Кровь на антитела чума
Чума – это высокозаразное заболевание, которое проявляется в виде острой пневмонии или в виде поражения лимфатических узлов, сопровождающегося лихорадкой.
Возбудитель заболевания – чумная палочка.
Первично чума поражает грызунов (крыс, мышей, барсуков, белок и др.). Заражение человека происходит через укусы блох, инфицированных от больных грызунов. От человека к человеку заболевание передается чаще всего при вспышках легочной чумы воздушно-капельным путем.
На протяжении нескольких тысячелетий люди страдали от эпидемий чумы, уносящих огромное количество жизней. На данный момент она встречается очень редко, в основном в развивающихся странах.
Лечениесостоит в приеме антибиотиков. Без лечения высок риск смерти больного.
Симптомычумы зависят от ее формы.
Бубонная чума проявляется обычно спустя 2-5 дней после заражения:
- резким повышением температуры до 40-41 °C, ознобом и головной болью;
- бубонами – болезненными, увеличенными лимфатическими узлами в паховой, подмышечной области, в области шеи, которые окружены зоной отека; примерно на второй неделе заболевания они могут нагноиться;
- мышечными болями, сильным истощением, слабостью, болями в животе, диареей.
Септическая чума возникает при заражении крови чумной палочкой. Общие симптомы сходны с проявлениями бубонной чумы, однако сами бубоны отсутствуют.
При легочной чуме через 2-3 дня после заражения появляются быстро прогрессирующие симптомы:
- высокая температура тела, слабость, головная боль;
- кашель с кровавой или гнойной мокротой;
- боль в груди, затруднение дыхания;
- тошнота и рвота.
Общая информация о заболевании
Чума – это высокозаразное заболевание, которое проявляется поражением легких или лимфатических узлов и сопровождается лихорадкой.
Возбудитель заболевания – чумная палочка.
Люди страдали от эпидемий чумы на протяжении нескольких тысячелетий, раньше погибало до 100 % жителей зараженных мест. На данный момент она встречается редко, как правило, в развивающихся странах.
Изначально чума поражает грызунов (крыс, мышей, кроликов, бурундуков, барсуков, белок, землероек и др.). Человек инфицируется через укусы блох, хозяином которых до этого было зараженное чумой животное.
Кроме того, заразиться можно от укусов и царапин кошек, при разделке тушек животных, воздушно-капельным путем от человека при эпидемиях легочной чумы, от животного путем вдыхания зараженной воздушной взвеси.
Попав с укусом блох в организм, бактерии мигрируют в близлежащие лимфатические узлы и размножаются внутри клеток. Так пораженные лимфоузлы превращаются в бубоны. Затем происходит разрушение структуры и отмирание тканей лимфатических узлов. Без лечения инфекция может распространиться на другие органы.
Выделяются три наиболее распространенных формы чумы.
- Бубонная чума – наиболее распространенная форма. Поражаются лимфатические узлы, чаще всего один. При адекватном лечении смертность от бубонной чумы составляет около 20 %. Больной не заразен для окружающих.
- Септическая чума – менее распространенная форма. Происходит заражение крови больного. Бубоны не образуются. При полноценном лечении летальность среди больных составляет примерно 25 %.
- Легочная чума является редкой формой заболевания, при которой поражаются легкие. При оказании больным медицинской помощи смертность от легочной чумы достигает 50 %.
Чума может приводить к следующим осложнениям:
- менингиту – воспалению оболочек головного и спинного мозга;
- гангрене (сгустки крови в кровеносных сосудах пальцев, образующиеся при чуме, могут нарушить приток крови к ним и привести к отмиранию конечностей);
- септическому шоку – состоянию, угрожающему жизни и характеризующемуся крайне низким кровяным давлением;
- смерти (при отсутствии лечения смертность от чумы составляет примерно 60 %).
Кто в группе риска?
Риск заболеть чумой достаточно низок. В группу риска входят:
- лица, контактировавшие с больным животным или человеком;
- те, кого часто кусают блохи;
- проживающие в местности, где наблюдались вспышки чумы;
- люди, чья пища может быть доступна грызунам;
- жители местности с плохими санитарными условиями и высокой численностью крыс;
- контактирующие с чумной палочкой по роду занятий (ученые, доктора, ветеринары).
При подозрении на чуму незамедлительно проводится взятие материала из пораженных органов и крови, выполняется рентгенография грудной клетки. Лечениеначинается до получения результатов исследований.
В целях оценки общего состояния больного и состояния жизненно важных органов выполняются следующие анализы.
Оставьте ваш E-mail и получайте новости, а также эксклюзивные предложения от лаборатории KDLmed
Срок исполнения
Исследуемый материал
Метод определения
Аденовирус тип I (вирусный гепатит собак (CAV I))
Инфекционный гепатит собак (болезнь Рубарта) – вирусное заболевание, характеризующееся, лихорадкой, катаральным воспалением желудочно-кишечного тракта и дегенеративно-некротическими процессами в печени.
Болеют собаки всех возрастов и пород, но наиболее восприимчивы щенки 1,5-6 месячного возраста. Возбудитель – ДНК-содержащий аденовирус типа CAV I, – при попадании в организм распространяется и размножается в клетках различных органов и тканей, но, прежде всего, в печени, вызывая воспалительные и дегенеративно-некротические изменения.
В результате нарушения функций печени нарастают явления интоксикации, вплоть до развития печеночной комы, что, в свою очередь, приводит к нарушению функций почек и центральной нервной системы.
Парвовирус (CPV-2)
Парвовирусный энтерит - высококонтагиозное и быстропротекающее инфекционное заболевание собак, часто приводящее к смертельному исходу.
Возбудитель парвовирусного энтерита собак - один из самых мелких ДНК-содержащих вирусов, с довольно простой геномной и капсидной структурой - относится к семейству Parvoviridac.
Вирус довольно устойчив к факторам внешней среды, рН и температурным изменениям (выживает во внешней среде при 80 °С - 15 минут; при 60 С - 1 час; при 56 °С - 24 часа; при 37 °С - 2 недели; при 20 °С - 3 месяца; при 4 °С -более полугода). В высохших каловых массах может оставаться жизнеспособным более года. Вирус устойчив к действию жирорастворимых веществ, трипсина и большинства дезинфектантов. Однако он инактивируется 0,5%-ным раствором формалина и 4%-ным раствором хлорамина.
Основной мишенью, которую поражает вирус, является лимфоидная ткань, миокард и эпителий кишечника. Причем, исходя из особенностей вируса (малый размер генома), для его интенсивной репликации необходимы клетки с активными метаболическими процессами. У новорожденных щенков в первые 2 недели жизни наиболее активно растёт ткань миокарда. Через 8 недель начинает интенсивно увеличиваться количество клеток кишечного эпителия. Это и определяет преимущественный характер поражений: у новорожденных щенков болезнь протекает с интенсивным поражением миокарда, а у животных более старшего возраста в основном поражается кишечный тракт.
Вирус попадает в организм при контакте восприимчивого животного с материалом, контаминированным фекалиями больного.
Чума плотоядных (CDV)
Высококонтагиозное заболевание собак, сопровождающееся большим процентом гибели заразившихся животных.
Возбудитель чумы плотоядных - РНК-содержащий вирус, имеющий на своей поверхности два белка-антигена Н и F и относящийся к роду морбилливирусов.
Считается, что вирус довольно устойчив к воздействию факторов внешней среды, особенно в высушенном состоянии (до 3-4 месяцев при комнатной температуре не теряет своей активности). Вместе с тем при 56°С теряет жизнеспособность через 1,5 часа, а при 37-40°С погибает через 15 дней. Под действием 1% раствора формалина погибает через 3 часа, а 2% раствор NaOH убивает его через 1 час. Довольно хорошо вирус сохраняется в замороженном состоянии.
Наиболее часто и тяжело болеют молодые собаки (в возрасте до 1 года), хотя болезнь регистрируется и у животных старшего возраста. Данный факт объясняется более эффективной системой иммунологической защиты у взрослых животных.
В естественных условиях наиболее распространен респираторный путь заражения. Попадая в органы дыхания, вирус при помощи гемагглютинина (Н-белок) адсорбируется на мембране альвеолярных макрофагов легких.
После сорбции вирус при помощи белков слияния (F-белка) проникает в клетку фагоцита и подвергается транскрипции и репликации (т.е. начинает размножаться).
Поражая блуждающие альвеолярные макрофаги и размножаясь в них, вирус переносится в регионарные лимфоузлы. Практически уже на следующий день после заражения его обнаруживают в бронхиальных лимфоузлах и миндалинах. В них, кроме макрофагов и нейтрофилов, вирус поражает популяции лимфоцитов и моноцитов. С помощью клеток белой крови он переносится во все паренхиматозные органы, включая печень, селезенку, структуры кишечного тракта, тимус, костный мозг и т.д. В результате вирусиндуцированных процессов разрушения клеток и, как следствие, развития соответствующих иммунных реакций, в организме возникают множественные воспалительные очаги. Это приводит к поражению различных органов и тканей. Обычно данный процесс развивается на 3-6 сутки после инфицирования и, как правило, сопровождается высоким подъемом температуры тела.
Длительно текущий воспалительный процесс приводит к развитию нервной стадии чумы, которая сопровождается повреждением мозга.
Определение вакцинальных антител, обнаруживаемых в данном исследовании, имеет клиническую значимость для понимания врачом-клиницистом вакцинального статуса собаки. На основании полученных данных возможно принять решение о необходимости первичной вакцинации/ревакцинации базовыми вакцинами, мульти- или моновалентными.
Тест является модифицированным иммуноферментным анализом, который может быть описан как точечный анализ с использованием вторичных антител, меченных ферментом, при котором определяется уровень антител в сыворотке крови.
Для исследования основным биоматериалом является сыворотка крови собак. Образец стабилен 5 дней при температуре +2ºС…+8ºС.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ
Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.
Тест качественный. Могут быть получены следующие результаты:
1. Непротективный уровень IgG:
- АТ к парвовирусу собак ( 1:80)
- АТ к вирусу гепатита собак (>1:16)
- АТ к вирусу чумы плотоядных (>1:32)
Сотрудники Саратовского филиала Федерального исследовательского центра вирусологии и микробиологии изучили, какие антитела и механизмы клеточного иммунного ответа активирует чумная живая вакцина у человека. Они выяснили, что присутствие в крови испытуемых специфических антител к белку Pla (активатору плазминогена чумы) служит надежным показателем успешной вакцинации. Научная статья опубликована в журнале PLoS Neglected Tropical Diseases.
Чума — это инфекционное заболевание, вызываемое бактерией Yersinia pestis (чумной палочкой). Инфекция переносится блохами, живущими на грызунах, в том числе на обильно населяющих города крысах. В прошлом чума уничтожала европейцев миллионами. За последние несколько десятилетий число случаев заражения удалось существенно снизить с помощью вакцинации. Однако это заболевание по-прежнему часто встречается в развивающихся странах. Чтобы препятствовать его распространению, необходимо хорошо понимать, как работает чумная вакцина, и повышать ее эффективность.
Саратовские биологи начали масштабную работу по выявлению механизмов действия живой чумной вакцины. Для этого они взяли образцы крови у 34 добровольцев 26—72 лет, неоднократно привитых против чумы втиранием взвеси живых микробов в специально поврежденную кожу, а также у 17 здоровых непривитых людей того же возраста. Позже людей первой группы разделили на тех, кто проходил вакцинацию менее чем за год до анализа крови (13 человек), и тех, кому делали прививку за год и более до участия в этом исследовании (остальные 21). Ученых интересовало состояние мононуклеарных лимфоцитов в крови испытуемых. Эти клетки обеспечивают иммунный ответ на вторжение в организм различных бактерий, в том числе и чумной палочки.
Оказалось, что мононуклеарные лимфоциты вакцинированных выделяют существенно больше интерлейкинов 4 и 10, а также ФНО-α и IFN-γ в ответ на присутствие Pla. Клетки из крови привитых менее года назад были чуть более активны, чем лимфоциты привитых ранее, но эта разница не была статистически значимой. Тем не менее по какой-то причине мононуклеарные лимфоциты не вакцинированных от чумы испытуемых при наличии Pla производят в 3,4 раза больше интерлейкина-4, чем аналогичные клетки из крови привитых. И чем больше раз человеку вводили живую чумную вакцину в прошлом, тем меньше интерлейкина-4 в эксперименте вырабатывали его лимфоциты.
Также исследователи определили в крови испытуемых уровни антител из различных классов иммуноглобулинов, реагирующих на присутствие активатора плазминогена чумы Pla. Многие из них связывались не только с Pla, но и с другими белками. Когда ученым удалось выделить именно те антитела, которые реагируют только на присутствие Pla, оказалось, что больше всего их образуется у тех, кто был вакцинирован относительно давно. Как и в случае с интерлейкином-4, многократные прививки против чумы приводили к тому, что антител из подклассов иммуноглобулинов G1 и G2 в ответ на активатор плазминогена чумы вырабатывалось меньше. Однако в крови многократно привитых в присутствии Pla обнаруживали специфические антитела к этому белку из подкласса иммуноглобулинов G3, а у невакцинированных их не встречали. Напротив, антитела к активатору плазминогена чумы из подкласса иммуноглобулинов G4 присутствовали только у непривитых.
Из полученных данных авторы сделали вывод, что по иммунной реакции организма на активатор плазминогена чумы Pla можно судить об эффективности вакцинации, хотя Pla не единственное вещество, вырабатываемое чумной палочкой и провоцирующее иммунный ответ в теле человека. Однако при этом надо четко отслеживать, выделение и активация каких веществ связаны с появлением Pla в организме, а какие происходят неспецифически. Также ученые предполагают, что многократные введения живой чумной вакцины могут и не повышать эффективность защиты от чумы, так как уровень интерлейкина-4 и антител из подклассов иммуноглобулинов G1 и G2 в крови с каждой вакцинацией падает.
Цибезов В.В., Терехова Ю.О., Баландина М.В., Латышев О. Е.,
Гребенникова Т. В., Верховский О.А. АНО "Научно-исследовательский
институт диагностики и профилактики болезней человека и животных"
Клипер Т.Н. "НПОНАРВАК"
Шевкопляс В.Н. Кубанский госагроуниверситет
Африканская чума свиней (АЧС) - вирусная болезнь свиней, характеризующаяся высокой контагиозностью. Возбудителем заболевания является ДНК-содержащий вирус семейства Asfarviridae с размером вириона 175—215 нм [8]. В естественных условиях к АЧС восприимчивы домашние и дикие свиньи всех возрастов. Скорость распространения и степень патогенности вируса АЧС таковы, что эта инфекция способна в короткие сроки (3-5 месяцев) привести к огромным экономическим потерям или даже полной утрате поголовья свиней [1, 6].
Эпизоотологическая особенность АЧС заключается в чрезвычайно быстром изменении форм течения инфекции среди домашних свиней от острого со 100%-ной летальностью до хронического и бессимптомного носительства и непредсказуемого распространения.
Для эффективного использования различных методов диагностики АЧС. направленных на выявление возбудителя или специфических антител, следует учитывать особенности протекания болезни и ее формы. При сверхострой и острой формах выявление вирусоспецифических антител возможно только в пробах селезенки, так как специфические антителопродуцирующие клетки и. следовательно, антитела появляются там на 2-3 сутки после инфицирования, в то время как животные гибнут уже на 3-7 сутки [5]. При подостром и хроническом течении болезни виру-соспецифические антитела в крови появляются на 7-10 сутки, до этого времени целесообразно проводить выявление вирусного антигена или генома в крови, так как данный период течения АЧС характеризуется виремией [7] .
В более поздний срок прижизненная идентификация вирусного антигена возможны только при наличии устойчивой ви-ремии. которая характерна для циркуляции высокопатогенных штаммов и изолятов. Вирус умеренно вирулентных изолятов вызывает перемежающуюся виремию. невысокий уровень смертности при высоком уровне заболеваемости, поэтому в этом случае диагностика АЧС. в основном, базируется на обнаружении антител в сыворотке крови [5. 7]. Таким образом, для эффективной диагностики АЧС необходимы методы специфического определения, как возбудителя, так и антител, образующихся после заражения вирусом.
Одним из перспективных методов определения вирусных антигенов и антител к ним является иммуноферментный анализ (ИФА). Преимущества ИФА заключаются в высокой специфичности, скорости и простоте постановки реакции, сравнительна невысокой стоимости и универсальности применяемого оборудования, возможности автоматизации процедуры анализа. За последнее десятилетие произошли значительные изменения в технологии производства ИФА-наборов. обусловленные результатами научно-практических разработок, связанных с применением моноклональных антител (МкА). которые практически полностью вытеснили поликлональные не только в "сэндвич"-вариантах ИФА. предназначенных для обнаружения антигена, но и в большинстве тест-систем, направленных на выявление антител, где они используются либо в качестве конъюгатов или для адсорбции антигена [9. 10]. Помимо этого, в качестве компонентов ИФА эффективно используются рекомбинантные антигены, обладающие иммунохимическими свойствами нативных белков и представляющие собой хорошо охарактеризованные и стандартизированные препараты [2. 3. 4].
Целью настоящей работы являлась разработка современных иммуноферментных тест-систем для выявления как антител к вирусу АЧС. так и самого вируса АЧС в биологическом материале.
Материалы и методы исследования. Для создания высокоспецифичных иммуноферментных тест-систем необходимо было разработать методику синтеза рекомбинантного белка vp73 вируса АЧС. а также, используя в качестве антигена полученный рекомбинантный белок, получить и охарактеризовать специфические моноклональные антитела к вирусу АЧС. Часть работы была проведена в сотрудничестве с сотрудниками фирмы INGENASA (Испания).
Получение рекомбинантного белка vp73. Для получения рекомбинантного белка фрагмент гена B646L размером 485 п.о., кодирующий конформационный эпитоп белка vp73. был амплифицирован с рекомбинантной плазмидной ДНК pSG72a, несущей полную последовательность этого гена. Экспрессию рекомбинантного белка проводили в клетках E.coli штамма BL21(DE3)pLysS (Novagen). Белок очищали из микробной массы Е. coli BL21(DE3)pLysS на NI-NTA агарозе (Qiagen. USA).
Идентификацию и степень чистоты полученного препарата проверяли методом SDS- электрофореза в 12% полиакриламид-ном геле, его активность и специфичность - в непрямом ИФА и иммуноблоттинге с использованием МкА и референтных положительных и отрицательных сывороток крови свиней.
Получение МкА к рекомбинантному белку vp73. Для получения МкА мышей линии BALB/c 3 раза иммунизировали ре-комбинантным белком vp73 (200 мкг/мышь) с двухнедельным интервалом между иммунизациями. Бустерную дозу (200 мкг/ мышь) вводили за 3 дня до выделения селезенки.
Гибридомные клеточные линии получали путем слияния спленоцитов с перевиваемой клеточной линией миеломы Sp2/0.
Скрининг и оценку иммунологической активности МкА в сыворотке крови или культуральной жидкости проводили методом непрямого ИФА. Позитивные гибридомы реклонировали и наращивали в культуральных флаконах, увеличивая объем (Greiner. Германия). Асцитные жидкости, содержащие МкА, получали после введения гибридомных клеток в брюшную полость праймированных пристаном мышей линии BALB/c. Очистку МкА из асцитных жидкостей осуществляли методом аффинной хроматографии с использованием Белок-А-агарозы (Sigma. США).
Конъюгаты МкА с пероксидазой хрена получали периодатным методом.
Иммуноферментный метод выявления антител к вирусу АЧС в формате конкурентного ИФА. Очищенный рекомбинантный белок vp73 сорбировали в лунках микропланшета в 0.1 М карбонатном буфере. рН=9.5 (концентрация 5 мкг/мл) по 100 мкл в лунку в течение ночи при 4°С. После 4-кратной отмывки планшета в лунки вносили по 100 мкл исследуемой сыворотки. Инкубировали планшет 1 час при +37°С. После отмывки планшета в лунки вносили по 100 мкл пероксидазного конъюгата МКА. Инкубировали планшет 1 час при +37°С. После промывания планшета вносили по 0.1 мл субстратного раствора с тетраметилбензидином (МДЛ. Россия). Инкубировали 15 мин при комнатной температуре в темноте и добавляли 0.1 мл 1 М H2S04 для остановки реакции. Оптическую плотность при 450 нм (А450) измеряли на спектрофотометре с вертикальным лучом Multiscan EX (Thermo, США).
Иммуноферментный метод выявления антигена вируса АЧС в формате "сэндвич"-ИФА. Для "сэндвич"-ИФА очищенные МкА сорбировали в лунках микропланшета в 0.1 М карбонатном буфере. рН=9.5 (концентрация 10 мкг/мл) по 100 мкл в лунку в течение ночи при 4°С. После 4-кратной отмывки планшета в лунки вносили по 100 мкл очищенного рекомбинантного vp73 в серийных разведениях (от 5 нг/мл до 320 нг/мл) или подготовленные образцы биоматериала. Инкубировали планшет 1 час при +37°С. После 4-кратной отмывки планшета в лунки вносили по 100 мкл пероксидазного конъюгата детектирующих МкА в рабочих разведениях на ФСБТ. Инкубировали планшет 1 час при +37°С. После промывания планшета вносили по 0.1 мл субстратного раствора с тетраметилбензидином и определяли оптическую плотность как описано выше.
Полимеразная цепная реакция в реальном времени для выявления ДНК вируса АЧС. Выделение ДНК вируса АЧС из биологических образцов проводили с использованием набора для выделения ДНК на колонках ("Ветбиохим". Россия).
ПЦР в реальном времени проводили на приборе ДТ-96 ("ДНК-Технология". Россия) в конечном объеме 25 мкл. Реакционная смесь содержала 5 мкл ДНК. 10 пмоль каждого прайме-ра. 5 пмоль зонда. 0.25 мМ каждого dNTP. 1.25 ед. Taq-полиме-разы, 10 мМ Tris-HCI (рН=9.0). 50 мМ KCI. 0.1% Triton Х-100. 1.5 мМ MgCI2.
Результаты и обсуждение. Рекомбинантный фрагмент конформационного эпитопа белка vp73 вируса АЧС был охарактеризован биохимическими и иммунохимическими методами (электрофорез, иммуноблоттинг. ИФА). Показано, что полученный продукт обладает электрофоретической гомогенностью и детектируется АЧС-специфическими сыворотками. Неспецифические сыворотки не взаимодействуют с полученным продуктом. Рекомбинантный белок был использован в качестве антигена для получения МкА.
После проведения гибридизации было получено 523 гибридных клеточных линий, устойчивых к селективной среде HAT. При первичном тестировании культуральных жидкостей было отобрано 67 клонов реагировавших с рекомбинантным белком vp73.
После повторного клонирования были отобраны 2 клона, обладающих максимальной активностью по отношению к vp73 в непрямом ИФА. Полученные МкА были использованы в дальнейшей работе.
При разработке тест-системы для выявления антител к вирусу АЧС был использован принцип конкурентного ИФА. применяемый в наборе для определения антител к вирусу АЧС INGEZIM РРА СОМРАС (INGENASA. Испания). INGEZIM РРА СОМРАС на основе белка vp73 вируса АЧС обладает 100% чувствительностью и специфичностью и используется в Европе в качестве основного для первичного исследования сывороток при диагностике АЧС. Набор INGEZIM РРА СОМРАС успешно применялся в Испании в рамках национальной программы по искоренению АЧС.
В результате проведенных исследований с использованием полученных рекомбинантного белка vp73 и МкА была разработана тест-система для определения антител к вирусу АЧС "АЧС-CEPOTECT/INGEZIM РРА СОМРАС". Оценка диагностической чувствительности и специфичности тест-системы проводилась в компании INGENASA на широкой панели референтных сывороток крови сывороток крови, полученных от экспериментально зараженных животных и сывороток крови свиней, охарактеризованных референтными методами в соответствии со стандартами OIE (иммуноблоттинг. реакция непрямой иммунофлуорес-ценции. РИФ) [10] .
При исследовании в системе "АЧС-CEPOTECT/INGEZIM РРА СОМРАС" 120 сывороток, показавших негативный результат методами непрямого ИФА и иммуноблоттинга. АЧС-позитивных 21 сывороток не выявлено, т.е. специфичность тест-системы составила 100%.
23 сыворотки, положительные в непрямом ИФА, но отрицательные в иммуноблоттинге были определены как отрицательные. Поскольку иммуноблоттинг является официальным референтным методом по рекомендации OIE. специфичность системы "АЧС-CEPOTECT/INGEZIM РРА СОМРАС" в данном случае также составляет 100%.
30 сильноположительных в непрямом ИФА и иммуноблоттинге сывороток и 5 слабоположительных в непрямом ИФА и сильноположительных в иммуноблоттинге сывороток определены как положительные, т.е. чувствительность системы составила 100%.
Тест-система не выявила перекрестных реакций с антителами к вирусам болезни Ауески. болезни Тешена. КЧС и РРСС.
Диагностическая чувствительность системы была определена при исследовании сывороток свиней, экспериментально зараженных вирулентным штаммом вируса АЧС Ug03H (табл. 1) и слабовирулентными штаммами Е75 и Е70 (табл. 2).
Таблица 1. Результаты анализа сывороток крови свиней после экспериментального заражения штаммом Ug03H в системе "АЧС-CEPOTECT/INGEZIM РРА СОМРАС
Полный текст:
Современные отечественные препараты, предназначенные для серологической диагностики чумы, направлены, как правило, на выявление в сыворотке крови антител к одному антигену. Для повышения достоверности результатов анализа целесообразно применение тест-систем для одновременного определения уровня антител к нескольким иммунодоминантным антигенам Y. pestis. Изучена возможность применения биочиповых технологий для оценки специфических антител к антигенам возбудителя чумы. Объект исследования – 5 коммерческих сывороток, 35 сывороток крови людей, вакцинированных живой чумной вакциной со сроками забора материала через 1, 4, 5, 18 месяцев после вакцинации, 5 сывороток здоровых доноров.
Уткин Денис Валерьевич, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории диагностических технологий
SPIN-код: 1842-8549, Scopus ID: 56634394300, Researcher ID: С-4586-2014.
Куклев Василий Евгеньевич, кандидат медицинских наук, зав. лабораторией диагностических технологий
Осина Наталия Александровна, кандидат биологических наук, зав. лабораторией молекулярной диагностики
1. Гржибовский А.М. Доверительные интервалы для частот и долей //Экология человека. 2008. № 5. С. 57–60.
2. Девдариани З.Л., Терешкина Н.Е., Тараненко Т.М., Киреев М.Н., Терехова И.В., Григорьева Г.В., Исляева М.Н., Ермаков Н.М., Виноградова Н.А., Малахаева А.Н. Результаты модельных экспериментов по конструированию тест-системы иммуноферментной для выявления антител к Ф1 чумного микроба (ИФА-АТ-Ф1) Yersinia pestis //Проблемы особо опасных инфекций. 2013. № 1. С. 74–77. ]
3. Евсеева В.В., Платонов М.Е., Копылов П.Х., Дентовская С.В., Анисимов А.П. Активатор плазминогена чумного микроба //Инфекция и иммунитет. 2015. Т. 5, № 1. С. 27–36. doi: 10.15789/2220-7619-2015-1-27-36
4. Ляпина А.М., Федорова В.А., Хижнякова М.А., Телепнев М.В., Мотин В.Л. Рекомбинантные полипептиды как биомаркеры оценки иммунологической эффективности вакцинации живой чумной вакциной у людей //Медицин ский академический журнал. 2012. Т. 12, № 3. С. 85–87.
5. Никифоров К.А., Уткин Д.В., Куклева Л.М., Ерошенко Г.А. Конструирование ДНК-чипа для дифференциации основного и неосновных подвидов и биоваров основного подвида Yersinia pestis //Проблемы особо опасных инфекций. 2017. № 2. С. 32–35. doi: 10.21055/0370-1069-2017-2-32-35
6. Пудова Е.А., Маркелов М.Л., Дедков В.Г., Чеканова Т.А., Сажин А.И., Кирдяшкина Н.П., Бекова М.В., Девяткин А.А., Шипулин Г.А. Разработка набора реагентов в формате ДНК-чипа для генотипирования штаммов Vibrio cholera //Клиническая лабораторная диагностика. 2014. № 5. С. 47–52.
7. Пудова Е.А., Чеканова Т.А., Маркелов М.Л., Дедков В.Г., Кирдяшкина Н.П., Карасева И.П., Сажин А.И., Зацепин Т.С., Уткин Д.В., Осина Н.А., Щербакова С.А., Шипулин Г.А. Разработка и апробация ДНК-чипа для индикации возбудителей особо опасных инфекций //Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы. 2014. № 3. С. 13–19.
8. Уткин Д.В., Осина Н.А., Киреев М.Н., Спицын А.Н., Щербакова С.А. Биологический микрочип для выявления и многопараметрического анализа противохолерных антител. Патент РФ на изобретение. RUS 2528099 //Изобретения. Полезные модели: Бюллетень, № 25 от 10.09.2014.
9. Уткин Д.В., Осина Н.А., Спицын А.Н., Киреев М.Н., Громова О.В., Захарова Т.Л., Найденова Е.В., Куклев В.Е. Разработка биочипа для выявления противохолерных антител в сыворотке крови человека //Клиническая лабораторная диагностика. 2015. Т. 60, № 2. С. 50–53.
10. Фирстова В.В., Калмантаева О.В., Горбатов А.А., Кравченко Т.Б., Тюрин Е.А., Бондаренко Н.Л., Дятлов И.А., Караулов А.В. Оценка специфического гуморального и клеточного иммунитета у людей, периодически вакцинирующихся против чумы //Иммунология, аллергология, инфектология. 2015. № 3. С. 62–68. doi: 10.14427/jipai.2015.3.62
11. Goji N., MacMillan T., Amoako K.K. A new generation microarray for the simultaneous detection and identification of Yersinia pestis and Bacillus anthracis in food. J. Pathogens, 2012, vol. 2012, pp. 1–8. doi: 10.1155/2012/627036
12. Plotkin S.A. Correlates of protection induced by vaccination. Clin. Vaccine Immunol., 2010, vol. 17, no. 7. pp. 1055–1065. doi: 10.1128/CVI.00131-10
13. Williamson E.D, Oyston P.C.F. Protecting against plague: towards a next-generation vaccine. Clin. Exp. Immunol., 2013, vol. 172, no. 1, pp. 1–8. doi: 10.1111/cei.12044
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.
Читайте также:
