Можно при биопсии выявить вич

Если при гинекологическом осмотре или аппаратной диагностике на влагалищной поверхности шейки матки или в толще ее тканей были выявлены различные патологические изменения, нужно использовать такие точные методики исследований, как биопсия.

В ходе такой манипуляции осуществляется забор малого объема тканей пациентки для последующего исследования в особых условиях. Окрашивая образец специальными пигментами и используя особые маркеры, специалисты будут исследовать его на предмет наличия доброкачественных и злокачественных новообразований, а также в целях обнаружения предраковых состояний.

Если в ходе биопсии выясняется, что изменения в шейке матки имеют онкологический характер, врачи и лаборанты устанавливают наиболее точный диагноз по образцу тканей. Благодаря этому можно выбрать наиболее эффективную методику лечения и подобрать лучшие препараты.

Подготовка и предварительные обследования

Показания к биопсии шейки матки выявляются при кольпоскопии. Это гинекологический осмотр, в ходе которого изучается состояние входа во влагалище, а также внутренней его части. В частности, зева шейки матки, на котором зачастую видны следы органических изменений при различных патологиях.

Кроме того, мы назначаем пациенткам PAP-тест. В ходе процедуры врач, предварительно очистив зев шейки матки, при помощи особого инструмента берет соскоб с него. Манипуляция абсолютно безболезненна. Затем материал направляется в лабораторию для цитологических исследований. При помощи микроскопии клеток и воздействия на них особыми веществами специалисты обнаруживают наличие единиц ткани в предраковом состоянии.

В большинстве случаев результаты такого анализа положительные, и проводить дополнительные исследования не нужно. Однако если у пациентки обнаруживаются признаки изменений онкологического характера, нужно переходить к подготовке к биопсии шейки матки.

К факторам, которые могут говорить о риске наличия доброкачественных и злокачественных новообразований, относятся:

наличие йод-негативных участков при кольпоскопии;
окрашивание отдельных участков эпителия в белый оттенок при контакте с уксусной кислотой;
цитологические признаки, выявленные в результате PAP-теста.

В таком случае мы рекомендуем пройти биопсию шейки матки в нашей клинике в Краснодаре. Это быстрая и простая процедура, которая позволяет выявить заболевания онкологического профиля на ранних этапах развития, когда от них можно избавиться легко и быстро.

Биопсия шейки матки может проводиться при беременности, если гинеколог подозревает онкологию. В иных ситуациях процедуру переносят на послеродовой период.

Подготовка к манипуляции включает медицинское обследование, направленное на выявление сопутствующих заболеваний и инфекций, а также воспалительных процессов. Пациентке нужно сдать:

общий и биохимический анализ крови;
коагулограмму;
анализы на ИППП (ВИЧ, сифилис, гепатит B и C);
мазок из влагалища;
общий анализ мочи.

Специалисты нашего центра исследуют результаты анализов. При благополучном состоянии пациентки и отсутствии противопоказаний (например, воспалительных процессов), врачи переходят к юридической стороне подготовки к биопсии шейки матки.

Клиенты нашей клиники подписывают согласие на проведение процедуры, а также на соблюдение медицинских предписаний – половой покой в течение суток, а также отмена на этот период ввода любых медикаментов во влагалище.

Особенности проведения биопсии

В медицине есть целый ряд типов и методов проведения биопсии шейки матки. Специалисты OXY-center используют наиболее безопасные и информативные из них.
В каждом случае мы учитываем индивидуальные особенности пациентки, показатели ее анализов и результатов осмотра, чтобы прибегнуть к определенной методике в пользу достоверности полученных данных или безболезненности для организма.

Другие способы проведения манипуляции менее инвазивны и способствуют сохранению целостности тканей шейки матки:

Конизация. Эта методика подразумевает забор образца тканей конической формы. При этом остается точечная ранка на поверхности зева шейки матки. Однако благодаря особой форме образца специалисты могут оценить состояние как поверхностных структур, так и подлежащих тканей. Взятие материала проводится под местным, региональным или общим обезболиванием, в зависимости от чувствительности пациентки.
Выскабливание. При проведении такой биопсии шейки матки при помощи специального инструмента – кюретки, снимается часть слизистой оболочки с зева. В материале содержится большое количество эпителиальных клеток, что позволяет оценить их состояние с довольно большой выборкой. Зачастую проводится при спинальной анестезии.
Петельная электрохирургическая биопсия. Такая методика является самой безболезненной и малоинвазивной. Забор материала осуществляется тонкой металлической нитью, по которой проходит слабый электрический ток. Однако из-за температурных воздействий на образец этот способ малоинформативен. Поэтому к нему прибегают только при особых показаниях. Для взятия материала специалисты обезболивают шейку матки спинальной или локальной анестезией.

Все виды процедур занимают не более часа. Продолжительность зависит от выбранной методики и индивидуальных особенностей строения тела пациентки.

Болезненность биопсии и ожидание результатов

Поскольку проведение забора материала связано с повреждением тканей пациентки, хоть и в малом объеме, специалисты используют различные обезболивающие препараты – анестетики. Шейка матки является частью тела женщины, в которой переплетается множество нервных окончаний, но болевых рецепторов среди них нет.
Поэтому продолжительность анестезии при биопсии и подбор препаратов для снижения ее болезненности зависят от индивидуальных особенностей пациентки.

Кроме того, выбор анестетиков и методик обезболивания зависит от масштабов вмешательства, то есть конкретного метода забора материала. Конечно, наиболее эффективной считается общая анестезия. Но это серьезное медикаментозное воздействие, которое может негативно сказываться на состоянии пациентки.

Поэтому зачастую специалисты используют локальную анестезию, то есть введение лидокаина и других средств. Также в отдельных случаях (например, при хирургическом заборе материала), применяется спинальная анестезия. Это укол в область поясницы, с которым вводится особое вещество, блокирующее болевую чувствительность в нижней половине тела.

При проведении биопсии шейки матки пациентке необходимо максимально расслабить все мышцы, а также не испытывать эмоциональных переживаний. Это позволит избежать осложнений и болей, напоминающих схватки.

Стоимость процедуры

Цена биопсии шейки матки зависит от выбранного метода взятия биоматериала. Уточнить ее вы можете у администратора нашей клиники.

эрозия шейки матки
отрицательный результат мазка на цитологию
обнаружение нетипичных отклонений, которые были диагностированы во время проведения кольпоскопии (ацетобелый эпителий, йод-негативные участки)
наличие полипов, кондилом, опухолевидных образований
лейкопатия

Проводится биопсия на 7-13 день менструального цикла.

обнаружение воспалительных очагов во время приема гинеколога, нуждающихся в дальнейшем исследовании и лечении
начавшийся менструальный цикл
о беременности врачу необходимо сообщить заранее.

Перед проведением процедуры необходимо сдать ряд обследований и анализов для того, чтобы сократить риск появления и осложнения инфекционных заболеваний.

общий анализ крови
коагулограмма (анализ свертываемости крови)
мазок на флору (возможность выявить заболевания половой системы)
мазок на цитологию
провести кольпоскопию
анализы на скрытые инфекции (которые не имеют внешних проявлений)
анализы на ВИЧ, гепатит, сифилис

Кроме этого, перед самой процедурой рекомендуется отказаться от лекарственных препаратов, которые вводятся в полость влагалища, от использования тампонов, спринцевания, сексуальных контактов за 2 дня до проведения процедуры.

воспалительные заболевания шейки матки
беременность(1 и 3 триместр)

В этих случаях биопсию придется отложить.

Случаи, когда в вовремя беременность требуется проведение биопсии шейки матки встречаются, когда ваш лечащий врач замечает подозрительные изменения в области шейки матки и принимает решение, что ждать до родов невозможно биопсию проводят во время беременности.
На сроке до 12 недель проведение биопсии грозит риском повышения вероятности выкидыша, а на поздних сроках повышает вероятность преждевременных родов, поэтому биопсию шейки матки при беременности проводят во втором триместре, когда риск ниже.
Если обнаруженные изменения в шейки матке не требуют оперативной диагностики, то манипуляцию можно отложить на послеродовой период, не ранее 6 недель после родов.

Работу сайта поддерживают:

Адвокация пїЅ это ряд мероприятий, направленных на лиц, принимающих решения, и политических деятелей, с целью поддержки конкретных политических вопросов. Процесс адвокации считается завершенным, когда принимается решение, и в соответствии с ним проводятся определенные действия. В целом адвокация пїЅ это процесс постоянного воздействия на ситуацию, установки, политику и законы, посредством влияния на ключевых людей и организации, имеющие власть, а также на структуры и системы разных уровней, с тем, чтобы улучшить условия, в которых находятся люди, затронутые конкретной проблемой.

Мифы и факты: что следует знать и помнить о ВИЧ
Хотя, пожалуй, самый распространённый миф пїЅ это то, что никакого ВИЧ и СПИД на самом деле нет. И что всё это происки фармацевтических компаний, которые хотели заставить людей покупать дорогущие препараты. Но увы, проблема есть, и от её игнорирования всем будет только хуже. А вот о развенчании некоторых опасных заблуждений пїЅ нет.
Лечение ВИЧ намного хуже самой болезни
Расскажите это пациентам с рассеянным склерозом. Или диабетикам. Или людям с пересаженными органами. Вот уж кому на самом деле тяжко.
Нет, не спорим, у ВИЧ ещё и серьёзная психологическая составляющая, однако не надо излишне драматизировать. Да и медицина постоянно развивается пїЅ носителю уже не надо пить таблетки строго по часам. Да и побочных эффектов всё меньше и меньше.
С ВИЧ долго не живут
Долго не живут со СПИДом. Тут уже да, любой лишний чих пїЅ всё, можно морально готовиться к месяцам тяжелого лечения. А непосредственно ВИЧ пїЅ это только ПОТЕНЦИАЛЬНАЯ проблема. И чтобы случайно не превратить её в реальную, нужно довольно серьёзно подойти к своему образу жизни.
Минимум вредных привычек, максимум физической активности и различных укреплений организма. Регулярное лечение и обследование, быстрое и качественное лечение всех прочих заболеваний, чтобы не дай Боже не ослабить иммунитет. Да, сложно. Но вполне реально.
ВИЧ пїЅ это приговор
И диабет - это приговор. И гепатит - это приговор. И, боже упаси, клиническая шизофрения пїЅ это тоже приговор. Любая болезнь пїЅ суть приговор, поскольку всегда оставляет на теле свои следы. Просто они бывают разной степени тяжести.
Что касается конкретно носителей ВИЧ, то современная медицина научилась неплохо так поддерживать их здоровье и общее состояние. У инфицированных матерей вполне могут рождаться здоровые дети, а у здорового партнёра носителя ВИЧ эта инфекция не обнаружится никогда. Более того, не так давно разработали лекарство так называемой пїЅдоконтактной профилактикипїЅ. То есть носитель ест таблеточку и даже при незащищённом контакте партнёру ничего не грозит. Жаль только, что это а) дорого б) работает не со всеми штаммами вируса.
Презервативы не помогают на 100 процентов, поэтому они бесполезны
Единственныей метод, который поможет на все сто процентов в данном случае пїЅ полное и абсолютное воздержание. Также не слишком эффективны дешевые тонкие презервативы, которые рвуться от любого неловкого движения. А если изделие качественное, правильно надетое, ещё и дополнительно смазанное пїЅ тогда опасаться практически нечего.
Я чувствую себя хорошо, так что у меня не может быть ВИЧ
А наличие ВИЧ вовсе не обязательно сопровождается резкими клиническими проявлениями. Ну подумаешь, простуда длится раза в 3 дольше. Ну есть субфебрильная температура без видимых причин пїЅ это же практически ерунда. А нет, не ерунда. Хроническая форма носительства ВИЧ может годами о себе никак не заявлять. Вообще никак, если у организма изначально были неплохие резервы. Зато потом.
Я уже когда-то сдавал анализы, так что теперь мне ничего не грозит
Ох, не факт. Может быть ложнонегативнаяя проба пїЅ это раз. Вирус, попавший в кровь, мог ещё не успеть дать иммунный ответ (антитела) пїЅ это два. Не все методы одинаково чувствительны к ВИЧ пїЅ это три.
Короче, один раз ещё ничего не доказывает. Вот двухэтапный анализ с интервалом в несколько месяцев пїЅ уже может дать достоверную информацию. И различные хитрые методы исследования, которые бесплатно не проводятся.
ВИЧ вообще не существует в природе
Ну да. А данные электронной микроскопии кто-то рисует в фотошопе, химические реакции подделывают, врачи врут, лабораторные крысы кончают жизнь самоубийством,а за всем этим сидят ехидные владельцы фармакологических корпораций и греют руки над баснословными суммами, которые несчастные вынуждены платить за своё лечение. Серьёзно, вам не кажется эта картина абсурдной?

Часто задаваемые вопросы
Могли ли быть эпидемии СПИДа в прошлом, но мы о них ничего не знаем?

пїЅКаждый человек должен знать свой ВИЧ-статус. Это модно, стильно, современно, это один из важных кирпичиков ответственного отношения к своему здоровью и здоровью своих близких.пїЅ

Сделай тест на ВИЧ! Для этого потребуется одна капля крови и полчаса! Не называй своё имя! Не плати! Нажми здесь!

Запущена новая платформа parhiv.lv На ней размещены материалы о ВИЧ и жизни с ВИЧ, форум для общения ВИЧ+ людей, есть возможность задать вопрос и получить компетентный ответ врача.

Общество "DIA+LOGS, центр поддержки всем, кого касается ВИЧ/СПИД" предлагает услугу опорного лица / социального ментора ВИЧ-позитивным . Интересующихся просят звонить 28632639 .

Прочесть обязательно! Доклад Генерального секретаря ООН (71-я сессия, 2016) пїЅК ликвидации эпидемии СПИДа ускоренными темпамипїЅ

Телефон группы поддержки ВИЧ-позитивным 24801359

Рижанин! Прояви максимум ответственности, сделай экспресс-тест на ВИЧ БЕСПЛАТНО И АНОНИМНО в любом из пунктов профилактики!

пїЅC ВИЧ можно жить. Быть успешным. Строить карьеру. И не подвергать риску ни себя, ни окружающих.пїЅ

Попова М.Ю., Танцурова К.С., Яковлева Ю.А.

Рак шейки матки у ВИЧ-инфицированных женщин

Попова М.Ю., Танцурова К.С., Яковлева Ю.А.

ФГБОУ ВО Южно-Уральский ГМУ Минздрава России

Кафедра акушерства и гинекологии

Рак шейки матки у ВИЧ-инфицированных женщин

Попова М.Ю., Танцурова К.С., Яковлева Ю.А.

ФГБОУ ВО Южно-Уральский ГМУ Минздрава России

Кафедра акушерства и гинекологии

Рак шейки матки у ВИЧ-инфицированных женщин

Попова М.Ю., Танцурова К.С., Яковлева Ю.А.

ФГБОУ ВО Южно-Уральский ГМУ Минздрава России

Кафедра акушерства и гинекологии

Актуальность. Рак шейки матки (РШМ) представляет собой одну из наиболее частых злокачественных опухолей̆ женской репродуктивной системы. Среди онкологических заболеваний у молодых женщин рак шейки матки имеет самые высокие показатели смертности. Источником раковой опухоли шейки матки служат нормальные клетки, покрывающие шейку матки. Ежегодно эту опухоль выявляют более чем у 600 тысяч пациенток [6]. Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) вызывает синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД) и является одним из факторов риска развития плоскоклеточного интраэпителиального поражения или squamous intraepithelial lesion (SIL), возникающего в результате нарушения иммунного контроля. С течением времени SIL переходит в инвазивный рак шейки матки.

Цель работы. Изучить особенности возникновения, течения, диагностики, лечения рака шейки матки у ВИЧ- инфицированных женщин.

Задачи исследования. Установить взаимосвязь прогрессирования рака шейки матки у женщин с ВИЧ-положительным статусом.

Материалы и методы. По классификации выделяют LSIL, или Low grade SIL, или легкая степень и HSIL, или Hight grade SIL, или тяжелая степень. SIL должна своевременно лечиться (путем удаления или уничтожения внешних слоев клеток шейки

матки), чтобы не дать ей перерасти в инвазивный рак.

У ВИЧ инфицированных женщин переход SIL в рак шейки матки происходит намного быстрее, чем у здоровых женщин, вследствие поражения иммунной системы. ВИЧ поражает клетки крови человека, имеющие на своей поверхности CD4-рецепторы, а именно: Т-лимфоциты, макрофаги и дендритные клетки. Инфицированные Т-лимфоциты гибнут из-за разрушения вирусом, апоптоза и уничтожения цитотоксическими Т-лимфоцитами. Если число CD4+ T-лимфоцитов становится ниже 200 в одном микролитре крови, система клеточного иммунитета перестает защищать организм [3]. Исследования показали, что нелеченая неоплазия шейки матки с большей вероятностью переходит в инвазивный рак у ВИЧ-инфицированных женщин, чем у здоровых [4, 5].

При жидкостной цитологии забор материала проводится цитощетками, которые предназначены для взятия биологического материала с поверхности шейки матки и из цервикального канала для цитологических и бактериологических исследований, при этом образец не сразу переносится на стекло, а цитощетка с собранным материалом погружается в специальный раствор и затем с помощью прибора готовится образец для исследования. Цитощетка удобна в применении, атравматична для взятия материала. При необходимости рабочая часть может быть согнута под любым углом по отношению к рукоятке. Это позволяет адаптировать инструмент в зависимости от анатомических особенностей зоны, с которой выполняется забор материала.

Терапия требует чёткого соблюдения графика приёма. Недопустимо пропускать приемы препаратов, как и принимать уменьшенные или увеличенные дозы в случае пропуска.

Появление и развитие рака шейки матки — это многоступенчатый процесс. Этапы развития рака шейки матки представлены следующим образом: нормальный эпителий шейки матки => дисплазия эпителия (легкая, умеренная, тяжелая) => внутриэпителиальный рак (или рак 0 стадии, неинвазивный рак) => микроинвазивный рак => инвазивный рак. Самыми ранними проявлениями могут быть водянистые обильные выделения, кровянистые выделения, которые у женщин детородного возраста не связаны с менструациями, а у женщин в постменопаузе наблюдаются постоянно или периодически, выделения могут иметь неприятный запах. Выделение мочи и кала через влагалище свидетельство мочевлагалищных и прямокишечно-влагалищных свищей. При IV стадии появляются метастатические паховые и надключичные лимфоузлы.

Рак шейки матки делят на четыре стадии (I, II, III и IV), каждая из стадий делится на две подстадии (A и B), а каждая из подстадий IA и IB еще на две — IA1, IA2 и IB1, IB2. Выбор метода лечения рака шейки матки зависит от стадии заболевания. Хирургическое лечение используют при стадиях IA1, IA2, IB и реже IIA. Объем операции зависит от глубины инвазии, наличии метастазов в тазовых и парааортальных лимфоузлах. При стадии IA1 возможно выполнение конизации шейки матки (клиновидная биопсия, конусовидная эксцизия — ампутация конусовидного участка шейки матки, которая состоит в удалении части шейки матки в виде конуса) или простой экстирпации матки с придатками: трубами и яичниками. При стадиях IA2, IB1, IB2 и IIA показана радикальная экстирпация матки с удалением тазовых, а иногда и парааортальных лимфоузлов. Во время этой операции кроме матки с придатками и лимфоузлов удаляют еще и верхнюю треть влагалища, а также части связок матки и жировую клетчатку параметрия и клетчатку, окружающую шейку матки. При обнаружении метастазов в лимфоузлах, лечение после операции дополняют лучевой или одновременной химиолучевой терапией. Обычно комбинированное лечение (операция+лучевая терапия) проводят при стадиях IB и IIA. Иногда при инвазивном раке шейки матки (стадии IA2, IB1) выполняют сложную радикальную операцию, которая позволяет сохранить детородную функцию, под названием трахелэктомия. Во время операции удаляют только пораженную раком ткань шейки матки и окружающие лимфатические узлы [4]. Эффективность хирургического лечения и лучевой терапии при ранних стадиях инвазивного рака шейки матки практически одинаковая, лучевая терапия используется в виде дистанционной гамматерапии и брахитерапии. Длительность сочетанной лучевой терапии (дистанционной и брахитерапии) не должна превышать 55 дней. При стадиях IB2–IV стандартным лечением во всем мире признана одновременная химиолучевая терапия (раньше при этих стадиях проводили только лучевую терапию). При IVB стадии возможно применение только химиотерапию. Однако, женщины больные СПИДом и раком шейки матки одновременно, вылечиваются от рака не так успешно, как ВИЧ-отрицательные пациентки [5, 6].

Результаты исследования. Таким образом, в связи с большой вероятностью возникновения рака шейки матки у ВИЧ-инфицированных женщин и с целью раннего его выявления, им необходимо сделать ПАП-мазок, при отсутствии выявления атипичных клеток, необходимо повторить исследование через полгода, а затем, при отрицательных результатах, 1 раз в год. При обнаружении в ПАП-мазке всех видов SIL выполняется кольпоскопия с прицельной биопсией изменённых участков слизистой матки. Это позволяет не только выявить рак шейки матки на начальных стадиях, но также предупредить его развитие, путём диагностирования предопухолевых изменений эпителия шейки матки, лечение которых не позволяет развиться опухоли.

Выводы. СПИД-ассоциированный рак шейки матки развивается более стремительно, чем рак шейки матки ВИЧ-отрицательных женщин и приводит к многочисленным осложнениям. У женщин с положительным ВИЧ статусом предопухолевое состояние шейки матки с большей̆ вероятностью переходит в инвазивный рак, чем у ВИЧ-отрицательных женщин. Женщины, больные СПИД и ВИЧ-инфицированные женщины, должны находиться под постоянным наблюдением системой здравоохранения, так как имеют более высокий риск развития рака шейки матки.

Список литературы

1. У В.Н. Ошибки в лечении дисплазии шейки матки / В.Н. Беляковский // Иммунопатология, аллергология, инфектология. – 2008. – №1. – С. 83-87.

2. Биджиева Б.А. Генетическая нестабильность и аллельный полиморфизм у больных с дисплазиями и раком шейки матки, вызванными персистенцией ДНК вируса папилломы человека / Б.А. Биджиева. – М.: МИА, 2008. – 34 с.

3. Красногольский В.И. Патология влагалища и шейки матки / В.И. Красногольский. – М.: Медицина, 2007. – 172 с.

4. Прилепская В.Н., Роговская С.И., Межевитинова С.А. Кольпоскопия: практическое руководство / В.Н. Прилепская, С.И. Роговская, С.А. Межевитинова. – М.: МИА, 2001. – 100 с.

5. Садовникова В.Н., Вартапетова Н.В., Карпушкина A.B. Эпидемиологическая характеристика ВИЧ-инфекции у женщин / В.Н. Садовникова, Н.В. Вартапетова, А.В. Карпушкина // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. – 2011. – №6. – С. 4-10.

6. Трушина О.И., Новикова Е.Г. Роль папилломавирусной инфекции в генезе рака шейки матки / О.И. Трушина, Е.Г. Новикова // Российский онкологический журнал. – 2009. – №1. – С. 45- 51.

За звучной аббревиатурой ПЦР скрывается сложная и не слишком понятная для рядового пациента расшифровка — полимеразная цепная реакция. Что же такое ПЦР-диагностика, на чем она основана и почему в последнее время ее стали считать самой перспективной технологией в постановке диагнозов, касающихся инфекционных и вирусных заболеваний? Мы расскажем о преимуществах ПЦР-метода, его особенностях и этапах проведения.

ПЦР-диагностика: что это такое?

Диагностика методом ПЦР существует чуть более 30 лет. Значительно эволюционировав за это время, она зарекомендовала себя как один из наиболее точных способов выявления инфекций. В основе метода лежит принцип многократного увеличения микроскопических концентраций фрагментов ДНК возбудителя в биологической пробе пациента в искусственных условиях. В результате сложного процесса, называемого амплификацией, под воздействием ферментов и изменения температуры (от 50 до 95°С) из одной молекулы ДНК образуется две. При этом происходит копирование участка ДНК, который присутствует только у того вида патогенного микроорганизма, который интересует врача.

Цикл образования новой молекулы ДНК занимает всего около 3 минут, а тридцати-сорока циклов вполне достаточно, чтобы получить количество молекул, необходимое для достоверного визуального определения методом электрофореза.

Кроме амплификации, то есть простого увеличения числа копий молекулы ДНК, с помощью ПЦР можно производить и другие манипуляции с генетическим материалом, например, сращивать фрагменты ДНК, вводить мутации и т.д. Это позволяет использовать ПЦР не только для диагностики инфекционных и генетических заболеваний, но и для установления отцовства, клонирования и выделения новых генов.

ПЦР-диагностика проводится в специальных лабораториях с помощью амплификационного оборудования. На сегодня существует множество различных модификаций ПЦР, включая технологии с использованием не только ДНК, но и фрагментов рибонуклеиновой кислоты (РНК). В некоторых из них амплификация осуществляется при постоянной температуре, и для их проведения специальное оборудование не требуется.

Еще одна популярная модификация ПЦР — мультиплексная амплификация (МПА), которая позволяет проводить исследование сразу нескольких изучаемых фрагментов в одной пробирке. Это не только ускоряет и удешевляет проведение анализа, но и позволяет рассматривать одни фрагменты, получившиеся в результате реакции, в качестве положительных маркеров для других, что еще больше увеличивает точность исследования методом ПЦР.

В клинической медицине ПЦР-диагностика является одним из наиболее востребованных методов анализа в самых разных сферах:

Прямое определение возбудителя инфекции. Некоторые традиционные методы, такие как иммуноферментный анализ (ИФА), выделяют только белки-маркеры, которые являются продуктом жизнедеятельности возбудителей инфекции, а потому только косвенно указывают на присутствие микроорганизмов. Наличие специфического участка в ДНК, выявленное с помощью ПЦР, безошибочно или почти безошибочно указывает на присутствие конкретной инфекции.
Высокая специфичность метода . Она обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется фрагмент ДНК, характерный только для конкретного возбудителя инфекции. Специфичность исключает возможность ложных результатов анализа, тогда как в иммунологических методах исследований ошибки вполне вероятны из-за перекрестной реакции антигенов.
Высокая чувствительность . При помощи ПЦР-диагностики можно выявить присутствие в организме даже единичных клеток вирусов или бактерий в тех случаях, когда обычными методами сделать это практически невозможно. ПРЦ определяет наличие всего 10–100 клеток в пробе, тогда как иммунологическими и микроскопическими тестами можно определить наличие инфекции при количестве клеток не менее 103–105.
Универсальность . Сходство состава всех ДНК или РНК дает возможность применять универсальные методы лабораторных исследований, диагностируя сразу несколько возбудителей из одной биологической пробы.
Скорость получения результатов . Поскольку для проведения ПЦР-диагностики не нужен посев и выделение культуры возбудителя, то и большого количества времени на нее не требуется. Весь цикл — от забора биоматериала до получения результатов — занимает 4–5 часов.
Диагностика латентных инфекций . ПЦР-методом диагностируются трудно культивируемые и некультивируемые формы микроорганизмов, встречающиеся в тех случаях, когда заболевание протекает в скрытой форме.

Методом ПЦР можно выявлять возбудителей инфекции не только в организме человека, но и в почве, воде, продуктах питания.

Тем не менее не стоит думать, что ПЦР-диагностика не имеет недостатков. У нее есть свои ограничения, но их количество настолько незначительно, что не может отрицательно повлиять на популярность и эффективность метода:

Вероятность амплификации ДНК не только живого, но и погибшего микроорганизма . При проведении ПЦР-диагностики для контроля эффективности лечения необходимо соблюдать определенные требования. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка времени (1–2 месяца), за который происходит полное исчезновение возбудителя инфекции в организме.
Возможность возникновения перекрестной реакции . Подбор фрагментов ДНК (праймеров) осуществляется на основе знаний о генетическом строении конкретного микроорганизма. Но теоретически такой же фрагмент может присутствовать и у других микроорганизмов, геном которых на сегодняшний день еще не расшифрован. Их присутствие в пробе может привести к ложноположительному результату анализа.
Изменчивость микроорганизмов . Эта способность возбудителей к мутации иногда приводит к тому, что некоторые их штаммы становятся неуловимыми в процессе ПЦР-анализа.

Чтобы уменьшить риски, разработаны стандарты объемов испытаний тест-систем ПЦР-диагностики, включающие проверку на перекрестные реакции и тестирование всех известных штаммов конкретного возбудителя.

ПЦР-диагностика проводится в специальной лаборатории в несколько этапов.

Забор биоматериала . Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть:
- Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови.
- Моча . Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций.
- Мокрота . Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15–20 мг.
- Кровь, сыворотка, плазма . С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь (1–1,5 мл), собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Хранить биоматериал можно не более суток при температуре 4°С. Замораживать кровь категорически запрещается.
- Биологические жидкости . К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости. Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1–1,5 мл в стерильные пробирки.
- Биоптаты , т.е. материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2–3 мм 3 .
Хранение и транспортировка биоматериала . Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Если необходимо длительное хранение, то пробы помещают в холодильник с температурой 2–8°С на срок не более одних суток. Допустимо хранение некоторых биоматериалов в течение двух недель в замороженном виде при температуре -20°С. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено. Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов.
Выделение ДНК из образца . Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором.
Проведение ПЦР . Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2–3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные , включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные , не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе.
Регистрация результатов . Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35–40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате.
Интерпретация результатов исследования . Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций. На основании количественного результата можно сделать вывод о степени активности заболевания и определить характер лечения.

Цена ПЦР-диагностики зависит от того, на какую конкретно инфекцию пациент планирует проверяться, от вида анализируемого материала, методики тестирования — качественной или количественной. Цена за определение одной инфекции составляет от 200 до 800 рублей в разных клиниках. Кроме того, к стоимости анализа добавится и плата за забор биоматериала — около 400 рублей. Средняя стоимость ПЦР-диагностики разных видов приведена в таблице 1.

Таблица 1 . Примерные цены на анализы ПЦР в Москве

Название анализа	Цена, руб.
Определение ДНК хламидия	750
Определение ДНК микоплазмы хоминис	540
Определение микоплазмы гениталиум	350
Определение ДНК уреаплазмы	350
Гонококк, определение ДНК	350
Определение ДНК герпеса (разные типы)	350–600
Определение ДНК кандиды	570
Вирус краснухи, определение РНК	800
Дифференцированное определение ДНК ВПЧ (разные типы)	350–1900 [1]

Читайте также: