдается через 2-3 дня.

Так как у ребёнка до 1,5 лет рожденного от ВИЧ+ матери сохраняются её антитела против ВИЧ, то определить заражен ВИЧ ребенок или нет с помощью ИФА невозможно. В такой ситуации используется ПЦР:

• Если у ребенка возрастом 1 мес с помощью ПЦР обнаружили вирус, значит он заразился.
• Если у ребенка в 1-2 месяца и 4-6 месяцев ПЦР отрицательная, то при условии, что мать не кормила его своим грудным молоком — ребёнок здоров.

ПЦР определяет сам вирус, а ИФА реакцию (в виде антител) организма на вирус.

ПЦР быстрее определяет наличие вируса, чем ИФА.

Новый алгоритм определения ВИЧ.