Пцр на вич из сыворотки крови

На точность анализа на ВИЧ влияют диеты, гормоны и инфекции.

Два вида проверки

Есть два основных вида анализов на ВИЧ/СПИД: иммуноферментный анализ и ПЦР-диагностика. Оба информативны и точны.

Иммуноферментный анализ сегодня максимально распространен. Он основывается на выявлении в сыворотке крови пациента антител к ВИЧ. У большей части больных они появляются примерно через 4-6 недель после заражения, у 10% - через 3-6 месяцев, и у 5% - позднее. Поэтому в идеале, этот анализ следует сдавать три раза через каждые 3 месяца.

ПЦР-диагностика - это исследование при помощи полимеразной цепной реакции, которая может проверять сыворотку крови, противовирусную-РНК или ДНК, количественную оценку CD-4-лимфоцитов. При этом ПЦР-анализ медики часто называют единственной возможной ранней диагностикой ВИЧ-инфекции, которую проводят, в том числе и у малышей первого года жизни. Преимуществом такого метода исследования является и тот факт, что с ним можно выявлять вирус в инкубационном и раннем клиническом периоде, когда в крови еще нет антител. Это помогает раньше начать лечение и снизить негативное воздействие болезни.

К анализу на ВИЧ/СПИД нужно подготовиться. Сдавать кровь следует натощак, при этом последний прием пищи должен состояться не позднее, чем за 8 часов. Естественно, рекомендуется выдержать и своеобразную диету, отказавшись за несколько дней до сдачи крови от алкоголя и "вредных" блюд - жирных, жареных, копченостей, маринадов и прочих рафинированных продуктов.

Стоит учитывать, что если вы недомогаете, даже при любом вирусном или инфекционном заболевании, кровь лучше не сдавать или прийти на анализ повторно через 35-40 дней после выздоровления. В противном случае есть риск получить ложноположительный результат.

Анализ на ВИЧ/СПИД проходит несколько этапов проверки. Поэтому готовят его 2-10 дней.

Результат может быть положительным, отрицательным и сомнительным. В последнем случае стоит пересдать анализ несколько позднее.

Медики утверждают, что при положительном результате сразу же заявлять, что у человека ВИЧ или СПИД, нельзя. Ведь в ряде случаев показатели могут быть завышены по другим причинам. В этой ситуации следует пересдать анализ повторно - через такую процедуру проходят все, у кого результат оказался со знаком "+".

Откуда берется "ложный сигнал"? Из-за некоторых заболеваний и состояний, которые могут стать причиной перекрестных реакций. Например, из-за аллергии в крови могут вырабатываться непонятные для организма антигены, которые он распознает как чужеродные.

Также похожая реакция могут произойти из-за резкого изменения состава крови - например, вследствие скачка холестерина (при избыточном употреблении жирной пищи, жареных блюд, семечек), гормонального дисбаланса ( в частности, в период месячных у женщин), инфекций (болезни дыхательных путей, наличие вирусов гепатита и гриппа, недавно сделанные прививки, туберкулез), чрезмерной густоты крови артрита, онкологии. Грибки, вирусы и бактерии тоже могут способствовать появлению неверных данных. Кроме того, ложноположительный результат может появиться из-за врачебных ошибок: при нарушении правил забора и транспортировки крови, использовании некачественной сыворотки и неправильном хранении материала.

Сдать анализ на вирус иммунодефицита при желании можно в любое время. Однако есть ряд положений, когда сделать это рекомендуется. Так, стоит сдать кровь при планировании беременности, перед плановой операцией, после проведения сомнительных инъекций, незащищенного полового контакта с малознакомым человеком, при резком ухудшении самочувствия.

Провериться можно в любой поликлинике, частных клиниках и диагностических центрах, а также специализированных центрах СПИДа. Причем в государственных медучреждениях эта процедура будет совершенно бесплатной. Сдавать анализы в центре СПИДа может любой гражданин страны, независимо от того, где он проживает.

Тестирование бывает 2-х видов: конфиденциальное и анонимное. В первом случае человек называет лаборантам свое имя. Во втором случае ему присваивают идентификационный номер. Все результаты выдаются исключительно на руки пациенту, и даже при положительном результате лаборатория не может никуда сообщить - это будет расцениваться как нарушение врачебной тайны. В платных клиниках принцип сдачи анализов ничем не отличается, только при этом услуга оказывается за деньги. Стоимость - от 400 до 3 400 рублей, в зависимости от сложности и вариантов проверки.

В настоящее время новые диагностические технологии позволяют выявить этиологические и патогенетические причины многих заболеваний и коренным образом повлиять на результаты лечения. Пожалуй, наиболее впечатляющие результаты внедрения этих технологий в клиническую практику достигнуты в области иммунологии и диагностики инфекционных заболеваний.

Для исследования может быть использован различный биологический материал: сыворотка, плазма крови, соскоб, биоптат, плевральная или спинномозговая жидкость (СМЖ). В первую очередь, методы лабораторной диагностики инфекций направлены на выявление таких заболеваний, как вирусный гепатит В, С, D, цитомегаловирусная инфекция, инфекции, передающиеся половым путем (гонорейная, хламидийная, микоплазменная, уреаплазменная), туберкулез, ВИЧ-инфекция и др.

ВИЧ-инфекция – заболевание, вызываемое вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), длительное время персистирующего в лимфоцитах, макрофагах, клетках нервной ткани, в результате чего развивается медленно прогрессирующее поражение иммунной и нервной систем организма, проявляющееся вторичными инфекциями, опухолями, подострым энцефалитом и другими патологическими изменениями.

Возбудители инфекции – вирусы иммунодефицита человека 1-го и 2-го типов (ВИЧ-1, ВИЧ-2) – относятся к семейству ретровирусов, подсемейству медленных вирусов. Вирионы являются сферическими частицами диаметром 100–140 нм. Вирусная частица имеет наружную фосфолипидную оболочку, включающую гликопротеиды (структурные белки) с определенной молекулярной массой, измеряемой в килодальтонах. У ВИЧ-1 – это gpl60, gpl20, gp41. Внутренняя оболочка вируса, покрывающая ядро, также представлена белками с известной молекулярной массой – р17, р24, р55 (ВИЧ-2 содержит gpl40, gpl05, gp36, р16, р25, р55).

В состав генома ВИЧ входит РНК и фермент обратная транскриптаза (ревертаза). Для того чтобы геном ретровируса соединился с геномом клетки хозяина, вначале с помощью ревертазы происходит синтез ДНК на матрице вирусной РНК. Затем ДНК провируса встраивается в геном клетки-хозяина. ВИЧ обладает выраженной антигенной изменчивостью, значительно превышающей таковую у вируса гриппа.

В организме человека основной мишенью ВИЧ являются Т-лимфоциты, несущие на поверхности наибольшее количество СD4-рецепторов. После проникновения ВИЧ в клетку с помощью ревертазы по образцу своей РНК вирус синтезирует ДНК, которая встраивается в генетический аппарат клетки-хозяина (СD4-лимфоциты) и остается там пожизненно в состоянии провируса. Помимо Т-лимфоцитовхелперов поражаются макрофаги, В-лимфоциты, клетки нейроглии, слизистой оболочки кишечника и некоторые другие клетки. Причиной снижения количества Т-лимфоцитов (клетки CD4) является не только прямое цитопатическое действие вируса, но и их слияние с неинфицированными клетками. Наряду с поражением Т-лимфоцитов у больных с ВИЧ-инфекцией отмечается поликлональная активация B-лимфоцитов с увеличением синтеза иммуноглобулинов всех классов, особенно IgG и IgA, и последующим истощением этого отдела иммунной системы. Нарушение регуляции иммунных процессов проявляется также повышением уровня α-интерферона, β2-микроглобулина, снижением уровня IL-2. В результате нарушения функции иммунной системы, особенно при снижении числа Т- лимфоцитов (CD4) до 400 клеток в 1 мкл крови и менее, возникают условия для неконтролируемой репликации ВИЧ со значительным увеличением количества вирионов в различных средах организма. В результате поражения многих звеньев иммунной системы человек, зараженный ВИЧ, становится беззащитным перед возбудителями различных инфекций.

На фоне нарастающей иммунодепрессии развиваются тяжелые прогрессирующие заболевания, которые не встречаются у человека с нормально функционирующей иммунной системой. Это заболевания, которые Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) определила как СПИД-маркерные или СПИД-индикаторные заболевания.

СПИД-индикаторные заболевания

Первая группа – заболевания, присущие только тяжелому иммунодефициту (уровень СD4 74 100 копий/мл почти у всех пациентов развивается клиническая картина СПИДа (Senior D., Holden Е., 1996).

Вероятность развития СПИДа в 10,8 раз выше у лиц с содержанием ВИЧ-1 в крови >10 000 копий/мл, чем у лиц с содержанием ВИЧ-1 в крови 20 000 копий/мл (ПЦР). Оценка результатов антиретровирусной терапии у лиц, инфицированных ВИЧ, проводится по снижению уровня сывороточной РНК ВИЧ.

При эффективном лечении уровень виремии должен снижаться в 10 раз в течение первых 8 недель и быть ниже предела чувствительности метода (ПЦР) (

Взятие, доставку и оформление материалов для проведения лабораторных исследований методом ИФА на ВИЧ-инфекцию и СПИД - индикаторные заболевания, для проведения лабораторных исследований методом ПЦР на ВИЧ - инфекцию, вирусные гепатиты В и С, а также для иммунологических исследований в КДЛ ГБУЗ РЦПБ СПИД и ИЗ производить строго в соответствии с правилами (приложение 1, 2, 3).

Наиболее частыми нарушениями указанных правил являются следующие:

1) при оформлении сопроводительной документации не указывается наименование диагностической тест-системы, ее серия, срок годности

2) не полностью указываются паспортные данные обследуемых, а также дата и место взятия материала

3) зачастую в лабораторию ГБУЗ РЦПБ СПИД и ИЗ доставляется материал, уже непригодный для исследования: сыворотки, хранившиеся дольше установленного срока хранения (для разных методов исследования сроки хранения составляют от 3 до 48 часов); проросшие, гемолизированные сыворотки, в недостаточном для исследования количестве (в зависимости от метода минимально необходимый объем материала составляет от 2 до 5 мл);

4) номера, проставленные на флаконах, не соответствуют указанным в направлении; количество проб крови не соответствует количеству, указанному в направлении;

5) неправильно производится взятие материала, в пробах крови, доставляемых для исследований методом ПЦР и для иммунологические исследований, обнаруживаются сгустки,

6) при заборе материала не всегда медицинский персонал ЛПУ обращает внимание на сроки годности пробирок.

Правила взятия и доставки крови для проведения лабораторных исследований методом ИФА на ВИЧ-инфекцию и СПИД-индикаторные заболевания.

Взятие крови производится из локтевой вены в чистую сухую пробирку в количестве 3-5 мл. У новорожденных можно брать пуповинную кровь с указанием об этом в направлении. Полученный материал не рекомендуется хранить более 12 часов при комнатной температуре и более 1 суток в холодильнике при +4-8 0С. Наступающий гемолиз может повлиять на результаты анализа. В случае невозможности доставки материала в течение суток следует сразу после взятия крови отобрать из нее сыворотку. Сыворотка отделяется центрифугированием. Отделенная сыворотка переносится в чистую (лучше стерильную) пробирку, флакон или пластиковый контейнер, и в таком виде она может храниться до 7 дней при температуре +4-8 0С. На пробирке следует указать порядковый номер, фамилию и инициалы пациента, в строгом соответствии с направлением. Для транспортировки в КДЛ диагностики ВИЧ штативы с пробирками помещают в термоконтейнер, легко подвергающийся дезинфекции. Полученный материал в КДЛ диагностики ВИЧ доставляет медицинский персонал, прошедший специальный инструктаж в установленном порядке.

Утв. МЗ СССР от 05.09.1988 г. №690

Направление №__________________

на исследование образца крови в ИФА на ВИЧ-инфекцию

В_________________________________________________________
(наименование учреждения)

Должность лица, направляющего материал___________________________________

Взятие материала для исследования производить только при предъявлении пациентами паспорта или иного документа, удостоверяющего его личность (кроме анонимного обследования).

Коды контингентов

Наименование кода

код

Доноры (крови, биологических жидкостей, органов и тканей)

Медицинский персонал, работающий с ВИЧ - инфицированными лицами и инфицированным материалом

Гомо- и бисексуалисты

Больные заболеваниями, передающимися половым путем

Лица, находящиеся в местах лишения свободы

Обследованные по клиническим показаниям

Беременные (доноры плацентарной и абортной крови)

Обследованные при эпидемиологическом расследовании

Для лабораторий диагностики ВИЧ-инфекции в обменном журнале и направлении обязательно дополнительно указываются результаты исследования (ОП сыворотки, ОП критическое), а также дата постановки, название, серия, срок годности используемой тест-системы.

Правила взятия, хранения и доставки материала для проведения исследований методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

В направлении должны быть четко указаны: учреждение, направившее материал, Ф.И.О. (полностью), год рождения, код контингента, домашний адрес, дата, точное время и место взятия материала, фамилия и подпись ответственного лица с указанием номера контактного телефона.

Правила взятия и доставки материала для проведения иммунологических исследований.

Материал должен быть доставлен в лабораторию сразу после взятия. Недопустимо замораживание биологического материала. Флаконы должны быть четко промаркированы с указанием фамилии пациента, даты и времени взятия. Маркировка флаконов должна строго соответствовать данным, указанным в направлении.

В направлении должны быть четко указаны: учреждение, направившее материал, Ф.И.О. (полностью), год рождения, код контингента, домашний адрес, дата, время и место взятия материала, фамилия и подпись ответственного лица с указанием номера контактного телефона.
















на платные медицинские услуги (кроме экстренной медицинской помощи), оказываемые ГБУЗ "Клинический центр профилактики и борьбы со СПИД" министерства здравоохранения Краснодарского края сверх установленного государственного задания, а также в случаях, определенных законами, в пределах установленного государственного задания, действующий с 05.11.2014г.

1. Взятие крови из периферической вены процедура 52 2.

Определение антител к ВИЧ-1/ВИЧ-2 крови (качественный метод), экспресс-метод

945 3. Определение антител к ВИЧ-1/ВИЧ-2 крови (качественный метод) исследование 640

Исследование антител к рецептору тиреотропного гормона (ТТГ) в крови

Исследование уровня свободного тироксина (Т4) сыворотки крови

284 6. Определение антител к тиреоидной пироксидазе ИФА (полуавтоматический)

Определение антител к HbsAg в сыворотке крови (ИФА)

Определение антител к HbsAg в сыворотке крови (подтверждающий тест) (ИФА)

Определение антител иммуноглобулина G гепатита С в сыворотке крови (ИФА)

Определение антител HCV-спектр (NS-белки) в сыворотке крови (ИФА)

Иммуноферментный анализ по выявлению антител к Cor-антигену вируса гепатита В

Исследование иммунологического статуса при смешанном иммунодефиците (14 параметров)

Исследование иммунологического статуса при клеточном дефиците

ПЦР-диагностика гепатита С в крови (единичное)

Количественное определение РНК HCV в крови

16. Исследование крови на вирусный гепатит В методом полимеразной цепной реакции (единичное) исследование 736 17. Количественное определение ДНК HBV в крови исследование 973 18. ПЦР-исследование вируса ВИЧ: уровень РНК (количественный анализ) исследование 1097 19. ПЦР-определение вируса ВИЧ (качественный анализ) (противовирусное ДНК) исследование 1219 20. Диагностика токсоплазмоза в биологическом материале методом ПЦР исследование 659 21. Диагностика цитомегаловирусной инфекции в крови методом ПЦР (каждое последующее исследование) исследование 780 22. Определение липопротеинов высокой степени плотности в сыворотке крови (авт.) исследование 191 23. Определение железа в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 120 24. Определение общего белка в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 121 25. Определение альбумина в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 74 26. Определение мочевины сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 90 27. Определение мочевой кислоты в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 91 28. Определение креатинина в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 115 29. Определение общего билирубина в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 117 30. Определение глюкозы в венозной (капиллярной) крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 112 31. Определение триглицеридов в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 134 32. Определение холестерина в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 114 33. Определение липопротеинов низкой плотности в сыворотке крови на автоматическом анализаторе исследование 222 34. Определение кальция в сыворотке крови на автоматическом анализаторе исследование 117 35. Определение активности лактатдегидроденазы в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 115 36. Определение аспарат-аминотрансферазы в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 116 37. Определение аланин-аминотрансферазы в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 116 38. Определение гамма-глутаминтрансферазы в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 115 39. Определение амилазы в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 115 40. Определение активной щелочной фостофазы в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 119 41. Определение ферритина в сыворотке крови (автоматический метод, до 100 анализов) исследование 226 42. Анализ мочи общий исследование 145 43. Общий анализ крови с формулой (автоматический метод) исследование 204 44. Иммуно-ферментный анализ для количественного иммуноферментного определения СА-19-9 в сыворотке крови человека исследование 375 45. Иммуно-ферментный анализ для количественного иммуноферментного определения СА 125 в сыворотке крови человека исследование 339 46. Консультация врача-специалиста консультация 420

За звучной аббревиатурой ПЦР скрывается сложная и не слишком понятная для рядового пациента расшифровка — полимеразная цепная реакция. Что же такое ПЦР-диагностика, на чем она основана и почему в последнее время ее стали считать самой перспективной технологией в постановке диагнозов, касающихся инфекционных и вирусных заболеваний? Мы расскажем о преимуществах ПЦР-метода, его особенностях и этапах проведения.

ПЦР-диагностика: что это такое?

Диагностика методом ПЦР существует чуть более 30 лет. Значительно эволюционировав за это время, она зарекомендовала себя как один из наиболее точных способов выявления инфекций. В основе метода лежит принцип многократного увеличения микроскопических концентраций фрагментов ДНК возбудителя в биологической пробе пациента в искусственных условиях. В результате сложного процесса, называемого амплификацией, под воздействием ферментов и изменения температуры (от 50 до 95°С) из одной молекулы ДНК образуется две. При этом происходит копирование участка ДНК, который присутствует только у того вида патогенного микроорганизма, который интересует врача.

Цикл образования новой молекулы ДНК занимает всего около 3 минут, а тридцати-сорока циклов вполне достаточно, чтобы получить количество молекул, необходимое для достоверного визуального определения методом электрофореза.

Кроме амплификации, то есть простого увеличения числа копий молекулы ДНК, с помощью ПЦР можно производить и другие манипуляции с генетическим материалом, например, сращивать фрагменты ДНК, вводить мутации и т.д. Это позволяет использовать ПЦР не только для диагностики инфекционных и генетических заболеваний, но и для установления отцовства, клонирования и выделения новых генов.

ПЦР-диагностика проводится в специальных лабораториях с помощью амплификационного оборудования. На сегодня существует множество различных модификаций ПЦР, включая технологии с использованием не только ДНК, но и фрагментов рибонуклеиновой кислоты (РНК). В некоторых из них амплификация осуществляется при постоянной температуре, и для их проведения специальное оборудование не требуется.

Еще одна популярная модификация ПЦР — мультиплексная амплификация (МПА), которая позволяет проводить исследование сразу нескольких изучаемых фрагментов в одной пробирке. Это не только ускоряет и удешевляет проведение анализа, но и позволяет рассматривать одни фрагменты, получившиеся в результате реакции, в качестве положительных маркеров для других, что еще больше увеличивает точность исследования методом ПЦР.

В клинической медицине ПЦР-диагностика является одним из наиболее востребованных методов анализа в самых разных сферах:

  • Прямое определение возбудителя инфекции. Некоторые традиционные методы, такие как иммуноферментный анализ (ИФА), выделяют только белки-маркеры, которые являются продуктом жизнедеятельности возбудителей инфекции, а потому только косвенно указывают на присутствие микроорганизмов. Наличие специфического участка в ДНК, выявленное с помощью ПЦР, безошибочно или почти безошибочно указывает на присутствие конкретной инфекции.
  • Высокая специфичность метода . Она обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется фрагмент ДНК, характерный только для конкретного возбудителя инфекции. Специфичность исключает возможность ложных результатов анализа, тогда как в иммунологических методах исследований ошибки вполне вероятны из-за перекрестной реакции антигенов.
  • Высокая чувствительность . При помощи ПЦР-диагностики можно выявить присутствие в организме даже единичных клеток вирусов или бактерий в тех случаях, когда обычными методами сделать это практически невозможно. ПРЦ определяет наличие всего 10–100 клеток в пробе, тогда как иммунологическими и микроскопическими тестами можно определить наличие инфекции при количестве клеток не менее 103–105.
  • Универсальность . Сходство состава всех ДНК или РНК дает возможность применять универсальные методы лабораторных исследований, диагностируя сразу несколько возбудителей из одной биологической пробы.
  • Скорость получения результатов . Поскольку для проведения ПЦР-диагностики не нужен посев и выделение культуры возбудителя, то и большого количества времени на нее не требуется. Весь цикл — от забора биоматериала до получения результатов — занимает 4–5 часов.
  • Диагностика латентных инфекций . ПЦР-методом диагностируются трудно культивируемые и некультивируемые формы микроорганизмов, встречающиеся в тех случаях, когда заболевание протекает в скрытой форме.

Методом ПЦР можно выявлять возбудителей инфекции не только в организме человека, но и в почве, воде, продуктах питания.

Тем не менее не стоит думать, что ПЦР-диагностика не имеет недостатков. У нее есть свои ограничения, но их количество настолько незначительно, что не может отрицательно повлиять на популярность и эффективность метода:

  • Вероятность амплификации ДНК не только живого, но и погибшего микроорганизма . При проведении ПЦР-диагностики для контроля эффективности лечения необходимо соблюдать определенные требования. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка времени (1–2 месяца), за который происходит полное исчезновение возбудителя инфекции в организме.
  • Возможность возникновения перекрестной реакции . Подбор фрагментов ДНК (праймеров) осуществляется на основе знаний о генетическом строении конкретного микроорганизма. Но теоретически такой же фрагмент может присутствовать и у других микроорганизмов, геном которых на сегодняшний день еще не расшифрован. Их присутствие в пробе может привести к ложноположительному результату анализа.
  • Изменчивость микроорганизмов . Эта способность возбудителей к мутации иногда приводит к тому, что некоторые их штаммы становятся неуловимыми в процессе ПЦР-анализа.

Чтобы уменьшить риски, разработаны стандарты объемов испытаний тест-систем ПЦР-диагностики, включающие проверку на перекрестные реакции и тестирование всех известных штаммов конкретного возбудителя.

ПЦР-диагностика проводится в специальной лаборатории в несколько этапов.

  1. Забор биоматериала . Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть:
    • Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови.
    • Моча . Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций.
    • Мокрота . Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15–20 мг.
    • Кровь, сыворотка, плазма . С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь (1–1,5 мл), собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Хранить биоматериал можно не более суток при температуре 4°С. Замораживать кровь категорически запрещается.
    • Биологические жидкости . К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости. Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1–1,5 мл в стерильные пробирки.
    • Биоптаты , т.е. материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2–3 мм 3 .
  2. Хранение и транспортировка биоматериала . Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Если необходимо длительное хранение, то пробы помещают в холодильник с температурой 2–8°С на срок не более одних суток. Допустимо хранение некоторых биоматериалов в течение двух недель в замороженном виде при температуре -20°С. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено. Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов.
  3. Выделение ДНК из образца . Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором.
  4. Проведение ПЦР . Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2–3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные , включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные , не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе.
  5. Регистрация результатов . Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35–40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате.
  6. Интерпретация результатов исследования . Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций. На основании количественного результата можно сделать вывод о степени активности заболевания и определить характер лечения.

Цена ПЦР-диагностики зависит от того, на какую конкретно инфекцию пациент планирует проверяться, от вида анализируемого материала, методики тестирования — качественной или количественной. Цена за определение одной инфекции составляет от 200 до 800 рублей в разных клиниках. Кроме того, к стоимости анализа добавится и плата за забор биоматериала — около 400 рублей. Средняя стоимость ПЦР-диагностики разных видов приведена в таблице 1.

Таблица 1 . Примерные цены на анализы ПЦР в Москве

Название анализа Цена, руб.
Определение ДНК хламидия 750
Определение ДНК микоплазмы хоминис 540
Определение микоплазмы гениталиум 350
Определение ДНК уреаплазмы 350
Гонококк, определение ДНК 350
Определение ДНК герпеса (разные типы) 350–600
Определение ДНК кандиды 570
Вирус краснухи, определение РНК 800
Дифференцированное определение ДНК ВПЧ (разные типы) 350–1900 [1]

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Copyright © Иммунитет и инфекции