Выделение культуры возбудителя орнитоза происходит на среде

Настройки шрифта:

Выбор цветовой схемы:

В связи с весенней миграцией перелетных птиц и на фоне широко развитого птицеводства, а также популярности охоты на диких птиц, содержание экзотических и декоративных птиц существует угроза возникновение вспышек орнитоза в России.

Орнитоз - инфекционное заболевание человека, которое передается от птиц и характеризуется поражением легких (пневмонии). Заболевание может протекать в острой, хронической и стертой формах.

Возбудитель орнитоза - хламидия, особый вид микроорганизма, который по своим свойствам близок к вирусам. Хламидии, проникая в организм человека или животного, развиваются внутри клеток, чаще всего поражаются легкие.

Возбудитель орнитоза длительно сохраняется во внешней среде, особенно во влажных условиях. В подстилке птиц при отсутствии прямого солнечного света возбудитель орнитоза сохраняет свои инфекционные свойства до 8 месяцев. Хламидии чувствительны к повышенной температуре и дезинфицирующим средствам. При нагревании до 70 градусов и выше, а также при воздействии дезинфицирующих средств (хлорамин, щелочь, фенол) быстро погибают.

Хламидии широко распространены в природе среди диких, домашних (куры, утки, индейки) и синантропных (сизых голубей, воробьев, ворон) птиц.

Для человека наиболее опасными и значимыми как источники заболевания людей являются домашние (утки, индейки, куры), синантропные (сизые голуби, воробьи, вороны) и комнатные декоративные (попугаи, канарейки) птицы.

Заболевание птиц может протекать как в острой, так и в стертой форме.

Острая форма заболевания у птиц сопровождается вялостью, отказом от пищи, изменениями внешнего вида (грязное оперение, опущенные крылья, голова, закрытые глаза), часто развивается жидкий (серо-зеленый) помет, слезотечение, конъюнктивит.

При стертой форме заболевания (носительство) внешний вид птиц практически не изменен, вместе с тем, выделяя возбудителя с пометом, могут явиться источником заражения людей. В периоды яйцекладки или выведения птенцов, при охлаждении, неполноценном питании, скученности, которые вызывают снижение иммунитета, стертая форма может дать обострение, сопровождающееся интенсивным выделением возбудителя во внешнюю среду.

Заражение человека орнитозом происходит при контакте с больными птицами, носителями орнитозной инфекции или объектами внешней среды, инфицированными возбудителями орнитоза.

Период от момента заражения до появления первых признаков заболевания может длиться в среднем 6-10 дней, реже до 20 дней.

Человек может заразиться орнитозом:

- воздушно-пылевым (аэрозольным) путем при вдыхании инфицированного воздуха (пыли, пуха);

- контактным, через поврежденные слизистые оболочки и кожные покровы;

- алиментарным, при употреблении загрязненных пищевых продуктов.

Возможность передачи орнитоза от человека к человеку мало вероятна, но нельзя исключить передачу инфекции при тесном контакте с больным через мокроту при кашле.

Основными клиническими признаками орнитоза у человека являются первичное поражение легких и общая интоксикация.

Клиническая картина характеризуется острым началом, подъемом температуры тела до 38 градусов, головной и мышечной болью, катаральными явлениями и развитием пневмонии.

В начале заболевания для орнитозной пневмонии характерен сухой кашель без мокроты, а затем при присоединении вторичной бактериальной инфекции появляется гнойная мокрота. В ряде случаев без своевременно начатого специфического лечения лихорадящее состояние может продолжаться 2-3 недели, орнитозная пневмония может приобретать хронические формы и давать рецидивы.

При правильном и своевременном лечении (антибиотики тетрациклинового ряда) наступает выздоровление.

Перенесенное заболевание не создает напряженного иммунитета и не предохраняет от повторного заражения. В ряде случаев повторное заражение орнитозом происходило спустя 1-2 года после перенесенного ранее заболевания. Восприимчивость людей к орнитозу очень велика.

Основными источниками заражения орнитозом на территории города являются декоративные комнатные птицы (попугаи), купленные в зоомагазинах города, бесхозные голуби, а также дикие птицы в природных условиях (турпоходы, отдых на даче).

Предупреждение заболеваний орнитозом основывается на проведении комплекса профилактических ветеринарно-санитарных мероприятий.

Одним из важных направлений является ветеринарный надзор за ввозом птиц (из-за границы, с других территорий страны), их перевозкой и содержанием на птицефабриках, в зоопарках, зооуголках, зоомагазинах и др.

Второе направление - проведение мероприятий по ограничению численности синантропных (сизых голубей, ворон, воробьев) птиц.

Для профилактики заболеваний орнитозом необходимо соблюдение следующих правил:

- избегать приобретения декоративных, певчих и других птиц без соответствующего документа ветеринарной службы, удостоверяющего состояние их здоровья;

- в случаях подозрения на заболевание орнитозом среди птиц, содержащихся в домашних условиях, немедленно обращаться в ветеринарную станцию;

- исключить контакт с больными или подозрительными на заболевание птицами как в дикой природе, так и в городской популяции;

- уборку подвалов, чердаков, дачных помещений после зимнего сезона проводить влажным способом с применением дезинфицирующих средств (3% хлорамин, 2% хлорная известь, горячий мыльно-щелочной раствор), использовать защитные очки, ватно-марлевые повязки, резиновые перчатки.

При подозрении на заражение и первых признаках заболевания у человека необходимо обязательно обратиться к врачу. Помните - самолечение опасно.

Заболевание орнитозом можно предупредить, если соблюдать предложенные правила.

ВАЖНО!

При выявлении признаков заболевания у птиц или обнаружения мертвой птицы необходимо немедленно информировать государственную ветеринарную службу по тел.:

45-88-68; 33-05-11; 8-912-053-22-75 - круглосуточно

Тем кто решил приобрести птицу в качестве домашнего питомца лучше это делать в зоомагазинах, где поступление птицы осуществляется по ветеринарной сопроводительной документации с проведенными необходимыми исследованиями, включая орнитоз. Документы, подтверждающие наличие проведенных исследований по требованию покупателя должны быть предъявлены сотрудником зоомагазина.

Орнитоз (пситтакоз, болезнь попугаев) — это зооантропонозное острое инфекционное заболевание, характеризуется лихорадкой, общей интоксикацией, поражением лёгких, центральной нервной системы, увеличением печени и селезёнки.

Возбудителем заболевания являете и бактерия Chlamydia psittaci из числа хламидий, в организме человека развивается внутриклеточно, во внешней среде сохраняется до 2-3 недель.

Резервуаром возбудителя и источником заражения являются домашние и дикие птицы. Наибольшее эпидемиологическое значение имеют домашние птицы — особенно утки и индюшки; комнатные птицы — попугаи, волнистые попугайчики, канарейки, городские голуби.

Среди птиц возбудитель циркулирует в основном за счёт алиментарного заражения. Возможна трансовариальная (через яйцо) передача возбудителя потомству в двух и более поколениях.

Заражение людей орнитозом происходит при общении с больными птицами, носителями орнитозной инфекции выделяющими микроорганизмы с носовой слизью, при чихании, кашле, с пометом, или объектами внешней среды, инфицированными возбудителями орнитоза. Распространение в основном происходит воздушно - капельным или воздушно - пылевым путем. 3ражение может произойти контактным путем через поврежденные кожные покровы и слизистые, а также алиментарным путем (попадание возбудителя в организм с загрязненными продуктами питания). Орнитоз распространён повсеместно, регистрируется в виде спорадических случаев и групповых производственных или семейных вспышек.

У индеек отмечают кахексию, анорексию, диарею, снижение яйценоскости, истощение и парезы конечностей.

У уток более восприимчив молодняк 20-30 дневного возраста, болезнь продолжается 20-60 дней, смертность достигает 30%. Заболевание характеризуется насморком, кашлем, затрудненным дыханием и конъюнктивитом. У гусей симптомы сходные.

Голуби поражаются чаще других видов птиц и играют главную роль в распространении инфекции. У птенцов отмечают понос, плохое оперение, отставание в росте. У взрослых голубей болезнь характеризуется насморком, конъюнктивитом, слезотечением и хрипами.

У взрослых попугаев отмечают отсутствие аппетита, сонливость, конъюнктивит, слабость, профузный понос, приводящий к истощению и гибели. У молодой птицы часто возникает двусторонний конъюнктивит, выделяется экссудат из клюва и восковицы, развивается светобоязнь, расстройство кишечника, при этом помет может быть зеленного и желтого цвета. У взрослых кроме них признаков отмечают воспаление воздухоносных мешков, параличи конечностей ног. Гибель может наступать через 1-2 недели.

Птица, переболевшая орнитозом, обычно длительное время остается вирусоносителем.

У людей клиническая картина и течение орнитоза не всегда одинакова. Инкубационный период колеблется от 7 до 14 и более суток.

Заболевание может начаться остро, с лихорадки и симптомов обшей интоксикации, к которым лишь позднее присоединяются признаки поражения органов дыхания. Характерна резкая головная боль, температура выше 39°С, боль в мышцах спины и конечностей, слабость, могут быть рвота, понижение аппетита. На 2-4-й день болезни присоединяются признаки поражения легких: сухой кашель, иногда колющая боль в груди, через 1-3 дня начинает выделяться небольшое количество слизистой или слизисто-гнойной мокроты, иногда с примесью крови. К концу 1-й недели определяется увеличение печени и селезенки.

При заражении от попугаев орнитоз протекает дольше и тяжелее, чем при заражении от домашней птицы и голубей.

Профилактика и меры борьбы с орнитозом:

Борьба с орнитозом среди домашних птиц, регулирование численности голубей, ограничение контакта с ними. На птицефермах и предприятиях, занимающихся переработкой пера и пуха, необходимо проводить ветеринарные санитарные мероприятия. При ввозе в страну птиц следует применять карантинные меры. Эффективной вакцины для профилактики орнитоза не существует.

Для недопущения возникновения и распространения на территории города Москвы орнитоза государственной ветеринарной службой Северного АО города Москвы ежемесячно в соответствии с планом проводится клинический осмотр и мониторинговые исследования птицы в зооуголках дошкольных и школьных учреждений, зоомагазинах и на сельскохозяйственных объектах Северного АО г. Москвы. Также исследуют и синантропную птицу.

Всего за год мониторинговым исследования подвергаются порядка 6500 голов птицы.

Ведущий ветеринарный врач ЛПП СББЖ САО

Кузнецов Дмитрий Петрович

Если вы нашли ошибку: выделите текст и нажмите Ctrl+Enter

Инфекционная болезнь диких и домашних птиц, млекопитающих и человека, характеризующаяся поражением паренхиматозных органов, кишечника и атипичной пневмонией.

ИСТОРИЧЕСКАЯ СПРАВКА – в первые о заболевании людей, возникающем в результате контакта с попугаями и характеризующемся лихорадкой, диареей и воспалением легких, сообщил Юргенсон в 1874 г. В 1879 г. Риттер (Швейцария) описал вспышку орнитоза в семье, возникшую после приобретения экзотических птиц.

В 1891—1897 гг. вспышки этой болезни неоднократно отмечали в Париже. Нокар подтвердил факт заражения людей от попугаев, изучил и описал (1892) характер течения и проявления инфекции у этих птиц. С 1895 г., по предложению Моранжа, болезнь стали называть пситтакозом (пситтакоз— попугай). В 1929—1930 гг. эпидемии пситтакоза возникли в 12 странах Америки и Европы. В это время Левинталь в Германии, Коулз в Англии и Лилли в США почти одновременно, но независимо друг от друга открыли возбудителя болезни, обнаружив специфические включения в клетках ретикулоэндотелиальной системы больных птиц. Бедсон, Вестерн и Симпсон установили, что эти включения являются элементарными частицами возбудителя. В последующем было выяснено, что источником возбудителя инфекции служат не только попугаи, но и птицы многих других видов, в частности голуби, утки, индейки, гуси, куры. Поэтому болезнь стали называть орнитоз (орнис—птица).

Орнитоз распространен очень широко. Он установлен на Американском континенте, в Австралии, в Африке, в Азии, во многих странах Европы (Англия, Голландия, Дания, Швейцария, ГДР, ФРГ, Италия, Югославия, Венгрия, Румыния, Болгария, Чехословакия и др.). Начиная с 1948 г. орнитоз регистрируется у человека и птиц и в различных областях нашей страны.

Конкретных данных об ущербе, причиняемом птицеводческим хозяйствам, нет. У домашних птиц орнитоз чаще протекает бессимптомно. Велико эпидемиологическое значение этой болезни. Возбудитель может быть очень заразительным для человека и легко передается аэрогенным путем.

ВОЗБУДИТЕЛЬ - Chlamydiae psittaci – относится к роду хламидий. Это неподвижные кокковидные микроорганизмы, размер которых от 0,2 – 1,5 мкм. Для хламидий характерно образование элементарных телец (инфекционная форма). В пораженных клетках образуются цитоплазматические включения разной величины (от 1 до 12 мк), из которых через ряд промежуточных (незрелых) форм дифференцируются инфекционные (зрелые) элементарные тельца. Их можно обнаружить в срезах или препаратах-отпечатках из патологического материала. Они располагаются в цитоплазме (реже внеклеточно) поодиночке, попарно, кучками. По Романовскому— Гимза зрелые частицы красятся в фиолетовый цвет, по Маккиавеллю (карболовый фуксин – 10 минут, затем сливают и кратковременно воздействуют 0,5% раствором уксусной кислоты, затем сливают и докрашивают метиленовой синькой) при этом на зеленом фоне мазка элементарные тельца окрашиваются в ярко-красный цвет.

При люминесцентной микроскопии с окраской акридином оранжевым они дают желто-зеленое свечение, так как содержат преимущественно ДНК. В крупных цитоплазматических включениях может преобладать РНК (оранжево-красное свечение).

Возбудитель орнитоза культивируется в развивающихся куриных эмбрионах. Лучше заражать 6—7-дневные эмбрионы в желточный мешок. Хорошо растет он и в культурах тканей (куриные фибробласты и др.). Можно культивировать и на белых мышах, вводя материал в мозг и внутрибрюшинно.

Возбудитель обладает сложной антигенной структурой. Выделены, в частности, группоспецифическая эфирорастворимая антигенная фракция и щелочь-растворимый антиген, обладающий групповой и специфической активностью. Вирулентность и соответственно токсигенность различных штаммов могут варьировать в значительных пределах.

УСТОЙЧИВОСТЬ - при нагревании до 60 о С погибает в течение 10 минут, при комнатной температуре (в высыхающем материале) — через 24—48 часов. На скорлупе яиц в инкубаторе он выживает не более трех дней, в воде до 17 дней, но в помете птиц сохраняется до 3—4 месяцев. При температуре минус 20° выживает свыше 6 месяцев. Надежными дезинфицирующими средствами: 2% раствор формалина, 2% раствор хлорамина, 2%-ный раствор едкого натрия, 5 % раствор лизола.

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ - хламидии широко распространены в природе, и в качестве их хозяев могут быть домашние и дикие животные (более 200 видов) и 132 вида птиц. В экспериментах: штаммами возбудителя, выделенными от птиц, удалось воспроизвести болезнь у некоторых диких грызунов (домовая мышь, полевка, суслик), а также у морских свинок, кроликов, телят, поросят, суягных овец, обезьян). Дикие грызуны могут участвовать в формировании и поддержании природных очагов орнитоза.

У млекопитающих хламидии вызывают пневмонии, аборты, риниты, энтериты, кератоконъюнктивиты, энцефаломиелиты, полиартриты и генетальные инфекции.

В естественных условиях чаще болеют голуби, гуси, индейки, утки, фазаны, попугаи и куры. Более восприимчив к инфекции молодняк.

Большое эпизоотологическое значение имеют природные очаги орнитоза в популяции диких птиц. Так, на пример, известно, что полудикие сизые голуби переболевают орнитозом в 30-40%, а в отдельные годы до 80% с летальность в 30-50%.

Данные условия способствуют накоплению возбудителя во внешней среде, взаимному перезаражению и широкому распространению орнитоза.

Главный источник инфекции — больная птица, выделяющая возбудителей орнитоза с носовой слизью при чихании и кашле, с экскрементами в течение 6 месяцев после переболевания. При латентном течении болезни выделение может продолжаться месяцами.

Заражение алиментарное, воздушно-капельное, возможна вертикальная передача и через инфицированные яйца. В благополучные хозяйства орнитоз обычно заносится латентно.

Возможно заражение при контакте с дикой птицей. Распространению болезни способствуют неблагоприятные условия содержания (скученность, антисанитарные условия, охлаждения, недостаточное или неполноценное питание). Ослабление птиц при неполноценном кормлении, охлаждении, длительной транспортировке, наличии других инфекций или инвазий ведет к клиническому проявлению болезни у носителей возбудителя и интенсивному инфицированию внешней среды.

ПАТОГЕНЕЗ - возбудитель болезни, проникший в организм птицы через слизистые оболочки верхних дыхательных путей или пищеварительного тракта, заносится кровью в различные органы, ткани и размножается в клетках ретикулоэндотелиальной системы. При недостаточности защитных сил организма появляются признаки интоксикации. У птиц наиболее часто поражаются печень, селезенка, кишечник. Токсин возбудителя вызывает повреждения кровеносных сосудов; появляются геморрагии, образуются очажки некроза в паренхиматозных органах и селезенке. Поражается и центральная нервная система. У выздоравливающих птиц постепенно накапливаются комплементсвязывающие антитела, агглютинины, антигемагглютинины, и возбудитель исчезает из крови. Нейтрализующие антитела обнаруживаются нерегулярно, активность их незначительна.

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ - малохарактерны и наиболее выражены у молодняка. Болезнь протекает остро, подостро и хронически.

Инкубационный период от 3 дней до 3 месяцев и более. У всех видов птиц широта распространения болезни и ее течение зависят от многих неспецифических факторов, снижающих естественную резистентность организма.

Птицы-вирусоносители с латентной формой орнитоза, особенно домашние, внешне могут не отличаться от здоровой птицы, и только в случае резкого ухуд­шения условий содержания, снижающих резистентность орга­низма, латентная инфекция у них может перейти в явную, в результате чего воз­никает эпизоотия в птицехозяйстве.

Взрослые птицы в большинстве случаев вы­здоравливают. Менее резистентны к инфекции цыплята (молодняк), которые болеют острой формой. Потери их от заболевания составляют от 30 до 50%.

У попугаев при остром течении орнитоза отмечают сонливость, слабость, отсутствие аппетита, взъерошенность оперения, подъем температуры тела, конъюнктивит, дыхание затрудненное, хрипящее; появляется понос. Часть заболевших птиц (прежде всего молодняк) через 1—2 недели погибает при явлениях прогрессирующего истощения, параличей ног и крыльев. Но чаще болезнь протекает хронически—латентно или при слабо выраженных клинических признаках (истощение, слабость).

У взрослых особей голубей в основном течение заболевания - латентное. Реже у них отмечают конъюнктивит, ринит.

При хроническом течении отмечают снижение летных качеств голубей и массовой гибелью в гнездах 14-20 дневных птенцов с явлениями поноса и воспаления воздухоносных мешков.

У молодых голубей орнитоз протекает остро. Птенцы быстро слабеют, появляется понос, затрудняется дыхание; резко выражены признаки конъюнктивита. Через 2—3 дня может наступить смерть.

У уток, индеек, гусей понос, кахексия, кератит, конъюнктивит, пневмония. Летальность при распространении орнитоза среди утят и гусят может быть очень высокой.

Взрослые куры болеют чаще субклинически. При подостром течение наблюдается диарея, слюнотечение, конъюнктивит, кератоконъюнктивит (может проявляться иногда один признак).

У цыплят отмечают слабость, истощение, нарушение равновесия, конъюнктивиты и кератоконъюнктивиты, ринит, понос, позже параличи.

ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ - Орнитоз у птиц протекает как кишечная инфекция с первичным поражением кишечника и паренхиматозных органов. Соответственно в случае падежа при остром течении болезни устанавливают катаральное воспаление слизистой оболочки кишечника. Печень увеличена, иногда имеет шафранно-желтый цвет. В ней обнаруживают множественные некротические очажки величиною до зерна проса.

Селезенка темно-красная, сильно увеличена (иногда в несколько раз) и пронизана мелкими очагами некроза. Почки сероватого цвета, набухшие. Устанавливают также аэросаккулиты, перитонит, перикардит. В некоторых случаях серозные покровы слегка помутневшие, но чаще покрыты фибринозными наложениями. Очажки некроза могут быть и в слизистой оболочке кишечника, и в толще серозных оболочек, и даже в поджелудочной железе. Поражение легких (очаговая катаральная пневмония) обнаруживают очень редко, но воспалительные изменения слизистых оболочек верхних дыхательных путей встречаются почти постоянно.

Степень выраженности патологоанатомических изменений зависит от вирулентности возбудителя, от возраста и состояния птицы. У птиц, убитых при хроническом течении орнитоза, обычно отмечают лишь анемию слизистых оболочек и серозных покровов.

При гистологическом исследовании наблюдают очаговую пролиферацию ретикулярной стромы паренхиматозных органов, на фоне которой развиваются некрозы. В купферовских клетках печени, в мононуклеарах можно обнаружить элементарные тельца возбудителя.

ДИАГНОЗ – ставят на основании эпидемиологических, клинико-эпизоотологических данных, результатах патолого-анатомического вскрытия. Решающее значение имеют лабораторные исследования, направленные на обнаружение возбудителя или специфических антител.

В лабораторию для выделения вируса орнитоза от птицы на исследование посылают труп павшей птицы или для этого убивают больную птицу (применяя эфирное или хлороформенное наркотизирование). Труп каждой птицы для пересылки в лабораторию завертывают в несколько слоев марли (или ткани), смоченной 5%- ным раствором лизола или карболовой кислоты, затем кладут в клеенчатый мешок и в металлическую коробку с плотно закрывающейся крышкой.

Если транспортировка трупа птицы будет длиться более одного часа, надо обязательно обеспечить охлаждение коробки льдом.

Если на исследование могут быть посланы только органы птицы, тогда производится вскрытие тушки с соблюдением правил работы с особо опасными материалами. В бактериологические пробирки асептически собирают раздельно кусочки печени, селезенки или экссудат из брюшной полости и сердечной сумки.

При жизни можно исследовать носовой и конъюнктивальный секрет, фекалии, сыворотку крови.

В лаборатории проводят микроскопию мазков-отпечатков (из тканей селезенки, печени, из экссудата воздухоносных мешков), их окрашивают по Романовскому-Гимзе, Маккловелю для обнаружения элементарных телец.

При отрицательном результате проводят биопробу.

Испытуемым материалом заражают 5—7-дневные куриные эмбрионы (в желточный мешок), белых мышей (внутрибрюшинно, интрацеребрально) или тканевые культуры. В случае гибели эмбрионов (это бывает на 3—9-й день) возбудителя выявляют микроскопией. Зараженных мышей убивают на 6—8-й день и препараты из их органов и экссудатов исследуют с целью обнаружения элементарных телец. Если возбудитель не выявлен, делают новый пассаж на мышах. При работе с культурами клеток используют метод люминесцентной микроскопии с окраской препаратов акридином оранжевым.

Так же можно использовать аллергическую диагностику – для этого внутрикожно вводя аллерген, приготовленный из патматериала, уткам – в межчелюстное пространство, курсам в сережку. Через 36-48 часов у уток наблюдают красное пятно с плотным белым инфильтратом в центре. У кур – воспаление сережки. Продолжительность аллергии 3-7 дней.

Для диагностики латентных форм орнитоза исследуют сыворотку крови в РСК (при отрицательном результате нет антител). Можно использовать РИФ и ИФА.

Хламидиозы - разнообразные по патогенезу и клиническим проявлениям, распространенные заболевания человека и животных.

В последние десятилетия неуклонно возрастает роль в патологии человека, так называемых, антропонозных хламидиозов. Особенно большое значение приобретает урогенитальные хламидийные инфекции, которые относятся к числу наиболее распространенных заболеваний, передающихся половым путем. Они поражают мужчин и женщин, все чаще регистрируются у новорожденных, оказывают существенное влияние на репродуктивную функцию и часто являются причиной трубного бесплодия.

В связи с интенсификацией животноводства и птицеводства, созданием промышленных комплексов с высокой концентрацией животных, увеличивается потенциальная возможность возникновения крупных вспышек зоонозных хламидиозов, которые не только представляют серьезную угрозу для здоровья человека, но и наносят значительный экономический ущерб.

Следовательно, проблема хламидиозов приобретает все большее социально-экономическое и народнохозяйственное значение. Успешная организация борьбы с этими заболеваниями возможна лишь при условии их своевременного и полного выявления, а это, учитывая многообразие клинических форм, протекающих без патогномоничной симптоматики, представляет значительные трудности. В этой связи решающее значение в постановке диагноза приобретают методы лабораторной диагностики.

В настоящих Методических рекомендациях представлены основные методы лабораторной диагностики антропонозных и зоонозных хламидиозов с учетом возможности практической лабораторной службы.

Хламидии - грамотрицательные бактерии с облигатным внутриклеточным паразитизмом, характеризующиеся широким спектром естественных хозяев. Биологическое своеобразие хламидий, выражающееся в энергозависимом паразитизме и уникальном цикле развития, определяет самостоятельное положение этих микроорганизмов в системе прокариотов.

Хламидии выделены в отдельный порядок Chlamydiales, включающий одно семейство Chlamydiaceae содержащее один род Chlamydia, состоящий из 3 видов: C. trachomatis, C. psittaci, C. pneumoniae.

Вид C. trachomatis - объединяет микроорганизмы, вызывающие заболевания, главным образом, у человека (антропонозные хламидиозы). Они обусловливают разнообразную патологию урогенитального тракта, глаз и связанную с ней хламидийную инфекцию иной локализации у мужчин, женщин и детей.

Вид C. psittaci - включает микроорганизмы, первично поражающие животных. У человека они могут вызывать зоонозные хламидиозы (орнитоз, генерализованные инфекции, связанные с сельскохозяйственными и домашними животными).

Вид C. pneumoniae - включает микроорганизмы, вызывающие респираторную патологию и передающиеся от человека к человеку .

Идентифицирован в 1989 г., недостаточно изучен.

Основными морфологическими формами хламидий являются элементарные и ретикулярные тельца. Элементарные тельца - инфекционная форма, мелкие ригидные сферические клетки с плотным нуклеоидом, диаметр 0,25 - 0,35 мкм. Окрашиваются по Романовскому-Гимзе в фиолетово-красный цвет.

Ретикулярные тельца - вегетативная неинфекционная форма, пластичные сферические клетки с рыхлым нуклеоидом, диаметр 0,6 - 1,5 мкм. Окрашиваются по Романовскому-Гимзе в синий цвет.

Хламидии культивируют в желточных мешках развивающихся куриных эмбрионов, в первичных или перевиваемых культурах клеток; некоторые штаммы хламидий - в организме белых мышей, чаще при заражении в мозг. На искусственных питательных средах хламидии не размножаются. Их паразитизм обусловлен выраженной метаболитической зависимостью от клетки хозяина.

Цикл развития хламидий протекает в клетке-хозяине в "цитоплазматическом включении", представляющем собой микроколонию микроорганизма. В процессе цикла развития происходит преобразование элементарных телец в ретикулярные. Последние размножаются бинарным делением и преобразуются через переходные формы в элементарные тельца нового поколения микроорганизмов. Цитоплазматические включения и морфологические структуры хламидий выявляются при световой, люминесцентной и фазовоконтрастной микроскопии.

Хламидии имеют сложную антигенную структуру. Выделяют три основных антигенных комплекса. Родоспецифический термостабильный, липополисахаридный комплекс, характерный для всех представителей рода. Его детерминантной группой является кислый полисахарид. Родоспецифический антигенный комплекс локализуется в клеточной стенке хламидий. Видоспецифические и типоспецифические термолабильные белковые фракции. Видоспецифический антиген определяет принадлежность штаммов к соответствующему виду. Типоспецифические антигены позволяют дифференцировать различные серовары (серотипы) хламидий внутри вида.

Хламидии чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда, макролидам, рифампицину (рифадину), являющимися основными средствами этиотерапии хламидиозов. Пенициллин и его производные вызывают образование Л-подобных форм микроорганизмов, способных реверсировать в инфекционные.

Хламидии быстро инактивируются под действием высокой температуры: при 60 °C - в течение 15 мин., при 80 °C - через 10 мин., при кипячении - через 3 мин. Материал, содержащий штаммы C. psittaci, может быть обеззаражен в течение 3 часов при комнатной температуре: фенолом (1% р-р), хлорамином (3% р-р), лизолом (3% р-р), марганцевокислым калием (1:500), формалином с содержанием 38 - 40% формальдегида.

"Урогенитальные штаммы" хламидий, C. trachomatis, высокочувствительны к 70° этанолу, растворам - 2% лизола, 0,05% серебра нитрата, 0,1% калия йодида, 0,5% калия перманганата, 25% перекиси водорода и инактивируются при комнатной температуре в течение 2 сут. Хлорамин в 3% концентрации инактивирует в течение 1 мин.

2.1. Методы лабораторной диагностики урогенитальных хламидиозов и связанных с ними заболеваний иной локализации.

Для диагностики этих инфекций используют бактериоскопический, бактериологический и серологические методы исследования. Техника лабораторных исследований приведена в Приложении I.

2.1.1. Бактериоскопический метод.

Бактериоскопическое исследование предполагает выявление хламидий, их морфологических структур и антигенов в пораженных клетках (клиническом материале).

Материалом для исследования служат соскобные препараты с доступных исследованию слизистых оболочек мочеполовых (уретра, шейка матки и т.п.) и других органов (конъюнктива, прямая кишка и пр.) при экстрагенитальных формах. Из исследуемого материала готовят мазки, которые окрашивают по Романовскому-Гимзе. Цитоплазматические включения хламидий (тельца Гальберштедтера-Провачека) содержат или крупные ретикулярные тельца, или мелкие элементарные тельца. Они по цвету и внутренней структуре отличаются от ядра клетки и цитоплазмы. Для постановки диагноза хламидийной инфекции достаточно обнаружить одно типичное цитоплазматическое включение. Метод характеризуется сравнительно низкой чувствительностью, позволяет диагностировать от 10 - 20% случаев урогенитальной инфекции. При хламидийной патологии глаз чувствительность способа составляет 90 - 100%.

Применение люминесцирующих поликлональных и моноклональных антител для выявления антигенов хламидий в цитоплазматических включениях в соскобных препаратах урогенитального тракта значительно увеличивает чувствительность и специфичность метода. С этой целью можно использовать как прямой, так и непрямой иммунофлуоресцентный метод. Первый предполагает обработку препарата непосредственно специфическими люминесцирующими моно- или поликлональными антителами, второй - иммунной и антивидовой флуоресцирующей сыворотками. При люминесцентной микроскопии антигены хламидий выявляют на красном или оранжевом фоне (при контрастировании синькой Эванса или родамином) цитоплазмы эпителиальных клеток в виде внутриклеточных включений ярко-зеленого цвета.

Метод отличается высокой информативностью и уступает по чувствительности только бактериологическому (выделение хламидий в клеточных культурах).

2.1.2. Бактериологический метод.

Бактериологический метод основан на выделении хламидий из исследуемого материала путем заражения куриных эмбрионов или клеточных культур с последующей идентификацией возбудителя. Исследуемый материал тот же, что и при бактериоскопическом методе. Для удаления сопутствующей бактериальной флоры клинический материал помещается в специальные транспортные среды, содержащие антибиотики, не влияющие на жизнеспособность хламидий. Способ может быть использован в течение всего периода заболевания. Особенно эффективен при острых формах, на ранних этапах инфекции до начала антибиотикотерапии.

2.1.2.1. Выделение хламидий на куриных эмбрионах.

Исследуемым материалом заражают 6 - 8-дневные куриные эмбрионы в полость желточного мешка. Наличие возбудителя определяют микроскопией мазков - отпечатков тканей оболочек желточного мешка, окрашенных по Маккиавелло, а также специфическими люминесцирующими поли- и моноклональными антителами.

2.1.2.2. Выделение хламидий в культурах клеток.

Выделение хламидий в культуре клеток проводят в 24-часовом монослое культуры клеток (L-929, McCoy, Hela), предварительно обработанном ДЕАЕ-декстраном (30 мкг/мл) в течение 30 мин. При инокуляции исследуемого материала на монослой применяют метод принудительной адсорбции - центрифугирование при 3000 об./мин. в течение часа. После центрифугирования неадсорбированный материал удаляют при промывании средой 199 без сыворотки и дальнейшее культивирование в течение 48 - 72 часов проводят при t = 36 °C в среде 199 с 5% фетальной сыворотки, 5% 0,5 М раствора глюкозы и 0,5 - 1,0 мкг/мл циклогексимида.

Оценку результатов проводят через 48 - 72 ч методами ПИФ (при использовании специфических люминесцирующих поли- и моноклональных антител), МГГ (при окраске Май-Грюнвальд-Гимза), Люголя (окраска раствором Люголя).

При исследовании препаратов инфицированных культур клеток хламидии выявляются в виде характерных цитоплазматических включений, окрашенных в соответствующий методу цвет. Выявление хотя бы одного цитоплазматического включения, имеющего специфическое окрашивание, форму и структуру достаточно для определения хламидийной инфекции в исследуемом объекте. По специфичности метод диагностического выделения хламидий в культуре клеток является эталонным.

2.1.3. Серологические методы диагностики.

Методы серологической диагностики основаны на выявлении специфических антител в сыворотке крови, а также в секретах больных и переболевших. Для серодиагностики обычно используют реакцию связывания комплемента (РСК), непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) и реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Учитывая низкую иммуногенность "урогенитальных штаммов" хламидий при локализованных формах инфекции, возможность наличия антител, связанных с ранее перенесенной хламидийной инфекцией, необходимо исследовать несколько проб сыворотки в динамике заболевания с интервалом в 2 - 3 недели. Первую пробу забирают в момент обращения больного к врачу. Интерпретацию результатов серологического обследования следует проводить в совокупности с анализом клинико-эпидемиологических данных, а также с учетом особенностей использованного серологического теста. Оптимальным является параллельное применение нескольких серологических реакций. Эти серологические тесты могут быть также использованы для проведения эпиднадзора за хламидиозами.

РСК - выполняется с коммерческим диагностикумом, который выпускается Одесским предприятием по производству бактерийных препаратов Минмедпрома СССР. В РНГА и РНИФ - более эффективных серологических тестах, разработанных и успешно апробированных в последние годы, используются экспериментальные серии соответствующих препаратов, подготовленных к промышленному выпуску. Техника постановки этих реакций приведена в Приложении II.

2.1.3.1. Реакция связывания комплемента.

РСК проводят с родоспецифическим антигеном возбудителя орнитоза. Эту реакцию используют для диагностики так называемых "генерализованных" (осложненных) форы урогенитальных хламидиозов, венерической лимфогранулемы и ряда экстрагенитальных хламидийных поражений (болезнь Рейтера, пневмония новорожденных). При локализованных поражениях (уретрит, цервицит и т.п.) РСК недостаточно чувствительна.

2.2. Методы лабораторной диагностики орнитоза и других зоонозных хламидиозов у людей.

Поскольку методы диагностики орнитоза и других зоонозных хламидиозов аналогичны, то в последующем изложении материала использован только один термин - орнитоз.

Для диагностики орнитоза у людей и птиц используют бактериологический, серологический и кожно-аллергический методы исследования. Техника лабораторных исследований и постановки полной аллергической пробы приведены в Приложении I.

2.2.1. Бактериологическое исследование.

Возбудитель орнитоза по патогенности для человека относится к микроорганизмам II группы ("Положение о порядке учета, хранения, обращения, отпуска и пересылки культур бактерий, вирусов риккетсий, грибов, простейших, микоплазм, бактерийных токсинов, ядов биологического происхождения" утверждено МЗ СССР 18.05.1979), поэтому выделение возбудителей может проводиться только в лабораториях медицинского и ветеринарного профиля, имеющих разрешение режимной комиссии на работу с возбудителями второй группы патогенности со строгим соблюдением соответствующих режимных условий ("Инструкция о противоэпидемическом режиме работы с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителями инфекционных заболеваний I - II группы патогенности" утверждена МЗ СССР 29.06.1978).

Для выделения возбудителя орнитоза от больных в качестве исследуемого материала используют кровь или мокроту. Изоляция возбудителя возможна из крови на протяжении первых 7 - 10 дней, из мокроты - 14 - 20 дней заболевания. Применение антибиотиков широкого спектра действия для лечения больных значительно снижает возможность выделения возбудителя орнитоза. При исследовании секционного материала чаще используют кусочки печени, легкого.

Патологический материал, полученный от людей, используют для заражения мышей чаще в мозг или внутрибрюшинно и развивающихся куриных эмбрионов - в желточный мешок. Наличие возбудителя контролируют микроскопией мазков-отпечатков мозговой ткани (или внутренних органов) зараженных мышей и оболочек желточных мешков зараженных куриных эмбрионов, окрашенных различными способами: по Романовскому-Гимзе, Маккиавелло, акридином оранжевым или специфическими люминесцирующими поли- или моноклональными антителами.

Тот же патологический материал можно использовать для выделения возбудителя орнитоза в монослойных культурах различных клеток (фибробласты куриных эмбрионов, клетки L-929, Hela-229, Hep-2 и другие).

В этом случае первичными критериями диагностического выделения хламидий является обнаружение типичных для этих микроорганизмов морфологических и тинкториальных характеристик, а также содержание родоспецифического хламидийного антигена, определяемого в реакции иммунофлуоресценции.

2.2.2. Серологические методы исследования.

Серологические методы являются основными средствами практической диагностики орнитоза. Они могут применяться без ограничений в различных лабораториях медицинского профиля.

Традиционно используют реакцию связывания комплемента (РСК), диагностические препараты для которой (антиген специфический, контрольный и диагностическую сыворотку) выпускает Одесское предприятие по производству бактерийных препаратов Минмедпрома СССР.

В последние годы разработаны, успешно апробированы и другие, более информативные тесты (реакция непрямой гемагглютинации - РНГА, реакция непрямой иммунофлуоресценции - РНИФ, иммунофлуоресцентная реакция микроагглютинации - ИФРМА, иммуноферментный метод - ИФА), в них используются экспериментальные серии препаратов. Техника постановки этих реакций приведена в Приложении II.

Для серологической диагностики орнитоза у людей наиболее широко применяют РСК, РНГА и РНИФ.

В целях дифференциации серологических показателей текущей орнитозной инфекции от анамнестических реакций и естественной иммунизации, серологическое обследование на орнитоз необходимо проводить неоднократно, с интервалом 10 - 14 дней. Наиболее информативным является использование комплекса серологических реакций. Бесспорным основанием для постановки диагноза орнитоза у больных является обнаружение сероконверсии - 4-кратное повышение титра хламидийных антител. Вместе с тем более низкие показатели титра антител во 2 или 3 пробе сыворотки могут быть следствием косвенного влияния интенсивной антибиотикотерапии. В этих случаях достоверное увеличение титра антител в 2 - 3 раза может оцениваться в качестве диагностического показателя.

Положительные результаты серологических реакций без сероконверсий оценивают с учетом особенностей каждого конкретного случая, во взаимосвязи с клиническими показателями и эпидемической ситуацией.

2.2.2.1. Реакция связывания комплемента (РСК).

РСК ставят с родоспецифическим антигеном возбудителя орнитоза (выпускается Одесским предприятием по производству бактерийных препаратов Минмедпрома СССР).

Комплементсвязывающие антитела определяют у больных людей к 10 - 15 дню болезни, обычно в невысоком титре (1:16). Нарастание титра антител наблюдают в течение 4 - 6 недель и их снижение - через 3 - 6 месяцев. Антитела нередко выявляют в крови переболевших 1 - 2 года, а иногда и более длительный срок.

При однократном обследовании или при отсутствии нарастания уровня антител в динамике показатель их титра 1:64 может оцениваться диагностическим при наличии соответствующих клинико-эпидемиологических данных. Определение в этих условиях меньших титров антител требует индивидуального анализа и может быть использовано для подтверждения клинико-эпидемиологического диагноза. При обследовании "профессионально угрожаемых" коллективов комплементсвязывающие антитела могут обнаруживаться и в сыворотках клинически здоровых людей. Их выявление на фоне благополучной эпидситуации, при отсутствии клинически выраженных случаев орнитоза, может быть связано с ранее перенесенным орнитозом, с естественной иммунизацией за счет постоянного контакта с микродозами возбудителя (прямая зависимость от стажа работы обследуемых на предприятии), а также с другими хламидийными инфекциями.

2.2.3. Кожно-аллергический метод.

Для диагностики орнитоза у людей может быть использована кожно-аллергическая проба с орнитозным аллергеном (выпускается Одесским предприятием по производству бактерийных препаратов Минмедпрома СССР). Внутрикожная проба с орнитозным аллергеном становится положительной с первых дней заболеваний у 87 - 95% больных, сохраняясь до года и более. Она является чувствительным индикатором эпидемиологического неблагополучия в коллективах, профессионально связанных с птицей. С увеличением стажа работы повышается вероятность обнаружения сенсибилизации к орнитозному аллергену и процент положительных находок по внутрикожной пробе возрастает. Положительные реакции могут определяться у здоровых лиц, профессионально связанных с птицами, что можно объяснить перенесенным в прошлом заболеванием, латентной формой инфекции, естественной иммунизацией.

Специфичность внутрикожной пробы на введение орнитозного аллергена на одной руке подтверждается отсутствием реакции на введение контрольного субстрата на другой.

Учитывая высокий уровень аллергизации населения и возможность развития неспецифических реакций, оценку результатов кожной пробы у людей проводят при комплексном учете данных других диагностических тестов и клинико-эпидемиологических показателей.