Ортопоксвирусная инфекция что это
Данная диссертационная работа должна поступить в библиотеки в ближайшее время
Уведомить о поступлении
480 руб. | 150 грн. | 7,5 долл. ', MOUSEOFF, FGCOLOR, '#FFFFCC',BGCOLOR, '#393939');" onMouseOut="return nd();"> Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья
Автореферат - бесплатно , доставка 10 минут , круглосуточно, без выходных и праздников
Жукова, Ольга Алексеевна. Современные ортопоксвирусные заболевания человека, диагностика и экология возбудителей : автореферат дис. . кандидата медицинских наук : 03.00.06.- Москва, 1993.- 23 с.: ил.
Введение к работе
Актуальность проблемы. После ликвидации натуральной оспы и отмены оспопрививания возник вопрос о потенциальной угрозе для людей вирусов оспы животных, в частности, возбудителя оспы обезьян, вызывающего у людей клинически неотличимое от натуральной оспы заболевание (Маренникова С.С. и др., 1971: Marennikova et al., 1972: Ladnyi et al., 1972> . Несмотря на то, что с момента его открытия прешло более 20 лет, многие вопросы, связанные с этим заболеванием, остались неизучеными: до последнего времени был неизвестен природный резервуар вируса, не вполне ясна контагиоз-ность згой инфекции, пути заражения человека и другие особенности оспы обеэьян. Поэтому в число задач, определенных ХХХШ Всемирной Ассамблеей Здравоохранения на период после ликвидации натуральной оспы, было вклочено изучение оспы обезьян у человека (Resolution of ХХХШ WHA, 1980). В соответствии с згой резолюцией Отделом лик-^видации оспы ВОЗ начал осуществляться специальный научный проект по изучению оспы обезьян. В выполнении этого проекта приняли участие СЬгрудничаюшие центры ВОЗ по оспе в Атланте и в Москве (в таи числе и автор настоящей работы) . а также полевые эпидемиологические бригады в странах Экваториальной Африки, эндемичных по оспе обезьян.
Помимо выполнения решения ХХХШ ВАЗ об определении потенциальной опасности оспы обезьян для людей, эти исследования были актуальными и для нашей страны, поскольку полностью исключить возможность завоза оспы обезьян в другие страны с инфицированными животными или больными людьми нельзя. Следует отметить, что в упомянутой резолюции ХХХШ ВАЗ (пункт 4) было настоятельно реко-
мендовзно стимулировать научные исследования и в отношении других ортопоксвируоов, в частности, патогенного для человека вируса оспы коров.
Огоссительно оспы коров в течение последних двух десятилетий накопилось большое количество наблюдений, которые заставили изменить традиционную концепцию о том, что это заболевание является про$ессионзльньы заболеванием доярок, которые инфицируются от больных коров (Baxby, 1975).
Случаи заболевания оспой коров животных, принадлежащих к 8 из 18 отрядов класса мдакопитаюи)их, а также людей без какой-либо связи с крупным рогатый скотом (Biacala, 1976; Baxby, 1977) позволили выдвинуть гипотезу о грызунах как резервуаре вируса оспы коров (Baxby, 1977.: Marennikcva et al., 1984). Учитывая это, оставалось актуальным выяснение этиашгии всех случаев оспоподобных заболеваний в нашей стране и поиск природного резервуара вируса.
В связи с этим ставились слвдуюцие задачи:
1. Проведение вирусологического и серологического исследования материалов от людей с подозрением на оспу обезьян, собранных бригадами эпиднадзорэ ВОЗ в эндемичных по оспе обезьян очагах и анализ архивного материала по диагностическому обследованию аналогичного контингента за более ранний период (с 1984 г.).
Обследование га наличие вируса оспы обезьян и соответствующих антител в пробах от животных и насекомых, собранных бригадами эпиднэдзорз ВОЗ в очагах оспы обезьян, а также привезенных организованной ВОЗ экспедицией в Республику Заир.
Изучение и внедрение в практику метода быстрой Еидоспеци-фической диагностики оспы обезьян с использованием шноклональных антител (МАТ)к этому вирусу.
Изучение динамики образования групповых и видоспешфичес-ких антител у больных оспой обезьян.
Выяснение этиологии оспоттодобных заболеваний, имевших место в нашей стране в период после ликвидации натуральной оспы в мире.
Определение возможности віпрсттєцифичеокой серологической диагностики оспы коров, истіользуя и-мунсформентный анализ ІИ'Ї'А) с предварительной адсорбцией сыворотки вирусом вакцины (ИФА-А).
Научная новизна и теоретическая значимость работы.
1. На основе проведенных исследований существенно расширены
наши знания об оспе обезьян у людей: установлено наличие бессимптомных форм этой инфекции и их частота.: уточнены воггросы трана-дассибильнссти инфекции; подтверждены данные о том, что одним из основных природных резервуаров этого вируса являются тропические бел<и; впервые в нашей стране в экспериментальных исследованиях установлена чрезвычайно высокая чувствителы гость белок к вирусу оспы обезьян при разных путях заражения.
2. Впервые установлено, что в нашей стране в период после ликвидации натуральной оспы в мире у людей имеют место заболевания генуинной оспой коров, а также подтверждена циркуляция вируса пэрзвакцикы; впервые в нашей стране получены эксге/риметальше
данные, подтверждающие вькгокую восприимчивость домашних кошек к вирусу оспы коров и их возможную роль как "промежуточного хозяина" этого вируса и источника инфицирования человека.
Практическая ценность работы. 1. Изучен и внедрен в практику Московского Сотрудничающего центра ВОЗ по оспе и родственны.! инфекциям метод быстрой видостіецифичєской диагностики оспы обезьян на основе ИФА с использованием ЫАГ к этому вирусу.
Разработан метод шдрсхіецифической серологической диагностики оспы коров с использованием ИВА-А.
Пополнена коллекция музея Сотрудничающего центра ВОЗ (НИИВП) 5 новыми штаммами вируса оспы коров, получекньми от людей и 2 иггаммами, выделенными от белых крыс, послуживших источником заражения людей оспой коров,
В государственную коллекцию вирусов МЗ РФ депонирован штамм "Ель-87", выделенный впервые) на территории бывшего СССР от больного человека, инфицированного от больной белой крысы.
4. Разработаны следующие методические рекомендации:
а) "Видовая идентификация антител к патогенным для человека
ортопоксвирусам (оспе обезьян и оспе коров) с помощью ИФА-адсорб-
ции". Утверждены Ученым советом НИИВП 28 ноября І930 г.;
б) "Дополнения к методическим река.гендациям по комплексному
исследованию материала при эгтизоагологическом обследовании терри
тории: выявление очагов ортогтексвируоов". Утверждены Главным эпи
демиологическим управлением МЗ СССР 28 октября 1989 г.;
в) "Методические рекомендации по экспресс-диагностике орто-
поксБирусных инфекций с помощью иммунной электронной микроско
пии". Утверждены Ученым советом НИИВП 10 июня 1990 г.
Публикация результатов исследования и апробация роботы. По теме диссертации опубликовано 12 печатных работ. Материалы работы изложены на 62 сессии общего собрания АМН СССР (21 марта 1991 года) . Диссертация апробирована га конференции НИИВП РАМН 12 июля 1991 г.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 115 страницах машинописного текста, включая иллюстрации (8 рисунков и 18 таблиц). Работа состоит из следующих разделов: введение, обзор данных литературы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы. Список литературы включает 126 источников, из которых 95 - зарубежна.
Цена:
Авторы работы:
Научный журнал:
Год выхода:
РОССИЙСКИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, 2010, том 4(13), № 1, с. 25-32
ОПТИМИЗАЦИЯ ДНК-ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ОРТОПОКСВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ЧЕЛОВЕКА НА ОСНОВЕ ГЕНА Г8Ь ВИРУСА НАТУРАЛЬНОЙ ОСПЫ
Поступила: 14.12.2009. Принята: 15.01.2010
Изучили влияние способа введения кандидатной ДНК-вакцины и промотора, направляющего экспрессию гена Р8Ь иммунодоминантного белка вируса натуральной оспы, на развитие иммунного ответа против ортопоксвирусов. Группы мышей иммунизировали препаратами кандидатных ДНК-вакцин: рБККБУ_Р8Ь или реОЫЛ_Р8Ь внутрибрюшинно, внутримышечно, внутрикожно или подкожно. Вакцины вводили трехкратно с трехнедельными интервалами, а через три недели после последней иммунизации все мыши в группах были внутрибрюшинно инфицированы вирусом эктромелии штамм К1 в дозе 10 ЬЭ50 для оценки протективности. Впервые обнаружено, что ДНК-вакцина с промотором из длинных терминальных повторов вируса саркомы Рауса (рБКЯБУ) оказалась наиболее эффективной при внутрибрюшинном способе иммунизации, ДНК-вакцина с промотором цито-мегаловируса (реОЫЛ3.1) — при внутрикожном способе иммунизации.
Ключевые слова: ДНК-вакцина, способ иммунизации, эффективность промотора, натуральная оспа
Инициированная учеными СССР в 1958 г. международная программа Всемирной организации здравоохранения по ликвидации оспы, основанная на массовой вакцинации населения Земли вирусом осповакцины (ВОВ) и строгом эпидемиологическом надзоре, к 1977 г. привела к триумфальной элиминации природных случаев заражения вирусом натуральной оспы (ВНО) [1, 2]. Последующее прекращение вакцинации против оспы создало опасную ситуацию, когда человеческая популяция с каждым годом становится все более беззащитной не только перед возможным инфицированием ВНО в результате теракта, но и перед заражением другими близкородственными ортопоксвирусами, такими как вирусы оспы обезьян (ВОО) и оспы коров (ВОК), природным резервуаром которых являются мелкие грызуны [2]. Необычно многочисленные
вспышки ортопоксвирусных инфекций среди людей стали регистрировать в новых географических регионах. Так, в 2003 г. в США зарегистрирована массовая вспышка оспы обезьян среди людей, а в Бразилии — вспышка оспы коров среди людей [3, 4]. В декабре 2008 г. — январе 2009 г. во Франции и Германии наблюдалась беспрецедентная вспышка оспы коров у людей [5, 6]. Это демонстрирует, как ранее редкие зоонозные вирусные заболевания могут быстро распространяться среди невакцинированного населения.
Использование классической живой вакцины на основе ВОВ для массовой вакцинации в настоящее время недопустимо из-за большого числа возможных осложнений. Последнее объясняется возросшим в последние годы количеством категорий людей с супрессивным иммунитетом, таких как пациенты, перенесшие трансплантацию, ВИЧ-инфицированные пациенты, лица, принимающие иммуноде-прессанты, и др. В связи с этим особенно актуальной является разработка современных безопасных вакцин против ортопоксвирусов. Одним из перспективных решений этой про-
блемы может быть создание ДНК-вакцины
Эффективность ДНК-вакцины в значительной степени зависит от выбранного антигена, векторной плазмиды, используемого эука-риотического промотора для экспрессии целевого антигена, способа иммунизации, дозы и количества иммунизаций, используемого адъюванта, так как все эти параметры влияют на величину и качество вызываемого иммунного ответа [9].
В большинстве исследований ДНК-вакцин используют плазмиды с промоторами, обеспечивающими высокий уровень продукции белка в большинстве тканей млекопитающих, например, цитомегаловирусный (CMV) промотор или промотор из длинных терминальных повторов вируса саркомы Рауса (RSV) [12, 13]. Для уменьшения побочных эффектов возможно использование тканеспецифичных промоторов, однако эффективность вызываемого при этом иммунного ответа в сравнении с цитомегаловирусным промотором на порядок ниже [14, 15]. Неоднократно было показано, что цитомегаловирусный промотор более эффективен, чем промотор из длинных терминальных повторов вируса саркомы Рауса [16, 17]. Однако эффективность промотора в плане развития иммунного ответа на белковый продукт целевого гена зависит от условий конкретного эксперимента. В работе по созданию ДНК-вакцины против вируса гриппа на основе гена вирусного нуклеопротеина было показано, что при внутрикожном способе иммунизации CMV промотор приводит к индукции более сильного гуморального ответа, чем RSV промотор, однако оба промотора активируют равный иммунный ответ при внутримышечном способе иммунизации [18].
Ранее мы исследовали иммуногенность созданных нами ДНК-вакцин, кодирующих восемь различных белков ВНО: три белка (A4L, M4R и I5R) сердцевины вириона, три белка
(A30L, F8L и M1R) поверхностной мембраны внутриклеточных вирионов (IMV) и два белка (A36R и B7R) оболочки внеклеточных вирионов (EEV) [8]. Выраженный иммунный ответ против ВОВ удалось обнаружить для кандидатных ДНК-вакцин, кодирующих белки сердцевины вириона (M4R и I5R), поверхностной мембраны IMV (A30L и F8L) и оболочки EEV (B7R). При этом одновременно выраженные гуморальный и клеточный иммунные ответы были выявлены только для белка F8L.
Целью данной работы являлось определение оптимального способа иммунизации в зависимости от использованного промотора для экспрессии гена белка F8L ВНО в плане развития протективного иммунного ответа на модели мышей и высокопатогенного для них вируса эктромелии (оспы мышей).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Вирусы, бактериальные штаммы и культуры клеток
Конструирование и наработка ДНК-вакцин
Ген F8L ВНО штамма India-1967 [19] ампли-фицировали методом ПЦР, используя Taq-полимеразу (СибЭнзим, Россия), с помощью праймеров F8L_upper 5'-CCCGGCTAGCCG CCACCATGTCACAACAACTATCTCCTA-3' и F8L_lower 5' - C C CGTCGACAATCTAGTTTT GTTTTTCTCG-3' (сайты рестрикции AsuNHI и SalI выделены жирным шрифтом, инициирующий и стоп кодоны подчеркнуты). Ампли-фицированный продукт гена F8L встраивали в плазмиду pBKRSV (Stratagene, США) по сайтам гидролиза рестриктаз SalI и AsuNHI и далее переклонировали в плазмиду pcDNA3.1/ Myc-His(-)/lacz (Invitrogen, США) по сайтам гидролиза рестриктаз HindIII и AsuNHI. С целью подтверждения правильности вставок полученные конструкции секвенировали на автоматическом секвенаторе 310 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, США). Плазмид-ную ДНК нарабатывали в клетках E. coli в препаративном количестве, выделяли щелочным
методом [20] и очищали от бактериального эндотоксина центрифугированием в градиенте CsCl [20]. Концентрацию плазмидной ДНК измеряли на спектрофотометре Ultrospec 3000 pro (Biochrom, Великобритания).
Измерение титра вируснейтрализующих антител
Клетки Vero растили в среде DMEM с 10% эмбриональной сывороткой коров (ЭСК). К 100 мкл сывороток крови мышей, последовательно разведенных с шагом 5 до разведений 1/10, 1/50, 1/250, 1/1250, добавляли равный объем вирусной суспензии ВОВ штамм Л-ИВП с титром 103 БОЕ/мл в среде DMEM и инкубировали при 37 оС 1 час. 150 мкл смеси сывороток с ВОВ наносили на монослой клеток Vero в 6-ти луночном планшете. Спустя один час добавляли 2 мл среды DMEM с 2% ЭСК, 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина на лунку и инкубировали при 37 оС 3 суток в атмосфере, содержащей 5% С02. Затем удаляли среду и добавляли 0,2% краситель кристаллический фиолетовый, разведенный в 10% этаноле. Подсчитывали число бляшек и рассчитывали процент нейтрализации относительно числа бляшек в лунках без сывороток. Титр представляет обратное наи-
большее разведение сыворотки, при котором достигалось 50% уменьшение числа бляшек.
Измерение титра антител к ВОВ
Твердофазный ИФА проводили на 96-лу-ночных планшетах (Costar, США). Сорбцию 3 х 106 БОЕ/на лунку ВОВ штамм Л-ИВП, очищенного на сахарозной подушке, проводили в течение 16 часов при 4 оС. После удаления несвязавшегося вируса и блокировки свободных мест в лунки вносили по 100 мкл сывороток, последовательно разведенных с шагом 2 до разведений 1/50, 1/100, 1/200, 1/400, 1/800, 1/1600, 1/3200. Планшеты инкубировали 1 ч при 37 оС. После удаления несвязав-шихся антител и промывки планшета в лунки внос
Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.
ГРАЖДАНЦЕВА А.А., КАНДРИНА Н.Ю., КОЛОСОВА И.В., КОЧНЕВА Г.В., ЛУПАН Т.А., РЯБЧИКОВА Е.И., СИВОЛОБОВА Г.Ф., ЩЕЛКУНОВ С.Н., ЮДИН П.В. — 2009 г.
БАБКИН И.В., БАБКИНА И.Н., БЕССМЕЛЬЦЕВА Е.В., КОЛОСОВА И.В., КОЧНЕВА Г.В., РЯБЧИКОВА Е.И., СЕРЕГИН С.В., СОЛЕНОВА Т.Е., ЩЕЛКУНОВ С.Н. — 2003 г.
БАЛАХНИН С.М., БЕЛАНОВ Е.Ф., БОРМОТОВ Н.И., КАЗАЧИНСКАЯ Е.И., КИСЕЛЕВ Н.Н., ЛОКТЕВ В.Б., СВЯТЧЕНКО В.А., СЕЛИВАНОВ Б.А., СЕРОВА О.А., ТИХОНОВ А.Я. — 2011 г.
БОЛДЫРЕВА Ε.Ф., ГУСЕВА Т.С., КЛИМОВА Р.Р., КОЗЛОВ А.Ю., КУЩ А.А., МАЛИНОВСКАЯ В.В., НЕКРАСОВА О.В., НОВИКОВ В.В., ПАРШИНА О.В., ШИНГАРОВА Л.Н. — 2004 г.
| вирус Camelpox | |||||
|---|---|---|---|---|---|
| классификация Вирус | |||||
| Группа: | |||||
| Подсемейство: |
Camelpox этого заболевание верблюдов , вызванного вирусом семейства Poxviridae , подсемейства Chordopoxvirinae и рода ортопоксвирусного . Это вызывает повреждения кожи и генерализованной инфекции. Около 25% молодых верблюдов , которые заразились умрут от этого заболевания, в то время как инфекция у пожилых верблюдов , как правило , более мягкая. Хотя редко, инфекция может распространиться на руки тех , которые работают в тесном контакте с верблюдами. Camelpox является эндемическим заболеванием на всем Ближнем Востоке, в Африке и Азии. содержаниепричинаВирус Camelpox (CMPV) , который вызывает Camelpox является Orthopoxvirus , который очень тесно связан с Variola вирусом , который вызывает оспу . Это большой, кирпич-образный, охватил вирус , который колеблется в размере от 265-295 нм. Вирусный генетический материал содержится в двухцепочечной линейной ДНК , состоящей из плотно упакованных 202,182 пар оснований. ДНК заключенная в вирусном ядре. Два боковых тела находятся за пределами вирусного ядра, и , как полагают, держат ферменты , необходимые для размножения вируса. Вирус Camelpox наиболее часто поражает членов семьи Camelidae . Однако недавние исследования показали , что болезнь может передаваться как людям , так и членистоногих . коробка передачВирус Camelpox распространяется тремя способами: прямой контакт, косвенный контакт, и насекомых-переносчиков. В непосредственном контакте инфекции, верблюд заражается при непосредственном контакте с инфицированным верблюд. В косвенном контакте инфекции, верблюд заражается после контакта с зараженной средой. Вирус распространяется через молоко, слюну, глазные выделения, и из носа, и был показан, что остается вирулентными вне хозяина в течение 4-х месяцев. Вирус Camelpox был выделен из верблюжьих клещи ( Hyalomma Дромедарии ) удалено от зараженных животных. Считается , что клещи могут передавать болезни от верблюда до верблюда. Эта теория подтверждается увеличением Camelpox инфекции сразу после сильных дождей, во время которых население верблюда клеща значительно увеличивается. Передача Camelpox людей была подтверждена в 2009 году, когда верблюд пастухи в Индии представлены инфекциями рук и пальцев. Хотя другие случаи инфицирования людей не было, никаких других случаев не было проверено. Благодаря тесному контакту между верблюдами и их человеческих обработчиков в большинстве стран мира, считается, что Camelpox передается человеку через прямой контакт. копированиеВирус , который вызывает ортопоксвирусную Camelpox ведет себя очень похож на вирус , который вызывает оспу . После того , как вирус прикрепляется к клетке - хозяина, он впрыскивает свою вирусную сердцевину (оболочку , содержащую его ДНК) в клетках цитоплазмы . Вирус несет ДНК - полимеразы , которая используется для транскрибировать свои гены. В конце концов, вирусное ядро растворяется, и генетический материал голый в цитоплазме. Когда все структурные белки были произведены, вирусная сборка происходит. Вновь сформированные вирусные частицы могут быть освобождены во время клеточного лизиса , или они могут вывести полученную через клеточную мембрану хозяина и быть выпущены через почкование . Признаки и симптомыИнкубационный период Camelpox составляет от 3 до 15 дней. В результате инфекция , может быть классифицирована как острая или обобщенной. Обобщенные инфекции обычно встречаются в верблюдах в возрасте до трех лет , и характеризуются опуханием лимфатических узлов, лихорадкой, и развитием поражений кожи. Повреждения начинаются как папулы , но развиваться в пустулы . Эти внешние симптомы обычно начинаются на голове и шее, но в конце концов распространились по всему телу, причем особенно сосредоточены на конечностях и половых органах. Без лечения животное обычно оправиться от инфекции 4 до 6 недель. Острые инфекции обычно встречаются в верблюдах в возрасте до трех лет, и в результате легкого до тяжелых системных инфекций. В дополнение к симптомам, которые сопровождают генерализованной инфекции, эти животные испытывают внутренние повреждения вдоль выстилки рта и дыхательных путей и пищеварительного тракта. Они также испытывают потерю аппетита и понос. Большая часть верблюдов остро инфицированные Camelpox умирают, хотя смерть часто связывают с вторичной инфекцией. Camelpox инфекция в организме человека приводит к мягкому поражению кожи на руках и пальцах. Доклады были сделаны, что повреждения могут быть найдены на рот и губах, если пациент пил молоко из инфицированного верблюда, но эти симптомы не были подтверждены. Диагностика и лечениеДиагноз Camelpox может быть основан на симптомах. Однако, как верблюд Contagious эктима и Camel Папилломатоз вызывают неразличимые симптомы в аналогичных условиях. Таким образом, лучший способ диагностировать Camelpox происходит через просвечивающей электронной микроскопии оценка образцов кожи от инфицированных животных. Вирус Camelpox имеет уникальную форму, которая легко идентифицировать с помощью этого метода. В тех случаях , когда ТАЯ технология не доступна, серологические тесты доступны для выявления Camelpox в качестве возбудителя инфекции. Кроме того, исследователи в Индии работают на диагностическом полимеразной цепной реакции , чтобы быстро и эффективно идентифицировать вирус Camelpox. Когда вирус Camelpox идентифицируется как возбудитель, болезнь можно лечить с помощью анти-вирусных препаратов. Наиболее распространенный препарат , используемый для лечения Camelpox является Цидофовир , широкий спектр анти-вирусным , который действует путем ингибирования вирусной ДНК - полимеразы. Cidofovir доказал, что 100% эффективность в предотвращении смерти в зараженных верблюдов. профилактикаВспышки Camelpox оказывают негативное влияние на местную экономику. Очаги часто приводят к потере молодых верблюдов, и делают старые верблюды бесполезные с точки зрения молока и мяса, а также транспорт. Таким образом , попытки часто делается , чтобы предотвратить передачу заболевания. Ослабленная вакцина в настоящее время доступна , что обеспечивает длительную защиту против Camelpox при введении , когда верблюд, по крайней мере 9 месяцев. Инактивированная вакцина также доступна, но они должны быть введены в год для поддержания защиты. Вирус Camelpox чувствителен к ряду общих дезинфицирующих средств. Она также может быть разрушена путем автоклавирования, кратковременным воздействием УФ-излучение, и кипячения в течение по крайней мере 10 минут. Эти методы могут быть использованы верблюжьими пастухами, чтобы минимизировать риск загрязнения окружающей среды. Общество и культураВ 1995 году Саддам Хусейн признал, что ряд ведущих иракских ученых, работающих, чтобы превратить Camelpox в биологическое оружие. Camelpox был выбран по двум основным причинам: теория о том, что местное население будет в значительной степени защищено, и его отношение к оспе. Считается, что сообщаемые случаи Camelpox инфекции в организме человека является низким из-за иммунитета, полученного в результате воздействия на верблюдах в раннем детстве. Таким образом, значительная часть населения Ирака будет невосприимчива к Camelpox, в то время как войска из стран, не являющейся Camel пастушьих бы восприимчивы. Он не считал, что процесс исследования был успешным, или что вирус был когда-либо в любых больших количествах. При интраназальном заражении мышей вирусом эктромелии (ВЭ) оценивали противовирусную эффективность отечественного химического соединения НИОХ-14 по сравнению с противооспенным препаратом ST-246, разработанным SIGA Technologies Inc. (США). Показано, что 50 % эффективные дозы in vivo препаратов НИОХ-14 (3,59 мкг/г массы мыши) и ST-246 (5,08 мкг/г массы мыши) достоверно не отличались. Пероральное введение мышам НИОХ-14 за 1 сутки или за 1 ч до заражения ВЭ, а также через 1, 2 и 4 суток после заражения ВЭ и далее в течение 9-ти суток обеспечивало 100 % выживаемость животных. НИОХ-14, так же как ST-246, снижал титры ВЭ в легких, носовой полости, головном мозге, печени, селезенке, почках и поджелудочной железе. Ключевые слова: ортопоксвирусы, оспа, вирус эктромелии, мыши, противовирусная эффективность, химическое соединение. Введение. Благодаря программе глобальной ликвидации вирус натуральной оспы (ВНО) был элиминирован из окружающей среды [15]. При этом более половины населения Земли лишено иммунитета против ортопоксвирусных инфекций в связи с прекратившейся с 1980 года всеобщей вакцинации против оспы. Вместе с тем, угроза возникновения оспы существует до настоящего времени, поскольку невозможно исключить наличие нелегального хранения ВНО и преднамеренного использования против населения природных или рекомбинантных штаммов ВНО и вируса оспы обезьян (ВОО) в качестве биологического оружия [12]. Кроме того, появление вспышек оспы обезьян в популяции людей в Африке (в 1996–1997 годах в Демократической Республике Конго, в 2005 в Судане) и ее распространение (в 2003 году ВОО был завезен в США с партией экзотических животных — гамбийских или хомячковых крыс) представляет собой серьезную угрозу населению всего мира [4, 12]. Противовирусные препараты, эффективные в отношении ВНО и других патогенных для человека ортопоксвирусов, прежде всего ВОО, могли бы существенно снизить последствия возможного возникновения вспышек оспы. Спектр лечебно-профилактических препаратов, используемых для экстренной профилактики и лечения заболеваний, вызываемых ортопоксвирусами, чрезвычайно ограничен. К этим средствам относятся тиосемикарбазоны, аналоги нуклеозидов, нуклеотидов, ациклические нуклеозиды и нуклеотиды [13]. В настоящее время проводятся клинические испытания двух эффективных биодоступных при пероральном введении противовирусных препаратов: CMX001 — эфирно-липидного аналога цидофовира с активностью на стадии репликации ДНК, и ST-246 — нового ингибитора выхода вируса из клетки [12]. Недавно в США компанией SIGA Technologies Inc. по лицензии ViroPharma Inc. (Corvallis, Oregon) был разработан противооспенный препарат ST-246 ® или Tecovirimat™ [15]. ST-246 проявил высокую активность в экспериментах с использованием низших приматов, инфицированных штаммом Zaire-79 (V79-I-005) ВОО [11, 14]. При этом наиболее полное исследование противовирусной эффективности ST-246 было проведено на модели летальной инфекции мышей вирусом эктромелии (ВЭ), который является естественным патогеном для мышей и вызывает у них генерализованное заболевание, называемое мышиной оспой, аналогичное оспе у человека [9]. Совместно с Новосибирским институтом органической химии Сибирского отделения Российской академии наук (НИОХ СО РАН) нами было получено новое химическое соединение НИОХ-14, обладающее сравнимой с ST-246 активностью в отношении ортопоксвирусов, в том числе ВОО, in vitro и in vivo [2, 3, 7]. Цель исследования: изучение фармакодинамических показателей противовирусной эффективности НИОХ-14 в экспериментах на мышах, инфицированных ВЭ. Материалы и методы Химические соединения. В работе было использовано химическое соединение НИОХ-14 (7-[N`-(4-трифторметилбензоил)-гидразинокарбонил]-трицикло[3.2.2.0 2,4 ]нон-8-ен-6-карбоновая кислота), синтезированное в НИОХ им. Н.Н. Ворожцова СО РАН [14], с высокой активностью в отношении ортопоксвирусов, ранее описанной нами, в экспериментах in vitro и in vivo [2, 3, 7]. В качестве положительного контроля использовали химическое соединение с установленной противооспенной активностью — ST-246 (4-трифторметил-N-(3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-октагидро-1,3-диоксо-4,6-етеноциклопроп[f]изоиндол-2(1H)-ил)-бензамид) [15], синтезированное в НИОХ им. Н.Н. Ворожцова СО РАН по описанной методике [10]. Введение химически синтезированных препаратов при инфицировании мышей ВЭ. При оценке 50 % эффективной дозы (ЭД50) НИОХ-14 вводили перорально 1 раз в сутки в дозах 0,78; 1,56; 3,12; 6,25; 12,5; 25,0; 50,0 мкг/г массы мыши через 1 ч после заражения и далее в течение 9-ти суток после заражения животных. Группе контрольных животных, инфицированных ВЭ, перорально вводили плацебо-раствор, содержащий 0,75 % метилцеллюлозы и 1 % твина-80. За животными наблюдали в течение 21-х суток после заражения ВЭ, ежедневно регистрируя количество павших мышей, определяли долю павших животных, подсчитывали коэффициент защиты (КЗ = процент павших в контроле — процент павших в опыте) и среднюю продолжительность жизни (СПЖ). При определении СПЖ в каждой группе учитывали число животных, проживших определенное количество дней после заражения до гибели и число выживших животных. За максимальную продолжительность жизни выживших животных принимали 21 сутки после заражения ВЭ, т. е. гарантированное время прекращения специфической гибели инфицированных мышей, что было установлено эмпирически при многократном повторении аналогичных экспериментов. Для определения терапевтического окна препарат НИОХ-14 вводили 1 раз в сутки в дозе 50 мкг/г массы мыши в разные сроки до и после заражения ВЭ: за 1 сутки до заражения (д/з), за 1 ч д/з, через 1, 2, 3, 4, 5 и 6 суток после заражения (п/з), а далее введение НИОХ-14 продолжали в течение 9-ти суток после первого введения препарата. Наблюдение за животными осуществляли в течение 21-х суток после заражения ВЭ, в каждой группе мышей регистрировали падеж и рассчитывали СПЖ. Определение титров ВЭ в гомогенатах органов. Через 6 суток после заражения и ежедневного введения препаратов (начиная с 1-х суток после инфицирования) определяли концентрацию ВЭ (в lg БОЕ/мл) в сыворотке крови и 10 % гомогенатах органов, полученных от 4-х инфицированных мышей из каждой группы. Для этого использовали стандартный для ортопоксвирусов метод подсчета количества бляшек при внесении последовательных разведений образцов на монослой культуры клеток Vero [16]. В случаях, когда концентрация ВЭ в гомогенатах органов инфицированных мышей была ниже порога чувствительности метода титрования ( & | 3,59 (2,29–5,63)^ | |||
| 25,0 | 10* (100) | 100 | 21,0 ± 0,00 & | ||
| 12,5 | 8* (80) | 80 | 19,7 ± 2,98 & | ||
| 6,25 | 7* (70) | 70 | 17,9 ± 5,30 & | ||
| 3,12 | 6* (60) | 60 | 16,8 ± 5,59 & | ||
| 1,56 | 2 (20) | 20 | 12,7 ± 4,76 | ||
| 0,78 | 0 (0) | 0 | 9,8 ± 2,30 | ||
| SТ-246, n = 10 для каждой дозы препарата | 50,0 | 10* (100) | 100 | 21,0 ± 0,00 & | 5,08 (3,04–8,48)^ |
| 25,0 | 10* (100) | 100 | 21,0 ± 0,00 & | ||
| 12,5 | 7* (70) | 70 | 18,5 ± 4,09 & | ||
| 6,25 | 3 (30) | 30 | 16,0 ± 3,74 & | ||
| 3,12 | 3 (30) | 30 | 13,6 ± 5,30 | ||
| 1,56 | 2 (20) | 20 | 11,3 ± 5,12 | ||
| 0,78 | 3 (30) | 30 | 12,5 ± 5,99 | ||
| Контроль ВЭ, n = 10 | — | 0 (0) | — | 10,2 ± 2,78 | — |
Примечание: ЭД50 — 50 %-я эффективная доза препаратов; ^ — доверительные интервалы, нет достоверных отличий по ЭД50 препаратов НИОХ-14 и ST-246; КЗ = процент гибели в контроле — процент гибели в опыте; * — отличие от контроля по критерию χ² при р & — отличие от контроля по U-критерию Манна-Уитни при р &
n = 10
n = 10
n = 10
n = 10
n = 10
n = 10
n = 10
n = 10
Примечание: КЗ = процент гибели в контроле — процент гибели в опыте; * — отличие от контроля по критерию χ² при р & — отличие от контроля по U-критерию Манна-Уитни при р ® for Treatment of Poxvirus Infections / R. Jordan [et al.] // Viruses. — 2010. — Vol. 2 (11). — P. 2409–2435.
Государственная лицензия ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России
на образовательную деятельность:
серия ААА № 001052 (регистрационный № 1029) от 29 марта 2011 года,
выдана Федеральной службой по надзору в сфере образования и науки бессрочно
Свидетельство о государственной аккредитации ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России:
серия 90А01 № 0000997 (регистрационный № 935) от 31 марта 2014 года
выдано Федеральной службой по надзору в сфере образования и науки
на срок по 31 марта 2020 года
Адрес редакции: 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52
тел./факс: (383) 229-10-82, адрес электронной почты: mos@ngmu.ru
Средство массовой информации зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) —
Свидетельство о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-72398 от 28.02.2018.
 |
|
08.02.2016 11.01.2016 28.12.2015 Читайте также:
 Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.
Copyright © Иммунитет и инфекции
|