Сап и мелиоидоз диагностика

МЕЛИОИДОЗ (Melioidosis), ложный сап, инфекционная болезнь животных и человека, характеризующаяся септицемией с образованием абсцессов во внутр. органах. Болезнь регистрируется в ряде стран Юго-Вост. Азии, на о-вах Шри-Ланка и Мадагаскар, в Австралии, Юж. Америке, Панаме, США. Экономич. ущерб от М. невелик, т. к. это заболевание у с.-х. животных встречается спорадически. Однако М. очень опасен для людей.

Этнология. Возбудитель болезни — Pseudomonas pseudomallei, нежная, тонкая палочка с закруглёнными [закругленными] концами, размером 2—6 X 0,5—1 мкм, встречаются нитевидные формы дл. 15— 20 мкм; грамотрицательная, подвижная. Хорошо растёт [растет] на обычных питат. средах при t 37,5˚C, аэроб. Возбудитель М. имеет антигенное родство с возбудителем сапа . Нагревание до t 56˚C убивает бактерию М. через 10—15 мин;1%-ный р-р фенола, 0,1%-ный р-р формальдегида — через 24 ч; на холоде (—4 °С) она погибает через 2—3 нед. Устойчива к высушиванию. В воде сохраняет жизнеспособность до 44 сут, в кале — до 27, в моче — до 17 сут.

Эпизоотология. В естеств. условиях М. болеют крысы, мыши, реже морские свинки, кролики, иногда кошки и собаки. Описаны вспышки М. у овец, коз и свиней; спорадически — у кр. рог. скота, лошадей и кенгуру. Восприимчив и человек. Резервуар возбудителя М. в природе — грызуны. Возбудитель выделяется из организма больных животных с носовым истечением, из кожных поражений, с мочой и калом. Заражение происходит алиментарно, аэрогенно и через кожу. Иммунитет изучен недостаточно.

Течение и симптомы. Инкубационный период у животных при экспериментальном заражении от 2 до 11 сут. У больных овец отмечают лихорадку, шаткую походку, отсутствие аппетита, кашель, одышку, истечение из носовой полости и глаз, признаки поражения ц. н. с. (менингоэнцефалит). Болезнь длится от 8 до 30 сут и заканчивается, как правило, летально. У морских свинок повышается темп-pa тела, наблюдаются гнойный конъюнктивит, ринит, вагинит, абсцессы и язвы на коже. Животные погибают через 2—3 нед.

Патологоанатомические изменения. Печень и селезёнка [селезенка] увеличены, содержат узелки и абсцессы. Такие же поражения обнаруживают в почках, лёгких [легких] , мочевом пузыре, жёлчном [желчном] пузыре, подкожной клетчатке, мышцах, костях. В головном мозге находят микроабсцессы и инфильтрацию мозговых оболочек.

Диагноз на М. по эпизоотол., клинич. и патологоанатомич. данным поставить трудно, поэтому необходимо проводить лабораторное исследование (бактериол. исследование мочи, крови, экссудатов, содержимого абсцессов, носового истечения). Применяют метод люминесцирующих антител, биопробу на морских свинках (самцах). М. дифференцируют от сапа.

Лечение. Эффективно комплексное лечение хлорамицетином, эритромицином, полимиксином, сульфадимезином, норсульфазолом с одновременным применением специфич. лошадиного гамма-глобулина.

Профилактика и меры борьбы. Для предупреждения М. уничтожают грызунов и кровососущих насекомых, не допускают загрязнения экскрементами крыс и мышей кормов, животноводч. продуктов и воды. При возникновении М. больных изолируют; очищают и дезинфицируют помещения; принимают меры к недопущению заражения людей.

Мелиоидоз человека. Люди заражаются в основном при употреблении инфицированных пищи и воды. Возможно заражение респираторным путём [путем] , а также при укусе насекомых. При наиболее тяжёлой [тяжелой] форме сверхострое течение характеризуется подъёмом [подъемом] темп-ры до 40—41°С, головными и мышечными болями, потерей сознания, нарушением функций сердечнососудистой системы и жел.-киш. тракта. Смерть наступает на 2—5-е сут. Предупредительные меры — строгое соблюдение правил личной профилактики при проведении исследований животных, запрещение купания в стоячих водоёмах [водоемах] и употребления воды из них; уничтожение крыс.

Лит .; Бакулов И. А., Мелиоидоз, в кн.: Эпизоотология, под ред. Р. Ф. Сосова, М., 1969, с. 135-37; Мелиоидоз, в кн.: Руководство по тропическим болезням, М., 1974, с. 337-38; Тимаков В. Д., Возбудитель мелиоидоза, в его кн.: Микробиология, М., 1973, с. 329-31.

Полный текст:

1. Будченко А.А., Мазурова И.Ю., Илюхин В.И., Храпова Н.П. ROC-анализ результатов выявления антигенов возбудителей мелиоидоза и сапа твердофазным иммуноферментным методом. Проблемы особо опасных инфекций. 2013, 2: 37-41.

2. Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М., Высшая школа. 1991.

3. Илюхин В.И., Сенина Т.В. Мелиоидоз: итоги столетнего изучения, современные проблемы и зримые перспективы. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2012, 5: 41-46.

4. Кэтти Д. (ред.) Антитела. Методы. М., Мир. 1991.

5. Пивень Н.Н., Илюхин В.И., Замарин А.Е., Алексеев В.В., Васильев В.П. Адекватный выбор антигенов при серодиагностике экспериментального мелиоидоза. Журн. микро-биол. 2007, 2: 49-53.

7. Тихонов Н.Г., Липницкий А.В., Илюхин В.И. История открытия и изучения возбудителя сапа. В: Тихонов Н.Г. (ред.) Сап. Сборник научных трудов. Волгоград, Нижневолжское книжное, 1995, с. 4-6.

8. Ширяев Д.Т., Рассудов С.М., Гольдберг А.М., Лозовой Н.В., Родионова А.В. Эритроцитарные диагностикумы в реакции пассивной гемагглютинации при мелиоидозе и сапе. В: Диагностика особо опасных инфекций. Ростов Н/Д, 1968: 42-47.

9. Alexander A.D., Huxsoll D.L., Warner A.R. et al. Serological diagnosis ofhuman melioidosis with indirect hemagglutination and complement. Appl. Microbiol. 1970, 20: 825-833.

10. Allwood E.M., Logue C.-A., Hafner G.J. et al. Evaluation of recombinant antigens for diagnosis of melioidosis. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2008, 54: 144-153.

11. Anuntagool N., Rugdech P., Sirisinha S. Identification of specific antigens of Pseudomonas pseudomallei and evaluation oftheir efficacies for diagnosis of melioidosis. J. Clinical Microbiol. 1993,31: 1232-1236.

12. Chambon L., Fournier J., Lajudie P. et al. La reaction d’hemagglutination dans la melioidose. Ann. Inst. Pasteur. 1953, 85 (4): 530-534.

13. Chantratita N., Wuthiekanun V, Thanwisai A. et al. Accuracy of enzyme-linked immunosorbent assay using crude and purified antigens for serodiagnosis of melioidosis. Clin. Vaccine Immunol. 2007, 14: 110-113.

14. Chen Y.-S., Shiuan D., Chen S.-C. et al.' Recombinant truncated flagellin of Burkholderia pseudomallei as a molecular probe for diagnosis of melioidosis. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2003, 10: 423-425.

15. Cheng A.C., Currie B.J. Melioidosis: epidemiology, pathophysiology, and management. Clin. Microbiol. Rev. 2005, 18 (2): 383-416.

16. Chenthamarakshan V, Vadivelu J., Puthucheary S.D. Detection of immunoglobulins M and G using culture filtrate antigen of Burkholderia pseudomallei. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 2001,39(1): 1-7.

17. Dharakul T., Songsivilai S., Anuntagool N. et al. Diagnostic value of an antibody enzyme-linked immunosorbent assay using affinity-purified antigen in an area endemic for melioidosis. Am. J. Trap. Med. Hyg. 1997, 56: 418-423. 7

18. Engvall E., Perlmann P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G. Immunochemistry. 1971, 8 (9): 871-874.

19. Ileri S.Z. The indirect haemagglutination test in the diagnosis of melioidosis in goats. Br. Vet. J. 1965, 121: 164-170.

20. Kumar S., Malik R, Kumar Verma S. et al. Use of a recombinant Burkholderia intracellular motility A protein for immunodiagnosis of glanders. Clin. Vaccine Immunol. 2011, 18: 1456-1461.

21. Kunakom M., Boonma P., Khupulsup K. et al. Enzyme-linked immunosorbent assay for immunoglobulin M specific antibody for the diagnosis of melioidosis. J. Clin. Microbiol. 1990, 28: 1249-1253.

22. Laws L. Melioidosis in animals in North Queensland. Serological methods for the diagnosis in goats, pigs, cattle, horses and man. Queensland J. Agric. Sci. 1967, 24 (2): 223-234.

23. Limmathurotsakul D., Chantratita N., Teerawattanasook N. et al. Enzyme-linked immunosorbent assay for the diagnosis of melioidosis: better than we thought. Clin. Infect. Dis. 2011, 52: 1024-1028.

24. Pal V, Kumar S., Malik P. et al. Evaluation of recombinant proteins of Burkholderia mallei for serodiagnosis of glanders. Clin, hccine Immunol. 2012, 19: 1193-1198.

25. Petkanjanapong V, Naigowit P., Kondo T. et al. Use of endotoxin antigens in enzyme-linked immunosorbent assay for the diagnosis of P. pseudomallei infections (melioidosis). Asian Рас. J. Allergy Immunol. 1992, 10(2): 145-150.

26. Phung L.V., Han Y., Oka S. et al. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using a gly-colipid antigen for the serodiagnosis of melioidosis. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1995, 12 (3-4): 259-264.

27. Puah S.M., Puthucheary S.D., Chua K.N. Potential immunogenic polypeptides of Burkholderia pseudomallei identified by shotgun expression library and evaluation of their efficacy for serodiagnosis of melioidosis. Int. J. Med. Sci. 2013, 10 (5): 539-547.

28. Rice C.E., Konst H., Duthie R.C. Studies by complement-fixation methods of malleins produced in broth and synthetic media. 1. Relative immunizing activities in horses and rabbits copyright and license information. Can. J. Comp. Med. Vet. Sci. 1951, 15 (12): 284-291.

29. Rugdech R, Anuntagool N., Sirisinha S. Monoclonal antibodies to Pseudomonas pseudomallei and their potential for diagnosis of melioidosis. Am. J. Trop. Med. Hyg. March. 1995, 52: 231-235.

30. Sermswan R.W., Wongratanacheewin S., Anuntagool N. et al. Comparison of the polymerase chain reaction and serologic tests for diagnosis of septicemic melioidosis. Am. J. Trop. Med. Hyg. 2000,63: 146-149.

31. Sirisinha S., Anuntagool N., Dharakul T. et al. Recent developments in laboratory diagnosis of melioidosis. Acta Tropica. 2000, 74: 235-245.

32. Strauss A., Alexander A. D., RapmaundG. Melioidosis in Malaysia. Antibodies to Pseudomonas pseudomallei in human population. 1969, 18 (1): 703-707.

33. Tiyawisutsri R., Peacock S.J., Langa S. et al. Antibodies from patients with melioidosis recognize Burkholderia mallei but not Burkholderia thailandensis antigens in the indirect hemagglutination assay. J. Clin. Microbiol. 2005, 43: 4872-4874.

34. Westphal O., Jan K. Bacterial lipopolysaccharides; extraction with phenol-water and further applications of the procedures. Methods Carbohydr. Chem. 1965, 5: 83-91.

35. Wheelis M. First shots fired in biological warfare. Nature. 1998, 395: 213.

Будченко А.А. ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ МЕЛИОИДОЗА И САПА НА ОСНОВЕ РЕАКЦИИ ПАССИВНОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ И ТВЕРДОФАЗНОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии (ЖМЭИ). 2016;(4):86-95.

Budchenko A.A. EFFECTIVENESS OF A TEST-SVSTEM FOR DIAGNOSTICS OF MELIOIDOSIS AND GLANDERS BASED ON PASSIVE HEMAGGLUTINATION REACTION AND SOLID-PHASE ENZYME IMMUNOASSAY. Journal of microbiology epidemiology immunobiology. 2016;(4):86-95. (In Russ.)

Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.

Полный текст:

1. Алтухова В.В., Антонов В.А., Ткаченко Г.А. и др. Использование полимеразной цепной реакции для обнаружения возбудителей сапа и мелиоидоза при экспериментальной инфекции. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2007; 3:22-7.

2. Будченко А.А., Илюхин В.И., Викторов Д.В. Сравнительный анализ электрофореграмм суммарных клеточных белков патогенных буркхольдерий. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2005; 2:24-8.

3. Кулаков М.Я., Прохватилова Е.В., Храпова Н.П. Моноклональный эритроцитарный диагностикум для обнаружения возбудителей сапа и мелиоидоза. В кн.: Эколого-эпидемиологический надзор за природно-очаговыми инфекциями в Северном Прикаспии. Астрахань; 1996. С. 146-7.

5. Прохватилова Е.В., Храпова Н.П. О получении моноклональных люминесцирующих иммуноглобулинов для обнаружения возбудителя мелиоидоза. В кн.: Эколого-эпидемиологический надзор за природно-очаговыми инфекциями в Северном Прикаспии. Астрахань;1996. С. 147-8.

6. Ряпис Л.А., Илюхин В.И., Вострова Е.И. и др. Лабораторная диагностика клинически значимых видов псевдомонад. Лаб. дело. 1988;12:66-71.

7. Ткаченко Г.А., Антонов В.А., Замараев В.С., Илюхин В.И. Идентификация возбудителей сапа и мелиоидоза с помощью полимеразной цепной реакции. Мол. генет., микробиол. и вирусол. 2003; 3:7-11.

8. Храпова Н.П., Тихонов Н.Г., Рыбкин В.С. и др. Иммунологическая диагностика мелиоидоза. В кн.: Мелиоидоз. Волгоград; 1995. С. 57-68.

9. Antonov V.A., Tkachenko G.A., Altukhova V.V. et al. Molecular identification and typing of Burkholderia pseudomallei and Burkholderia mallei: when is enough enough? Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 2008; 102(Suppl 1):134-9.

10. Chantratita N., Vesaratchavest M., Wuthiekanun V. et al. Pulsed-field gel electrophoresis as a discriminatory typing technique for the biothreat agent Burkholderia mallei. Am. J. Trop. Med. Hyg. 2006; 74:345-7.

11. Cheng A.C., Currie B.J. Melioidosis: epidemiology, pathophysiology, and management. Clin. Microbiol. Rev. 2005; 2:383-416.

12. Currie B.J., Mayo M., Anstey N.M. et al. A cluster of melioidosis cases from an endemic region is clonal and is linked to the water supply using molecular typing of Burkholderia pseudomallei isolates. Am. J. Trop. Med. Hyg. 2001; 65:177-9.

13. Dharakul T., Songsivilai S., Viriyachitra S. et al. Detection of Burkholderia pseudomallei DNA in patients with septicemic melioidosis. J. Clin. Microbiol. 1996; 34(3):609-14.

14. Duangsonk K., Gal D., Mayo M. et al. Use of a variable amplicon typing scheme reveals considerable variation in the accessory genomes of isolates of Burkholderia pseudomallei. J. Clin. Microbiol. 2006; 44:1323-34.

15. Gilardi G.L. Identification of Pseudomonas and related bacteria In: Glucose nonfermenting Gramnegative bacteria in clinical microbiology. 1978. P. 16-44.

16. Godoy D., Randle G., Simpson A.J. et al. Multilocus sequence typing and evolutionary relationships among the causative agents of melioidosis and glanders, Burkholderia pseudomallei and Burkholderia mallei. J. Clin. Microbiol. 2003; 41:2068-79.

17. Harvey S.P., Minter J.M. Ribotyping of Burkholderia mallei isolates. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2005; 1:91-7.

18. Holden M.T.G., Titball R.W., Peacock S. et al. Genomic plasticity of the causative agent of melioidosis, Burkholderia pseudomallei. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004; 39:14240-245.

19. Inglis T.J.J., Merritt A., Chidlow G. et al. Comparison of diagnostic laboratory methods for identification of Burkholderia pseudomallei. J. Clin. Microbiolog. 2005; 5:2201-06.

20. Janda J.M., Abbot S.L. Bacterial identification for publication: When is enough enough? J. Clin. Microbiol. 2002; 6:1887-91.

21. Jones S.W., Dobson M.E., Francesconi S.C. et al. DNA assays for detection, identification, and individualization of select agent microorganisms. Croat. Med. J. 2005; 46:522-9.

22. Kaestli M., Mayo M., Harrington G. et al. Sensitive and specific molecular detection of Burkholderia pseudomallei, the causative agent of melioidosis, in the soil of tropical northern Australia. Appl. Environ. Microbiol. 2007; 2:6891-7.

23. Koh T.H., Ng L.S. Y., Ho J.L.F. et al. Automated identification systems and Burkholderia pseudomallei. J. Clin. Microbiol. 2003; 41:1809.

24. Koonpaew S., Ubol M.N., Sirisinha S. et al. Genome fingerprinting by pulsed-field gel electrophoresis of isolates of Burkholderia pseudomallei from patients with melioidosis in Thailand. Acta Trop. 2000; 74:87-191.

25. Kunakorn M., Markham R.B. Clinically practical seminested PCR for Burkholderia pseudomallei quantitated by enzyme immunoassay with and without solution hybridization. J. Clin. Microbiol. 1995;33:2131-5.

26. Layne S.P., Beugelsdijk T.J. High-throughput laboratories for Homeland and National Security. Biosecurity and bioterrorism: biodefence, strategy, practice and science. 2003; 2:123-30.

27. Lew A.E., Desmarchelier P.M. Detection of Pseudomonas pseudomallei by PCR and hybridization. J. Clin. Microbiol. 1994; 32:1326-32.

28. Merritt A., Inglis T.J.J., Chidlow G. et al. PCR-based identification of Burkholderia pseudomallei. Rev. Inst. Med. Trop. Sao Paulo. 2006; 5:239-244.

29. Meumann E.M., Gal D., Novak R.T. et al. Clinical evaluation of a type III secretion system real-time PCR assay for diagnosing melioidosis. J. Clin. Microbiol. 2006; 44:3028-30.

30. Nierman W.C., DeShazer D., Kim H.S. et al. Structural flexibility in the Burkholderia mallei genome. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004; 39:14246-251.

31. Novak R.T., Glass M.B., Gee J.E. et al. Development and evaluation of a real-time PCR assay targeting the type III secretion system of Burkholderia pseudomallei. J. Clin. Microbiol. 2006; 44:85-90.

32. Palleroni N.J. Family of Pseudomonadaceae. In: Bergey's manual of systematic bacteriology. Baltimore; 1984. P. 141-99.

33. Rainbow L., Hart C.A., Winstanley G. Distribution of type III secretion gene clusters in Burkholderia pseudomallei, B. thailandensis and B. mallei . J. Med. Microbiol. 2002; 51:374-84.

34. Rattanathongkom A., Sermswan R.W., Wongratanacheewin S. Detection of Burkholderia pseudomallei in blood samples using polymerase chain reaction. Mol. Cell. Probes.1997; 11:25-31.

35. Sirishiha S., Anuntagool N., Dharakul T. et al. Recent developments in laboratory diagnosis of melioidosis. Acta Tropica. 2000; 74:235-45.

36. Sonthayanon P., Krasao P., Wuthiekanun V. et al. A simple method to detect and differentiate Burkholderia pseudomallei and Burkholderia thailandensis using specific flagellin gene primers. Mol. Cell. Probes. 2002; 3:217-22.

37. Supaprom C., Wang D., Leelayuwat C. et al. Development of Real-Time PCR assays and evaluation of their potential use for rapid detection of Burkholderia pseudomallei in clinical blood specimens. J. Clin. Microbiol. 2007; 9:2894-901.

38. Suppiah G., Bagali P.G., Vadivelu G. Development of polymerase chain reaction assay to detect Burkholderia genus and to differentiate the species in clinical specimens. In: The 5-th world melioidosis congress. Thailand, Khon Kaen; 2007. P. 245.

39. Tenover F.C., Arbeit R.D., Goering R.V. How to select and interpret molecular strain typing methods for epidemiological studies of bacterial infections: a review for healthcare epidemiologists. Infect. Control Hosp. Epidemiol. 1997; 18:426-39.

40. Thibault F. M., Valade E., Vidal D. R. Identification and discrimination of Burkholderia pseudomallei, B. mallei, and B. thailandensis by real-time PCR targeting type III secretion system genes. J. Clin. Microbiol. 2004; 42:5871-4.

41. Tomaso H., Scholz H.C., Al Dahouk S. et al. Development of 5- nuclease real-time PCR assays for the rapid identification of the Burkholderia mallei/Burkholderia pseudomallei complex. Diagn. Mol. Pathol. 2004; 13(4):247-53.

42. Ulrich M.P., Norwood D.A., Christensen D.R. et al. Using real-time PCR to specifically detect Burkholderia mallei. J. Med. Microbiol. 2006; 55:551-9.

43. Ulrich R., Ulrich M., Schell M. et al. Development of a polymerase chain reaction assay for the specific identification of Burkholderia mallei and differentiation from Burkholderia pseudomallei and other closely related Burkholderiaceae. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 2006; 1:37 - 45.

44. U'Ren J.M., Schupp J.M., Pearson T. et al. Tandem repeat regions within the Burkholderia pseudomallei genome and their application for high resolution genotyping. BMC. Microbiol. 2007; 7:23.

45. Vadivelu J., Puthucheary S.D., Mifsud A. et al. Ribotyping and DNA macrorestriction analysis of isolates of Burkholderia pseudomallei from cases of melioidosis in Malaysia. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1997; 91:358-60.

46. Vandamme P., Pot B., Gillis M. et al. Polyphasic taxonomy, a consensus approach to bacterial systematics. Microbiol. Rev. 1996; 60:407-38.

47. Van Pelt C., Verduin C.M., Goessens W.H.F. et al. Identification of Burkholderia spp. in the clinical microbiology laboratory: comparison of conventional and molecular methods. J. Clin. Microbiol.1 999; 7:2158-64.

48. Wattiau P., Van Hessche M., Neubauer H. et al. Identification of Burkholderia pseudomallei and related bacteria by Multiple-Locus Sequence Typing-derived PCR and Real-Time PCR. J. Clin. Microbiol. 2007; 45:1045-8.

49. Wilcox W.R., Lapage S.P., Holmes B. A review of numerical methods in bacterial identification. Antonie Van Leeuwenhoek. 1980; 46:233-99.

50. Winstanley C., Hart C.A. Presence of type III secretion genes in Burkholderia pseudomallei correlates with Ara- phenotypes. J. Clin. Microbiol. 2000; 38:883-5.

Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.

Мелиоидоз (melioidosis) (ложный сап, сапоподобное заболевание, болезнь Стантона, сап Рангуна, болезнь Флетчера, пневмоэнтерит) – инфекционная болезнь животных и человека, характеризующаяся лихорадкой, септицемией, образованием абсцессов в легких, печени, селезенке, почках и других органах, на коже – язв.

Этиология. Возбудитель — Pseudomonas pseudomallei. Представляет собой тонкую, грамотрицательную, биполярно окрашивающуюся палочку длиной 2-6 мкм и шириной 0,5-1 мкм. Аэроб имеет жгутики, подвижен, хорошо растет на МПА и МПБ, капсул не имеет, спор не образует.

Возбудитель длительно сохраняется во внешней среде. Во влажной среде выживает до 30 дней, в гниющих материалах — 24 дня, в воде — до месяца и более. Погибает при нагревании и под воздействием дезинфицирующих средств.

Эпизоотологические данные. Болезнь регистрируется среди домашних животных в странах Азии и Африке. К мелиоидозу восприимчивы овцы, козы, лошади, крупный рогатый скот, свиньи обезьяны, собаки, кошки, дикие грызуны; из лабораторных животных – кролики, крысы и белые мыши.

Источником возникновения инфекции являются больные животные, которые выделяют возбудителя во внешнюю среду с истечениями из носа, гноем кожных язв, мочой, испражнениями. Факторами передачи инфекции являются, почва, вода, корма и другие контаминированные выделениями инфицированных животных объекты внешней среды. Резервуаром инфекции в природе являются грызуны (крысы, мыши и др.), у которых болезнь может протекать хронически. Заражение происходит чаще алиментарным и аэрогенным путями, реже через кожу, возможен перенос микроба блохами, обитающими на крысах, в организме которых бактерии сохраняются до 50 дней. У домашних и сельскохозяйственных животных болезнь протекает в виде спорадических случаев.

Патогенез. Развитие патологического процесса при мелиоидозе зависит от реактивности организма и вирулентности возбудителя. В одних случаях развивается латентная инфекция, выявляемая только при помощи иммунобиологических реакций, в других – характерные для мелиоидоза клинические признаки.

На месте внедрения бактерий реактивные явления слабо выражены. С места внедрения возбудитель болезни лимфой и кровью заносится в легкие и другие органы и ткани, где развивается специфический для мелиоидоза воспалительный процесс с вовлечением в него регионарных лимфатических узлов. Воспаление в первичном очаге носит экссудативный характер и сопровождается образованием гнойных узелков, склонных к казеозному распаду с последующим обызвествлением и инкапсуляцией. Для мелиоидозного процесса характерно также возникновение вокруг первичного очага вторичных гнойных узелков продуктивного типа. На коже и слизистых оболочках образуются мелкие узелки и гноящиеся язвы.

У больных животных по мере развития инфекции образуются специфические антитела и появляется аллергия. Образование и накопление в крови антител непостоянно: оно характерно при обострении болезни и сопровождается бактериовыделением. Аллергическое состояние в большинстве случаев развивается через 2-3 недели после заражения и сохраняется длительное время, не определяя степени активности процесса.

Течение и симптомы. Инкубационный период болезни длится 3-10 дней. Течение болезни острое, подострое и хроническое. У больных кошек, собак при остром и подостром течении отмечаются понос, гнойный конъюнктивит, ринит с образованием язв и нагноением лимфатических узлов. При хроническом течении на коже образуются язвы. У овец и коз отмечается кашель, истечения из носа, нервные симптомы. Для лошадей и крупного рогатого скота характерно относительно доброкачественное течение болезни, на месте проникновения возбудителя образуется флегмона, наблюдается кратковременная лихорадка, гнойные выделения из носовой полости, абсцессы во внутренних органах.

При экспериментальном заражении (подкожное введение культуры) у животных появляется местное нагноение, которое исчезает через 7-15 дней без генерализации инфекции.

Диагноз ставится комплексно, учитываются эпизоотические данные, клинические признаки, патологоанатомические изменения и результаты бактериологических исследований. Для выделения чистой культуры делают высевы из патматериала на МПА, МПБ, МПЖ. Биопробу ставят, вводя материал морским свинкам под кожу (самцам можно в брюшную полость), животные погибают на 10-20-й день (у самцов развивается орхит и перитонит, при подкожном введении – язва на месте инъекции).

Дифференциальный диагноз. Необходимо исключить сап на основании эпизоотических данных (сап поражает преимущественно лошадей), клинических симптомов (сап характеризуется поражением носовой полости, легких кожи), патологоанатомических изменений (при сапе узелки располагаются в легких и носовой полости), маллеинизации, по результатам биопробы на кроликах (при заражении возбудителем мелиоидоза кролик погибает на 2-3 сутки, а при заражении возбудителем сапа выживает).

Лечение. Специфических средств лечения нет. Применяют симптоматическое лечение, наиболее выраженный терапевтический эффект дают левомицетин, сульфадимезин и биомицин.

Профилактика и меры борьбы. Для предупреждения мелиоидоза необходимо уничтожать грызунов – основной резервуар возбудителя инфекции в природе. Поскольку возбудитель в больших количествах выделяется с экскрементами и секретами больных крыс и мышей нужно хранить корма в местах, недоступных для грызунов.

При подозрении на мелиоидоз больных животных изолируют и исследуют бактериологически. В неблагополучном хозяйстве проводят дезинфекцию, дератизацию и дезинсекцию. Убой на мясо больных и подозрительных по заболеванию животных запрещают.

Цель занятия. Ознакомить студентов со свойствами возбудите­лей и лабораторной диагностикой сапа, мелиоидоза, псевдомоноза норок и биопрепаратами.

Сап. Это инфекционная, хронически протекающая болезнь однокопытных животных (лошади, ослы, мулы, лошаки); вос­приимчивы представители семейства кошачьих и человек. Характеризуется возникновением в легких, на слизистой оболочке носа и различных участках кожи специфических узелков, склон­ных к распаду с образованием гноящихся язв.

Возбудитель сапа — бактерия Pseudomonas mallei, род Pseudomonas, семейство Pseudomonadaceae.

Лабораторная диагностика сапа основана на результатах серо­логических исследований (РСК); бактериологическое исследова­ние проводят в исключительных случаях.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии и биопробы, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию воз­будителя по культурально-морфологическим и ферментативным свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют кровь, гнойное отделяемое язв, носовые выделения, пунктат лимфати­ческих узлов, гной из абсцессов; от убитых животных берут учас­тки пораженной ткани легких, печени, селезенки, лимфатичес­ких узлов, носовой перегородки, трахеи, бронхов и др.

Микроскопия препаратов из исходного материала. В мазках из материала, окрашенных по Граму, возбудитель обнаруживают в виде прямых или слегка изогнутых, с закругленными концами грамотрицательных палочковидных бактерий размером (1,4. 4) х 0,5 мкм, без спор и капсул (рис. 108). При окраске метиленовым синим Леффлера в клетках видна зернистость.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбудитель сапа —аэроб, температурный оптимум 37. 38 °С, рН 6,8. 7, луч­ше растет на средах с добавлением глицерина (2. 4 %). Исследуе­мый материал высевают на глицеринизированных МПА и в МПБ. Рост возбудителя появляется на первые-вторые сутки, иногда позже.

В МПБ возбудитель растет с помутнением среды, на дне про­бирки образуется серо-белый слизистый осадок, на поверхности бульона может появляться пленка. На МПА возбудитель форми­рует гладкие, полупрозрачные, серовато-белые, с перламутровым оттенком колонии, постепенно сливающиеся в слизистый налет. Из выросших культур делают мазки, окрашивают по Граму, при микроскопии обнаруживают грамотрицательные полиморфные палочки; в бульонных культурах клетки возбудителя короче — вплоть до кокковидных.

Биопроба. Готовят тканевую суспензию на стерильном физио­логическом растворе (соотношение 1:10) и вводят в объеме 0,5. 1 мл подкожно в область шеи золотистым хомячкам или в объеме 3. 5 мл морским свинкам. Стерильно взятым материалом (пунктат) заражают животных внутрибрюшинно. В положитель­ных случаях на месте подкожной инъекции образуется язва с уп­лотненными краями, развивается конъюнктивит, ринит, у зара­женных внутрибрюшинно самцов морских свинок — орхит (фе­номен Штрауса). Гибель хомячков наступает на 5. 7-е сутки, морских свинок — на 8. 15-е сутки или же болезнь переходит в хроническую форму. Павших и убитых животных подвергают бактериологическому исследованию.

Серологическая диагностика основана на ре­зультатах РСК. Диагностическим титром сыворотки считают раз­ведение 1:10 при задержке гемолиза на четыре или три креста; задержку гемолиза на один, два креста при разведении сыворот­ки 1 : 10 и на три, четыре креста при разведении сыворотки 1:5 оценивают как сомнительный результат.

Аллергическая диагностика. Метод, применяемый в хозяйствах для контроля за благополучием лошадей по сапу (ставят офтальмопробу или внутрикожную пробу с маллеином).

Биопрепараты. Маллеин — диагностический сапной аллер­ген. При его изготовлении выращивают культуру возбудителя в глицеринизированном бульоне в течение четырех месяцев, стерилизуют автоклавированием, фильтруют через фильтр Зейтца, контролируют на стерильность, безвредность на белых мышах, специфичность — на здоровых лошадях, стандартизу­ют по активности в единицах действия на лабораторных жи­вотных.

Сапной антиген для РСК готовят следующим образом: агаро­вую культуру возбудителя смывают фенолизированным физиоло­гическим раствором, стерилизуют автоклавированием, отстаива­ют. В качестве антигена используют свободную от клеток культу-ральную жидкость, проверенную на стерильность, специфич­ность и активность.

Позитивная сапная сыворотка предназначена для определе­ния активности антигена (РСК) и в качестве контроля при по­становке РСК. Получают гипериммунизацией лошадей.

Мелиоидоз (ложный сап, болезнь Уитмора). Инфекционное за­болевание животных (лошади, собаки, кролики, мелкий рогатый скот) и человека, протекающее в форме острой или хронической септицемии или септикопиемии.

Возбудитель — бактерия Pseudomonas pseudomallei, род Pseudomonas, семейство Pseudomonadaceae.

Лабораторная диагностика мелиоидоза основана на результатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии и биопробы, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию воз­будителя по культурально-морфологическим, ферментативным и серологическим свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют кровь, мокроту, мочу, гнойное отделяемое из абсцессов, участки пора­женных органов.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Возбудитель представляет собой полиморфную грамотрицательную палочку размером (1,5. 6) х (9,5. 10) мкм, с закругленными концами, спор и капсул нет; лофотрих. В мазках-отпечатках из органов располагается одиночно или компактными скоплениями.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбудитель — аэроб, температурный оптимум 37 ºС, рН 6,8. 7,0, к питательным средам нетребователен. Исследуемый материал высевают на агар и в бульон с глицерином. При загрязнении материала посторонней микрофлорой его обрабатывают пенициллином (1000 ЕД/мл).

На плотных средах через 24 ч инкубирования возбудитель формирует мелкие, прозрачные, позднее мутнеющие беловатые колонии с металлическим блеском, могут появляться колонии Я-формы и крупные (до 7 мм) М-формы. На кровяном агаре, глицеринизированных средах растет с образованием колоний кремово-оранжевого цвета. На жидких средах через 24. 48 ч вы­зывает помутнение среды, образование пленки, которая после добавления нейтрального красного приобретает оранжево-крас­ный цвет. Для бульонных культур характерен затхлый запах. Возбудитель в мазках из чистых культур располагается одиночно, па­рами, короткими цепочками или скоплениями по 5. 7 штук.

У культур с типичными для P. pseudomallei культурально-морфологическими признаками исследуют ферментативные свой­ства. Возбудитель ферментирует с образованием кислоты глюко­зу, сахарозу, лактозу, мальтозу, галактозу, дульцит; декстрин, не образует индол и сероводород, медленно разжижает желатину, свертывает и пептонизирует молоко, гидролизует аргинин.

Выделенные культуры также идентифицируют в серологичес­ких реакциях: РА, РНГА, РП.

Биопроба. Суспензией из материала заражают внутрибрюшин­но (0,5. 1,0 мл) крыс и морских свинок. В положительных случа­ях животные погибают в зависимости от вирулентности штамма на 3. 15-е сутки. У самцов морских свинок может развиться фе­номен Штрауса.

В качестве признаков для дифференциации P. mallei и P. pseudomallei используют морфологические критерии (см. табл.32), а также способность P.pseudomallei синтезировать на кровяном агаре кремово-оранжевый пигмент, пептонизировать молоко, гидролизировать желатину, при заражении вызывать ги­бель крыс.

Псевдомоноз норок. Остро протекающее инфекционное забо­левание. Характеризуется геморрагической пневмонией, призна­ ками сепсиса. Кроме норок восприимчивы лисицы, песцы; у жи­вотных других видов возбудитель может служить причиной пнев­моний, послеродовых, постхирургических осложнений.

Возбудитель псевдомоноза норок — бактерия Pseudomonas aeruginosa, род Pseudomonas, семейство Pseudomonadaceae.

Лабораторная диагностика псевдомоноза норок основана на ре­зультатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии, выделение чистой культуры посе­вом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным и серологи­ческим свойствам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют пора­женные участки легких, регионарные лимфатические узлы, селе­зенку, печень, почки.

Микроскопия препаратов из исходного материала. P. aeruginosa в мазках, окрашенных по Граму, обнаруживают в форме прямых или изогнутых грамотрицательных палочек длиной 0,5. 1,4 мкм, шириной 0,2. 0,4 мкм, без капсул и спор; образует жгутики. Рас­полагается в виде одиночных клеток, коротких цепочек.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбуди­тель — аэроб, температурный оптимум 35. 37 °С, к питательным средам нетребователен. Исследуемый материал высевают на МПА, в МПБ.

Через 24 ч рост P. aeruginosa в МПБ проявляется помутне­нием среды, образованием поверхностной пленки и серовато-белого осадка, за счет пигмента среда окрашена в сине-зеленый цвет, по мере старения культуры цвет колоний становится бурым. На МПА возбудитель формирует в основном два типа колоний: крупные (диаметр 2. 5 мм), полупрозрачные, сероватые, гладкие, с плоскими краями и приподнятым центром, а также мелкие шероховатые. Штаммы, выделенные из респира­торного и мочеполового тракта, могут образовывать слизистые колонии. Среда вокруг колоний окрашена за счет пигмента в сине-зеленый цвет. Возбудитель синтезирует четыре типа пиг­мента: пиоцианин (сине-зеленый или желто-зеленый), флуо-ресцеин, пиорубин и черно-бурый пигмент. Для культивирова­ния P. aeruginosa при первичной изоляции из исследуемого ма­териала используют специальные селективные среды с анти­биотиками.

У выделенных культур изучают ферментативные свойства. Для P. aeruginosa характерны следующие признаки: образование аргининдигидролазы, оксидазы, гидролиз желатины, расщепле­ние глюкозы, бета-аланина, D-, L-аспарагина, денитрификация и способность к росту при 4l °С.

Вид гетерогенен по соматическим О-антигенам. Для иденти­фикации на уровне О-серогруппы используют РА на стекле, причем исследуют только культуры, у которых отмечены мини­мум два из трех физиологических признаков, характерных для вида: образование пигмента пиоцианина, расщепление глюко­зы, рост при 41. 42°С. Используют набор из трех поливалент­ных и одиннадцати моновалентных сывороток. Антигеном слу­жит 18. 20-часовая агаровая культура P. aeruginosa, инактивированная кипячением в водяной бане в течение 1,5 ч [концентра­ция (3. 5)*10 9 /мл]. Антиген первоначально исследуют с поливалентными сыворотками, при получении положительного результата — с моновалентными, входящими в состав той или иной поливалентной сыворотки. Результат учитывают через 3. 6 мин.

Биопрепараты. Моновалентную формолквасцовую вакцину против псевдомоноза норок готовят следующим образом: культу­ру вакцинного штамма (Шестой серотип) выращивают на пита­тельной среде, инактивируют формалином, адсорбируют на квасцах, контролируют на стерильность, безвредность, актив­ность.

Диагностические О-агглютинирующие сыворотки для серо-групповой идентификации P. aeruginosa включают в себя три по­ливалентные сыворотки: № 1 (03, 04, 05, 06, 07), № 2 (02, 08, 09), № 3 (010, 011, 012) и одиннадцать соответствующих моновалент­ных сывороток. Предназначены для идентификации P. aeruginosa на уровне О-серогруппы.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Ознакомиться с биопрепаратами для серологической и ал­лергической диагностики сапа.

2. Изучить морфологические, тинкториальные, культуральные и ферментативные свойства P. aeruginosa.

3. Ознакомиться с биопрепаратами для специфической про­филактики и диагностики псевдомоноза норок.

1. Каково значение бактериологического исследования для лабораторной диагностики сапа?

2. Какие иммунологические методы применяют для диагностики сапа?

3. Каковы биологические свойства возбудителя псевдомоноза норок?

4. Какие биопрепараты применяют для специфической профилактики псевдомоноза норок и серологической идентификации возбудителя?

5. В чем заключается бактериологическое исследование на мелиоидоз?

Дата добавления: 2014-11-10 ; просмотров: 2189 . Нарушение авторских прав