Бактериологическое исследование на иерсиниоз

Комплексное исследование для выявления возбудителя иерсиниоза (Yersinia enterocolitica) и псевдотуберкулеза (Yersinia pseudotuberculosis), включающее серологические тесты и полимеразную цепную реакцию (ПЦР).

Анализы на иерсиниоз и псевдотуберкулез.

Laboratory Diagnostics of Yersiniosis, Enteropathogenic Yersiniae Lab Panel.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, кал.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
  • Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Иерсинии - это грамотрицательные, факультативно-анаэробные палочки, относящиеся к семейству Enterobacteriaceae. Известно 11 видов иерсиний, три из которых являются возбудителями заболеваний человека: Yersinia pestis – это возбудитель чумы, Yersinia enterocolitica (Y. enterocolitica) и Yersinia pseudotuberculosis (Y. pseudotuberculosis) – кишечные патогены. Хотя Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis относятся к разным видам, они имеют много общего, особенно в плане клинической картины и диагностики.

Основной "резервуар" иерсиний - дикие и домашние животные (свиньи, грызуны, овцы, козы, коровы, собаки, кошки и птицы). Считается, что человек не участвует в естественном жизненном цикле этих патогенов ни в качестве промежуточного, ни окончательного хозяина и его заражение, таким образом, носит случайный характер. Как правило, заражение кишечными иерсиниями происходит фекально-оральным путем при употреблении контаминированных продуктов питания (молочные продукты, сырое или плохо приготовленное мясо, особенно свинина). Как Y. enterocolitica, так и Y. pseudotuberculosis сохраняют жизнеспособность в условиях пониженных температур. Случаи передачи инфекции от человека к человеку или при переливании инфицированной крови описаны, но очень редки.

Следует отметить, что не все кишечные иерсинии являются патогенами. Так, к развитию заболевания у человека приводят серотипы Y. enterocolitica O:3, O:8, O:9 и O:5,27 и Y. pseudotuberculosis O:1 и O:2. Только указанные серотипы являются истинно энетропатогенными иерсиниями.

Особенностью энтеропатогенных иерсиний является их тропность к лимфатичекой ткани. Проникая через слизистую оболочку кишечника, эти микроорганизмы попадают в мезентериальные лимфатические узлы. Развивающийся воспалительный ответ сопровождается болью в области живота и диареей, а также мезентериальным лимфаденитом. У иммунокомпетентных лиц заражение энтеропатогенными иерсиниями чаще ограничивается гастроэнтеритом и регионарным лимфаденитом. Если возбудителем заболевания является Y. enterocolitica, говорят об иерсиниозе, если Y. pseudotuberculosis – о псевдотуберкулезе. Иерсиниоз встречается чаще, чем псевдотуберкулез. Как при иерсиниозе, так и при псевдотуберкулезе могут наблюдаться иммунопатологические феномены в виде реактивного артрита и узловатой эритемы. У лиц с иммунодефицитом, а также маленьких детей могут наблюдаться тяжелые формы иерсиниоза и псевдотуберкулеза с диссеминацией бактерий и сепсисом.

Диагностика иерсиниоза и псевдотуберкулеза достаточно сложна. Хотя бактериологический посев кала (крови или других биологических материалов) считается "золотым стандартом" диагностики, он трудноосуществим. Это связано с тем, что энтеропатогенные иерсинии сложно отличить от других кишечных микроорганизмов, которые в норме преобладают в кишечной флоре. После выявлении роста иерсиний проводят дополнительные биохимические тесты, устанавливающие их энтеропатогенность. Кроме того, метод бактериологического посева характеризуется достаточно низкой чувствительностью (для получения результата необходимо 10 3 -10 6 КОЕ в грамме образца биоматериала). Учитывая эти особенности, диагностика иерсиниоза и псевдотуберкулеза носит комплексный характер и включает следующие дополнительные тесты:

  • Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из методов молекулярной диагностики, в ходе которого определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в образце биоматериала (в кале). Основными преимуществами ПЦР являются быстрота получения результата, высокая чувствительность и специфичность. В данное комплексное исследование входит анализ ПЦР на Y. pseudotuberculosis.
  • Серологические тесты. Антитела к энтеропатогенным иерсиниям обычно могут быть определены в первые 2-4 недели болезни (IgM-антитела). Следует отметить, что из-за определенного антигенного сходства Yersinia с бактериями других родов (Salmonella, Morganella, Brucella) серологические тесты могут давать ложноположительные результаты. Еще одним недостатком серологических тестов является то, что антитела к иерсиниям (IgG-антитела) сохраняются в течение нескольких лет после инфицирования, что может препятствовать интерпретации результата. Следует помнить, что результат серологических тестов зависит от иммунного статуса организма.

Точность ПЦР и серологических тестов в меньшей степени, чем бактериологического метода, подвержена влиянию антибактериальных препаратов. Однако максимально точный результат теста будет получен при анализе биоматериала, полученного до начала лечения.

Гастроэнтерит, возникающий при инфицировании энтеропатогенными иерсиниями, сложно отличить от сальмонеллеза, кампилобактериоза и других кишечных инфекций. По этой причине часто требуются дополнительные лабораторные анализы.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики иерсиниоза и псевдотуберкулеза.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на иерсиниоз или псевдотуберкулез: лихорадка, тошнота, боли в животе (боль может локализоваться в правой паховой области), диарея, а также узловатая эритема или реактивный артрит;
  • в некоторых случаях при подозрении на острый аппендицит.

Что означают результаты?

Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:

Взятие материала проводится до начала антибактериальной терапии или не ранее, чем через 2 недели после ее окончания.

Правила взятия биоматериала

  1. Перед сбором материала провести тщательный туалет области вокруг анального отверстия с мылом и водой.
  2. При сборе кала: произвести дефекацию в чистую емкость (горшок или др. , предварительно хорошо промыв с мылом и водой, многократно ополоснув и обдав кипятком).
  3. Далее, необходимо перенести материал в пробирку с жидкой средой Кэри Блейр, зонд-тампон погрузить в фекалии поочередно в нескольких местах (важно: обязательно погрузить в места со слизью, гноем и т. д.) и переместить материал в пробирку, отломить избыток аппликатора по условной линии, плотно закрыть крышку. НЕ помещать в пробирку кусочки кала.

Пробирку и зонд-тампон можно получить в регистратуре CMD

Доставка в лабораторию в день взятия биоматериала.

Метод исследования: Микробиологический

Yersinia enterocolitica – возбудитель иерсиниоза, острого инфекционного кишечного заболевания, характеризующегося интоксикационным синдромом, преимущественным поражением ЖКТ, при генерализованной форме – полиорганным поражением (множества органов). Основной путь передачи – алиментарный (через воду, овощи, молоко, молочные подукты). Заболевание начинается остро, с подъема температуры до 38-40º, сопровождается симптомами интоксикации, поражением желудочно-кишечного тракта (боли в животе, тошнота, рвота, понос, увеличение печени и селезенки), возможны высыпания на коже, боли в суставах.

Идентификация микроорганизмов производится на высокоточном масс-спектрометре Microflex (Bruker). На следующем этапе лабораторного исследования выполняется определение чувствительности возбудителя к лекарственным препаратам на современных микробиологических анализаторах. Вся антибиотикограмма соответствует стандартам CLSI (Институт клинических и лабораторных стандартов), США и EUCAST (Европейский комитет по определению чувствительности к антимикробным препаратам (European Committee Antimicrobial Susceptibility Testing). Определение чувствительности к широкому спектру антибактериальных препаратов позволяет врачу назначить адекватную терапию.

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

  • Наличие симптомов острой кишечной инфекции;
  • Эпидемиологические обследования;
  • Подбор антибактериальной терапии;
  • Оценка эффективности антибактериальной терапии.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Результат бактериологического исследования стандартизирован и выдается в соответствии с выделенными этиологически значимыми микроорганизмами, в количественном формате, содержит антибиотикограмму и заключение, помогающее лечащему врачу лучше сориентироваться в предоставленной информации.

Референсные значения (вариант нормы): не обнаружено.

Интерпретация проводится врачом с учетом клинических проявлений.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 - 2020


! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Р . Я . Хурай , заслуженный ветеринарный врач Российской Федерации, кандидат ветеринарных наук, заведующий бактериологическим отделом

ФГУ "Краснодарская межобластная ветеринарная лаборатория"

Иерсиниоз — острое инфекционное заболевание людей и животных разных видов, включая птиц. Воз­будителями болезни являются патогенные штаммы Yersinia enterocolitica, относящиеся к роду Yersinia, семейству Enterobacteriaceae, которое включает 7 видов.

Представляют собой палочковидные или овоидные гра-мотрицательные клетки длиной 1-3 мкм, шириной 0,5-0,8 мкм; могут располагаться по одиночке, парами, иногда короткими цепочками из 4-5 клеток. Хорошо растут на простых питатель­ных средах, образуя на плотных средах в отличие от других эн-теробактерий, мелкие диаметром до 1 мм , колонии. В мазках отпечатках и из бульонных культур могут окрашиваться бипо­лярно. В культурах, выращенных при 30°С, все виды, за исклю­чением Y.pestis, подвижны, при 37°С это свойство утрачивает­ся. Все иерсинии за исключением Y.pestis, могут развиваться на синтетических минеральных средах (25°С), содержащих в качестве источника энергии один из углеводов.

Бактерии вида Yersinia enterocolitica широко распростра­нены в природе ввиду высокой адаптации к сапрофитному об­разу жизни, что является одной из характерных биологических особенностей данного вида бактерий. Наряду с сапрофитными свойствами многие штаммы иерсинии проявляют патогенные свойства за счет токсигенности, адгезивности, инвазивности и способности противостоять фагоцитозу в организме тепло­кровных животных. Резервуаром возбудителя иерсиниоза по­мимо больных животных являются объекты окружающей среды — вода, почва, растительные корма, пищевые продукты, осо­бенно молоко.

Большую роль в распространении возбудителя иерсинио­за играют синантропныс грызуны (серые крысы, мыши), в свя­зи тем, что с их экскрементами иерсинии часто попадают на овощи в период хранения.

Температура от +4 °С до +40 "С является благоприятной для размножения Yersinia enterocolitica, что способствует накопле­нию иерсинии в объектах животноводческих помещений — стойл, полов, подстилки, навозной жижи, овощехранилищах и пр.

Иерсиниоз чаще протекает в кишечной форме, но иногда развивается бактериемия с поражением различных внутрен­них органов. В зависимости от продолжительности болезни она может иметь острое и подострое течение.

Заболеванию подвержен молодняк, у которого иерсиниоз проявляется в виде спорадических случаев или энзоотической вспышки, чему способствуют многие факторы, связанные с несоблюдением технологических, ветеринарно-санитарных, зоогигиенических и общих противоэпизоотических требований при его выращивании.

Клиническая картина болезни не имеет специфических особенностей и характеризуется признаками, свойственными кишечной инфекции, вызванными другими микроорганизма­ми. У больных животных наблюдается потеря аппетита, понос, нарастающая слабость, адинамия, учащенное и поверхностное дыхание, учащенный пульс, интоксикация, поражение цент­ральной нервной системы — судороги, депрессия, чередующа­яся с возбуждением. При затяжном течении болезни возникает обезвоживание организма, западание глазных яблок, истоще­ние. У некоторых животных могут быть серозно-катаральные или серозно-гнойные истечения из носовой полости, хрипы в области бронхов и легких, конъюнктивит, артриты, температура тела обычно в пределах нормы или повышена на 0,5-1 °С, в предагональном состоянии ниже нормы.

При кишечной форме возбудитель болезни локализуется в ЖКТ и мезентериальных лимфатических узлах; при септической форме — еще и паренхиматозных органах, крови, костном моз­ге и головном мозге, и регионарных лимфатических узлах.

У взрослых животных клинические признаки болезни обычно отсутствуют. В отдельных случаях могут быть артриты, аборты, эндометриты, маститы, диарея.

Основной путь заражения — алиментарный. Не исключа­ется возможность инфицирования при контакте с больными животными, а также с ранее переболевшими животными и работниками животноводческих ферм — бактерионосителями. Выздоровевшие животные могут длительное время оставаться бактерионосителями и выделять возбудителя болезни в окружа­ющую среду.

У животных—бактерионосителей клинические признаки от­сутствуют. У КРС иерсинии встречаются в кишечнике, у свиней — на слизистой корня языка, миндалинах глотки, в подчелюстных лимфатических узлах, у лактирующих животных — в молоке.

Патологоанатомические изменения у погибших животных имеют картину катарального или катарально — геморрагическо­го гастроэнтерита с наличием точечных, пятнистых и полосчатых кровоизлияний на слизистой оболочке тонкого и толстого отделов кишечника; мезентериальные лимфатические узлы увеличены, на разрезе розово-красного или вишневого цвета. В брюшной полости может содержаться серозный экссудат светло-желтого цвета. Селезенка иногда имеет утолщенные края или слегка уве­личена с точечными кровоизлияниями под капсулой; печень не­редко перерождена, глинистого цвета, пульпа на разрезе имеет дряблую консистенцию и легко снимается при соскобе.

В почках под капсулой могут быть точечные кровоизлия­ния. На разрезе граница коркового мозгового слоев в ряде слу­чаев сглажена. На эпи- и эндокарде в области клапанов сердца часто отмечаются точечные и пятнистые кровоизлияния. Легкие могут иметь мраморный рисунок с наличием лобарной пневмо­нии, в бронхах и трахее пенистый экссудат. Сосуды головного мозга сильно гиперемированы, мозговая ткань отечна.

Указанные изменения наблюдаются в отдельных или од новременно в нескольких органах.

Диагноз иерсиниоза у животных ставят на основании ре­зультатов бактериологического и молекулярно-генетического исследования (ПЦР) с учетом эпизоотологических данных, кли­нических признаков болезни и патологоанатомической картины.

При убое и разделке туш животных-бактерионосителей мо­жет происходить контаминация иерсиниями мяса этих живот­ных и получаемых от них субпродуктов, в результате загрязне­ния частицами фекалий, помета птиц, содержимого кишечника, через режущие не обеззараженные инструменты, тару и пр.

У лактирующих животных- бактерионосителей иерсинии могут содержаться в молоке и в приготовленных из него слив­ках или попадать в молоко с контаминированной поверхности молочной железы во время доения коров, не обеззараженных доильного оборудования и молочной посуды.

Возможность контаминации различных растений, кор­неплодов, злаковых, бахчевых культур иерсиниями обуслов­лена способностью этих бактерий продолжительное выживать и размножаться при температуре от +4 "С до +40 °С в воде и влажной почве, богатой органическими веществами. В связи с этим, растительные культуры и приготовленные из них салаты и корма могут быть источником заражения людей и животных патогенными штаммами иерсинии. Установлено, что в период вегетации растений, выросших на почвах, в которые попадают сточные воды с животноводческих ферм, иерсинии проникают внутрь растений. И хотя в таких случаях в смывах с овощей ука­занные бактерии не удается обнаружить, но при измельчении зеленой массы из выделяемого сока может быть выделена культура иерсинии.

Взятие материала и пересылка его в лабораторию для бактериологического исследования

Для прижизненной диагностики иерсиниоза в лабораторию направляют материал от больных животных, не подвергавших­ся лечению антибактериальными препаратами, отобранные в стерильные пробирки (флаконы) с резиновыми пробками:

а) фекалии в количестве 2-3 гр., отобранные непосредс­твенно из прямой кишки с помощью предварительно прокипя­
ченного резинового катетера или в момент дефекации;

б) молоко в количестве 10-15 мл, взятое выборочно от 15-20 коров стада после санитарной обработки молочной железыи сдаивания первых порций молока-одна сборная проба. В зависимости от поголовья коров на ферме количество сборных проб молока может варьировать в пределах от 3 до 5. Моло­ко должно быть доставлено в лабораторию для исследования в день взятия пробы. При отсутствии такой возможности молоко консервируют кристаллической борной кислотой (0,1 г/10мл). Консервированное молоко пригодно для исследования в тече­ние 10 дней.

Для посмертной диагностики в лабораторию направляют материал от погибших или вынужденно убитых животных, же­лательно не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами.

Трупы мелких животных (поросят, пушных зверей, птиц, и др.) направляют целиком (2-4 тушки).

От крупных животных направляют следующий матери­ал: сердце, перевязанное лигатурой вблизи разреза сосудов и аорты; селезенку; долю печени с желчным пузырем; почку; пораженные участки тонкого и толстого отделов кишечника с содержимым, перевязанные с 2 концов лигатурой, вместе с регионарными, мезентериальными лимфатическими узлами (в отдельной посуде или полиэтиленовом пакете); голову, трубча­тую кость; подчелюстные лимфатические узлы; у свиней и поро­сят еще и соскобы с задней стенки глотки, с поверхности корня языка и глоточных миндалин, взятые стерильным скальпелем.

Для диагностики иерсиниоза птиц из неблагополучных секций птичника направляют по 3-5 свежих трупов или 3-5 птиц с клиническими признаками диареи. Больную птицу убивают в лаборатории и подвергают патологоанатомическому и бактери­ологическому исследованию.

Пробы мясного сырья, молока и сливок для бактериоло­гического исследования отбирают согласно правилам и в коли­чествах, предусмотренных следующими ГОСТами:

• мясо-ГОСТ 7269-79. методы отбора образцов и органо-лептические методы определения свежести;

• мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи - ГОСТ Р50396.0-92. Методы отбора проб и подготовка их к микробио­логическим исследованиям;

• молоко и сливки - ГОСТ 13928-84. Правила приемки, методы отбора проб и подготовка их к анализу.

Корнеплоды, хранящиеся в овощехранилищах или буртах, подвергают исследованию не ранее, чем через 30 дней после их закладки. Пробы растительных кормов для исследования на наличие в них бактерий вида Yersinia enterocolitica отбирают согласно следующим ГОСТам:

• корма растительного происхождения - ГОСТ 27662-87. Методы отбора проб (зеленый корм, сено, силос, сенаж);

• комбикорма, сырье - ГОСТ 13496.0-80. Методы отбора проб (кормовая мука, травяная мука, сушеный свекловичный жжем, сухие кукурузные корма и тд.);

• картофель свежий продовольственный - ГОСТ Р51808-2001. Методы отбора проб;

• свекла столовая, кормовая свежая - ГОСТ Р1811-2001.
Пробы материала, отобранные для бактериологическогр

исследования, упаковывают в полиэтиленовые пакеты или во влагонепроницаемую тару и в тот же день направляют в лабо­раторию. Если материал (органы, ткани и фекалии животных) доставить в лабораторию в течение 3-4 часов не представля­ется возможным, особенно в теплое время года, его консер­вируют стерильным 30% водным раствором химически чистого глицерина, обьем которого должен превышать объем материа­ла в 2-3 раза.

1.Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б. Справоч­ник определитель зоопатогенных микроорганизмов.

2.Каврук Л.С., Шумилов К.В., Мельниченко Л.П., Скляров О.Д., Обухов И.Л., Смирнов И.В., Зыкин Л.Ф., Щербаков А.А.

Методические указания по лабораторной диагностике иерсиниоза животных и обнаружения возбудителя болезни в мясном сырье, молоке и растительных кормах.

З. Хоулта Дм., Крига Н., Снита П., Стейли Дж., Уильямса С.

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Copyright © Иммунитет и инфекции

Подготовка к исследованию: