Набор для ифа диагностики коклюша

1. 1
2. 2
3. 3
4. 4

Конгресс Лабораторной Медицины 2019

11 - 13 сентября 2019

Рады сообщить Вам, что в Москве успешно состоялся V Российский Конгресс Лабораторной Медицины 2019 !

В ходе Конференции было проведено 8 форумов, в том числе, посвященных Молекулярной диагностике, клинической цитологии и преаналитике. Также прошли клинико-лабораторные конференции по гематологии, онкологии, кардиологии, эндокринологии, акушерству и гинекологии, неврологии, анестезиологии и реаниматологии, инфекционным заболеваниям.

В рамках Конференции была организована ежегодная выставка оборудования и реагентов для лабораторной диагностики - Лабораторный город.

Компания Медико-Диагностическая Лаборатория представила на своем стенде ДНК-зонды для FISH анализа, наборы реагентов NovaTec (Германия) для ИФА-диагностики, гибридайзеры ThermoBrite и ThermoBrite Elite, микроскопы и программное обеспечение для кариотипирования и FISH-анализа, анализатор конечных продуктов гликирования AGE Reader и другое оборудование для диагностики.

Фото с Конгресса смотрите здесь.

Конгресс Генетика 21 века

25 - 28 мая 2019

В конце мая состоялась международная Конференция для генетиков - "Генетика XXI века".

Конференция была посвящена 50-летию Медико-Генетического Научного Центра в Москве и включала сразу 3 Конференции:

Благодарим участников Конференции !

Редкие опухоли-2019

28 февраля - 02 марта 2019

В Москве состоялась новая Конференция по онкологии - I международный конгресс "Редкие опухоли. Фундаментальные и клинические достижения"

Председателями секций и лекторами выступили ведущие онкологи нашей страны. В Конгрессе приняли участие специалисты из стран Европы и СНГ.

На стенде компании Медико-Диагностическая Лаборатория наши сотрудники представили современные технологии генетического типирования опухолей: гибридизация in situ ( ДНК-зонды Leica Biosystems и гибридайзеры для FISH-анализа ), иммуногистохимия (антитела Novocastra ).

Благодарим посетителей стенда МДЛ !

Управляемые и другие социально-значимые инфекции

28 февраля - 01 марта 2019

Возможна предварительная регистрация на мероприятие до 20 февраля по данной ссылке.

Компания Медико-Диагностическая Лаборатория представит ИФА тест-системы NovaTec для выявления антител к различным патогенам, а также определения гормонов.

Также Вы узнаете про ДНК-зонды Leica Biosystems и гибридайзеры для FISH-анализа онкологических и наследственных заболеваний.

Будем рады видеть Вас на стенде МДЛ !

Конференция по респираторным инфекциям

30 ноября 2018

Главное медицинское управление Управления делами Президента Российской Федерации

На стенде компания Медико-Диагностическая Лаборатория представила тест-системы для иммуноферментного исследования наличия антител к различным бактериальным и вирусным патогенам (ИФА наборы NovaLisa). Также были представлены ДНК-зонды Kreatech от Leica Biosystems для диагностики рака легких методом FISH. Список ДНК-зондов, позволяющих классифицировать немелкоклеточный рак лёгких (составляет более 80% от всех случаев опухолей лёгких) на молекулярном уровне, представлен здесь.

Новые технологии диагностики наследственных болезней

26-27 октября 2018

Уважаемые коллеги!

В октябре в Москве состоялась Конференция "Новые технологии диагностики наследственных болезней".

В рамках Конференции ведущие генетики нашей страны прочитали доклады о современных методах пренатальной диагностики.

Благодарим организаторов и участников Конференции.

На стенде компании МДЛ была представлена информация о наборах и оборудовании для диагностики анеуплоидий и микроделеционных синдромов методом FISH (ДНК-зонды Kreatech, гибридайзеры ThermoBrite и ThermoBrite Elite , химические реактивы Serva ). Также наши сотрудники рассказали об ИФА тест-системах NovaLisa ( NovaTec, Германия ) для диагностики TORCH-комплекса и других инфекций.

Коклюш относится к той категории заболеваний, которые ранее традиционно считались детскими, а сегодня все повышающуюся заболеваемость мы наблюдаем у подростков и взрослых. Как долго этой болезнью страдает человечество, точно неизвестно. Первое ее детальное описание было дано французским врачом Гийеном де Байоном во время парижской эпидемии коклюша в 1538 г. Возможно, что название болезни в определенной степени является отражением кашля со свистящим вдохом, который напоминает пение петуха (chant du coq, в переводе с французского - петух).

Коклюш – острое инфекционное заболевание, вызываемое Bordetella рertussis с воздушно – капельным путем передачи, характеризующееся длительным своеобразным спазматическим кашлем с явлениями интоксикации и поражением дыхательной, сердечно – сосудистой и нервной систем. Подобные коклюшу заболевания – паракоклюш, вызывают, Bordetella parapertussis и Bordetella bronchisepticа. Все три вида бордетел сходны между собой и относятся к одному роду. В связи с наличием стертых и атипичных форм, сходства симптомов, решающее значение для их диагностики имеют лабораторные методы исследования. Микробиологический анализ проводят одновременно на выделение всех трех возбудителей.

В Липецкой области за 9 месяцев 2015 г. зарегистрировано 64 случая заболеваемости коклюшем, из них 47 - в г. Липецке, показатель заболеваемости увеличился в 6,0 раз в сравнении с аналогичным периодом 2014 г. и составил 7,8 на 100 тыс. Не привитые дети составляют 77% от заболевшего детского населения. Истинная же заболеваемость коклюшем значительно выше за счет не диагностированной коклюшной инфекции (легких и стертых клинических форм). Трудности клинической диагностики коклюша на ранних стадиях заболевания, отсутствие обследования всех длительно (свыше 7 дней) кашляющих или его проведение на поздних сроках заболевания, а также после продолжительного лечения антибактериальными препаратами, приводит к низкому проценту выявляемости возбудителя инфекции.

Возбудителями являются нестойкие во внешней среде бактерии рода Bordetella, которые вне человеческого тела гибнут в течение нескольких минут. Источником и резервуаром инфекции является только человек, представляющий опасность с конца инкубационного периода. Считается, что в предсудорожном периоде, а также в течение первой недели спастического кашля 90–100% больных выделяют возбудитель болезни. Большую опасность для детских организованных коллективов представляют дети и взрослые, переносящие заболевание в стертой форме.

Механизм передачи — аэрозольный; путь передачи — воздушно-капельный. Несмотря на массивное выделение возбудителя во внешнюю среду, благодаря крупнодисперсному характеру выделяемого аэрозоля передача микроба возможна только при тесном общении с больным. При этом заражение происходит на расстоянии не более 2 м от источника инфекции. Из-за нестойкости возбудителя во внешней среде передача через предметы обихода, как правило, не происходит. Между тем, восприимчивость организма к инфекции высокая — индекс контагиозности колеблется от 0,7 до 1,0, то есть, вероятность заражения при контакте составляет 70 - 100 %.

Для коклюша характерен осенне-зимний подъем заболеваемости с пиком в декабре–январе. Типичны периодические подъемы и спады с интервалом в 3–4 года. Входными воротами инфекции являются слизистые оболочки дыхательных путей. Возбудитель колонизирует клетки цилиндрического реснитчатого эпителия гортани, трахеи и бронхов. При этом он не проникает в клетки и не диссеминирует с кровотоком, а симптомы самой болезни вызывают вырабатываемые возбудителем токсины, в том числе и развитие спастического кашля. Кашлевой рефлекс постепенно закрепляется в дыхательном центре продолговатого мозга, приступы кашля становятся более частыми и интенсивными.

Коклюш наиболее опасен для детей младшего возраста, в том числе новорожденных и недоношенных, и нередко приводит у них к тяжелым нарушениям со стороны дыхательной и нервной систем. Основным сдерживающим фактором заболеваемости коклюшем является массовая плановая вакцинопрофилактика, которая привела к резкому снижению заболеваемости, смертности, летальности. Еще в середине 20-го столетия заболеваемость коклюшем в СССР составляла 428 человек на 100 тыс. населения при очень высокой летальности (0,25%). Но спустя десятилетия, благодаря начатой и постоянно проводимой вакцинопрофилактике, заболеваемость уменьшилась в 25 раз, а количество летальных случаев — в тысячу раз. Поствакцинальный иммунитет не всегда предохраняет от заболевания. Коклюш в этих случаях протекает в виде легких и стертых форм инфекции, которые диагностируются, в основном, ретроспективно (серологически). После перенесенного заболевания остается более длительный иммунитет.

Современные методы исследования позволяют проводить раннюю диагностику заболевания и существенно облегчают постановку диагноза. Одним из таких методов, является метод молекулярной диагностики (полимеразная цепная реакция ПЦР). ПЦР позволяет выявлять в биологическом материале (например, в носоглоточном аспирате) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции, и наиболее точно и быстро диагностировать коклюш. Специфичность ПЦР достигает 100 %, что обусловлено использованием в реакции специфичного именно для B. pertussis фрагмента. Исследование с помощью ПЦР характеризуется высокой чувствительностью, превосходящей чувствительность бактериологического метода. Важным условием для правильной лабораторной диагностики возбудителя является правильный забор материала и его доставка для исследования. Наиболее оптимальные временные рамки проведения ПЦР-диагностики — это первые три недели с момента начала кашля. Взятие материала проводится натощак или не ранее 2 часов после еды, а также до полоскания ротовой полости.

Наш адрес: г. Липецк, ул. Гагарина, д. 60а. Часы работы с 08:00 до 16:00; выходной: суббота, воскресенье; тел. (4742) 308-678.

• Инфекционная заболеваемость в Липецкой области за 9 месяцев 2015 года.
• А.Н.Сиземов, Е.В.Комелева: Коклюш: клиника, диагностика, лечение.
• Бактериологические исследования

Зав. баклабораторией Христенко Т.А.

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной биотехнологии, вирусологии и может быть использовано для выявления антигенов возбудителей вирусных болезней рыб в биологическом материале, как для диагностики, так и для научных исследований методом иммуноферментного анализа.

Аквакультура в России носит комплексный многоотраслевой характер, за счет использования крупнейшего в мире фонда внутренних водоемов и прибрежных акваторий морей. При этом одна из существенных проблем, сдерживающих развитие отечественной акваиндустрии - вирусные болезни выращиваемых гидробионтов, такие как: инфекционный некроз поджелудочной железы лососевых

Сейчас диагностика вирусных болезней рыб в лаборатории требует культивирования вируса на клетках рыб, что занимает достаточно длительное время и выполняется только в крупных научно-исследовательских институтах, имеющих профильные лаборатории. [Инструкция о мероприятиях по профилактике и ликвидации инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых рыб; Инструкция о мероприятиях по профилактике и борьбе с инфекционным некрозом гемопоэтической ткани лососевых рыб; Инструкция о мероприятиях по борьбе с вирусной геморрагической септицемией рыб // Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб (часть 1), Москва, отдел маркетинга АМБ-агро, 1998, с. 87-113]. Эти методы долгие, а результат анализа напрямую зависит от таких факторов, как опыт и компетенция специалиста, проводящего работу, физиологического состояния и биологических особенностей используемой линии клеток, поэтому, применение современных методов будет, несомненно, востребовано при диагностике.

Известен способ серологической диагностики вирусных желудочно-кишечных инфекций крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа, преимущественно рота-, коронавирусного энтеритов, вирусной диареи крупного рогатого скота, включающий взаимодействие антигенов с антителами, с антивидовыми антителами, меченными пероксидазой хрена, добавление субстратной смеси и учет результатов по интенсивности окраски образовавшегося комплекса, характеризующийся тем, что в реакции используют планшеты с предварительно сорбированными на них антигенами. [Патент №2472162]

Единственным известным набором для проведения серологической диагностики вирусных болезней рыб является ТФ ИФА, который содержит специфический герпесвирусный антиген для сенсибилизации планшет, специфическую герпесвирусную и нормальную сыворотки в качестве положительного и отрицательного контроля, антивидовой пероксидазный конъюгат к иммуноглобулину сибирского осетра для выявления комплекса антиген-антитело, используемые для выявления противогерпетических антител в сыворотке осетровых рыб, разработанный во ВНИИВВиМ в 2012 году, который предлагается использовать в научно-исследовательских и ветеринарных лабораториях для ретроспективной диагностики герпесвирусной болезни сибирского осетра (SbSHV). Однако, поиск антител - это ретроспективная диагностика, которая актуальна только при подозрении на герпесвирусную инфекцию осетровых рыб в межэпизоотический период, и непригодна для выявления антигенов возбудителей за счет длительного времени образования антител в живом организме. [Shchelkunov I. et. al. 2012]

При диагностике вирусных инфекций лососевых рыб важна оперативная информация, на ранних этапах развития заболевания и для быстрого подтверждения диагноза во время эпизоотии, поэтому необходимо анализировать наличие в организме рыб антигена возбудителя для своевременного принятия карантинных мер и профилактических мероприятий. Сведения по использованию комбинированного иммуноферментного анализа и существованию диагностических наборов для выявления вирусных болезней рыб в аналогичном формате в современной литературе отсутствуют.

В задачу исследований входило - разработать чувствительный и эффективный способ серодиагностики наиболее распространенных вирусных болезней лососевых рыб: инфекционного некроза поджелудочной железы (IPN), инфекционного некроза гемопоэтической ткани (IHN), вирусной геморрагической септицемии (VHS) и сократить время на постановку диагноза за счет одновременного исследования образцов биоматериала на три заболевания.

Сущность предполагаемого изобретения состоит в использовании диагностического набора, включающего все необходимые компоненты для проведения иммуноферментного анализа, позволяющего выявлять антигены IPN, IHN и VHS одновременно в образцах биологического материала от рыб на ранней стадии развития болезни с высокой специфичностью и чувствительностью. Принцип способа заключается в следующем: специфические иммуноглобулины к вирусам-возбудителям IPN, IHN и VHS, иммобилизованные на поверхности лунок одного полистиролового микропланшета, связываются с гомологичными антигенами, если они присутствуют в исследуемом материале, образуя комплекс антиген-антитело. Полученный иммунный комплекс выявляется путем взаимодействия с иммуноферментным конъюгатом, фермент которого, после добавления субстрата, вызывает разложение субстрат-индикаторного раствора и образование окрашенного продукта. Интенсивность окраски в лунке микропланшета пропорциональна содержанию специфического антигена в испытуемом образце, результаты учитывают по общепринятой формуле.

Диагностический набор для выявления вирусов-возбудителей IPN, IHN и VHS содержит: планшет полистироловый 96-луночный, сенсибилизированный иммуноглобулинами к IPN, IHN и VHS; положительный контрольный образец IPN, инактивированный (IPN К + ); положительный контрольный образец IHN, инактивированный (IHN К + ); положительный контрольный образец VHS, инактивированный (VHS К + ); отрицательный контрольный образец, инактивированный (К - ); конъюгат 1, представляющий собой анти-IPN антитела, меченные пероксидазой хрена; конъюгат 2, представляющий собой анти-IHN антитела, меченные пероксидазой хрена; конъюгат 3, представляющий собой анти-VHS антитела, меченные пероксидазой хрена; раствор для разведения конъюгата (РК); промыватель - концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином-80 (ФСБ-Тх25); субстрат - раствор тетраметилбензидина (ТМБ); стоп-реагент; ванночка для реагентов. Компоненты набора расфасованы в пластиковые флаконы разного объема с завинчивающимися крышками и упакованы в коробки.

1. Подготовка исследуемого материала

Для обнаружения антигенов IPN, IHN и VHS в качестве испытуемого используют биопсийный материал внутренних органов (почка, печень, селезенка), экссудат и/или вируссодержащую надосадочную жидкость культур клеток. Для получения 10%-ной суспензии биоматериал гомогенизируют до получения однородной массы на ФСБ (рН7,2-7,4). Полученную суспензию сливают в стерильную посуду и используют для исследования.

2. Подготовка компонентов для постановки реакции

Для промывания планшетов, при постановке реакции, готовят содержащий твин-80 фосфатно-солевой буфер: размешивают содержимое флакона с ФСБ-Т*25, при выпадении в концентрате осадка прогревают его до полного растворения солей, и разводят дистиллированной водой до 700 мл. Хранят при 4°С до 5 суток.

Растворы конъюгатов 1, 2, 3 в рабочем разведении готовят непосредственно перед использованием, к 0,05 мл концентрированного раствора добавляют 15 мл раствора для разведения конъюгата (РК), тщательно перемешивают.

Раствор ТМБ готов к применению, непосредственно перед использованием отбирают в пластиковую ванночку 12 мл. Остатки раствора ТМБ из ванночки нельзя сливать во флакон с исходным раствором ТМБ. Хранят при 4°С в течение всего срока годности набора.

3. Постановка реакции

Перед началом анализа лунки планшета промывают один раз промывочным раствором. В каждую лунку вносят по 300 мкл раствора, через пять минут после заполнения лунок раствор аккуратно удаляют. Остатки влаги из лунок тщательно удаляют, постукивая перевернутым планшетом по фильтровальной бумаге.

В первые лунки рядов планшета сенсибилизированных иммуноглобулинами к IPN, IHN и VHS вносят по 100 мкл специфических положительных антигенов (IPN К + , IHN К + , VHS К + ). Во вторые лунки каждого ряда вносят 100 мкл отрицательного антигена. Во все остальные лунки по 100 мкл исследуемых образцов (желательно делать 2-3 повторности). Лунки на планшете сенсибилизированы следующим образом: иммуноглобулинами к IPN (1, 4, 7, 10 ряды), IHN (2, 5, 8, 11 ряды), VHS (3, 6, 9, 12 ряды). Внесение материала в плашку сопровождают тщательным перемешиванием пипетированием в течение 5-7 секунд. Планшет инкубируют при комнатной температуре (21-25°С) 60 минут.

Растворы конъюгатов №1,2,3 в рабочем разведении готовят за пять-десять минут до окончания инкубации.

По окончании инкубации планшет отмывают четыре раза ФСБ-Т от несвязавшихся антигенов, после чего удаляют влагу постукивая перевернутым планшетом по фильтровальной бумаге.

В лунки рядов 1, 4, 7, 10 планшета вносят по 100 мкл раствора конъюгата 1 (IPN) в рабочем разведении. В лунки рядов 2, 5, 8, 11 планшета вносят по 100 мкл раствора конъюгата 2 (IHN) в рабочем разведении. В лунки рядов 3,6,9,12 планшета вносят по 100 мкл раствора конъюгата 3 (VHS) в рабочем разведении. Планшет инкубируют при комнатной температуре (21-25°С) 60 минут. По окончании инкубации планшет отмывают четыре раза ФСБ-Т после чего удаляют влагу постукиванием.

Во все использованные лунки планшета вносят по 100 мкл раствора ТМБ. Для внесения раствора ТМБ используют пластиковую ванночку, входящую в состав набора. Планшет инкубируют при комнатной температуре, в защищенном от света месте, 25-30 минут.

Реакцию заканчивают добавлением во все лунки 100 мкл стоп-реагента.

4. Учет результатов

Результаты реакции учитывают через 2-3 минуты после добавления стоп-реагента, проводя измерение оптической плотности (ОП) в каждой лунке на спектрофотометре с вертикальным лучом света при длине волны 450 нм или визуально. Результаты исследований учитывают только при соблюдении следующих условий:

- значение ОП в лунке с отрицательным контролем не более 0,30 о.е.

- значение ОП в лунке с положительным контролем не менее 0,62 о.е. Реакцию оценивают по формуле и выражают в виде процента реактивности:

процент реактивности (%) = (ОП-ОПК - )/(ОПК + -ОПК - )Х100%,

где ОП - оптическая плотность образца, ОПК + - оптическая плотность положительного контроля, ОПК - - оптическая плотность отрицательного контроля.

Границы пороговых значений: при величине % >22% реакция считается положительной, значение %