Опишите морфологию палочки дифтерии
Дифтерия – острое инфекционное заболевание, характеризующееся токсическим поражением сердечно-сосудистой и нервной систем, а также специфическим фибринозным (дифтеритическим) воспалением в месте входных ворот.
Возбудитель был открыт в 1883 г. Клебсом, в 1884 г. Ф. Леффлер выделил его в чистой культуре. В 1888 г. Ру и Йерсен получили дифтерийный токсин, а в 1895 г. Беринг и Ру независимо друг от друга получили противодифтерийную сыворотку. В 1923 г. Рамон разработали технологию получения дифтерийного анатоксина, а позднее получил противодифтерийную сыворотку. Н.Г. Габричевский применил противодифтерийную сыворотку с лечебной целью и организовал ее производство в России.
Вид – С. diphtheriae
В род Corynebacterium входят около 60 видов. Согласно Международной классификации Берджи этот род разделен на 3 секции:
1) патогенные для человека и животных;
2) патогенные для растений;
Прямые или слегка изогнутые палочки размером 0,3 - 0,6 х 4 - 8 мкм, спор не образуют, имеют микрокапсулу, неподвижны.
Особенностями дифтерийной палочки является наличие булавовидных утолщениях на концах; палочки отличаются также полиморфизмом; характерно взаимного расположения бактерий в мазках – в виде цифр V,X, L (не полное расхождение при делении);
Грамположительные микроорганизмы. При окраске по методу Нейссера тело клетки окрашивается в синий цвет, а зерна волютина - в желтый. Метод Леффлера окрашивает цитоплазму в голубой цвет, а зерна волютина – в темно-синий.
Культуральные свойства.
Возбудители дифтерии - факультативные анаэробы, отимальная температура их культивирования 37 о С, рН 7,3-8,0. Требовательны к питательной среде, для роста необходимо наличие цистина, гистидина, фенилаланина, метионина и т.д. Факторами роста являются Са 2+ , Mg 2+ , Fe 2+ , Zn 2+ , Mn 2+ , Cu 2+ . Для культивирования применяют сывороточные (среда Леффлера), среды с добавлением крови, хинозальную среду Бучина. Дифференциально-диагностические среды: теллуритовая среда (Конради, Трох, 1913г.), глицериновокровяная среда с теллуритом (среда Клауберг ΙΙ), сывороточно-теллуритовый агар с цистином (Тиндаль), теллурит-шоколадный агар Маклеода.
На теллуритовых средах возбудитель образует серовато-черные колонии, что обусловлено восстановлением теллурита до металлического теллура, имеющего черный цвет и аккумулирующегося бактериями.
Биохимическая активность.
Дифтерийные палочки малоактивны, сбраживают с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, галактозу, декстрин, не разлагают сахарозу, лактозу, маннит, восстанавливают нитраты в нитриты. Не гидролизуют мочевину (проба Закса отрицательная), не образуют индол. Разлагают цистеин (проба Пизу положительная).
По культуральным, биохимическим, патогенетическим и некоторым другим свойствам дифтерийные палочки разделяются на 3 биовара.
1) биовар митис, характеризуется свойствами:
ферментирует глюкозу, крахмал, мальтозу, не сбраживает сахарозу, гликоген, декстрин;
обладает цистиназной активностью;
уреазная проба отрицательная;
на средах с теллуритом образует мелкие гладкие блестящие черные колонии с ровным краем;
на жидкой среде дает равномерное помутнение и порошкообразный осадок;
дает зоны гемолиза на кровяных средах;
возбудители вызывают легкую спорадическую заболеваемость.
2) биовар гравис, характеризуется свойствами:
ферментирует глюкозу, крахмал,декстрин, мальтозу,
обладает цистиназной активностью;
уреазная проба отрицательная;
на средах с теллуритом формирует крупные, сухие, матовые, плоские, серо-черные колонии, приподнятые в центре, с радиальной исчерченностью и неровным краем (напоминают маргаритку);
на жидкой среде образуется пленка, помутнение, крошковидный или крупнозернистый осадок;
дает гемолиз на кровяных средах;
обладает выраженными токсигенными свойствами;
выделяется от больных с тяжелой формой дифтерии, вызывает групповые вспышки.
3) биовар интермедиус, характеризуется свойствами:
на средах с теллуритом образует мелкие сухие матовые серо-черные колонии с прозрачной периферией и неровным краем;
на жидкой среде дает помутнение с последующим просветлением и образованием мелкозернистого осадка;
гемолиз на кровяных средах отсутствует.
Дифтерийная палочка имеет 2 антигена
О – антиген (групповой), полисахарид клеточной стенки, термостабильный, дает перекрестные реакции с микобактериями и нокардиями;
К – антиген (типовой), капсульный, термолабильный, иммуногенный, видоспецифичный.
На практике серотипирование не применяется, однако выпускаются диагностические сыворотки для РА, РПГА.
Для идентификации используют фаготипирование (22 фага) и бактериоцинотипирование (25 бактериоцинов).
Токсины. Палочка выделяет токсин – дифтерийный экзотоксин. По силе он занимает 3-е место после ботулинического и столбнячного. Термолабильный, высокотоксичный, иммуногенный, протективный, обладает анестезирующим действием. Гистотоксин обладает дермонекротическими, гемолитическими свойствами. Синтезируется в виде неактивного предшественника - единой полипептидной цепи с молекулярной массой 61 кД. Активируется под действием собственной протеазы, которая разрезает полипептид на 2 связанные между собой дисульфидными связями пептида: А (21 кД) и В (39 кД). Пептид В выполняет акцепторную функцию – распознает рецептор, связывается с ним, формирует внутримембранный канал, через который проникает в клетку пептид А. Пептид А – это фермент, который обеспечивает перенос аденозиндифосфатрибозы из НАД на один из аминокислотных остатков (гистидина) белкового фактора элонгации EF-2. В результате модификации EF-2 утрачивает свою активность, что приводит к подавлению синтеза белка рибосомами на стадии транслокации. Токсин синтезируют только С. diphtheriae, лизогенные умеренным конвертирующим tox-профагом, интегрирующимся с помощью сайт-специфической рекомбинации. Оперон, кодирующий синтез токсина имеет промотор tox Р и 3 участка: tox S, tox А, tox В. Тox S – обеспечивает выход токсина через мембрану в периплазматическое пространство бактериальной клетки. Утрата клеткой профага или мутации в tox-опероне делают клетку малотоксичной.
Ферменты патогенности: гиалуронидаза, нейраминидаза, фибринолизин, каталаза – факторы инвазии, лейкоцидин – обеспечивает устойчивость к фагоцитозу;
Структурные и химические компоненты клетки – пили (способствуют адгезии на чувствительных клетках), микрокапсула (обеспечивает устойчивость к фагоцитозу), корд-фактор (6-6-дифосфоэфир трегалозы, коринемиколовая и коринемиколиновая кислоты, обладающие нарушает фосфорилирование в митохондриях), бактериоцины (корицины) кодирование синтеза которых передается плазмидами.
При нагревании до 60 о С палочки погибают за 10 мин, при 100 о С наступает мгновенная гибель. 5% раствор карболовой кислоты обеспечивает инактивацию через – 1 мин. Под действием прямого солнечного света палочка выживает несколько часов, в высохших пленках и кале – 3-4 мес., на предметах обихода и одежде сохраняется до 15 дней, на мягких игрушках – 3 мес., в воде и молоке – до 20 дней, в пыли – до 5 мес. Дифтерийные палочки чувствительны к пенициллину, тетрациклину, эритромицину.
Источник инфекции – больной человек, носитель или реконвалесцент.
Механизмы передачи инфекции:
аэрогенный (пути - воздушно-капельный и воздушно-пылевой);
контактный (путь - непрямой контактный).
Больной опасен (в смысле заражения) с последних дней инкубационного периода.
Входные ворота – слизистые оболочки носа, зева, гортани, трахеи, бронхов, конъюнктивы глаз, наружных половых органов; раневая поверхность, пупочная рана.
Инкубационный период – 2-14-20 дней.
Возбудители адсорбируются на чувствительных клетках, колонизируют эпителий. Секретируют гистотоксин, который инициирует развитие местного фибринозного воспаления, некроз эпителия, паретическое расширение сосудов с нарушением их проницаемости, отек тканей и выход фибриногена из сосудов. Фибриноген под влиянием тканевого тромбопластина, некротизированных тканей и атмосферным кислородом свертывается. На поверхности образуется фибринозная пленка. На многослойном плоском эпителии - плотная, спаянная с прилежащими тканями; на однослойном – тонкая, легко снимается. Разрастание пленок в воздухоносных путях может привести к асфиксии (истинный круп). Процесс сопровождают регионарные лимфадениты. Системное действие токсина приводит к гемодинамическим нарушениям. Развивается токсический миокардит и ранний паралич сердца. Возможно поражение канальцевого аппарата почек, некроз коркового слоя. В нервной системе – цитолиз нервных клеток с развитием поздних параличей мягкого неба, диафрагмы, сердца, блуждающего нерва. Смерть при дифтерии может наступить от раннего или позднего паралича сердца и диафрагмы, а также в результате истинного крупа (закупорки дыхательных путей оторвавшимися пленками).
У детей грудного возраста чаще развивается дифтерия зева (насмокр, слабая выраженность общих проявлений). Необходимо осматривать пупочную ранку для исключения местного процесса.
ГБОУ ВПО “Уральский государственный медицинский университет” Министерства здравоохранения Российской Федерации Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
Методические указания к практическим занятиям для студентов
ООП специальности 060301.65 Фармация Дисциплина С2.Б.11 Микробиология
1. Тема: Возбудитель дифтерии.
2. Цели занятия : Изучить со студентами свойства возбудителя дифтерии, факторы патогенности возбудителя и патогенез дифтерии, методы диагностики, профилактики и лечения дифтерии.
3. Задачи занятия:
3.1. Изучение свойств возбудителя дифтерии.
3.2. Изучение патогенеза дифтерии.
3.3. Изучение методов диагностики, профилактики и лечения дифтерии.
3.4. Выполнение самостоятельной работы.
проблемы и процессы,
и клинических наук в
готовность к участию
в постановке научных
работу с населением
4. Продолжительность занятия в академических часах : 3 часа.
5. Контрольные вопросы по теме:
5.1. Морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства возбудителя дифтерии.
5.2. Факторы патогенности возбудителя дифтерии и патогенез вызываемого заболевания.
5.3. Методы диагностики, профилактики и лечения дифтерии.
6. Задания и методические указания к их выполнению.
На занятии студенту необходимо:
6.1. Ответить на вопросы преподавателя.
6.2. Принять участие в обсуждении изучаемых вопросов.
6.3. Выполнить самостоятельную работу.
Теоретическая справка Дифтерия – острое инфекционное заболевание, характеризующееся общей
интоксикацией организма и образованием пленчатых налетов в месте внедрения возбудителя. Дифтерия относится к антропонозным инфекциям.
Возбудитель дифтерии – Corynebacterium diphtheriae - обнаружен впервые в 1883 г. Э. Клебсом в срезах пленок, взятых из зева больных. Получен в чистой культуре в 1884 г. Ф. Лёффлером.
В 1888 г. Э. Ру и А. Иерсен обнаружили способность дифтерийного микроба продуцировать экзотоксин.
В 1892 г. Э. Беринг получил антитоксическую противодифтерийную сыворотку. В последующем он совместно с Ш. Китазато использовал эту сыворотку для лечения больных дифтерией. Лечение с помощью сыворотки называется серотерапией. За внедрение в практику серотерапии при дифтерии Э. Беринг и Э. Ру
в 1901 г. были удостоены Нобелевской премии.
В 1923 г. Г. Рамон разработал метод получения дифтерийного анатоксина (токсоида). Анатоксин представляет собой препарат токсина, утратившего токсические свойства, но сохранившего иммуногенность. Анатоксин получают путем добавления к токсину 0,3-0,4% формалина и инкубирования смеси в течение месяца при 37-40ºС. В настоящее время анатоксин используется для вакцинации людей против дифтерии и для иммунизации животных при получении противодифтерийной сыворотки.
Классификация . Возбудитель дифтерии относится к отделу Firmicutes ,
семейству Corynebacteriaceae , роду Corynebacterium , виду C. diphtheriae . Название микроба происходит от греч. coryne - булава, bacteria - палочка, diphtheria - пленка.
Морфология . С. diphtheriae (палочка Клебса-Лёффлера) - прямые или слегка изогнутые неподвижные грамположительные палочки. Спор и капсул не образуют. Палочки утолщены на концах и напоминают булаву. В мазках бактерии располагаются под углом друг к другу, в виде “растопыренных пальцев”, “иероглифов”, “паркета”, латинских букв V, Y, L и др. На поверхности бактерий имеются фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистой оболочки.
При окраске препаратов метиленовым синим или по методу Нейссера на полюсах клеток обнаруживаются гранулы - зерна волютина (зерна Бабеша-Эрнста). По химической природе волютин представляет собой полифосфаты, он является запасом питательных веществ и энергии. При окраске по Граму зерна волютина не
выявляются. При окраске по методу Нейссера палочки окрашиваются в соломенножелтый цвет, а зерна волютина - в темно-коричневый цвет.
Культуральные свойства . Дифтерийная палочка является аэробом или факультативным анаэробом, температурный оптимум для роста 35-37°С, оптимальная рН 7,6-7,8. Лучше растет на средах, содержащих кровь или сыворотку крови животных, хорошо растет на средах с теллуритом калия. В бульоне наблюдается равномерное помутнение или нежная пленка.
Элективные среды для выращивания C. diphtheriae :
- свернутая кровяная сыворотка (среда Ру);
- сыворотка с добавлением сахарного бульона (среда Ру-Лёффлера);
- кровяной агар (КА);
- кровяной теллуритовый агар (среда Клауберга II);
- хинозольная среда Бучина;
- цистин-теллурит-сывороточная среда Тинсдаля-Садыковой. Биохимическая активность . Возбудитель дифтерии разлагает глюкозу,
мальтозу, галактозу с образованием кислоты без газа, но не ферментирует сахарозу. Возбудитель продуцирует цистиназу (положительная проба Пизу – почернение столбика сывороточного агара или образование коричневого облачка вокруг линии укола в результате образования сернистого свинца при взаимодействии с уксуснокислым свинцом сероводорода, образующегося при расщеплении цистина или цистеина цистиназой). Не образует уреазу (отрицательная проба Закса – цвет бульона с мочевиной и феноловым красным не изменяется). Не образует индола.
Биовары возбудителя . По культуральным и биохимическим свойствам возбудитель дифтерии подразделяется на биовары:
- mitis - тонкий, легкий;
Биовары различаются между собой по форме колоний на средах с теллуритом, по характеру роста в жидких средах, по гемолитической активности, по ферментации углеводов и морфологии клеток.
Биовар gravis на плотных средах образует сухие серовато-черные плоские радиально исчерченные колонии размером 2-3 мм (R-форма, вид “маргаритки”). В жидких средах растет в виде пленки на поверхности и зернистого осадка, жидкость остается прозрачной. Не вызывает гемолиза. Ферментирует глюкозу, мальтозу, крахмал, гликоген. Палочки короткие, с небольшим количеством гранул.
Биовар mitis образует мелкие (1-2 мм) гладкие блестящие черные колонии с ровными краями (S-форма), в бульоне вызывает равномерное помутнение и порошкообразный осадок. Обладает гемолитической активностью, разлагает глюкозу и мальтозу. Палочки длинные, изогнутые, содержат много зерен волютина.
Биовар intermedius образует круглые гладкие блестящие (S-форма) или шероховатые колонии с изрезанными краями (RS-форма) диаметром менее 1 мм. Клетки самые крупные, с бочковидными очертаниями и внутриклеточными перегородками. Ферментируют глюкозу, мальтозу, гликоген.
Антигенная структура . C. diphtheriae содержит соматический термостабильный О-антиген липидно-полисахаридной природы (родовая специфичность) и поверхностный термолабильный К-антиген белковой природы
(обладает типовой специфичностью). По особенностям К-антигена выделяют 58 сероваров, в том числе у биовара gravis 14 сероваров, у биовара mitis – 40 сероваров, у биовара intermedius – 4 серовара.
Факторы патогенности возбудителя дифтерии:
1. Поверхностные структуры способствуют адгезии микроорганизмов в месте входных ворот инфекции и препятствуют фагоцитозу:
- корд-фактор липидной природы; - микрокапсула, содержащая миколовые кислоты.
2. Ферменты агрессии и инвазии :
- нейраминидаза – расщепляет нейраминовую кислоту слизи;
- гиалуронидазу - разрушает гиалуроновую кислоту. 3. Токсины :
- гемолизин – разрушает эритроциты крови;
- дермонекротоксин – вызывает некроз клеток в месте локализации возбудителя;
- дифтерийный экзотоксин (гистотоксин) – основной фактор патогенности дифтерийного микроба. Он является одним из наиболее сильных биологических ядов. Представляет собой термолабильный полипептид - разрушается при 56-60ºС в течение 1-2 часов, при 80ºС - в течение нескольких минут. Инактивация токсина происходит под влиянием прямого солнечного света, УФ лучей (в течение 1-2 часов), кислорода воздуха.
Токсин состоит из двух фрагментов - А и В. Фрагмент В обеспечивает адсорбцию и проникновение фрагмента А в клетку. Дифтерию вызывают только токсигенные штаммы, которые несут в своем геноме гены умеренного бактериофага. Таким образом, способность к образованию токсина проявляется только у лизогенных штаммов, то есть у клеток, содержащих в своем геноме умеренный профаг (бета-фаг), несущий tox-гены. Утрата клеткой профага делает клетку мало токсигенной. Напротив, лизогенизация нетоксигенных С. diphtheriae конвертирующим фагом превращает их в токсигенные бактерии. Конверсия нетоксигенного штамма в токсигенный может происходить как in vivo, так и in vitro.
Резистентность . В пыли возбудитель сохраняет жизнеспособность и вирулентность в течение 5 недель, на различных предметах – до 5,5 месяцев, на посуде и игрушках – до 15 дней, в воде и молоке – в течение 6-20 дней. При 60ºС погибает в течение 10 минут, при кипячении - через 1 минуту. Чувствительный к дезинфицирующим веществам.
Возбудитель дифтерии хорошо переносит высушивание и долго сохраняется
в высохшей слизи, слюне, в частичках пыли. В высушенных пленках выдерживает температуру 98°С в течение 1 часа, а при комнатной температуре может сохраняться до 7 месяцев.
Для обнаружения токсигенных дифтерийных бактерий используют метод преципитации в геле (метод иммунодиффузии Илека) . Полоску стерильной фильтровальной бумаги смачивают антитоксической противодифтерийной сывороткой и наносят на поверхность плотной питательной среды в чашке Петри. Чашку подсушивают в термостате 15-20 минут. Испытуемые культуры засевают бляшками по обе стороны от полоски фильтровальной бумаги. Чашки с посевами инкубируют при 37°С, результаты учитывают через 24-48 часов. Результатом
взаимодействия токсина и антитоксина является образование в геле четкой линии преципитации.
Эпидемиология . В естественных условиях восприимчив к дифтерии только человек. Источник инфекции – больной человек или бактерионоситель. Больные заразны с появления первых признаков болезни до периода реконвалесценции. Особенно опасны больные стертыми, атипичными формами и бактерионосители. Пик заболеваемости приходит на осенне-зимний период . Заражение происходит
воздушно-капельным , воздушно-пылевым путем , контактно-бытовой (через различные предметы, бывшие в употреблении у больных или бактерионосителей: посуда, книги, белье, игрушки и т. п.). В случае инфицирования пищевых продуктов (в основном, молочные продукты) возможно заражение алиментарным путем . Чаще болеют дети младшего возраста. Однако заболевание встречается у подростков и взрослых.
Патогенез . Входные ворота - слизистые оболочки верхних дыхательных путей (миндалины, зев, носоглотка, гортань, трахея), реже – конъюнктива глаз, кожа, слизистая половых органов. В месте входных ворот происходит адгезия
возбудителя, его размножение и продуцирование дифтерийного токсина . В
результате этого наблюдается некроз эпителия , выход фибриногена из сосудистого русла, превращение фибриногена в фибрин и образование фибринозной пленки . Пленка представляет собой скопление нитей фибрина, некротизированных клеток эпителия, эритроцитов, лейкоцитов, бактерий. В полости рта, зеве, глотке, где слизистая выстлана многослойным эпителием, образуется дифтеритическая пленка , плотно соединенная с подлежащей тканью. На слизистой дыхательных путей, покрытых однослойным эпителием, возникает крупозная пленка , рыхло связанная с подлежащей тканью.
Экзотоксин оказывает не только местное, но и общее действие. Развивается токсинемия . При этом поражаются различные органы, но в наибольшей степени страдают сердечная мышца, нервная ткань, надпочечники и почки (в этих тканях происходит дегенерация паренхимы, жировая инфильтрация, некроз, иногда возникают обширные кровоизлияния).
Клиника. Инкубационный период - 2-10 дней (в среднем 5-7 дней).
Различают следующие периоды болезни :
- период манифестных проявлений и ранних токсических осложнений (5-10
- период поздних токсических осложнений (до 6 недель);
- период реконвалесценции (2-3 месяца).
- распространенные токсические формы;
В зависимости от локализации входных ворот различают дифтерию зева, носа, гортани, трахеи, глаза, уха, половых органов, кожи. При локализации процесса в зеве увеличиваются региональные (шейные) лимфатические узлы, в области шеи развивается выраженный отек (“бычья шея”).
Иммунитет . После переболевания формируется пожизненный напряженный антибактериальный и антитоксический иммунитет. Повторное заболевание возможно в 5-6% случаев.
Материал для исследования - слизь из зева и носа, пленка с входных ворот инфекции.
1. Бактериоскопия при окраске по Граму и по Нейссеру (используется
2. Бактериологический метод :
- посев на элективные среды;
- выделение чистой культуры на скошенном сывороточном агаре.
3. Идентификация культуры :
- проба Пизу на цистиназу;
- проба Закса на уреазу;
- укороченный пестрый ряд (глюкоза, мальтоза, сахароза, мочевина);
- способность к росту в анаэробных условиях в столбике 0,5% сахарного агара (растет только дифтерийный микроб).
4. Проверка культуры на токсигенность (реакция иммунодиффузии).
5. Серологические методы при дифтерии являются методами ретроспективной диагностики, поэтому они имеют вспомогательное значение. В настоящее время для оценки напряженности антитоксического иммунитета используют РНГА .
Окончательный ответ по токсигенным бактериям выдается через 48-72 часа. Окончательный ответ по биохимическим свойствам нетоксигенных бактерий выдается через 79-96 часов.
Лечение проводится в стационаре. Специфическим средством лечения дифтерии является внутримышечное введение противодифтерийной
антитоксической лошадиной сыворотки (антитоксина) , применение
антибиотиков (пенициллины, тетрациклины, эритромицин и др.) и сульфаниламидных препаратов. Проводят также детоксикационную терапию.
Сыворотку следует вводить как можно раньше. Введение сыворотки после третьего дня считается поздним. Сыворотку вводят дробно по методу Безредки для профилактики анафилактического шока.
Специфическая профилактика . Для специфической профилактики дифтерии используют препараты, содержащие дифтерийный анатоксин:
- адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС-
- адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин (АДС-анатоксин);
- адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин с уменьшенным содержанием антигенов (АДС-М-анатоксин):
- адсорбированный дифтерийный анатоксин с уменьшенным содержанием антигена (АД-М-анатоксин).
Компоненты адсорбированы на гидроокиси алюминия.
Первая вакцинация проводится в 3 месяца, вторая в 4,5 месяца, третья – в 6 месяцев, ревакцинация – в 18 месяцев, 6 и 14 лет.
После обсуждения теоретических вопросов преподаватель объясняет порядок проведения самостоятельной работы.
1. Приготовить два препарата из чистых культур дифтероидов, окрасить один из них щелочным метиленовым синим по Леффлеру в течение 3-5 минут, а второй – по Граму. Препараты промикроскопировать, результаты зарисовать в рабочей тетради.
2. Зарисовать в рабочей тетради схему лабораторной диагностики дифтерии.
7. Оценивание знаний, умений, навыков по теме занятия:
Ответы на вопросы и активность на занятии оцениваются по 5-балльной системе.
8. Литература для подготовки темы:
1. Галынкин В., Заикина Н., Кочеровец В. Основы фармацевтической микробиологии. 2008.
2. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для студентов медицинских вузов. Под ред. А.А. Воробьева. Учебники и учеб. пособия для высшей школы. Издательство: Медицинское информационное агентство, 2012. – 702 с.
3. Микробиология: учеб. для студентов учреждений высш. проф. образования, обучающихся по специальности 060301.65 “Фармация” / под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. – 608 с.: ил.
4. Одегова Т.Ф., Олешко Г.И., Новикова В.В. Микробиология. Учебник для фармацевтических вузов и факультетов. - Пермь, 2009. - 378 с.
1. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Учебник для студентов мед. вузов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. - 5-е изд., испр. и
доп. – СПб.: СпецЛит, 2012. – 759 с.: ил.
2. Медицинская микробиология: учебник. 4-е изд. Поздеев О.К. / Под ред. В.И. Покровского. – 2010. – 768 с.
3. Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. Книга 1 / Колл. авторов // Под редакцией Лабинской А.С., Волиной Е.Г. – М.: Издательство БИНОМ, 2008. – 1080 с.: ил.
Методические указания переработаны и дополнены профессором Литусовым Н.В.
Обсуждены на заседании кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии.
| Информация о документе | |
| Дата добавления: | |
| Размер: | |
| Доступные форматы для скачивания: |
Окраска по методу Циля-Нельсена
Нанести несколько капель карболового фуксина на фиксированный мазок, покрытый фильтровальной бумагой, и подогреть до появления паров (3-5 мин);
бумагу снять, мазок охладить и обесцветить 5% раствором серной кислоты или 3% солянокислым спиртом (2-4 с);
тщательно промыть водой;
окрасить леффлеровской синькой (3-5 мин);
промыть водой и высушить.
Кислотоустойчивые бактерии в результате такой окраски становятся рубиново-красными, а остальные – синими.
Примерная схема оформления протокола:
Протокол № ___ Дата :____________
Материал для исследования : (указать исследуемый материал, используемые бактериальные культуры и т.д.).
Ход исследования: (указать методику поэтапно, либо зарисовать схему исследования)
Полученные результаты: (зарисовать результаты микроскопии, иммунологических реакций, описать биологические свойства выделенных культур).
Поздеев O.K. Медицинская микробиология /Гл.ред В.И. Покровский - М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, — 1200 с.2006, 2007
Воробьев А.А. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Уч-к для ст-в мед.вузов/ред.Воробьев А.А. – М.: МИА, 2008. – 704 с.
Зверев В.В., Бойченко М. Н. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: в 2 т.: учебник. - М: ГЭОТАР-Медиа 2010, 2011. - 448 с., т.1
Царев В. Н. Микробиология, вирусология и иммунология: Учебник / ред. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 581 с. ил.
Воробьев, В. Н. Царев А.А. Практикум лабораторных работ с иллюстрированными заданиями по микробиологии, иммунологии и вирусологии: учеб. пособие для студ. мед.вузов. - М.: Мед. информ. агентство, 2008. - 320 с. : ил.
Азизов И.С. Основы клинической микробиологии. – Караганда: Б-н, 2006 – 280 с.
Райкис Б.Н. Общая микробиология с вирусологией и иммунологией (в графическом изображении): Учб.пос. – М.: Триада-Х, 2002. – 348 с.
Подколозина В.А. Медицинская микробиология: Конспект лекций. – М.: Приориздат, 2005. – 222 с.
Нетрусов А.И., Егоров М.А. Практикум по микробиологии: учеб.пособие для студентов вузов. – М.: Академия, 2005. – 608 с.: ил.
Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учебник. – М.: Мед. информ. агентство, 2005 – 736 с.: ил.
Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник для вузов. – СПб.: СпецЛит, 2012. – 760 с.
Тец В.В. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии – М.:Медицина, 2002. - 352 с.
Определитель бактерии по Берджи (в 2-х томах)// М: Мир, 1997.
Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических методов исследования // М: Медицина, 2004, 466с.
Контроль (вопросы, тесты, задачи и пр.)
Морфология бактерий (кокки, палочки, извитые). Примеры.
Ультраструктура бактериальной клетки: основные и вспомогательные элементы бактериальной клетки.
Особенности строения клеточной стенки у бактерий (грамположительные и грамотрицательные бактерии).
Техника приготовления мазка-препарата. Фиксация мазков, её назначение, способы фиксации.
Механизм и этапы окраски по методу Грама.
Капсула, её назначение. Окраска по методу Бурри-Гинса.
Споры и спорообразование. Выявление спор по методу Ожешко.
Выявление зерен волютина по методу Нейссера. Механизм и этапы окраски.
Кислотоустойчивые бактерии. Окраска по методу Циля-Нильсена.
1. Иммерсионная система микроскопии используется в связи с тем, что:
А) увеличивает разрешающую способность микроскопа
В) снижает преломление лучей
С) коэффициент преломления иммерсионного масла приближен к коэффициенту преломления стекла
D) коэффициент преломления иммерсионного масла приближен к коэффициенту преломления воздуха
Е) коэффициент преломления иммерсионного масла равен 1,52
2. В устройстве светового микроскопа может быть выделена:
А) регистрирующая система
В) динамическая система
С) оптическая система
D) контролирующая система
Е) люминесцентная система
3. Правила иммерсионной микроскопии предусматривают:
использование сильного бокового освещения
использование объектива с увеличением 40
использование иммерсионного масла
полностью закрытую диаграмму
4. Для изучения морфологии бактерий в окрашенном состоянии применяют:
метод фазовоконтрастной микроскопии
темное поле зрения
5. Метод темнопольной микроскопии:
дает увеличение в 250 тысяч раз
объект освещается косыми боковыми лучами, не попадающими в объектив
используется для изучения структуры вирусов и бактерий
разрешающая способность микроскопа 0.2 мкм
позволяет исследовать нативный материал
6. С помощью темнопольной микроскопии выявляются:
7. Метод фазовоконтрастной микроскопии:
дает увеличение в 10 раз
основан на превращении оптическими средствами фазовых колебаний в амплитудные
не позволяет исследовать препараты из живых клеток
позволяет выявить внутриклеточные структуры
отличает грамположительные бактерии от грамотрицательных
8. Простые методы окраски позволяют:
изучить ультраструктуру бактериальной клетки
9. Фиксация мазков из культур микробов обычно проводится:
в пламени горелки
10. Сложные методы окраски применяют:
изучения структуры бактериальной клетки
они не выявляют внутриклеточные структуры
для изучения спорообразования
защитных механизмов бактерий
11. В мазке из культуры микробов под объективом видны скопления кокков, по форме напоминающие пакеты или тюки синего цвета. Назовите эти кокки:
12. Для выявления споры применяют метод окраски по:
13.Для выявления капсулы применяют метод окраски по:
14. Для выявления зерен волютина применяют метод окраски по:
15. В нативном мазке, окрашенном простым методом, обнаружены округлые клетки, расположенные парами. Укажите морфологическую форму:
16. В нативном мазке, окрашенном простым методом, обнаружены палочковидные клетки, располагающиеся в виде цепей. Укажите морфологическую форму:
17. При окраске по Граму применяют реактивы:
С) перекись водорода
Е) не применяют раствор Люголя
18. В окрашенных мазках из мокроты больного воспалением легких обнаружены ланцетовидной формы попарно расположенные кокки фиолетового цвета с неокрашенной каймой вокруг. Что представляет собой эта кайма:
В) цитоплазматическую мембрану
Е) жировосковые вещества
19. Микрококки располагаются в мазке:
В) с образованием пакетов, тюков
D) в виде гроздьев винограда
20. Какой метод окраски применяется для выявления структуры нуклеоида:
При приготовлении мазка-препарата студент на предметное стекло нанес каплю дистиллированной воды и инокулировал в ней суточную агаровую культуру, подсушил и окрасил мазок водным раствором фуксина. При микроскопии бактерии не обнаружены. Укажите причину
При приготовлении мазка-препарата исследователь на предметное стекло нанес каплю дистиллированной воды и инокулировал в ней суточную агаровую культуру, подсушил, зафиксировал в пламени спиртовки. При микроскопии бактерии не обнаружены. Укажите причину
При приготовлении мазка-препарата исследователь на предметное стекло нанес каплю дистиллированной воды и инокулировал в ней суточную агаровую культуру, подсушил, зафиксировал, окрасил простым методом. При микроскопии с помощью сухого объектива бактерии не обнаружены. Укажите причины.
При приготовлении мазка-препарата студент на предметное стекло нанес каплю карболового фуксина Циля и не подогревая, промыл водой и окрасил мазок метиленовой синькой. При микроскопии бактерии не обнаружены. Укажите причину
Культура бактерий кишечной палочки была окрашена метиленовым синим и методом Грама. Какую информацию Вы получите, используя каждый из этих методов? Обоснуйте.
К какой морфологической группе относятся данные микроорганизмы?
Какие методы окраски могли быть использованы в данном случае?
Какая система светового микроскопа использовалась для изучения микроорганизмов? Обоснуйте.
8. Студент получил задание изучить морфологию бактерий в окрашенном препарате. Для этого он поместил препарат на предметный столик микроскопа и использовал объектив .40. В результате он не смог изучить морфологию микроорганизмов.
Почему студенту не удалось изучить морфологию микроорганизмов?
Что необходимо сделать студенту для выполнения задания?
Какие морфотипы бактерий Вы знаете?
10. Приготовлен фиксированный препарат из экссудата сибириязвенного карбункула, окрашен по методу Ожешко. В какой цвет должны окраситься споры и вегетативные формы возбудителя? Обоснуйте.
11. Студент получил задание изучить морфологию бактерий в окрашенном по методу Грама препарате. Для этого он поместил препарат на предметный столик микроскопа и использовал объектив х90. В результате он не смог изучить морфологию микроорганизмов.
• Почему студенту не удалось изучить морфологию микроорганизмов?
• Что необходимо сделать студенту для выполнения задания?
• Что определяет отношение микроорганизмов к окраске по Граму?
Читайте также:
