Дифференциация энтерококков от стрептококков
в пищевой промышленности
Энтерококки
Энтерококки входят в семейство Lactobacillaeeae, род Streptococcus. Ввиду того что энтерококки отличаются от стрептококков рядом морфологических, культуральных, ферментативных свойств и антигенной структурой, их предложили выделить в самостоятельную группу (род) Enterococcus. В эту группу входят два вида энтерококков: Str. faecalis (с вариантами zymogenes и liquefaciens) и Str. faecium (с вариантом durans).
По ряду биологических свойств к энтерококкам близки два вида стрептококков, составляющих нормальную микрофлору кишечника, крупного рогатого скота (Str. bovis) и лошадей (Str. equinus).
Морфология . Энтерококки представляют собой грам-положительные, попарно расположенные кокки, несколько вытянутые в длину, наружные концы их заострены. В жидких средах встречаются короткие цепочки кокков. Энтерококки не образуют спор и капсул. Им свойствен значительный полиморфизм, т. е. клетки различаются по размерам и по форме (круглые, длинные, иногда вытянутые настолько, что напоминают коккобактерии). Величина отдельных кокков колеблется от 0,5 до 1,2 мкм. В отличие от стрептококков среди энтерококков есть штаммы, обладающие подвижностью. Среди Str. bovis также встречаются подвижные штаммы.
Культуральные свойства . Энтерококки растут на МПА, МПБ, но лучший рост отмечен на средах, содержащих углеводы и факторы роста (дрожжевой экстракт, диализат). В жидких средах наблюдают диффузное помутнение с образованием вначале аморфного, затем ослизняющегося осадка. На плотных средах энтерококки растут в виде мелких, прозрачных, голубоватых колоний. При обильном посеве образуют сплошной рост в отличие от стрептококков, которые и при густом посеве дают изолированные колонии.
Ферментативные свойства . Энтерококки ферментируют лактозу, маннит, глицерин, а сорбит, арабинозу, сахарозу не постоянно и не все штаммы энтерококков. Желатин разжижают и пептонизируют молоко только var. liquefaciens; var. zymogenes непостоянно.
Санитарно-показателыгое значение энтерококков. Энтерококки наряду с бактериями группы кишечных палочек являются постоянными обитателями кишечника человека и животных, в большом количестве выделяются во внешнюю среду, и обнаружение их в почве, воде, пищевых продуктах свидетельствует о фекальном загрязнении этих объектов, продуктов.
При изучении вопроса о санитарно-показательном значении отдельных видов энтерококков было установлено, что в кишечнике человека преобладают Str. faecalis и его варианты, в меньшем количестве обнаруживают Str. faecium, в кишечнике крупного рогатого скота преобладает Str. bovis, у лошадей — Str. equinus, у свиней — Str. faecium, Str. bovis, у овец—Str. bovis, Str. faecium, в меньшем количестве Str. faecalis.
Следовательно, обнаружение во внешней среде Str. faecalis и его вариантов имеет определенное санитарное и эпидемиологическое значение как показатель загрязнения объекта фекалиями человека; обнаружение Str, bovis и Str, equinus — показатель загрязнения фекалиями животных.
Наряду с бактериями группы кишечных палочек энтерококк используют в качестве санитарно-показа-тельного микроорганизма при санитарной оценке воды открытых водоемов.
В международном и европейском стандарте по исследованию питьевой воды энтерококк введен как дополнительный показатель фекального загрязнения воды.
Энтерококки как санитарно-показательные микроорганизмы имеют значительные преимущества перед бактериями группы кишечных палочек. Энтерококки не подвергаются столь глубоким изменениям и не размножаются (за исключением пищевых продуктов) в объектах внешней среды. Их легче идентифицировать и дифференцировать от сходных видов, а также выявить из загрязненных другими микробами объектов благодаря наличию избирательных сред (среда Хайна и Перри с азидом натрия, среда накопления Мак-Конки с теллуритом калия, щелочная полимиксиновая среда Калины). Энтерококки более устойчивы, чем кишечные палочки, к физическим и химическим воздействиям, в частности к повышенным концентрациям солей, нагреванию, хлорированию. В связи с этим их рекомендуют использовать в качестве санитарно-показательных микроорганизмов при оценке качества хлорирования питьевой воды, при исследовании минеральных источников, а также пищевых продуктов с повышенной концентрацией соли.
Дифференциация . Чтобы отличить группу энтерококков от других видов рода Streptococcus, используют ряд признаков (тесты Шермена). В основу дифференциации положена более высокая устойчивость энтерококков по сравнению со стрептококками к воздействию физических и химических факторов.
Внутри группы, между собой, энтерококки различаются способностью редуцировать трифенилтетразолхло-рид (ТТХ), теллурит калия, ферментировать сорбит и маннит, пептонизировать молоко, вызывать гемолиз на средах с добавлением крови (табл. 1).
Str. bovis и Str. equinus в отличие от энтерококков неспособны ферментировать глицерин, расти при рН 9,6.
Сходные по культуральным и биохимическим свойствам штаммы энтерококков и стрептококков идентифицируют серологическим методом, с помощью реакций преципитации и агглютинации.
Энтерококкометрия . Энтерококкометрией называют количественный учет энтерококков в объектах внешней среды, пищевых продуктах.
Благополучной в санитарном отношении считают воду рек, колодцев, если в 50 мл ее энтерококк не обнаружен.
Энтерококкометрию используют при санитарной оценке таких мясных продуктов, как солонина, консервированная ветчина. Консервированную ветчину считают неудовлетворительной по качеству, если в 1 г ее обнаруживают энтерококк. В 50 мл доброкачественного рассола также не должен содержаться энтерококк.
Энтерококкометрию нельзя применять при исследовании молочнокислых продуктов, сыров, ввиду того что энтерококки содержатся в этих продуктах постоянно и способны размножаться.
Информация
Добавить в ЗАКЛАДКИПоделиться: |
СтрептококкиФекальные стрептококки обнаруживаются в испражнениях человека и животных. Некоторые из них постоянно живут также в полости рта, откуда и попадают в кишечник.[ . ] Пиогенные стрептококки адаптированы к паразитическому образу жизни в организме млекопитающих. Их выращивают при 37 °С в бульоне с сывороткой и кровью в атмосфере, содержащей 5—10% СОг. Типичный представитель группы пиогенных стрептококк ков — Str. pyogenes. Здесь и далее родовое название видов Streptococcus дается сокращенно Str. Он служит возбудителем скарлатины, ангины, послеродового сепсиса и других тяжелых эпидемических инфекций человека.[ . ] Фаги молочнокислых стрептококков в большом количестве встречаются в молочных продуктах.[ . ] Ускорению роста фекальных стрептококков, увеличению чувствительности метода способствует предложение Rose, Litsky (1965) проводить этап обогащения на дрожжевом питательном бульоне с добавлением протеозного пептона и казетона до помещения мембранного фильтра на элективную среду. Мембранные фильтры после фильтрования через них необходимых разведений испытуемой воды помещают на 3—18 ч на подкладки из фильтровальной бумаги или другого материала, обильно смоченные дрожжевым бульоном для обогащения, после чего фильтры переносят на М-энтерококковый агар для окончательного выращивания. Учет результатов в общей сложности заканчивают через 48 ч. Прием обогащения увеличивает эффективность метода более чем вдвое по сравнению с обычно принятым выращиванием на М-энтерококковом агаре. По данным авторов, продолжительность обогащения существенно не сказывается на результатах.[ . ] Для обнаружения фекальных стрептококков помещают каплю перекиси водорода (30 г/л) на колонии, выращенные на желчно-дубово-азидном агаре. Выделение у колоний пузырьков кислорода свидетельствует о положительной реакции на каталазу. Колонии, которые не реагируют на каталазу, являются фекальными стрептококками.[ . ] Естественной средой для фекальных стрептококков являются кишки теплокровных животных. Фекальные стрептококки сами по себе не являются патогенными (как и бактерии, напоминающие кишечную палочку) и относительно легко поддаются распознаванию и количественной оценке. Этот вид пробы может найти широкое применение.[ . ] Вместо колиформ индикаторными организмами могут служить стрептококки. По колиформы стали применять раньше стрептококков, н вследствие отсутствия каких-либо преимуществ в использовании последних изменять существующую методику нецелесообразно.[ . ] Перспективным методом и самым быстрым для обнаружения фекальных стрептококков группы D в воде является комбинация техники мембранных фильтров и флуоресцирующих антител. Время анализа — 10—12 ч (Pugsley, Evison, 1975). Значение быстрой идентификации фекальных стрептококков с помощью флуоресцирующих антител в оценке качества воды подчеркнуто Pavlova с соавт. (1973).[ . ] При выращивании бактерий в ферментерах производство педио-кокков и стрептококков гораздо дешевле, чем молочнокислых бактерий. Они не так привередливы в пищевых потребностях, как лактобациллы, растут в ферментерах до большей плотности, лучше выдерживают лиофилизацию и более стабильны при обычных условиях хранения на ферме. Выбор кокков для включения их в продукт должен диктоваться их способностью быстро размножаться в ограниченно аэробных и анаэробных условиях и достигать pH ниже 5,0 быстро, так чтобы клостри-дии и другие портящие силос микроорганизмы не смогли размножаться.[ . ] Тиамин (витамин В1) является важным фактором роста для стафилококков, стрептококков, лептоспир. Тиамин прибавляют в среды для выращивания тех микроорганизмов, которые не способны его синтезировать самостоятельно или только частично обладают этой способностью, например, молочнокислых (М. Стефенсон, 1951) или некоторых патогенных. Рибофлавин (витамин В2) необходим для нормальной биохимической активности гемолитических стрептококков, бацилл столбняка, молочнокислых и пропионовокислых бактерий. Пантотено-вая кислота (витамин В3) и ее производные являются факторами роста для патогенных и непатогенных микроорганизмов. В холине (витамин В4) большинство микроорганизмов не нуждается, так как в процессе эволюции приспособились к его синтезу.[ . ] Гомоферментативное молочнокислое брожение вызывают бактерии рода Lactobacillus и стрептококки. Они могут сбраживать различные сахара с 6-ю (гексозы) или 5-ю (пентозы) углеродными атомами, некоторые кислоты. Однако круг сбраживаемых ими продуктов ограничен.[ . ] Задачей дальнейших исследований является четкое определение группы фекальных стрептококков, которая должна учитываться в качестве санитарно-по,казатель-ной. Это необходимо для получения сравнимых данных и установления количественных критериев. Б унифицированных методах СЭВ важным в гигиеническом отношении считается только Str. faecalis и Str. faecium, которые условно выделяют на среде Сланеца — Бертли по интенсивности окраски колоний, образующих форма-зан (красные, темно-красные, бурые), в отличие от всех колоний, вырастающих на этой среде.[ . ] Гораздо более сложную задачу представляет точная идентификация всех фекальных стрептококков серологической группы D по Lancefield, включая Str. bovis и Str. equinus. В соответствии со Стандартными методами США (1975) для подтверждения принадлежности бактерий, вырастающих на средах с 0,04% азида натрия, к группе стрептококков необходимо установить отсутствие ката-лазной активности, способность расти при 45°С и на средах с 40% желчи.[ . ] Бактерии группы Coli, типичным представителем которых является Escherichia Coli, и фекальные стрептококки (энтерококки), населяющие кишечный тракт, в больших количествах выделяются с фекалиями человека и других теплокровных животных (в среднем около 50 млн. бактерий на 1 г фекалий). Неочищенные бытовые сточные воды обычно содержат более 3 млн. бактерий Coli: на 100 мл. Патогенные бактерии и вирусы, вызывающие кишечные заболевания у человека, имеют тот же источник, т. е. испражнения больных людей. Следовательно, вода, загрязненная фекалиями, о чем свидетельствует присутствие в ней бактерий Coli, считается потенциально опасной.[ . ] Индикаторным микробом за рубежом принят энтерококк Streptococcusfaecalis (один из видов зеленящих стрептококков фекальной группы). Энтерококки — группа микроорганизмов с характерными легко устанавливаемыми признаками. При анализе сравнительных исследований индикаторной роли Е. coli и Str. faecalis на различных сточных водах Г. П. Калина отмечает определенную взаимосвязь между индексом энтерококков и частотой обнаруживания патогенных энтеробактерий. Подобная взаимосвязь не наблюдалась при сопоставлении частоты обнаружения патогенных энтеробактерий и бактерий группы кишечных палочек.[ . ] Стафилококки, объединяемые в род Staphylococcus, по ряду признаков легко отличимы от сходных с ними микрококков и стрептококков. Это — грамположитель-ные кокки, имеющие правильную шаровидную форму, обладающие активной каталазой, ферментирующие глюкозу в анаэробных условиях с выделением кислоты, как правило, образующие пигмент на питательных средах. Два вида стафилококков имеют различное санитарное и эпидемическое значение.[ . ] Колонии, которые дают на эскулин положительную реакцию, а на каталазу — отрицательную, могут считаться фекальными стрептококками.[ . ] В Стандартных методах США (1975) рекомендуется использовать питательные подкладки для определения со-Hform, E. coli, фекальных стрептококков. Однако предлагаемый принцип пропитки подкладок средой непосредственно перед анализом, использование для пропитки жидких сред, ограниченный срок их хранения (не более 96 ч в холодильнике) —все это делает метод непригодным для полевых условий.[ . ] Неясен вопрос и о саиитарно-подазательном значении Str. bovis и Str. equinus. С одной стороны, эти виды наряду с другими видами фекальных стрептококков выделяются из экскретов человека и теплокровных животных, иногда преобладают у последних и, следовательно, исключение Str. bo,vis и Str. equinus из учета снижает индикаторное значение показателя. С другой стороны, нет достаточно четких критериев для отделения этих видов от прочих стрептококков, не имеющих значения в качестве показателей фекального загрязнения.[ . ] В 1940 г. Вудс [1934] показал, что га-аминобензошгая кислота может ■снимать иш’ибирующий эффект стрептоцида па рост гемолитического стрептококка. Он предположил, что стрептоцид вызывает конкурентное ингибирование фермента, действие которого зависит от присутствия га-аминобензойпой кислоты, и что это ингибирование обусловлено структурным сходством между стрептоцидом и и-амино бензойной кислотой. С тех нор много усилий было направлено на получение и исследование синтетических аналогов нормальных метаболитов с целыо выяснить, могут ли они служить ингибиторами роста in vivo, в особенности роста вирусов и опухолевых клеток. Никаких существенных практических успехов в этой области еще не достигнуто. Многие соединения этого типа были также исследованы в отношении возможного специфического ингибирования вирусов, находящихся в растениях. И в этом случае каких-либо значительных практических результатов до сих пор нс получено, однако некоторые группы соединений оказались очень интересными в качестве рабочего инструмента, могущего быть использованным при изучении процессов, происходящих при репликации вируса. Имеющиеся в нашем распоряжении методы исследования соединений этого типа подробно рассмотрены нами в другой работе [1183].[ . ] На сыродельных заводах, как правило, применяют закваски, состоящие не из одной культуры, а из смеси различных культур молочнокислых стрептококков.Стрептококков очень много в природе, поэтому для производства можно отобрать культуры, отличающиеся по своей чувствительности к фагам. При применении смешанной закваски под влиянием фага лизи-руется одна или две культуры, другие же продолжают процесс молочнокислого брожения.[ . ] Кокки можно подразделить на пять групп. Первая группа называется диплококками. Это кокки, располагающиеся попарно. Вторая группа — стрептококки (цепекокки), деление их происходит в одном измерении. Третья группа — тетракокки; деление их происходит в двух измерениях. Это кокки, деление которых происходит в трех измерениях. Пятая группа называется стафилококками (гроздекокками): деление их происходит также в трех измерениях, но не под прямым углом, а беспорядочно, вследствие чего они образуют как бы гроздья винограда.[ . ] Среди кокков существует много патогенных видов, вызывающих такие болезни, как менингит, крупозную пневмонию, гоноррею и пр. Некоторые виды стафилококков и стрептококков вызывают нагноение ран, септицемию, перитонит.[ . ] Возбудителями типичного молочнокислого брожения яв ляются следующие микроорганизмы: 1) Bact. Эта бактерия накапливает наибольшее количество молочной кислоты, равное 3,2%. Молочнокислые бактерии могут сбраживать различные сахара в зависимости от наличия в них тех или иных ферментов.[ . ] При введении 1 мг1л серебра в природную речную воду, зараженную большими дозами кишечной палочки, бактерий Флекснера (дизентерия), Эберта (брюшной тиф), стафилококка, стрептококка и др. полное обеззараживание воды наступает через 1—2 ч и сохраняется в течение многих дней. Вводимые в дальнейшем в эту воду бактерии погибают. Опыты показали [1181, что по эффективности действия серебряной воды на бактерии последние располагаются в такой ряд: бактерии коли < бактерии Флекснера < бактерии Эберта < стрептококки < стафилококки. Таким образом, бактерии коли являются наиболее стойкими к действию серебряной воды, поэтому дозы серебра, уничтожающие их, оказываются более эффективными по отношению к другим бактериям приведенного ряда (рис. 198).[ . ] Наиболее простой формой обладают шаровидные бактерии — кокки (рис. 38). Они могут соединяться по два, образуя диплококки (рис. 39), или соединяться между собой в цепочки (стрептококки, рис. 40), или объединяться по четыре (тетракокки, рис. 41), по восемь и более клеток (рис. 42).[ . ] Ценным тестом для межвидовой дифференциации энтерококков являются особенности ферментации глицерина. Этот тест выполняют на 1,5% агаре с глицериндм, разлитом высоким столбиком в узких пробирках по Mossel.[ . ] Продажный этиловый фиолетовый краситель имеет разное качество, поэтому рекомендуют каждую новую серию препарата проверять в заданной концентрации на 3 видах микроорганизмов: В. Subtilis (или В. Cereus) Sir. .Bovis и Srt. faecalis. Рост споровых должен быть полностью заторможен, стрептококки развиваются нормально. Этиловый фиолетовый можно заменить гексаметиловым фиолетовым в концентрации 1:800 000.[ . ] Современное производство сыра основано на применении пастеризованного молока. Однако пастеризация не убивает всех имеющихся в молоке фагов. Охлажденное после пастеризации молоко разливают в специальные ванны, в которые вносится закваска, состоящая из чистых культур молочнокислых стрептококков. Стрептококки вызывают сквашивание молока. Получаемый сгусток молока подвергается дальнейшей переработке.[ . ] Проведение полного анализа проб воды на присутствие в ней бактерий E. coli явилось первой попыткой разработать конкретные нормативы и более тесно связать их с реальным этиологическим фактором. Другими шагами в этом направлении было использование фекальных бактерий, напоминающих кишечную палочку, фекальных стрептококков и разновидностей сальмонеллы.[ . ] Инфекционные и паразитарные заболевания. Ежегодно в России регистрируется до 40 млн. случаев инфекционных и паразитарных заболеваний, около 25 тыс. из них оканчиваются смертельным исходом. В последние десятилетия структура инфекционных заболеваний значительно изменилась. При явном снижении заболеваемости паразитами, брюшным тифом, дизентерией возросло значение сальмонеллеза, стафилококка, стрептококка и ряда других.[ . ] Микробиологические производства, которые сталкиваются с проблемой фагии, можно разбить на две группы. К первой группе относятся те производства, в которых основное применяемое сырье может содержать (и большей частью фактически содержит) фаги. Это предприятия молочной промышленности. Одно из древнейших производств — молочное (сыроделие, получение молочнокислых продуктов и др.) — основано на применении молочнокислых стрептококков и бактерий.[ . ] Электрохимически приготовленная серебряная вода, по данным Л. А. Кульского, по своей бактерицидности обладает большей силой, чем применяемый на практике дезинфицирования хлор. Самой устойчивой к действию ионов серебра является кишечная палочка, которая служит индикатором на чистоту обеззараживания воды. Если после очистки в воде не будет содержаться кишечной палочки, то все вышеперечисленные бактерии тем более будут отсутствовать в ней.[ . ] Многие бактерии паразитируют внутри организма человека и животных, вызывая различные заболевания. Это патогенные, болезнетворные бактерии. Особенно опасны бациллы туберкулеза, дифтерита, брюшного тифа, сибирской язвы, столбняка. В состоянии споры они много лет сохраняют свою жизнеспособность. Например, бациллы столбняка десятилетиями живут в жирной, унавоженной почве. Заражение человека происходит при попадании их в кровь через царапины или порезы во время сельскохозяйственных работ. Стрептококки и стафилококки вызывают у человека ангину, воспаление различных органов. Холерный вибрион является причиной эпидемий холеры.[ . ] Впоследствии метод был модифицирован автором. В качестве подтверждающей среды была предложена комбинированная молочно-ингибиторная среда, позволяющая не только выявить наличие энтерококков в среде накопления, но и дифференцировать их на виды. Метод позволяет определять только два вида энтерококков. Другие фекальные стрептококки (Str. bovis, Str. equinus) на щелочно-полимиксиновой среде не развиваются из-за высокой щелочности.[ . ] Для большего сокращения времени анализа и более точного учета вырастающих на фильтрах бактерий следует использовать стереоскопическое микроскопирование колоний. Под стереоскопическим микроскопом учет результатов можно вести через 16 ч (при условии использования модифицированной среды Сланеца— Бертли), когда 80—90% видимых колоний образовано энтерококками. Позже вырастает посторонняя микрофлора. Изучение морфологии колоний под лупой позволяет без дальнейшего подтверждения определять количество двух основных видов энтерококков — Str. faecalis и Str. faecium с вариантами и дифференцировать всю группу энтерококков от стрептококков и от посторонних бактерий (сардины) . Степень точности, как любого другого субъективного метода, зависит от квалификации и опыта исследователя. Получаемая ошибка метода вполне допустима для ускоренного варианта.[ . ] Обычные анилиновые краски капсул не окрашивают. Единственная краска, способная окрашивать капсулу без протравливания,— это алциановая голубая. Долго полагали, что все бактериальные капсулы полисахаридной природы. Затем было доказано, что они бывают двух типов: полисахаридной и поли-пептидной природы. У возбудителя сибирской язвы капсула состоит из полипептида — глутаминовой кислоты. Аналогичный глутамин-полипептид найден в слизи сенной палочки. Полисахаридные капсулы, состоящие из углевода декстрана, характерны для вредителя сахарного производства — лейконостока, молочнокислых стрептококков и других бактерий. Некоторые капсулы содержат глюкозамин, азот и фосфор, другие состоят из остатков глюкозы и глюкуроновой кислоты. Если капсула имеет полипептидную или так называемую муциновую природу, она состоит из нитевидных полипептидных мицелл. В капсулах до 98% воды.[ . ] уФТЕРФПЛПЛЛЙ УЧПЕ ОБЪЧБОЙЕ РПМХЮЙМЙ ПФ ЗТЕЮЕУЛПЗП УМПЧБ StrЕptos ГЕРПЮЛБ. уФТЕРФПЛПЛЛЙ ЬФП ЗТБНРПМПЦЙФЕМШОЩЕ, ОЕРПДЧЙЦОЩЕ НЙЛТППТЗБОЙЪНЩ, УРПТ ОЕ ПВТБЪХАФ, ОЕЛПФПТЩЕ ЧЙДЩ УРПУПВОЩ ПВТБЪПЧЩЧБФШ ЛБРУХМХ. оБЙВПМЕЕ ТБУРТПУФТБОЕООЩНЙ РБФПЗЕООЩНЙ УФТЕРФПЛПЛЛБНЙ СЧМСАФУС: рПТСДПЛ ЙУУМЕДПЧБОЙС:
РУ: ФСЗ 2012/11572
Внимание! Данный каталог не является средством массовой информации. Вся представленная информация не является публичной офертой, предусмотренной ст. 437 Гражданского кодекса РФ. Изделия, не зарегистрированные в установленном порядке как медицинские, не могут быть использованы в медицинских целях. Приведенные характеристики товаров, включая изображения, представлены исключительно для ознакомления и могут отличаться от реальных. Для получения более подробной информации, пожалуйста, обращайтесь к сотрудникам компании. Логотипы, торговые марки, знаки, технологии и процессы, использованные или упомянутые в каталоге, являются собственностью их владельцев. Читайте также:
Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.
Copyright © Иммунитет и инфекции
|