Для лечения лепры применяют

Основные факты

• Лепра — это хроническая болезнь, вызываемая бациллой Mycobacterium leprae.
• M. leprae размножается медленно, и инкубационный период болезни длится около 5 лет.
• В некоторых случаях симптомы могут развиться в течение одного года, а в других случаях до их появления может пройти 20 лет.
• Болезнь поражает, в основном, кожу, периферические нервы, слизистую оболочку верхних дыхательных путей и глаза.
• Лепра излечима с помощью комбинированной лекарственной терапии (КЛТ).
• Лепра передается через капли, выделяемые из носа и рта и при частых контактах с инфицированными людьми, не получающими лечения.
• Без лечения лепра может приводить к прогрессирующим и стойким поражениям кожи, нервов, конечностей и глаз.
• По официальным данным из 159 стран шести регионов ВОЗ, число зарегистрированных случаев заболевания лепрой составляет 211 009.
• Принимая во внимание тот факт, что по состоянию на конец 2017 г. число случаев составило 193 118, показатель выявления случаев лепры равен 0,3/10 000.

Введение

Лепра — это хроническая инфекционная болезнь, вызываемая Mycobacterium leprae, кислотоустойчивой палочковидной бациллой. Болезнь поражает, в основном, кожу, периферические нервы, слизистую оболочку верхних дыхательных путей и глаза. Лепра излечима, и лечение, проведенное на ранних стадиях болезни, позволяет предотвратить инвалидность.

Краткая история — болезнь и лечение

Лепра известна с давних пор и упоминается в письменных источниках древних цивилизаций. На протяжении всей истории больные лепрой часто подвергались остракизму со стороны своих сообществ и семей.

В прошлом лепру лечили разными способами, но первый настоящий прорыв в лечении произошел в 1940-х годах, когда был разработан дапсон — препарат, останавливающий развитие болезни. Но лечение было многолетним, даже пожизненным, что затрудняло его для пациентов. В 1960-х гг. стала развиваться устойчивость M. leprae к дапсону — единственному противолепрозному препарату, известному в то время в мире. В начале 1960-х годов были открыты рифампицин и клофазимин, которые были включены в схему лечения, названную позднее комбинированной лекарственной терапией (КЛТ).

В 1981 г. ВОЗ рекомендовала КЛТ. В настоящее время рекомендуемый курс КЛТ включает следующие препараты: дапсон, рифампицин и клофазимин. Курс лечения продолжается шесть месяцев в случае олигобациллярной лепры и 12 месяцев при ее мультибациллярной форме. КЛТ убивает патогенный микроорганизм и приводит к излечению пациента.

С 1995 г. ВОЗ бесплатно предоставляет КЛТ всем пациентам с лепрой в мире. Первоначально бесплатную КЛТ финансировал Фонд Ниппона, а с 2000 г. бесплатные поставки КЛТ осуществляются в рамках соглашения с компанией Новартис, которая недавно обязалась продлить их, как минимум, до 2020 года.

Задача по ликвидации лепры как проблемы общественного здравоохранения (т.е. сокращение ее распространенности до показателя менее 1 случая на 10 000 человек) была выполнена во всем мире в 2000 г. За последние 20 лет лечение КЛТ было предоставлено более 16 миллионам пациентов.

Деятельность ВОЗ

• Обеспечить политическую приверженность и надлежащие ресурсы для программ по борьбе с лепрой.
• Способствовать обеспечению всеобщего охвата услугами здравоохранения с уделением особого внимания детям, женщинам и обездоленным группам населения, включая мигрантов и перемещенных лиц.
• Укреплять партнерства с государственными и негосударственными структурами и содействовать межсекторальному сотрудничеству и партнерствам на международном уровне и внутри стран.
• Оказывать содействие и проводить фундаментальные и операционные исследования в отношении всех аспектов лепры и максимально расширить базу фактических данных для разработки политики, стратегий и мероприятий.
• Усилить системы эпиднадзора и медико-санитарной информации для мониторинга и оценки программ (включая географические информационные системы).

• Повысить осведомленность пациентов и сообществ в отношении лепры.
• Способствовать раннему выявлению случаев заболевания путем активного поиска (например, проведение кампаний) в районах повышенной эндемичности и наблюдению за лицами, имевшими контакты с больными.
• Обеспечить быстрое начало лечения и его соблюдение, включая работу по улучшению схем лечения.
• Улучшить профилактику и ведение инвалидности.
• Усилить эпиднадзор за устойчивостью к противомикробным препаратам, включая лабораторную сеть.
• Способствовать применению инновационных подходов в отношении специальной подготовки, направления к специалистам и повышения квалификации в области лепры, таких как электронное здравоохранение.
• Содействовать проведению мероприятий по профилактике инфекций и болезней.

• Содействовать социальному включению путем принятия мер в отношении всех форм дискриминации и стигматизации.
• Расширять права и возможности людей, пораженных лепрой, и усиливать их потенциал для активного участия в деятельности служб по лечению лепры.
• Привлекать сообщества к деятельности, направленной на улучшение служб по лечению лепры.
• Содействовать созданию коалиций среди людей, пораженных лепрой, и способствовать объединению этих коалиций и/или их членов с другими организациями на уровне отдельных сообществ.
• Содействовать доступу к службам социальной и финансовой поддержки, например, способствовать получению доходов, для людей, пораженных лепрой, и их семей.
• Поддерживать реабилитацию людей с инвалидностью, связанной с лепрой, на уровне отдельных сообществ.
• Работать над отменой дискриминационных законов и способствовать проведению политики по социальному включению людей, пораженных лепрой.

• среди новых пациентов-детей нет инвалидов;
• инвалидность второй группы встречается менее чем у одного из миллиона человек;
• ни в одной стране нет законодательства, позволяющего дискриминацию на основе лепры.

Лепра

Лепра, история и мифы, современный подход к диагностике и лечению

Лепра (проказа, болезнь Хансена) — хроническое инфекционное заболевание, характеризующееся продолжительным инкубационным периодом и рецидивирующим течением. Заболевание носит системный характер и поражает кожные покровы, слизистые оболочки и периферическую нервную систему. В настоящее время, несмотря на применение эффективной схемы антибиотикотерапии и устранение угрозы эпидемии лепры, по всему миру продолжают ежегодно выявляться новые случаи заболевания, поэтому перспектива полной ликвидации болезни ставится под сомнение.

Одним из самых сложных вопросов является отношение общества к больным лепрой. До настоящего время это крайне мало заразительное и поддающееся лечению заболевание является социальным приговором. Из-за сложившихся мифов, литературных и обывательских, люди боятся этой болезни и подвергают гонениям заболевших.

Распространенность лепры в мире стабильно снижается из года в год. Согласно данным ВОЗ, количество новых случаев, каждый год выявляемых во всем мире, уменьшилось с 763 000 в 2001 г. до 249 000 в 2008 г. В 2013 г. было выявлено 215 656 новых случаев заболевания, в 2014 г. — 213 899, в 2015 г. — 211 973.

Глобальная статистика свидетельствует о том, что 96% (203 600 человек) новых случаев заражения лепрой были выявлены в 22 государствах (таких как Индия, Бразилия, Ангола, Конго, Судан, Эфиопия и др.). На долю других стран приходятся оставшиеся 4%.

Одной из шести стран мира с наиболее высокой распространенностью лепры является Бразилия, где ежегодно диагностируется более 30 000 новых случаев заболевания. В 2014 г. распространенность лепры в Бразилии составила 1,27 случая на 10 000 жителей.

Значимую роль в распространении заболевания играет миграция населения. В Европе большинство случаев лепры регистрируются у беженцев из других государств. Так, из 168 случаев заболевания лепрой, зарегистрированных в 2013 г. в Испании, 40 (24,6%) больных выявлены среди коренных жителей Испании, 128 (76,2%) — среди проживающих в стране мигрантов, главным образом из Бразилии, Парагвая и Боливии.

В России эндемичным регионом по лепре является Астраханская область. За последние десятилетия больные лепрой были выявлены и в других субъектах Российской Федерации: в Сибири, на Северном Кавказе и Дальнем Востоке, Санкт-Петербурге. Однако стоит отметить, что, благодаря внедрению в практику целого комплекса противолепрозных мероприятий, заболеваемость лепрой в России носит устойчивый эпизодический характер. В 2015 г. на учете состояло 240 больных, из них в Астраханской области — 135. Все эти люди получили полноценное лечение и не являются опасными для окружающих. В г.Санкт - Петербурге на учете, как переболевшие лепрой, в настоящее время состоят два человека.

Возбудителями лепры являются Mycobacterium leprae (M. leprae) и Mycobacterium lepromatosis (M. lepro­matosis). M. leprae была впервые открыта норвежским врачом Герхардом Хансеном в 1873 г. Данный микроорганизм относится к семейству Mycobacteriaceae и является кислото - и спиртоустойчивой бактерией, которая представляет из себя грамположительную прямую или изогнутую палочку длиной 1–7 мкм и диаметром 0,2–0,5 мкм. M. leprae может длительное время сохранять жизнеспособность при низких температурах и высушивании.

От других инфекционных заболеваний лепру отличает длительный инкубационный период, который варьирует от 2–3 месяцев до 50 лет (в среднем составляя 4–6 лет).

Общепризнан воздушно-капельный путь передачи инфекционных агентов, однако не исключаются другие пути заражения — через укусы кровососущих насекомых и поврежденные кожные покровы. Лепра является малоконтагиозным заболеванием. Заражение микобактериями лепры происходит в результате длительного тесного общения с больным, не получающим лечения, вследствие сенсибилизации, нарастающей при повторяющихся контактах, снижения сопротивляемости организма (в результате неполноценного питания, тяжелых физических нагрузок, частых простудных заболеваний, алкоголизма и других интоксикаций) и иммуногенетической восприимчивости.

На восприимчивость к лепре оказывают влияние различные наборы генов, в том числе системы антигена лейкоцитов человека (HLA).

Выделяют три типа лепры — недифференцированный (I — Indeterminate), туберкулоидный (Tuberculoidtype — TT) и лепроматозный (Lepromatoustype — LL). Лепроматозный и туберкулоидный типы являются полярными. Кроме того, различают субполярные и пограничные группы заболевания. В практической деятельности различают лепроматозный и туберкулоидный тип лепры, а также пограничный тип, который в дальнейшем может трансформироваться в одну из первых двух форм.

Клинические проявления заболевания определяются типом лепрозного процесса. Туберкулоидная форма лепры протекает более доброкачественно по сравнению с лепроматозной формой. При туберкулоидном типе поражаются преимущественно кожа и периферическая нервная система; внутренние органы поражаются реже. Поражение кожных покровов характеризуется резко очерченными депигментированными пятнами, напоминающими проявления витилиго, либо асимметричными яркими красновато-синюшными пятнами с бледным центром и плоскими полигональными фиолетовыми узелками по периферии. Поражение придатков кожи характеризуется выпадением волос и нарушением потоотделения в области пораженных участков. Для туберкулоидного типа лепры характерно раннее поражение периферической нервной системы с формированием расстройств чувствительности (болевой, температурной и тактильной). Полиневриты при туберкулоидной форме характеризуются более благоприятным течением, чем полиневриты при лепроматозной форме.

При лепроматозном типе лепры поражается как периферическая, так и центральная нервная система с развитием невротических расстройств, реже — психозов и поражений по типу невритов и полиневритов. В большинстве случаев поражаются лучевые, малоберцовые и большие ушные нервы: они утолщаются и становятся доступными для пальпации. В последующем развиваются двигательные и трофические расстройства, а также нарушения чувствительности. Больным свойственны невралгии, гиперестезии, парестезии, неадекватное или замедленное реагирование на раздражение, аналгезия. На фоне трофических нарушений развивается процесс мутиляции кистей и стоп. Поражение внутренних органов характеризуется неспецифическими изменениями в печени, легких, селезенке и нарушением функции некоторых желез внутренней секреции.

При недифференцированной форме лепры специфические высыпания отсутствуют. Для данной формы характерно появление небольшого количества бледных пятен различной величины с нечеткими границами, а также поражение периферической нервной системы по типу полиневрита. Как правило, выявить возбудителя у этой категории лиц удается крайне редко.

При развитии обострений лепрозного процесса форма заболевания может меняться. Несмотря на множество клинических проявлений лепры, окончательная постановка диагноза не всегда является простой задачей, так как отсутствуют специфические клинические признаки заболевания.

При диагностике лепры учитывают данные эпидемиологического анамнеза (пребывание в эндемичном регионе, контакты с больными лепрой), объективного осмотра (обращают внимание на характер и длительность существования высыпаний, наличие признаков нарушений периферической иннервации).

Общепринятым лабораторным методом диагностики лепры считается бактериоскопическое исследование. Соскобы для исследования берут с очагов поражения на коже и слизистой оболочке носа путем легкого поскабливания. Мазок помещают на предметное стекло и окрашивают по Цилю–Нильсену. Также исследуют пунктат из бедренных или паховых лимфатических узлов. Однако бактериоскопическое исследование имеет очень низкую чувствительность, особенно у больных с промежуточной или туберкулоидной формой поражения.

Лепроминовая реакция (проба Митсуды) является показателем способности хозяина поддерживать в своем организме клеточный иммунитет к M. leprae.

Для серологической диагностики лепры применяют реакцию связывания комплемента и реакцию непрямой гемагглютинации.

Наиболее чувствительным методом диагностики, позволяющим определять M. leprae, является полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Используемые в настоящее время традиционные методы диагностики, такие как лепроминовая проба и бактериоскопическое исследование, не всегда позволяют подтвердить диагноз лепры на ранних стадиях заболевания. При этом эффективность лечебных и профилактических мероприятий определяется возможностью ранней диагностики заболевания. В мире постоянно регистрируются новые случаи лепры, поэтому актуальным вопросом остается разработка и внедрение новых, более точных, методов диагностики, которые стали бы доступными для широкого использования и позволили с высокой степенью достоверности диагностировать лепру на ранних стадиях развития заболевания.

Лечение заболевания стандартизовано ВОЗ в 1981 г. Комбинированная лекарственная терапия включает в себя использование трех основных препаратов: дапсон, рифампицин и клофазимин.

В 1997 г. ВОЗ была установлена продолжительность курса лечения: 6 месяцев для мультибациллярных форм лепры и 12 месяцев для олигобациллярных. Дапсон назначается в дозировке 100 мг для взрослых один раз в день, рифампицин в дозировке 600 мг один раз в месяц, клофазимин в дозировке 300 мг один раз в месяц. Для лечения детей применяются более низкие дозы препаратов

Выявление источников заражения и выполнение назначенного курса комбинированной лекарственной терапии считаются главными принципами стратегии последующего снижения распространенности лепры. Однако комбинированная лекарственная терапия не исключает возможность развития резистентности к противолепрозным препаратам. Ввиду длительности терапии нередко пациенты не соблюдают схему лечения. Из трех препаратов, входящих в состав схем комбинированной лекарственной терапии, на территории Российской Федерации зарегистрированы только два — дапсон и рифампицин, что осложняет применение стандартизированных схем терапии. Актуальными представляются разработка отечественных аналогов лекарственных препаратов, совершенствование существующих методов терапии и поиск новых схем лечения, которые позволили бы уменьшить длительность терапии и повысить тем самым приверженность пациентов к лечению, а также снизить резистентность к противолепрозным препаратам.

Своевременная диагностика лепры, профилактика распространения лепры беженцами и вынужденными переселенцами, особенно из высокоэндемичных государств (Бангладеш, Филиппинские острова, Индия, Ангола, Бразилия, Шри-Ланка и др.), являются серьезной и актуальной проблемой для мирового здравоохранения, одной из приоритетных задач при осуществлении контроля над здоровьем иностранных граждан и лиц без гражданства, въезжающих на территорию страны. В Российской Федерации, в соответствии с существующим порядком, установленным на законодательном уровне, для контроля над распространением заболеваний среди населения, нерезидентам Российской Федерации необходимо пройти медицинское освидетельствование в медицинских организациях. Однако данная процедура освидетельствования осложнена отсутствием комплексной методологической платформы.

Таким образом, несмотря на снижение распространенности лепры, представляется актуальным усиление контроля за обязательным обследованием на лепру прибывающих в страну иностранных граждан, разработка отечественных аналогов лекарственных препаратов и поиск новых схем лечения больных лепрой.

Кроме того необходимо разрушать мифы, сложившиеся в прошлые века, и делающие жизнь людей, заболевших лепрой невыносимой. В развитых странах, имеющих высокий уровень медицины, в том числе и в России, для человека страшен данный диагноз в первую очередь из-за субъективных, не имеющих отношения к медицине факторов. Необходимо понимать, что пролеченный пациент не заразен и должен подвергаться никаким ограничениям.

Проказа, лепра или же болезнь Хансена, крымка, финикийская болезнь – это заболевание, сопровождающееся инфекцией на слизистых оболочках, коже, внутренних органах. Возникает непосредственно из-за микробактерии лепры, которая может поражать как верхние дыхательные пути, так и нервную систему. Проказа имеет определенный инкубационный период, который заключается не только в нескольких месяцах, но и даже в годах – обычно составляет 5–6 лет. Иногда латентный период может протекать со слабостью, чувством зябкости, сонливостью и недомоганием.

Симптомы

Проказа может проявляться высыпанием пятен белого или красного цвета с оттенком вишневого тона. Бывает ощущение онемения конечностей или ползанье мурашек, ощущение покалывания. Обычно симптомы проказы зависят от формы проявления заболеваний.

Первоначально лепра может проявляться недифференциальной проказой, которая проявляет себя в виде:

• онемение кистей или стоп и чувство покалывания, особенно в районе поражения;
• сыпь на коже, которая практически незаметна – это неяркие пятна без границ единичного характера.

Проявленные высыпания могут самостоятельно проходить через год-два. Но ослабленный иммунитет может и дальше развить эту форму, которая переходит в туберкулоидную или лепроматозную проказу.

Туберкулоидная лепра – легкая форма проявления болезни, развивающаяся из-за ослабленного иммунитета на основе простудных или хронических заболеваний. Эта форма не столь заразна в отличие от лепроматозной и имеет благоприятный прогноз для пациента. Сопровождается такими симптомами:

• бледные депигментированные пятна с яркими папулами и четкими границами красного цвета;
• папулы могут сливаться и образовывать бляшки, разрастающиеся по коже и образующиеся участки атрофии;
• покрасневший участок кожи может потерять чувствительность, так как сопровождается повреждением нервов;
• иногда сопровождается выпадением волос и сниженным потоотделением;
• сыпь обычно локализуется в области локтя или колена, возле ушных нервов.

Лепроматозная форма намного серьезней и заразней, чем предыдущие две, но также протекает на фоне ослабленной иммунной системы. Для нее характерны:

Причины

Болезнь проказа передается через кожу воздушно-капельным путем, плотными контактами с больным, через предметы (контактно-бытовой путь). Может возникать из-за применения грязной воды, антисанитарных условий проживания и неблагоприятного состояния иммунитета (ВИЧ или онкологические заболевания).

Диагностика

Больные проказой могут не подозревать о заболевании, но, если есть жалобы на онемение и покалывание в конечностях, одышка, кровотечения из носа, слабость и непонятная сонливость, то стоит обратить на это внимание. Диагностировать лепру можно с помощью:

• общего осмотра места высыпания и прощупываний утолщенности кожи, ее нервных окончаний;
• лабораторного исследования пораженных участков на возбудитель лепры;
• лепроминовой пробы – внутрь кожи вводят аллерген и через 2–4 недели смотрят реакцию;
• бактериоскопического исследования – диагностика соскоба, взятого со слизистых оболочек для выявления возбудителя;
• пробы никотиновой кислотой – осуществляется внутривенное вливание раствора никотиновой кислоты, из-за которого пятна краснеют и отекают через несколько минут.

Однозначно необходима консультация дерматолога или инфекциониста.

Лечение

В общем случае есть три пути лечения:

• антибиотикотерапия специфического направления – то есть, применение антибиотиков, которые поразят возбудитель лепры;
• комплексное лечение на основе антибиотиков может длиться несколько лет или всю жизнь;
• стационарное лечение, если имеет место ускоренное течение заболевания.

Игнорировать появление заболевания не стоит ни в коем случае, поэтому при проявлении первых признаков проказы лечение должно осуществляться в скором времени.

Если нет конкретного лечения, то возможны разнообразные осложнения:

• утрата чувствительности или паралич нервов;
• уплотнение тканей кожи и появление различных бугров, выпадение волос, утолщение и увеличение в области ушей, деформация облика;
• деформация или западание спинки носа;
• отмирание ткани или даже утрата частей тела;
• атрофия мышц, зачастую в области кисти;
• несмыкание век (лагофтальм) или воспаление роговицы глаза, приводящее к слепоте;
• поражение лицевых нервов;
• ограниченное движение суставов;
• у мужского пола поражение яичек и дальнейшее бесплодие, импотенция.

Так как осложнения могут быть довольно серьезными, то необходимо заранее проводить профилактику, тем более что вакцинации против возбудителя микробактерии лепры еще не разработано. Итак, профилактические методы включают:

• соблюдение стандартных правил санитарной гигиены (мытье рук с мылом, дезинфекция травм);
• исключение контакта с больными лепрой;
• те, кто перенес данное заболевание, не может работать в пищевой промышленности, а также в детских учреждениях.

ПРОКАЗА (лепра), хроническое инфекционное заболевание, обычно поражающее кожу и периферические нервы. Вопреки предрассудкам, проказа не передается при простом прикосновении больного и не всегда смертельна. Лишь от 5 до 10% лиц, подвергающихся опасности заражения проказой, действительно заболевают ею, так как большинство людей обладает достаточным уровнем иммунологической защиты от возбудителя, а кроме того, его патогенность, т.е. способность вызывать заболевание, относительно низка. Среди медиков давно известно, что распространение проказы происходит в результате длительного прямого кожного контакта. Однако многие современные исследователи считают, что заражение возможно и при вдыхании бактерий, попадающих в воздух из полости носа или рта больного.

Известны два основных типа проказы: лепроматозный, поражающий в основном кожу, и туберкулоидный с поражением главным образом нервов. Выделяют также стертую и пограничную формы заболевания, но их можно считать промежуточными, имеющими тенденцию развития в какой-либо из двух основных типов.

Географическое распространение и частота.

В настоящее время проказа встречается главным образом в тропиках и субтропиках; в районах с более холодным климатом она редка. Болезнь распространена в Африке и Азии (особенно в Индии), в Испании и Португалии, в странах бывшего СССР и Корее, в Японии и на Филиппинах, а также в странах Центральной и Южной Америки. В США больные проказой встречаются на побережье Мексиканского залива, в Южной Калифорнии и на Гавайях. Проказа не относится к массовым заболеваниям, однако по данным ВОЗ в мире ею страдают около 11 млн. человек, среди которых мужчин втрое больше, чем женщин. Дети более восприимчивы к проказе, чем взрослые.

Возбудитель.

Проказу вызывают палочковидные микроорганизмы, Mycobacterium leprae, открытые в 1874 Г.Хансеном. Инкубационный период от заражения до проявлений заболевания может длиться от 2 до 20 лет, но в большинстве случаев первые симптомы появляются через 3–10 лет. Микобактерии лепры близки по своим свойствам к туберкулезным, но неспособны к росту на искусственных питательных средах, что затрудняло изучение проказы. В 1957 Ч.Шепарду впервые удалось культивировать их в подушечках лап лабораторных мышей. В 1971 была обнаружена восприимчивость к заражению проказой у броненосца Dasypus novemcinctus и его стали использовать для получения больших количеств микобактерий лепры в экспериментальных целях.

Симптомы.

В основном при проказе поражаются охлаждаемые воздухом ткани организма: кожа, слизистая оболочка верхних дыхательных путей и поверхностно расположенные нервы. В нелеченных случаях инфильтрация кожи и деструкция нервов могут приводить к выраженной деформации облика и уродству. Однако сами микобактерии лепры не способны вызывать отмирание пальцев кисти или стопы. К утрате частей тела в результате некроза тканей приводит вторичная бактериальная инфекция в тех случаях, когда лишенные чувствительности ткани подвергаются травмам, что остается незамеченным и невылеченным.

Из двух типов проказы лепроматозный протекает тяжелее. Микобактерии обильно размножаются в коже, вызывая образование узлов, называемых лепромами, а иногда и чешуйчатых бляшек. Постепенно кожа утолщается, образуются крупные складки, особенно на лице, которое приобретает сходство с львиной мордой.

При проказе туберкулоидного типа на коже появляются плоские чешуйчатые пятна красноватого или беловатого оттенка; в местах поражения происходит утолщение оболочек нервов, которое, прогрессируя, приводит к локальной потере чувствительности. Следствием повреждения крупных нервных стволов может быть деструкция костей и суставов, которая обычно ограничивается конечностями. При проказе туберкулоидного типа возможно спонтанное излечение.

Лечение.

Сульфоновые препараты заменили применявшееся столетиями в лечении проказы хаульмугровое масло. Терапевтическое действие сульфонов проявляется только после длительного приема. Их нельзя отнести к специфическим лечебным средствам, но в большинстве случаев они способны остановить развитие проказы. При легком ее течении больной может выздороветь в результате двухлетней терапии, но в тяжелых случаях для излечения может потребоваться не менее восьми лет. Однако в начале 1980-х годов было отмечено появление штаммов микобактерий лепры, устойчивых к дапсону (диафенилсульфону), который был основным средством лечения проказы с 1950-х. Поэтому теперь его часто применяют в комбинации с другими препаратами. При лепроматозном типе заболевания широко используется также клофазимин.

Профилактика.

Способов предупреждения проказы на сегодняшний день нет. Однако ведутся перспективные исследования по усовершенствованию вакцины, содержащей убитые микобактерии лепры; ее эффективность показана в опытах на мышах и броненосцах.

История.

С 12 по 14 вв. заболеваемость проказой достигла в Европе своего пика, затем начала быстро падать и к концу 16 в. исчезла в большинстве европейских стран, за исключением средиземноморского побережья, ряда регионов России и Скандинавии.

В Америку проказу принесли первые колонисты из Испании, Португалии и Франции. Новый подъем заболеваемости был вызван афро-американской работорговлей, приведшей к появлению проказы в некоторых районах западного полушария.

Цель

Провести сравнение эффективности однокопийных и мультикопийных маркеров генома Mycobacterium leprae, используемых для идентификации присутствия патогена в организме человека, методом ПЦР в реальном времени.

Описание

Метод диагностики лепры, основанный на использовании ПЦР в реальном времени, позволяет выявлять наличие ДНК-патогена на ранних стадиях заболевания, что увеличивает эффективность терапии и предотвращает тяжёлые последствия для пациентов.

Задачи

1. Изучение основных правил проведения работ в клинико-диагностической лаборатории, в том числе работе с патогенами.

2. Освоение лабораторного метода ПЦР в реальном времени.

3. Выделение ДНК из клинических образцов скарификатов кожи пациентов, характеристика препаратов ДНК.

4. Анализ присутствия Mycobacterium leprae в клинических образцах с помощью диагностических наборов, использующих амплификацию участков: RLEP (повторяющийся элемент генома лепры), гена sodA (кодирует фермент супероксиддисмутазу), гена rpoB (кодирует β-субъединицу бактериальной РНК-полимеразы), гена mntH (кодирует марганцевый транспортёр).

5. Оценка эффективности амплификации различных участков генома Mycobacterium leprae методом ПЦР в реальном времени.

Лепра – хроническая инфекционная болезнь с продолжительным инкубационным периодом, вызываемая патогенной кислотоустойчивой бактерией Mycobacterium leprae. Базовым лабораторным методом диагностики лепры является обнаружение в препаратах Mycobacterium leprae при помощи световой микроскопии после окраски по Цилю − Нильсену. Бактериоскопическое исследование не всегда информативно, так как требует наличия высокого титра микроорганизма. Диагностика заболевания основывается также на клинических признаках и гистопатологической картине, поскольку Mycobacterium leprae является некультивируемой.

В настоящее время лепра считается излечимой, но ещё в средние века болезнь охватывала целые континенты. Сейчас на территории нашей страны наблюдаются единичные случаи, однако в связи с наличием большого числа больных в других странах (Индия, Бразилия, Малайзия) и активной миграцией населения, а также тяжёлыми последствиями поздней диагностики заболевания, актуальным является применение современных средств ранней диагностики лепры. Без лечения лепра может приводить к прогрессирующим и стойким поражениям кожи, нервов, конечностей и глаз. Лечение, проведённое на ранних стадиях болезни, позволяет предотвратить инвалидность.

Геном Mycobacterium leprae полностью расшифрован. Уникальность генома заключается в наличии повторяющихся последовательностей четырёх семейств: RLEP, REPLEP, LEPREP и LEPRPT. Показано применение различных маркеров генома Mycobacterium leprae для ранней диагностики присутствия патогена в организме человека. Исследование генома проводится путём полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени, современным вариантом которого является использование гидролизующейся пробы.

При обнаружении ДНК Mycobacterium leprae используется амплификация участка повторяющихся элементов RLEP (до 29 повторов в бактериальной хромосоме, отсутствие в геноме прочих видов рода Mycobacterium). Использование семейства повторяющихся элементов с наибольшим показателем копийности RLEP для определения микроорганизмов методом ПЦР показало лучшие результаты в сравнении с генами, традиционно используемыми для идентификации бактериальных геномов (rpoВ, SodA и 16S рРНК). Клиническая практика диагностики в России также показала, что тест-системы, основанные на различных участках генома Mycobacterium leprae, проявляют неодинаковую эффективность.

Генетический материал M. leprae обнаружен в трёх образцах из восьми анализируемых. При этом показано, что концентрация M. leprae в образцах является различной, о чём можно судить по изменениям величины порогового цикла при проведении ПЦР в реальном времени. Показано отсутствие взаимосвязи между концентрацией общей ДНК (смесь ДНК человека и M. leprae) и обнаружением ДНК патогена.

Форма кривых на графиках накопления флуоресцентного сигнала, полученных в ходе проведения эксперимента, свидетельствует о правильном протекании реакции и возможности анализа результатов. Сопоставление значений порогового цикла (Ct) однокопийных генов говорит о практически равной эффективности амплификации при использовании систем для генов SodA и MntH вне зависимости от концентрации ДНК микобактерий лепры в образце. Интенсивность амплификации при использовании системы для гена rpoB оказалась самой низкой, даже при сравнении с системой MntH, имеющей тот же уровень пороговой флуоресценции. Показано отсутствие детекции в одном из образцов ДНК M. leprae системой для однокопийного гена SodA, что вероятно свидетельствует о нестабильной работе такой системы детекции при низких концентрациях микобактерий в образце.

Оснащение и оборудование, использованное в работе

• Cпектрофотометр NanoVue 2000

• ДНК-амплификатор StepOne 5c

• Наборы проб и праймеров для анализа повторяющегося участка генома лепры RLEP и однокопийных генов SodA и MntH

• Набор Leprosy std

Результаты

2. Наилучшую эффективность среди тест-систем, основанных на анализе участков однокопийных генов, − марганцевого транспортёра mntH, фермента супероксиддисмутазы sodA, β-субъединицы бактериальной РНК-полимеразы rpoB, − показала система mntH.

3. Наименьшая интенсивность показана для коммерческого набора фирмы Genesig (Великобритания), использующего участок гена rpoB.

Полученные закономерности показаны для разной степени концентраций ДНК M. leprae в клинических образцах пациентов.

Перспективы использования результатов работы

Полученные результаты являются частью работ по созданию диагностического набора для определения генетического материала лепры в клинической практике.

Сотрудничество с учреждением при создании работы

Особое мнение