Дифференциальная диагностика бруцеллеза животных

Бруцеллез

Бруцеллез — хроническое инфекционное заболевание, относящееся к антропозоонозам, сопровождающееся поражением ретикуло-гистиоцитарной, сердечно-сосудистой и других систем, вовлечением в патологический процесс полового аппарата с последующим абортом у беременных коров.

Этиология. Возбудитель — Br. abortus, маленькие грамотрицательные микроорганизмы шаровидной, овоидной или палочковидной формы, являющиеся факультативными внутриклеточными паразитами, Основной источник инфекции — больное животное, которое выделяет бруцелл при аборте, во время родов с плодом, последом и плодными водами, а после аборта — с истечениями из родовых путей, с мочой, молоком.

Бруцеллы, попадая в организм алиментарным путем или через кожные и слизистые покровы, с током лимфы проникают в регионарные лимфатические узлы, обусловливая развитие в них воспалительно-гиперпластических изменений. Организм крупного рогатого скота, зараженного бруцеллами, отвечает фагоцитозом последних, образованием специфических антител и аллергической перестройкой. Через 3—4 нед. после заражения происходит генерализация патологического процесса, в пораженных органах и тканях формируются специфические бруцеллезные гранулемы. Спустя 1,5—2 мес болезнь переходит в латентную форму с локализацией бруцелл в молочной железе или в отдельных лимфатических узлах. Наиболее благоприятную среду для размножения бруцеллы находят в беременной матке, вызывая эндометрит. Воспалительно-некротические изменения в беременной матке, как частное проявление генерализованного бруцеллезного процесса, приводят к глубокому нарушению естественной связи между материнской частью последа и оболочками плода, к нарушению его питания, гибели и последующему аборту. Причем бруцеллезные аборты у крупного рогатого скота могут быть как у инфицированных во время беременности, так и у зараженных животных до ее наступления. В результате длительного воспалительного процесса в матке происходит разрастание грануляционной ткани между плодными оболочками и карункулами. Это создает более прочную, чем в норме, связь между ними и служит причиной частого задержания последа.

С первых же дней после заражения, а также после аборта и в ряде случаев во время беременности наблюдается бактериемия, бруцеллезный процесс приобретает генерализованный характер и морфологически выражается в общем инфекционном ретикуло-эндотелиозе. Постоянным является также распространенный инфекционно-аллергический васкулит. Поражение сосудов — исходный пункт органопатологии бруцеллеза, и одно из центральных мест при этом занимают нарушения проницаемости капилляров. Повышение проницаемости капиллярной стенки свидетельствует об активности процесса, протекающего в ряде случаев и при отсутствии явных клинических симптомов бруцеллеза. Основной причиной циркуляторных расстройств при бруцеллезе является отложение в стенке сосудов комплементарно связанных иммунных комплексов антиген — антитело.

Клинические признаки.

Бруцеллез как динамически развивающийся инфекционный процесс характеризуется сменой определенных фаз и стадий болезни. Проявляются они более или менее выраженными клиническими и морфологическими изменениями и зависят от ряда факторов, различных по своей природе. В основу правильного толкования клинических проявлений бруцеллеза должны быть положены современные представления об этиопатогенетических особенностях болезни с учетом комплексного влияния двух главных факторов: инфекционного (возбудитель) и аллергического. В ранней фазе заболевания отмечают повышение температуры тела, угнетение общего состояния и увеличение размеров доступных клиническому исследованию лимфатических узлов.

Первым показателем развивающегося инфекционного процесса служит появление в крови инфицированных животных агглютининов в нарастающих титрах. У отдельных животных наблюдается связанность движений, повышение болевой чувствительности в области спины и поясницы, так называемая беспричинная хромота на ту или иную конечность при отсутствии к этому каких-либо иных показаний. Хромота у больных животных может быть вследствие поражения суставов, воспаления суставных сумок и сухожильных влагалищ. У самцов часто встречаются орхиты, эпидидимиты, бурситы слизистых сумок конечностей и др. Однако основными и более частыми клиническими симптомами бруцеллеза являются аборты на 5—8-м мес беременности и осложнения после аборта. Повторные аборты у коров возможны при более ранней беременности. Клинически выраженными осложнениями после аборта являются задержание последа, катаральный или катарально-гнойный эндометриты, интерстициальный или гнойный мастит. У некоторых больных животных те или другие симптомы обнаруживают одновременно. У абортировавших коров в крови резко повышается титр агглютининов (1:3000 и выше).

Патологоанатомические изменения наиболее характерные встречаются в матке беременных животных. Первичный патологический процесс возникает в беременной матке задолго до аборта, вызывается действием специфического возбудителя и достигает максимального развития ко времени изгнания недоношенного плода из матки и в ранний период после бруцеллезного аборта. Проявляется он в форме резко выраженных воспалительно-некротических изменений и обнаруживается как в самой матке, так и в плодных оболочках. За несколько дней до аборта наружные половые органы и слизистая влагалища набухшие, гиперемированы, покрыты серовато-красноватыми тягучими наложениями. Матка увеличенная и дряблая, слизистая оболочка ее утолщена, в состоянии гнойно-катарального (нередко язвенного) воспаления. Между слизистой оболочкой матки и хорионом, как правило, скапливается серовато-грязного цвета экссудат с хлопьями фибрина или крошковатые массы. Карункулы матки сильно увеличены, пронизаны точечными и полосчатыми кровоизлияниями (цв. табл. IV—Б).

Табл. IV. Б — кровоизлияния в карункулах при бруцеллезе.

Некоторые из них срастаются с плодными оболочками. Ворсинчатая часть хориона утолщена, отечна, усеяна точечными кровоизлияниями, покрыта тягучим, грязно-желтовато-коричневого цвета налетом, ее ворсинки укорочены и утолщены за счет разрастания грануляционной ткани. В зависимости от тяжести процесса патологоанатомические изменения могут варьировать от фибринозно-гнойного до гнойно-некротического воспаления плаценты.

После аборта воспалительные изменения в матке не исчезают в течение длительного времени, что приводит к развитию склероза ее слизистой оболочки и стенок сосудов. В этот процесс вовлекаются также яичники и фаллопиевы трубы. В конечном итоге все это обусловливает бесплодие коров.

У абортированного плода отмечают изменения, свойственные септическому процессу. Подкожная и межмышечная соединительная ткань его инфильтрирована серозно-геморрагическим экссудатом, пупочный канатик утолщен, нередко содержит гноеподобную массу. Брюшина, плевра, несколько реже перикард отечны, очагово покрасневшие, усеяны точечными кровоизлияниями, покрыты фибринозным налетом. Из-за попадания инфицированных околоплодных вод в желудочно-кишечный тракт развивается катаральный гастроэнтерит. Слизистая сычуга и тонкого отдела кишечника неравномерно гиперемированы, набухшие, пронизаны множественными кровоизлияниями.

Селезенка увеличена в объеме, а лимфатические узлы отечны и с наличием геморрагии. В печени обнаруживают мелкие некротические очаги, окрашенные в желто-красный цвет. В легких многочисленные мелкие пневмонические очаги. При наличии бурситов, гигром отмечают утолщение пораженных суставов, а в полостях их серозный, серозно-фибринозный экссудат.

У быков часто встречаются гнойно-некротические орхиты и эпидидимиты. Семенники сильно увеличены в объеме, плотной консистенции, их оболочки сращены между собой и подкожной клетчаткой. Развивающиеся некротические фокусы, достигающие размера лесного ореха, содержат сухие бледно-желтого цвета крошковатые массы. Наблюдают также гиперемию и отек полового члена с образованием на его поверхности мелких бледно-серых узелков.

Патогистологические изменения. В матке ко времени изгнания недоношенного плода и сразу же после аборта на слизистой оболочке отмечают резко выраженные экссудативно-некротические изменения в сочетании с гиперпластическо-пролиферативной реакцией клеток РЭС, утолщением и гиалинозом стенок крипт в карункулах, а также разрастанием соединительнотканных элементов в хорионе. В дальнейшем воспалительный процесс приобретает более выраженный продуктивный характер, в слизистой оболочке происходит разрастание фибропластических элементов, развиваются гранулемы из мононуклеарных клеток без признаков некроза. При этом чаще наблюдают продуктивные периваскулиты, несколько реже — васкулиты и эндоваскулиты, а в отдельных случаях — тромбоваскулиты. Очаговые инфильтраты лимфоидно-гистиоцитарных клеток, утолщение и гиалиноз стенок кровеносных сосудов обнаруживают также в строме яичников. В интерстициальной ткани молочной железы развиваются очаговые и диффузные воспалительные полиморфноклеточные инфильтраты с примесью плазматических клеток, отдельных полиморфноядерных и эозинофильных лейкоцитов. При паренхиматозном и смешанном мастите проявляются зернистая, а иногда и жировая дистрофия, слущивание и некротические изменения элементов железистой ткани. При угасании иммунологических реакций интенсивность морфологических изменений в вымени снижается, патологический процесс прекращается.

В ранний период заболевания бруцеллезом в печени заметна лишь слабо выраженная реакция со стороны элементов ретикуло-гистиоцитарной системы. Затем, по мере развития патологического процесса в организме, степень выраженности морфологических изменений в печени резко возрастает. В подавляющем большинстве случаев наблюдается пролиферация звездчатых эндотелиоцитов с образованием гранулем из мононуклеарных клеток. При более тяжелых формах болезни, особенно в ранний период после аборта, происходит трансформация последних в эпителиоидные клетки. Так формируются специфические гранулемы, центр которых при обострении процесса подвергается некротическим изменениям, а при затухании — фибротизации.

Изменения в миндалинах и селезенке аналогичны таковым в лимфатических узлах, но в них реже образуются специфические эпителиоидноклеточные гранулемы.

В легких, сердце, почках и в скелетной мускулатуре в основном очаговые инфильтраты имфоидно-гистиоцитарных клеток, размеры и характер дальнейших превращений которых зависят от остроты и тяжести инфекционного процесса.

При остром течении бруцеллеза в надпочечниках и поджелудочной железе выявляют гранулемы из мононуклеарных и эпителиоидных клеток, нередко подвергающихся некробиотическим изменениям.

В головном и спинном мозге и их оболочках довольно часто находят серозный отек периваскулярной ткани, нередко с инфильтрацией их лимфоидно-гистиоцитарными клетками с примесью эозинофилов. В твердой мозговой и спинномозговой оболочках, в эпендиме, под эпендимой боковых желудочков и в корешках спинномозговых нервов выявляют также васкулиты, эндо – и тромбоваскулиты. В спинальных ганглиях, корешках и периферических нервах обнаруживают ганглиорадикулит и полиневрит с преобладанием утолщения, вакуолизации и распада части нервных волокон и аксонов нервных клеток.

Диагноз ставят на основании результатов бактериологических, серологических и аллергических исследований с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков и патологоанатомических изменений последа и абортированного плода. Для бактериологического исследования в лабораторию направляют абортированный плод с оболочками или желудок плода с содержимым, а также кусочки печени и селезенки. Серологическая диагностика заключается в обнаружении специфических антител в сыворотке крови животного с помощью реакции агглютинации в пробирках (РА), реакции связывания комплемента (РСК), реакции длительного связывания комплемента на холоде (РДСК), пластинчатой реакции агглютинации с розбенгал антигеном (розбенгал проба — РБП) и в молоке коров — кольцевой реакции (КР).

Дифференциальная диагностика. Характерный для бруцеллеза крупного рогатого скота признак — аборт может быть при вибриозе, листериозе, трихомонозе, хламидиозах, при кормовых отравлениях и др. Изменения плодных оболочек и абортированного плода при указанных болезнях менее выражены, а при гистологическом исследовании “в них отсутствует специфическое гранулематозное воспаление, характерное для бруцеллезной инфекции.

Бруцеллез

Клинические признаки.

Табл. IV. Б — кровоизлияния в карункулах при бруцеллезе.

– Олег Дмитриевич, чем продиктовано принятие нового ГОСТа?

– Если быть точным, то в действие введен ГОСТ 34105-2017 (Межгосударственный стандарт. Животные. Лабораторная диагностика бруцеллеза. Серологические методы). Его появление обусловлено не только внедрением в российскую ветеринарную диагностическую практику новых серологических тестов, в частности, реакции непрямой гемагглютинации, вариантов иммуноферментного и иммунохроматографического анализа, но и целесообразностью совершенствования диагностики – прежде всего повышения ее оперативности и специфичности.

Разрабатывать этот ГОСТ начинали одновременно с подготовкой по распоряжению Минсельхоза России новых Ветеринарных правил осуществления профилактических, диагностических, ограничительных и иных мероприятий, установления ограничений, направленных на предотвращение возникновения, распространения и ликвидацию очагов бруцеллеза животных в России (далее – новые правила). Сейчас проект правил проходит стадию согласования различными ведомствами.

Разумеется, оценка диагностических титров серологических реакций при диагностике бруцеллеза в ГОСТе и новых правилах будет одинаковой. Поэтому считаю, что до выхода в свет этих правил ветеринарные диагностические лаборатории не должны переходить на работу по ГОСТ 34105-2017.

– Потому что между ГОСТом и действующими в настоящее время Ветеринарными правилами по борьбе с бруцеллезом (ВП 13.3.1302-96) сохраняются существенные различия.

– На какие положения стандарта вы хотели бы обратить внимание специалистов в первую очередь?

– К сожалению, несмотря на то, что ГОСТ34105-2017 согласовывался специалистами стран Евразийского экономического союза, в нем сохраняются недочеты.

– Одним из таких недочетов является предписание проводить дополнительное исследование образцов сыворотки в РИД и ИФА с ОПС-антигеном в случае выявления в группах животных, иммунизированных и не иммунизированных против бруцеллеза и положительно реагирующих по результатам серологических исследований в ряде реакций. Такое требование предусмотрено пп. 8.2, 8.3 и 8.4 данного ГОСТа в целях уточнения диагноза.

– Если речь идет об уточнении диагноза, то почему вы называете это недочетом?

– Дело в том, что, по состоянию на сегодняшний день, диагностические тест-системы для иммуноферментного анализа в рамках госзаказа выделяются в ограниченном количестве. Представители большей части ветеринарных диагностических лабораторий утверждают, что им такие тест-системы будут недоступны. Соответственно, непроведение серологического тестирования в ИФА, согласно ГОСТу, будет расценено представителями надзорных учреждений как нарушение.

С учетом разницы в диагностической чувствительности между РИД с ОПС-антигеном и ИФА с ОПС-антигеном исследование последним методом является принципиальным. В противном случае при выполнении серологического исследования только в РИД с ОПС-антигеном объективность его результатов может быть сомнительной.

Не буду вдаваться в подробности других имеющих принципиальное значение недочетов, отмечу лишь, что после их обсуждения и согласования с диагностическими ветеринарными лабораториями должно быть инициировано внесение изменений в ГОСТ 34105-2017.

– Какие ошибки чаще всего допускают при лабораторной диагностике бруцеллеза?

– О существенных ошибках мне неизвестно. К тому же мы не контролируем работу лабораторий. Однако, когда специалисты ряда лабораторий обращаются к нам, чтобы обсудить спорные результаты исследований, кажется, что некоторые из них не знакомы со всеми документами, регламентирующими диагностику болезни. Впрочем, большинство специалистов проявляют инициативу и демонстрируют познания, достаточные для диагностики болезни. Не менее важно и то, что они заинтересованы в получении объективных результатов.

– Какова сегодня эпизоотическая ситуация по бруцеллезу среди крупного и мелкого рогатого скота на территории России?

В период с 2013 по 2017 годы количество неблагополучных по бруцеллезу мелкого рогатого скота пунктов, остававшихся на конец года, составляло 30, 28, 22, 17 и 14. Число заболевших животных – 1,9; 2,5; 2,2; 1,22 и 1,01 тыс. голов.

– Можно утверждать, что динамика положительная?

– Система контроля бруцеллеза животных в стране несовершенна?

– Сложившуюся систему контроля бруцеллеза животных в Российской Федерации можно считать удовлетворительной. Однако это не исключает необходимости ее совершенствования. Прежде всего в части сокращения временных затрат при установлении диагноза за счет более широкого применения средств дифференциальной диагностики болезни, а именно реакции иммунодиффузии и иммуноферментного анализа с ОПС-антигеном, возможно, за счет сочетания средств диагностики.

Важным представляется проведение исследований и установление возможных, максимально ранних сроков серологического исследования вакцинированных животных, особенно мелкого рогатого скота, иммунизированного агглютиногенными вакцинами. В настоящее время этим никто не занимается.

Не стоит забывать, что самый эффективный способ оздоровления неблагополучного хозяйства предусматривает ликвидацию всего поголовья в таком хозяйстве. Однако данный способ не слишком широко применяется в нашей стране. (Должен отметить, что в проекте новых правил его применение регламентировано в большем количестве случаев, нежели в Ветеринарных правилах 13.3.1302-96.) Поэтому перед проведением вакцинации животных в рамках оздоровления путем вакцинации и последующих периодических серологических исследований особенно важно максимально полно удалять инфицированных особей из групп животных.

– В нынешних условиях это реально?

– Я бы сказал, что это возможно за счет введения животным неблагополучных по бруцеллезу хозяйств провоцирующих неагглютиногенных антигенов, в отличие от применяющихся вакцин, с последующим серологическим исследованием и удалением выявленных больных животных.

При этом не могу не отметить, что организации-производители, планировавшие выпускать такие антигены, зарегистрированные ими ранее в Российской Федерации, пока не справляются со своими планами и не понятно, справятся ли.

– Что препятствует повышению эффективности системы контроля бруцеллеза?

– На мой взгляд, совершенствование этой системы не представляется возможным без решения целого ряда задач. Во-первых, нужно создавать в регионах, неблагополучных по бруцеллезу, мясокомбинаты и бойни, обеспечивающие убой больных животных, что решает проблему неполного, несвоевременного и антисанитарного убоя. При этом следует компенсировать владельцам убыток. К сожалению, он неизбежен при изъятии больных животных, прежде всего в условиях ведения отгонного животноводства.

Во-вторых, следует запретить введение нетелей и ярок в стада и отары взрослых животных. В-третьих, нужно ограничить концентрацию поголовья в хозяйствах молочного направления, которые находятся на территориях, неблагополучных по бруцеллезу. В-четвертых, необходимо оперативно завершать реализуемую в стране программу идентификации (мечения) животных.

– Несложно предположить, что для решения этих задач требуются немалые финансовые вложения.

– Конечно, но если эти задачи не решить, то искоренить бруцеллез на территории нашей страны не получится.

– Лаборатория качества и стандартизации бактерийных лекарственных средств ВГНКИ как структурное подразделение Россельхознадзора разрабатывает образцы сыворотки, которая применяется для диагностики бруцеллёза. Соответствует ли она эталонным стандартам МЭБ?

– Более 30 лет тому назад в лаборатории была разработана Национальная стандартная сыворотка анти-Бруцелла абортус, активность которой составляет 1000МЕ агглютинирующих антител/см 3 . Сыворотка предназначена для стандартизации антигена для реакции агглютинации (РА), применяемой при серологической диагностике бруцеллеза. Периодически с интервалом в пять-семь лет лаборатория готовит очередную серию сыворотки взамен предыдущей. Каждая серия стандартизуется по международной эталонной сыворотке с использованием международного стандарта антигена, предоставляемых Международным эпизоотическим бюро.

Национальная стандартная сыворотка используется и для оценки активности антигенов для других серологических реакций. Но в этой части с учетом современных требований и рекомендаций МЭБ она нуждается в совершенствовании и в изменении ее статуса.

– В заключение расскажите, пожалуйста, о приоритетных задачах вашей лаборатории.

– Традиционно лаборатория выполняет регистрационные и сертификационные испытания, осуществляет инспекционный контроль сертифицированной продукции, а также лекарственный мониторинг и выборочный контроль качества образцов средств специфической профилактики и диагностики бруцеллеза животных. Наряду с этим предполагается выполнение научно-исследовательской работы, цель которой – разработка национальных стандартных образцов сыворотки anti-Brucella abortus для стандартизации антигенов для реакции агглютинации, реакции связывания комплемента, кольцевой реакции с молоком, метода поляризации флуоресценции и иммуноферментного анализа. В частности, речь идет о трех образцах сыворотки anti-Brucella abortus для непрямого ИФА, конкурентного ИФА и поляризации флуоресценции ИФА, стандартизированных по международным стандартным сывороткам с использованием международных стандартных антигенов бруцелл.

Разработка и применение национальных стандартных образцов сыворотки анти-бруцелла абортус для стандартизации бруцеллезных антигенов, используемых в разных серологических тестах, обеспечивает объективную оценку результатов диагностики бруцеллеза в стране, а также международную гармонизацию диагностического тестирования болезни.

Читайте также: