Противовоспалительная фаза инфекционного процесса обеспечивается интенсивной продукцией

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Маркелова Е. В., Скляр Л. Ф., Иванис Виктория Александровна

В последние годы вопросы патогенеза различных инфекционных болезней рассматриваются с позиций клинической иммунологии. Изучение механизмов патогенеза острых и хронических вирусных инфекций на примере геморрагической лихорадки с почечным синдромом и хронического вирусного гепатита С показывает иммуноопосредованность развития инфекционного процесса. Дисбаланс системного и локального цитокинового статуса характеризует прямое влияние иммунной системы на функцию всех органов и систем макроорганизма, определяет тяжесть, течение и прогноз заболевания

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Маркелова Е. В., Скляр Л. Ф., Иванис Виктория Александровна

In the last years immunological aspects are studying in the pathogenesis of infectious diseases . The influence of immune response to the infectious processes of acute and chronic virus infectious (Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome and Chronic Viral Hepatitis C, as an example) has been revealed. Misbalance of system and local cytokine status characterizes the direct influence of immune system to all organs and systems of human organism. It determines the severity of the disease and its outcomes

Инфекция и иммунитет 2011, Т. 1, № 4, с. 373-377

ЗНАЧЕНИЕ ИММУННЫХ МЕХАНИЗМОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ НЕКОТОРЫХ ОСТРЫХ

И ХРОНИЧЕСКИХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИИ

В.А. Иванис, Е.В. Маркелова, Л.Ф. Скляр

ГОУ ВПО Владивостокский государственный медицинский университет Росздрава, г. Владивосток

Резюме. В последние годы вопросы патогенеза различных инфекционных болезней рассматриваются с позиций клинической иммунологии. Изучение механизмов патогенеза острых и хронических вирусных инфекций на примере геморрагической лихорадки с почечным синдромом и хронического вирусного гепатита С показывает иммуноопосредованность развития инфекционного процесса. Дисбаланс системного и локального цитокинового статуса характеризует прямое влияние иммунной системы на функцию всех органов и систем макроорганизма, определяет тяжесть, течение и прогноз заболевания.

Ключевые слова: патогенез, инфекции, иммунные нарушения, цитокины.

SIGNIFICANCE OF IMMUNE MECHANISMS IN PATHOGENESIS OF SOME ACUTE AND CHRONIC VIRAL INFECTIOUS DISEASES

Ivanis V.A., Markelova E.V., Sklyar L.F.

Abstract. In the last years immunological aspects are studying in the pathogenesis of infectious diseases. The influence of immune response to the infectious processes of acute and chronic virus infectious (Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome and Chronic Viral Hepatitis C, as an example) has been revealed. Misbalance of system and local cytokine status characterizes the direct influence of immune system to all organs and systems of human organism. It determines the severity of the disease and its outcomes. (Infekc. immun., 2011, vol. 1, N 4, p. 373—377)

Key words: pathogenesis, infectious diseases, immune imbalances, cytokines.

В последние годы вопросы патогенеза различных инфекционных болезней рассматриваются с позиций клинической иммунологии, изучающей механизмы патологических процессов с учетом регуляции иммунологического гомеостаза [7, 16]. Первоначально представления об иммунологии складывались исключительно как о системе, обеспечивающей защиту организма от интервенции генетически чужеродных биологических структур, способных нарушить его физиологические функции и вызвать заболевание. В дальнейшем была показана тесная связь нейроэндокринной и иммунной систем в процессе формирования стресс-реакции и способности иммунной системы контролировать разнообразные не иммунные процессы [11, 12]. Клиническая форма, тяжесть, прогноз, осложнения и другие аспекты инфекционного заболевания определяются в большей мере не инициатором-возбудителем и механизмами ин-

поступила в редакцию 24.06.2011 принята к печати 28.06.2011

Адрес для переписки:

Иванис Виктория Александровна, д.м.н., профессор кафедры инфекционных болезней ВГМУ

690002, г. Владивосток, пр. Острякова, 2, ГОУ ВПО ВГМУ Росздрава.

Тел.: (4232) 25-64-44.

В.А. Иванис, Е.В. Маркелова, Л.Ф. Скляр

Инфекция и иммунитет

специализированная функциональная активность клеток. Свойства цитокинов и функционирование цитокиновой сети подробно описаны в литературе [2, 5]. Все цитокины имеют ряд общих биохимических и функциональных характеристик, среди которых важнейшими считаются плейотропность и взаимозаменяемость биологического действия, отсутствие антигенной специфичности, проведение сигнала путем взаимодействия со специфическими клеточными рецепторами, формирование цитоки-новой сети [4]. Индукция синтеза цитокинов является событием раннего воспалительного ответа. Накапливаясь в очаге воспаления, цитокины воздействуют практически на все клетки, участвующие в этой реакции, включая гра-нулоциты, макрофаги, фибробласты, клетки эндотелия и эпителия, Т- и В-лимфоциты [14]. Спектр и уровень синтезируемых цитокинов связаны с природой этиологического фактора, тяжестью и распространенностью патологического процесса.

Наши исследования, проведенные совместно на кафедрах инфекционных болезней и патологической физиологии, касаются изучения вопросов иммунопатогенеза наиболее актуальных инфекционных заболеваний Приморского края — геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) и хронического вирусного гепатита С (ХВГС). ГЛПС, одна из нозоформ хантавирусной инфекции, — природно-очаговая вирусная инфекция с преимущественным респираторным путем инфицирования, значение которой для здравоохранения Приморского края весьма велико. Это объясняется наличием природного очага на территории края, обусловленного циркуляцией хантавируса серотипов Хантаан, Амур и стабильно высокую заболеваемость среди городского населения, вызванную серотипом Сеул, а также наличием эпидемических вспышек, высокой летальностью. Хан-таан- и Амур-инфекции свойственно тяжелое течение болезни, нередко с осложнениями и летальными исходами (3—5%), Сеул-инфекция протекает более благоприятно. Другие нозо-формы хантавирусной инфекции — хантави-русный кардио-легочный синдром (ХКЛС), ассоциированный с вирусом Син-Номбре, а также Добрава- и Пуумала-инфекции в Приморском крае не зарегистрированы [1, 9, 10]. Нами показано, что ГЛПС — инфекция с иммуноопосредованным механизмом патогенеза. Ключевым и инициирующим фактором патогенеза ГЛПС принято считать виремию, хотя известно, что хантавирус обладает уникальным свойством реплицироваться в клетках без прямого повреждающего (цитопатогенного) эффекта. Особенности серотипа хантавируса и его кинетика в инфекционном процессе являются важными пусковыми, но не единственными звеньями

Иммунные механизмы в патогенезе инфекций

мунных реакций клеточного типа. Разнообразие клинико-патофизиологических синдромов ГЛПС возможно объяснить многочисленными прямыми или индуцибельными эффектами цитокинов, их полифункциональностью и плейо-тропностью действия, определяющими характер и глубину патологии. Тяжелым формам ГЛПС свойственен преимущественно TM-зависимый клеточный ответ, основой которого является деструкция и гибель клетки со всем ее содержимым, включая вирус. Системная избыточная продукция провоспалительных цитокинов ведет к развитию к инфекционнотоксического шока, ДВС-синдрома, острой почечной недостаточности в ранние сроки болезни у этой категории больных. Легкие формы отличались одновременным сбалансированным повышением цитокинов, характеризующих оба клона Т-хелперов (Th1 и Th2).

Хронические вирусные инфекции характеризуются еще более сложным и вариабельным комплексом иммунных реакций. Таким актуальным заболеванием является вирусный гепатит С в связи с его широким распространением, частотой хронизации и неизбежностью неблагоприятных исходов. В патогенезе хронических вирусных инфекций принципиальны два основных фактора: стадия жизнедеятельности вируса и характер иммунного ответа макроорганизма [8]. Вирусы для обеспечения сохранения себя как биологического вида используют пути, позволяющие им избежать действия защитных реакций организма, подавляя индукцию иммунного ответа. С одной стороны, репликация вирусов в иммунонеприкосновенных местах, какими являются сами клетки иммунной системы, позволяет вирусам избегать иммунного надзора. С другой стороны, инфицирование вирусами иммуноцитов нарушает их функцию, что в свою очередь играет важную роль в патогенезе поражения органов и систем, к которым эти вирусы тропны. Одним из свойств вирусов, выработавшихся в результате длительной коэволюции, как раз и является способность модулировать иммунный ответ в пользу реакций Т-хелперного-2-типа во время ранней фазы заболевания и склонять течение инфекции в сторону хронизации, чем, вероятно, и объяснятся феномен длительной персистенции. Вирус гепатита С является ярким представителем таких инфекционных агентов, способных длительно персистировать в организме человека и индуцировать развитие хронического заболевания. В патогенезе ХВГС немаловажную роль играют иммунологические нарушения, которые возникают первично (поражение вирусом иммунокомпетентных клеток) или вторично (функционально-морфологическая дезорганизация иммунной системы). Вирус стимулирует образование пептидов, являющихся функцио-

нальными антагонистами Т-лимфоцитов, что обусловливает снижение хелперной и цитотоксической активности клеток и, в совокупности со слабой иммуногенностью вируса, не приводит к его элиминации, а потенцирует последующую хронизацию процесса [8]. Иммунитет при ХВГС не обеспечивает контроль над инфекционным процессом. В условиях персистенции гипервариабельного вируса регуляторный дисбаланс в иммунной системе чаще формируется вторично и приводит к более тяжелым последствиям, чем сам факт инфицирования вирусом клеток. Другой механизм, который обеспечивает развитие иммунной недостаточности — развитие анергии соответствующих клеток. Факторами, способствующими возникновению функциональной клеточной анергии, обычно выступают регуляторные молекулы различных биологических систем организма: циклические нуклеотиды, медиаторы воспаления, цитокины, клеточные супрессорные факторы [3]. При ХВГС, так же как и при ВИЧ-инфекции, отчетливо проявляется еще одна форма количественного и качественного дисбаланса в иммунной системе — нарушение процессов клональной активации. В этом случае при развитии адаптивного иммунного ответа вместо избирательного (селективного) реагирования специфичных к конкретному антигену лимфоидных клонов развивается их поликлональная активация. В то же время основной механизм повреждения печени при ХВГС — иммунологический, обусловленный цитотоксическими Т-лимфоцитами.

Полученные нами результаты свидетельствуют о достоверном увеличении в сыворотке крови больных ХВГС уровней IL-1a, IL-4, IL-10, ^-12р40, ^-12р70, TNFa и уменьшении содержания IL-2 и IFNy. Эти данные согласуются с результатами исследований, которые свидетельствуют об изменении баланса цитокинов Т-хелперов в пользу повышения продукции цитокинов Т-хелперами 2-го типа, что объясняется постоянной активацией иммунокомпетентных клеток при длительной вирусной персистенции и преобладанием соответствующего пути иммунного ответа. В свою очередь активированные Т-хелперы 2-го типа способны усиливать секрецию IL-10, который может влиять на гуморальное звено иммунитета, одновременно подавляя продукцию Т-клетками IL-2, что установлено в нашем исследовании. Следовательно, дисбаланс цитокиново-го профиля играет значимую патогенетическую роль в формировании неполноценного иммунного ответа на фоне персистирующего инфекционного процесса и, в конечном итоге, хронизации вирусной инфекции. Как показали результаты наших исследований, изменение содержания Т-хелперных цитокинов на локальном (супернатанты печеночной ткани, в которых основными

В.А. Иванис, Е.В. Маркелова, Л.Ф. Скляр

Инфекция и иммунитет

продуцентами цитокинов являются макрофаги и клетки ретикулоэндотелиальной системы печени) и системном уровнях при ХВГС носило однонаправленный характер [8]. При этом преобладала локальная концентрация таких цитокинов, как IL-4, ^-12р40 и TNFa над сывороточными показателями — более чем в 15 раз по сравнению с уровнем группы контроля, и она напрямую зависела от выраженности фиброза (табл. 1). Преобладание уровня локальных цитокинов может быть связано и с нарушением их инактивации поврежденной печенью, что частично позволяет объяснить полученные результаты [6, 8]. При этом установлена достоверная связь уровней IL-4 и TNFa в сыворотке крови и супернатанте печени с клиническими показателями, отражающими активность системного воспалительного процесса при ХВГС. Это можно объяснить в рамках концепции активации клеток макрофагальной системы, сопровождающейся реактивным увеличением размеров печени, селезенки, лимфоузлов (за счет увеличения пула тканевых макрофагов) на фоне повышенной секреции провоспалительных цитокинов. Именно этим можно объяснить также высокую степень выявленных корреляционных связей между выраженностью фиброза и концентрацией TNFa, IL-10 и ^-12р70 на системном и локальном уровнях (табл. 2). Следовательно, определение концентраций указанных

цитокинов в сыворотке крови является альтернативным методом неинвазивного скрининга фиброза печени.

Таким образом, патогенетические механизмы развития инфекционных болезней, как острых, так и хронических, включают сложный и разнообразный комплекс иммунных реакций. При этом иммунная система макроорганизма далеко не всегда несет чисто защитную или ограничительную функцию. Гиперактивность иммунного ответа предполагает развитие иммунопатологических реакций, деструктивных процессов в тканях, тяжелого течения инфекций с ургент-ными состояниями и неблагоприятным прогнозом. Огромное значение в регуляции иммунных реакций имеет баланс между макроорганизмом и инфекционным агентом, который определяется рядом факторов: особенностями антигенной структуры и концентрацией возбудителя (антигена), его тропностью к определенным тканям, а также системой контролируемых иммунных реакций. Такой системой является универсальная цитокиновая сеть, которая осуществляет регуляторную связь между иммунной, нервной, эндокринной, кроветворной и другими системами. Цитокины являются той организующей системой, которая формирует и регулирует весь комплекс иммунных реакций организма при внедрении патогенов.

ТАБЛИЦА 1. ДИНАМИКА ЦИТОКИНОВ В РАЗЛИЧНЫХ БИОСУБСТРАТАХ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТАДИИ ФИБРОЗА ПРИ ХВГС

ФИБРОЗ IL-1a IL-2 IL-4 IL-10 ^-12р40 12р70 TNFa IFNy

Сыворотка F0 2T - - 2T - 2T 2T -

FI 3T - 4T 3T 2T 5T 3T 2i

FII 10T 1,5 i 5T 5T 3T 10T 5T 3i

FIII 12T 2i 7T 9T 4T 14T 7T 10i

Супернатант F0 - - - - 3T 0,5T 2T -

FI 4T - 4T 0,5T 8T 3T 10T 2i

FII 5T - 8T 2T 30T 6T 20T 2i

FIII 6T 3i lot 3T 300T 10T 50T 2i

ТАБЛИЦА 2. КОЭФФИЦИЕНТЫ КОРРЕЛЯЦИИ (R) И УРОВНИ ИХ ЗНАЧИМОСТИ (Р) МЕЖДУ ВЫРАЖЕННОСТЬЮ ФИБРОЗА (F) И ПОКАЗАТЕЛЯМИ СОДЕРЖАНИЯ СЫВОРОТОЧНЫХ И ЛОКАЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ ПРИ ХВГС

ЦИТОКИНЫ Сыворотка Супернатант печени

FI (1-4) FII (5-8) FIII (9-12) FI (1-4) FIII 5-8) FIII (9-12)

R p R p R p R p R p R p

IL-1a 0,1 0,8 0,09 0,7 0,65 0,01 0,14 0,7 0,33 0,2 0,68 0,001

IL-2 -0,26 0,4 -0,33 0,2 -0,49 0,1 -0,28 0,4 -0,22 0,4 -0.95 0,001

IL-4 0,97 0,001 0,87 0,001 0,98 0,001 0,95 0,01 0,89 0,001 0,97 0,001

IL-10 0,96 0,001 0,93 0,001 0,94 0,001 0,91 0,01 0,92 0,001 0,94 0,01

Ы2р40 0,1 0,8 0,99 0,001 0,97 0,001 0,18 0,6 0,9 0,7 0,93 0,001

IL-12р70 0,94 0,01 0,93 0.001 0,98 0,001 0,94 0,01 0,99 0,01 0,98 0,001

TNFa 0,87 0,001 0,9 0,001 0,98 0,01 0,93 0,01 0,9 0,01 0,98 0,001

IFNy -0,76 0,001 -0,67 0,01 -0,48 0,1 -0,17 0,6 -0,3 0,2 -0,96 0,001

Иммунные механизмы в патогенезе инфекций

1. Иванис В.А. Современные представления о патогенезе хантавирусной инфекции // Тихоокеан. мед. журн. — 2008. — № 2. — С. 15—19.

2. Козлов В.А. Некоторые аспекты проблемы цитокинов // Цитокины и воспаление. — 2002. — Т. 1, № 4. — С. 5-8.

3. Маркелова Е.В., Костюшко А.В., Красников В.Е. Патогенетическая роль нарушений в системе цитокинов при инфекционно-воспалительных заболеваниях // Тихоокеан. мед. журн. — 2008. — № 3. — С. 24-29.

4. Назаров П.Г. Реактанты острой фазы воспаления. — СПб.: Наука, 2001. — 423 с.

5. Носик Н.И. Цитокины при вирусных инфекциях // Вопр. вирусол. — 2000. — Т. 45, № 1. — С. 4-10.

6. Поповцева О.Н., Юдина С.М., Стародубова Н.И., Степаненко И.В., Науаф О.С. Диагностическое значение определения цитокинов при вирусных инфекциях // Цитокины и воспаление. — 2002. — Т. 1, № 2. — С. 125.

7. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология: Пер. с англ. — М.: Мир, 2000. — 592 с.

8. Скляр Л.Ф., Маркелова Е.В., Полушин О.Г., Токмалаев А.К., Попов А.Ф. Хроническая НСУ-инфекция: современные иммуноморфологические аспекты. — М: Изд-во Российского университета дружбы народов, 2006. — 81 с.

9. Слонова Р.А. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом на юге Дальнего Востока России (вирусологические и эколого-эпидемио-

логические аспекты): Дис. . д-ра мед. наук. — М., 1993. — 342 с.

10. Слонова Р.А., Ткаченко Е.А., Иванис В.А. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом. — Владивосток: Изд-во ОАО Примполиграфком-бинат, 2006. — 246 с.

11. Тотолян А.А., Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы. — Т. 1-2. — СПб.: Наука, 2000. — 231 с.

12. Фрейдлин И.С., Тотолян А.А. Клетки иммунной системы. — Т. 3-5. — СПб.: Наука, 2001. — 390 с.

13. Фрейдлин И.С., Шейкин Ю.А. Эндотелиальные клетки в качестве мишеней и продуцентов цитокинов // Медицинская иммунология. — 2001. — Т. 3, № 4. — С. 499-514.

14. Черешнев В.А., Юшков Б.Г., Климин В.Г., Лебедева Е.В. Иммунофизиология. — Екатеринбург: УрО РАН, 2002. — 257 с.

15. Klingstrom J., Plyusnin A., Vaheri A., Lundkvist A. Wild type Puumala hantavirus infection induses cytokines, C-reactive protein, creatinine, and nutric oxide in cytomolgus macagues // J. Virol. — 2002. — Vol. 76, N 1. — P. 444-449.

Автореферат диссертации по медицине на тему Варианты реакции иммунной системы детей на острые респираторно-вирусные инфекции

На правах рукописи

Железншсова Галина Федоропиа

ВАРИАНТЫ РЕАКЦИИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ДЕТЕЙ НА ОСТРЫЕ РЕСПИРАТОРНО-ВИРУСНЫВ ИНФЕКЦИИ

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте детских инфекций Министерства здравоохранения РФ

Научный консультант: академик РАМН, профессор Б.Ф.Ссменов

доктор медицинских наух П.Г.Назаров

доктор медицинских наук В.С.Смирнов

доктор медицинских наук, профессор В.М.Шубик

Научно-исследовательский инеппут гриппа РАМН

Защита состоится 1997 г. в 43" часов

на заседании диссертационного совета Д.001.23.02 по защите диссертаций, представленных на соискание ученой степени доктора наук при Научно-исследовательском институте экспериментальной медицины РАМН (197376, Санкт-Петербург, ул. акад. И.П.Павлова, 12)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ ЭМ РАМН.

А ытореферат разосла н " 1996 г.

Ученый секрегарь диссертационного совета, докгор медшишекгъч тук

В связи с этим требует переосмысления феномен "вирусинлуци-рованной" нммуиосупресснн как необходимый компонент ИО, ведущий к оптимизации взаимодействия микро- н макроорганизма /Фон-талин Л.Н., 1986/. Давно установлено, что неспецнфическая иммуио-супрессия (НИС), развивающаяся при многих вирусных (и невирусных) инфекциях,не препятствует формированию специфического ИО /Семенов Б.Ф. и соавт, 1982, Семенов Б.Ф., Варгин В.В., 1989/.

В свете современной концепции о гетерогенности популяции Т-хслперов (Тх) /Mossmah et at., 1986/ становится ясным, что проявления нммуйосупрессин органически присуши самому процессу иммуногенеза как результат взаимной негативной регуляции альтер нативныч клонов tx - 1-го И 2-го типа, контролирующих, соответственно, клеточные и гуморальные формы ИО. При этом супрессия может быть неспецифичной в отношении индуцирующего ИО антигена (АГ) из-за вовлечений й процесс некоммитированны* иммуно-компетеитНЫх клеток (ИКК).

Однако механизмы развития НИС многообразны; а патогенетическая роль ее конкретных проявлений требует уточнения, что делает актуальным Изучение этого феномена в рамках Исследования имму-нопатогенеза инфекционных заболеваний человека.

Хорошо известно сйоеОбразйе иммунных реакций организма в . раннем ностнатальмом онтогенезе, связанное с Незрелостью функций самих ИКК и регуяяторных механизмов ИО /Михайлова З.М., 1986, Вельтишев Ю.Е., 1990, Воронцов И.М., 1990/. Несовершенство механизмов протйвоинфекционной защиты является основной причиной тяжелого течения острых инфекций у детей, как и повышенной их. заболеваемости при инфицировании такими распространенными в природе агентами, как респираторные вирусы (РВ). В связи с лег-

коетью формирования у детей вторичных иммунодефнцитов вследствие перенесенных инфекционных заболеваний. именно в клинике детских инфекции особый ni порее приобретает изучение патогенетических механизмов 111 1С.

В методологическим отношении назрела необходимость иммунологического исследования, построенного по патогенетическому принципу с оценкой способности ИКК к активации. пролиферации, продукции цнтокинои н дифференцнроике /Ковальчук J1.В., Чередеев Л.П.. 1990, 1995/.

Для-Hinсгралыюй оценки реактивности ИКК н клинической иммунологии давно и с успехом применяется реакция бласпранс-формации лимфоцитом на фнтогемаплюгппнн (ФГА-РЬТЛ) /ЗареЦкая Ю.М.. 1983, Лесннцкнй Л.1. 1985. Гергсрт В.Я. и соавт.. 1995. Ляшен-ко В.Д.. 1996/. Высокая информативной ь ною теста, по-видимому, обусловлена тем. что в реакции.участвуют все коо иерируюШие в ПО популяции ИКК- макрофаги. Т- и П-лимфоцц:ы /Bloemeiia et al.. 1990/, а величина ФГЛ-РЫ Л коррелируе! со dio собност ью Т-лимфоцитов продуцирован, важнейший фактор регуляции их пролиферации и днфференцнровки - ИЛ-2 /Powrie. Mason. 1988/.

Одним из су mee i ценных проявлений II MC, сопровождающей вирусные инфекции (НИ), считают снижение реактивности ИКК п'ФГА-PBTJÍ /Ссменой Г>.Ф„ Варгин В.В.. 1989/.

Исходя из этих предпосылок Мы приняли лот тес i как базисный при изучении Иммунного статуса Переносящих OPÜ11 Детей.

В последние десятилетия постепенно развивается направление исследований, посвященное выявлению типов реакции иммунной системы человека на йозденствня in vivo или in vitro инфекционной и иейнфекцнонной природы /Иоффе 13.11.. 11оаниесян-'$веркоиа Б.П.. 1979, Кульберт А.Я.. (ар.чанова H.A.. 1984, L-ршов Ф.П.. Гоювцева Е.П.: 1986, Васильев II.В. и соавт., 1989, Калашникова H.A. и соавт., 1989, Стефани Д.В. и соавт., 1993/. Не вызывает сомнений актуальность подобного подхода при изучении нммуноиатогенеза конкретных инфекционных заболеваний у детей.

Цель исследования: выявить закономерные взаимосвязи между реактивностью ИКК в ФГА-Pül Л й уровнем продукции важнейших гуморальных факторов иммунной защиты и иммунорегуляции у детей разного возраста, переносящих ОРВИ.

2. Установить связь вариантов динамики ФГА-РБТЛ со специфическим антитепообразованием (АО) и клиническими проявлениями болезни.

3. Охарактеризоватьгуморалъный профиль каждого из выявленных вариантов (типов) ИО по уровню продукции иммуноглобулинов (ИГ) М, в, А н.Е, субклассов IgG, содержанию в хрови ЦИК и СЗ компонента комплемента.

4. Произвести сравнение уровня продукции важнейших цитоки-Нов - ннтерферонов (ИФ-а и у), интерлейкина-Г (ИЛ-1р), фактора Некроза опухолей (ФНО-а) при разных типах ИО.

5. Оц?нить информативность титра Р-бетсов как кригерия выраженного* острофазовой реакции иммунной системы при ОРВИ у детей.

6. Сравнить выраженность прессовой реакции при разных типах ИО по уровню секреции кортизола, пролактина и гормона роста. Оценить чувствительность ИКК к антипролиферативному действию ГК (преднизолона и дексаметаэона) при разных типах ИО.

7. Произвести анализ частоты встречаемости каждого из типов ИО у детей разного возраста.

8. Установить факторы, участвующие в формировании типов ИО.

Научная новизна работы. Впервые на основе различий динамики

Обнаружены различия между тинами ИО по уровню продукции ИГ, СЗ, всех изученных цйтокиНов, кортизола, содержанию в крови ЦИК и Р-белков.

Составлен иммунологический "портрет" каждого из типов по всей совокупности Изученных параметров^

Установлена взаимосвязь между типами ИО и клиническиын проявлениями ОРВИ, обнаружены возрастные изменения этой взаимосвязи и частоты встречаемости отдельных типов ИО.

Выявлены возрастные, генетические (НЬА-фенотнп) и этио-«отческне факторы, шжяюшне на формирование типа ИО.

На основании полученных данных предложена гипотеза, объясняющая феномен 4-х типов ИО как проявление нарастающей ннтен-сннносп« реакции иммунной системы на внедрение РВ в условиях исходно неодинакового уровня резистентности к возбудителю инфекции. В рамках общей гипотезы предложена также расшифровка превалирующих механизмов ИО (клеточного шш гуморального) при разных его типах в острую фазу ОРВИ м в фазу выздоровления.

Теоретическая н Практическая. значимость, Материалы исследования, демонстрирующие неоднородность ИО при ОРВИ у детей, вносят определенный вклад в современное направление фундаментальной иммунологии, изучающее альтернативные пути Т-клеточной рнуляцни ИО. Оценка типов реакции иммунной системы на внедрение возбудителя инфекции, в значительной мере определяющих клинические проявления болезни, имеет несомненное теоретическое и Практическое значение.

Полученные результаты могут служить научным обоснованием необходимости нового подхода к лечению и иммунокоррекциМ переносящих острые инфекции дггей, дифференцированного в зависимости от типа реакций иммунной системы. В практическом отношении особенно важна диагностика Ш и IV типов ИО, сопряженных с развитием НИС 8 фазу клинического выздоровления. Замедленное восстановление иммунного гомеостаза у этих детей диктует необходимость назначения курса нммунореабнлнтацни с целью префнлактйкн повторных заболеваний в постиифекционном периоде.

Возможность выявления типов ИО у дггей с помощью широко применяемого функционального теста - ФГА-РБТЛ - убеждает в его высокой и до сих пор недостаточно оцененной иммунологической информативности. Полученные результат. позволяют нам рекомендовать этот тест в качестве методической основы при определении типов иммунореактивности детей и взрослых, переносящих острые инфекции. Данные исследования в целом подтверждают актуальность и информативность патогенетического подхода к оценке иммунного

статуса и всех использованных в исследовании показателей, характеризующих функциональную активность основных популяций ИКК: моноцитов-макрофагов, Т- и В-лимфоцитов.

Основные положения, выносимые на зашит/.

!. Модуляция неспецифической реактивности ИКК крови у детей, переносящих ОРВИ, развивается неодинаково и представлена следующими вариантами, различающимися наличием или отсутствием супрессии ФГА-РБТЛ в острую фазу болезни или в фазу реконва-лесценцин: I - высокая реактивность ИКК в обе фазы; II - угнетение ФГА-РБТЛ в острую фазу и нормализация к выздоровлению; III -высокая реактивность ИКК в острую фазу, но угнетение се в периоде выздоровления; IV - низкая реактивность ИКК в обе фазы болезни.

2. С выявленными вариантами динамики ФГА-РБТЛ ассоции- . рованы определенные особенности специфического АО, что дает основание обозначить их как "типы ИО": I тип - средний по интенсивности АО; II тип - ранний (к вирусу хрипла А) и высокий АО; III тип - низкий иии замедленный АО; IV тип - Низкий или средний АО к РВ у детей до I г, но интенсивный АО у детей старше 1 г.

3. Типы ИО различаются между собой по уровню продукции изученных цитокинов (ИФ-а и у, ФНО-а, ИЛ-1 ß), ИГ четырех классов, некоторых субклассов IgO (IgGl, IgG2, IgO 4), СЗ компонента комплемента.

4. Типы ИО представляют собой разные по интенсивности реакции иммунной системы на внедрение возбудителя ОРВИ, о чем свидетельствует увеличение секреции монокинов (ФНО-а и ШП-ß) и продукции IgM в острую фазу болезни (у детей старше 1 г), а также рост уровня ЦИК от I к IV типу. В этом же порядке возрастает выраженность нейроэндокринной прессовой реакции, что иллюстрирует увеличение секреции xoptmema от I к III-IV типам в острую фазу ОРВИ. С данной трактовкой согласуется снижение числа неоейожненных О РВИ от 1 к IV типу НО, отчетливо регистрируемое у Детей старше 1 г.

5. Комплексные иммунологические характеристики каждого из 4 типов ИО позволяли- предположить, что в их основе Лежат различий структуры ИО йотношении превалирования кгкточно-опосредованных или гуморальных механизмов защиты, Контролируемых, соответственно, Тх 1- или Тх2 - подобными клонами активированных Т-лнмфоцнггов.

6. В формировании типов ИО участвуют возрастные и генетические (НЬЛ - фенотип) факторы, то:да как этнология. ОРВИ имеет ограниченное значение.

Реализация результатов. По результатам исследования оформлены две заявки на изобретение: "Способ прогнозирования заболеваемости ОРВИ детей первого года жизнИ" № 5065439 от 01.07.92 г. (принято решение о выдаче патента) и "Способ определения типа нммуно-реакгипности у детей младшего возраста" № 93040848 от 11.08.93 г. (принято решение о выдаче патента). Составлены два информационных письма: "Критерии оценки данных иммунологического обследования детей при остром инфекционном процессе", С.-Петербург, 1993 и "Методические подходы к оценке иммунного статуса детей с целью прогноза течения и исхода острых инфекций". С.-Петербург, 1994, утверждены директором НИ ИДИ. Оформлены методические рекомендации "Методы определения нммунореактнпности детского организма", С.-Петербург, 1993, утверждены МЗ РФ.

Материалы исследования используются при иммунологическом обследовании детей в клиниках ПИИ детских инфекций, а также клинике ОРЗ у детей НИИ гриппа РАМН, С.-Петербург. Результаты работы используются при обучении ординаторов на базе НИИ детских инфекций.

Апробация работы. Основные' положения работы доложены на научно-практических конференциях НИИДИ в 1989, 1990, ¡991, 1992, 1993 н 1994 п ., на заседаниях ВНО инфекционистов в 1990, 1991 н 1993 гг., ВНО иммунологов в 1990 и 1996 гг.. на I Всесоюзном съезде иммунологов в 1989 г и 1 съезде иммунологов России в 1992 г, на Всероссийском съезде врачей-инфекционистов в г.Суздале, 1992 г, на снмп. с м/н участием "Нейронммунологня на пороге XXI века", С.-Петербург, 1993 г и на IV м/н конференции "Нейроиммунология, нейроинфекцни, нейронмидж", С .-Петербург, 1995 г, на респ. научно-практической конференции "Микст-инфекции", С.-Петербург, 1994 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 26 работ, из них 12 в центральной печати.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 239 страницах л состоит из введения, обзора литературы, 7 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций. Список лшературы включает 200 отечественных и 182

зарубежных источников. Текст иллюстрирован 33 таблицами и 7 рисунками.

Работ выполнена в группе клинической иммуиолоши лаборатории функциональных методов диагностики Н1Ш детских инфекции в рамках тем НИР республиканской целевой программы "Иммунология, иммунопатология детского возраста" раздел IV по проблеме "Детские инфекций", "Иммунопатология, иммунопрофилактика, иммунотерапия" за 1985-1995 гг.

Материалы и методы исследования. Обследовано 449 детей, находящихся на лечении в стационаре НИИДИ с диагнозом ОРВИ, из них 239 в возрасте до 1 г и 210 - от ) г до 7 лет. Взятие крови производили дважды: при поступлении (острая фаза, 2-6-й день болезни) и перед выпиской (фаза выздоровления, 9- 14-й день болезни).

Контрольную группу составили 75 практически здоровых детей из детских домов г.Санкт-Петербурга или поступивших в клинику НИИДИ для проведения спсцпрофилактики (до прививки).

Неспецифическую реактивность ИКК крови оценивали в двух тестах: ФГА-РБТЛ и АЗЦЛ. РБТЛ ставили в культурах цельной крови с использованием радиометрического или морфологического метода учета результатов /Назаров П.Г., Пуринь В.И., 1975, Новиков Д.К., Новикова В.И., 1979/. Основным митогеном был ФГА (М) фирмы "Sigma" (США) в Дозе 5-10 мкг/мл. Супрессию пролиферативного ответа ИКК констатировали при величине индекса стимуляции (ИС) ниже 60 или числа бластных форм менее 60% (наименьшие значения РБТЛ на ФГА у здоровых детей). В части опытов параллельно с ФГА использовали антилимфоцитарный глобулин (АЛО производства Белорусского НИИВС (Минск), цельный или разведенный 1:5. АЗЦЛ определяли модифицированным нами микроскопическим методом, основанном на подсчете в камере Горяева оставшихся неповрежденными после 4-х часовой инкубации с мононуклеарами, лишенными прилипающих клеток, эритроцитов кур, сенсибилизированных субаг-глютинйрующИми дозами антисыворотки. ИГ и концентрацию СЗ определяли методом радиальной иммунодиффузин по Мгнчини, уровень общего IgE - в твердофазном иммуноферментном анализе (ИФА) с использованием тест-наборов Ставропольского НПО "Аллерген". ЦИК исследовали методом осаждения 3,5% раствором полиэтиленглюколя 6000.

Антитела (ЛТ) прошк РВ (гриппа А и В. парагриппа, респи-раторно-синци шального, аденовирусов, вируса lepneca простого и мнкопяазмы пневмонии) определяли в вирусологической лаборатории НИИДИ (зав.проф.Аксенов O.A.) методом PC К пли РИГА. Содержание ПФ в сыворотке крови или кулыуральнон жидкости определяли в той же лаборатории методом количественной гсмалсорбции в модификации /Аксенов O.A., 1981/. Индукцию ИФ вирусом болезни Ньюкасла (ВБН) и наличие у-ПФ в обшей активносш определяли по методических! рекомендациям /Ершов Ф.И. и соавт.. 1989/.

ФИО-ос в сыворотке кропи и 1 Ull-ß в надосадке культур ИКК крови измеряли в И ФА с помощью тс итА(1) фнпгЛС9 др.РВ(1)

Дета от 1 года до 7 лег

грипаА(1) ГРИППА® ДВ.Рв(1> i ЙР-РВСО

Ptoc.l Уровень антител к вирусу-возбудителю О РВИ у детей с разными

вариантами модуляции ФГА-РБТЛ Символами отмечено достоверное отличие: • - от I тина, • - от III, х - от II, при р по крайней мере 100 шов

Рис,2 Продукция ИГ четырех классов при разных типах ИО на ОРВИ.

Учитывай неодинаковую быраженность иолйклональной активации В-лИМфоЦИТоё, йредставлйет интерес сравйемие динамики содержания НесГтеиифиЧеСких ЦИК 8 крови детей, формирующих разные гИИы ИО. Важным фактором регуляции уровни ЦИК и ИО й целом яйЛйется СЗ KOMhoiicHT комплемента, участвушиШй как й классическом, так й в альтернативном пути его йкТИваЦнН /Кульберг А.Я., 1986/. Рисунок 3 иллюстрирует рецйпрокные соотношения Между содержанием в крови ЦИК й СЗ iipli pmiibix тинах ЙО у детей обеих возрастных групп: если концентрация ЦЙК растет оТ I к IV типу, то уровень СЗ компонента снижается в том же порядке. ВероятНо ре шиш 0,9 при р _. Ii и \ В7,5%детей старше 1 г.

Таким образом, только I н III типы ПО в острую фату ОРВИ ассоциированы с определенным диапазоном концентраций РБ: 8-32 п-к. и 2-8 гыс. соответственно. Полому указанные диапазоны титров РБ могу! быть использованы в качестве дополнителыюгодиато-сшчсского критерия :пих типов ПО, наиболее достоверного у дстей старше 1 i. 13 то же время для "гуморальных" Л и IV типов ПО характерен значшельный разброс ттров РБ, что можно объяснит), ¡"нимодействием !'Б с зффекторными молекулами ИО - ИГ или моду-

ляпнем мембранных процессии собственно иммунными факторами регуляции.

Из сказанного выше следуег, мю при интерпретации уровня РВ у переносящих ОРВН детей необходимо учитывать возраст ребенка и тип ПО.

Клинические формы ОРВН при разных типах ПО. Возникает принципиально важный вопрос о клинической значимости обнаруженного иммунологического феномена: представляют ли собой вымоленные типы IЮ лишь варианты сочетания механизмов иммунной зашиты, не имеющие патогенетического и клинического значения, или они непосредственно связаны с особенностями клинических проявлений- и тяжестью инфекционного процесса? Анализ частоты встречаемости разных клинических форм ОРВН в ассоциации с 4 типами ПО у детей двух возрастных гр\ни (до I г и старше 2 л) представлен на рис. 5. D переходной по возрасту группе от 1 г до 2 л достоверных связей между типом ПО и клиникой ОРВН не ni.(явлено. Число пеослож-ненных OPD11 превалирует при I типе ПО, что становится особенно отчетливым у детей старше 2 л: 45,9% случаев против 17,6% при IV типе, р -