Лабораторная диагностика анаплазмоза крупного рогатого скота

сельского хозяйства СССР

31 июля 1970 года

ПО БОРЬБЕ С АНАПЛАЗМОЗОМ КРУПНОГО И МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА

1. Анаплазмоз - трансмиссивная кровопаразитарная болезнь крупного и мелкого рогатого скота, характеризующаяся угнетением общего состояния, анемией и истощением животного.

К анаплазмозу также восприимчивы зебу, буйволы, олени, лоси, антилопы, сайгаки, козероги, белохвостые олени, архары.

Возбудитель анаплазмоза крупного рогатого скота - Anaplasma marginale , мелкого рогатого скота - A. ovis .

2. В целях предупреждения заноса анаплазмоза в хозяйство необходимо:

не допускать ввода в хозяйство (на ферму, отделение) больных анаплазмозом животных;

систематически проводить борьбу с клещами на животных, особенно в ранневесенний, летний и осенний периоды;

не менее 3 - 4 раз в год проводить дезакаризацию помещений, дворов, загонов и стоянок животных;

уничтожать клещей-переносчиков на пастбищах путем проведения агромелиоративных мероприятий и использования ядохимикатов в соответствии с действующими наставлениями.

3. Диагноз на анаплазмоз ставят на основании микроскопического исследования мазков крови животных с учетом эпизоотической обстановки, клинических признаков и патологоанатомических данных (см. Приложение N 1).

В сомнительных случаях от подозрительных по заболеванию животных направляют в лабораторию сыворотку крови для серологического исследования по РСК.

4. При установлении заболевания животных анаплазмозом на неблагополучное хозяйство (ферму, отару) накладывают ограничения и проводят следующие мероприятия:

больных животных отделяют от здорового поголовья, лечат антибиотиками тетрациклинового ряда в соответствии с Приложением N 2;

всех малоценных, переболевших анаплазмозом животных выбраковывают;

запрещают вывод больных и переболевших животных - анаплазмоносителей в благополучные хозяйства;

строго соблюдают правила асептики и антисептики при взятии крови, кастрации и других хирургических операциях.

5. В неблагополучных по анаплазмозу зонах, отобранных в племенных хозяйствах для продажи животных исследуют на анаплазмоз путем микроскопии мазков крови и по РСК. Положительно реагирующих на анаплазмоз животных вывозить в другие хозяйства запрещается.

Перед вывозом из хозяйства животные должны быть подвергнуты противоклещевой обработке акарицидными препаратами.

6. В неблагополучном по анаплазмозу хозяйстве все виды животноводческой продукции используют без ограничения.

7. Хозяйство (ферму, отару) считают благополучным по анаплазмозу и с него снимают ограничения при получении отрицательных результатов комплексного исследования всех животных данного вида по микроскопии и РСК.

к "Инструкции по борьбе

с анаплазмозом крупного

и мелкого рогатого скота"

АНАПЛАЗМОЗА КРУПНОГО И МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА

При постановке диагноза на анаплазмоз учитывают эпизоотологическое состояние местности, сезон года, клинические признаки заболевания и результаты микроскопического исследования мазков крови.

Из клинических признаков принимают во внимание лихорадку непостоянного типа, угнетенное состояние, у лактирующих коров и овец - снижение удоев, атонию преджелудков , запоры, учащение пульса, аритмию. В процессе болезни быстро нарастает анемия, конъюнктива при этом становится бледной, до цвета фарфора. Животные прогрессивно худеют, хотя аппетит в большинстве случаев сохранен. Больные животные отстают от стада, много лежат, стремятся спрятаться от солнца в тени. Постепенно развивается слабость, упадок сил, иногда наступает смерть при явлениях комы.

На вскрытии отмечают сильное истощение трупа, слизистые анемичны, иногда с оттенком желтушности. Скелетная мускулатура бледно-розового цвета. Кровь светлая, жидкая. Сердечная мышца дряблая, под эпикардом полосчатые и пятнистые кровоизлияния. Селезенка увеличена в 2 - 3 раза. Печень в большинстве случаев увеличена, с тупыми утолщенными краями, желтушна и пятниста.

Микроскопически диагноз ставят на основании обнаружения паразитов в мазках крови от больного и подозрительного по заболеванию животного.

Мазки фиксируют метиловым спиртом (3 - 5 минут) или этиловым (20 - 25 минут), или смесью этилового спирта и серного эфира в равных количествах (10 - 15 минут). После высушивания мазки окрашивают по методу Романовского (краска Гимза 1 - 2 капли на 1 мл воды, лучше слабощелочной или нейтральной реакции), азур-эозином или ускоренным способом по Щуренковой (см. Лабораторные методы исследования в ветеринарии, I, 1958 г., стр. 427).

Анаплазмы окрашиваются в темно-красный цвет, имеют округлую форму (похожи на точки), расположены преимущественно по периферии эритроцита. Размеры паразитов от 0,2 до 1,2 мк .

Степень пораженности эритроцитов бывает различной - от незначительной до 50% и более зараженных эритроцитов. В отличие от телец Жолли анаплазмы обычно мельче и менее интенсивно окрашены.

Не следует смешивать анаплазм с базофильной зернистостью эритроцитов, которая в большинстве случаев проявляется множественностью разнообразных форм включения в одном эритроците.

В местностях, неблагополучных по тейлериозу , пироплазмозу, бабезиозу и лептоспирозу, анаплазмоз необходимо дифференцировать от них. Нередко анаплазмоз проявляется вслед за этими болезнями и осложняет их. При дифференциации необходимо учитывать морфологию возбудителя.

При анаплазмозе, в отличие от других кровопаразитарных болезней, отсутствуют кровавая моча и, в большинстве случаев, желтушность видимых слизистых оболочек, несмотря на очень значительное уменьшение количества эритроцитов (до 1,5 млн. в 1 куб. мм); подъем температуры у животных проявляется в виде лихорадки постоянного или перемежающего типа; аппетит обычно сохраняется до конца болезни, но животные сильно худеют, часто до полного истощения.

В сомнительных случаях в лабораторию направляют сыворотки крови в количестве 3 - 5 мл для исследования в РСК. Реакцию ставят по общепринятой методике. При ограниченном количестве антигена реакцию можно ставить в объеме 0,5 мл, т.е. по 0,1 мл каждого компонента.

Положительной считается реакция в два креста в разведении сыворотки 1:5 и 1:10. При получении сомнительных результатов (один крест) исследование следует повторить через три месяца.

В отдельных случаях, когда необходимо установить благополучие по анаплазмозу овец овцеводческого хозяйства и нет возможности поставить РСК с анаплазмозным антигеном, с целью обострения паразитоносительства проводят спленэктомию 1 - 2 овец, подозрительных по заболеванию или анаплазмоносительству .

Наблюдения ведут в течение 25 - 30 дней, а исследования крови на наличие анаплазм проводят два-три раза в неделю.

В случае необходимости в ветлаборатории ставят биопробу на восприимчивых животных (крупный рогатый скот или овцы соответственно). Для постановки биопробы берут 50 - 100 мл дефибринированной , или цитрированной , или гепаринированной крови от животного, подозрительного в анаплазмоносительстве , и вводят реципиенту внутримышечно или подкожно, а затем проводят клинические наблюдения в течение 30 дней, исследуя мазки крови два-три раза в неделю. Диагноз считается установленным, если будут обнаружены анаплазмы в мазках крови.

к "Инструкции по борьбе

с анаплазмозом крупного

и мелкого рогатого скота"

ЛЕЧЕНИЕ БОЛЬНОГО АНАПЛАЗМОЗОМ РОГАТОГО СКОТА

Больных животных ставят под навес или в помещение, предохраняющее от солнечных лучей, дают легкоперевариваемый корм (хорошее сено, траву), вволю воды и соли. Если имеет место атония преджелудков , запор, то дают растительное или касторовое масло по 500 - 800 г корове и по 50 - 80 г овце, настойку чемерицы внутрь в принятых дозах.

В качестве специфической терапии применяют антибиотики тетрациклинового ряда: террамицин или тетрациклин в дозе 5000 - 10000 ЕД /кг в разведении 1:10 на 1 - 2-процентном растворе новокаина, внутримышечно, 4 - 6 дней подряд с интервалом в 24 часа.

Хорошие результаты дает введение террамицина внутривенно в 1 - 1,5-процентном растворе на 40-процентной глюкозе в дозе 10 - 15 мг/кг, 3 - 4 раза с интервалом в 12 - 24 часа.

Биомицин (хлортетрациклин) и биоветин применяют внутрь индивидуально в виде водной суспензии: биомицин - крупному рогатому скоту 10 мг/кг, овцам - 5 - 7,5 мг/кг, биоветин - крупному рогатому скоту - 40 мг/кг, овцам - 25 - 30 мг/кг 5 - 6 дней подряд, один раз в сутки. Растворы антибиотиков готовят перед применением.

Примечание. После первой или второй дачи внутрь биомицина или биоветина у овец может наступать снижение аппетита, замедленное движение рубца, разжижение фекалий. Это не является препятствием к продолжению курса лечения, так как через 2 - 3 дня указанные явления исчезают.

Можно применять спирт-риванол внутривенно по прописи: риванола 0,2 г, спирта-ректификата 60 мл, воды дистиллированной 120 мл. Риванол растворяют в горячей кипяченой воде, фильтруют и охлаждают до 40 - 50 °C, затем добавляют спирт и вводят внутривенно больному крупному рогатому скоту в объеме 180 мл, овцам - 18 - 20 мл.

В целях быстрейшего выздоровления, восстановления продуктивности и упитанности больным животным дают ежедневно микроэлементы внутрь в водном растворе 1:600 - 1:1000 (сернокислую магнезию, сернокислую медь по 1 - 2 мг/кг и хлористый кобальт по 0,5 - 1 мг/кг) в течение 10 - 15 дней в период болезни и после клинического выздоровления.

В тяжелых случаях, кроме того, инъецируют витамин B12 в дозе 1 - 2 мкг/ кг через каждые 1 - 2 дня пять-шесть раз, а также по показаниям назначают сердечные - кофеин, камфору крупному рогатому скоту по 5 - 10 мл 20-процентного раствора, овцам по 0,5 - 1,0 мл.

Интернет архив законодательства СССР. Более 20000 нормативно-правовых актов.
СССР, Союз Советских Социалистических республик, Советская власть, законодательство СССР, Ленин, Сталин, Маленков, Хрущев, Брежнев, Андропов, Черненко, Горбачев, история СССР.

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Георгиу Христофис, Белименко Владислав Валерьевич

В настоящее время для диагностики анаплазмоза применяют различные методы: микроскопические, серологические и молекулярно-биологические. Решающим в диагнозе является положительный результат микроскопических исследований мазков крови, окрашенных по Романовскому. Наиболее чувствительные методы серологической диагностики ИФА и РНГА. Для успешной диагностики следует комбинировать различные методы.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Георгиу Христофис, Белименко Владислав Валерьевич

Modern Laboratory Detection Methods of Anaplasmosis of Cattle and Sheeps

The diagnosis of anaplasmosis of cattle and sheeps is an important tool to control and prevent the dissemination of the disease. Identification of the parasite in mammalian can be used for direct diagnosis purposes. During the acute stage of the disease the number of parasites inside the erythrocytes increases in such a way that they can be detected microscopically. However, in chronically infected animals where a subclinical form of the disease occurs, this method is useless and other, more sophisticated methods (e.g. CFT, IHAT, ELISA and Molecular Methods) should be employed.

УДК 619: 616.993.192.5.995.1: 576.893.192.6

Современные лабораторные методы диагностики анаплазмоза крупного рогатого скота и овец

Х. Георгиу, доктор биологических наук (chgeorgiou@rambler.ru), В.В. Белименко, кандидат биологических наук (vlad_belimenko@mail.ru)

ГНУ Всероссийский НИИ экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко (ВИЭВ) (Москва).

В настоящее время для диагностики анаплазмоза применяют различные методы: микроскопические, серологические и молекулярно-биологические. Решающим в диагнозе является положительный результат микроскопических исследований мазков крови, окрашенных по Романовскому. Наиболее чувствительные методы серологической диагностики — ИФА и РНГА. Для успешной диагностики следует комбинировать различные методы.

Ключевые слова: анаплазмоз, Anaplasma marginale, Anaplasma ovis, крупный рогатый скот, лабораторная диагностика, паразитемия

Сокращения: ДНК—дезоксирибонуклеиновая кислота, ИФА (ELISA) — иммуноферментный анализ (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), МТ—масса тела, ПЦР— полимеразно-цепная реакция, РДП—реакция диффузной преципитации, РДСК — реакция длительного связывания комплемента, РНГА — реакция непрямой гемагглю-тинации, РФ — Российская Федерация, РФА — реакция флуоресцирующих антител, СНГ — Содружество Независимых Государств, ФО — федеральный округ

Анаплазмоз (Anaplasmosis)—трансмиссивное сезонное заболевание крупного рогатого скота и овец, протекающее с признаками анемии, лихорадки и истощения, вызываемая паразитами из рода Anaplasma (Rickettsia). Болеют также дикие жвачные: зебу, буйволы, олени, лоси, косули, антилопы.

У крупного рогатого скота возбудители анаплазмоза — Anaplasma marginale Theiler, 1910 и A. centrale Theiler, 1912, у овец — A. ovis Lestoquard, 1924. Переносчики ана-плазм — кровососущие членистоногие. Перенос анаплазм от больных животных к здоровым возможен также при нарушении ветеринарно-санитарных норм во время проведения ветеринарно-зоотехнических мероприятий (взятие крови одной иглой, биркование и др.). В организме переболевшего крупного рогатого скота анаплазмы сохраняются в течение 13. 15 лет, у овец — до 5 лет [8, 10, 15].

Анаплазмозы крупного рогатого скота и овец широко распространены во всем мире: во многих станах Европы и Азии, во всех государствах Африки, Америки и Австралии. В странах СНГ это заболевание регистрируют в Украине, Белоруссии, Молдавии, Казахстане, государствах Средней Азии и Закавказья. Особенно значительный экономический ущерб заболевание наносит в тропических и субтропических регионах, где гибель больных животных может достигать 96.100 % [2, 8, 15, 24].

В РФ, согласно ветеринарной отчетности, неблагополучными по анаплазмозу являются субъекты Центрального, Северо-Западного и Приволжского ФО [9, 10].

При постановке диагноза на анаплазмоз рогатого скота следует учитывать эпизоотическое состояние, сезон, кли-

нические признаки, патоморфологические изменения и результаты микроскопического исследования крови. Решающим в диагнозе является положительный результат микроскопических исследований мазков крови. В настоящее время в лабораторной диагностике анаплазмоза широко используют серологические методы. При проведении научных исследований применяют молекулярно-биологические методы, а также метод биопробы на восприимчивых животных или спленэктомию подозреваемого в анаплазмоносительстве животного [8, 15].

Микроскопический метод. Анаплазмы — это круглые, размером 0,2. 1,2 мкм включения в эритроцитах (рис.). Иногда их обнаруживают в лейкоцитах и тромбоцитах. При исследовании мазков крови, окрашенных по Романовскому, обнаруживают круглые включения почти темного цвета. Анаплазмы располагаются в эритроцитах преимущественно на периферии, иногда ближе к центру. В одном эритроците может быть от одного до четырех возбудителей. Паразитемия составляет 3.40 %, в отдельных случаях может достигать 80 % [11, 21].

При электронной микроскопии было установлено, что у анаплазм отсутствуют цитоплазма и ядро. Также были выявлены так называемые инициальные тельца, или микроколонии. Это округлые или овальные образования, покрытые тонкой мембраной. Кроме того, сама микроколония окружена двуслойной плазменной мембраной, содержимое которой имеет вид гранулированной, лентовидной или кольцевидно-трубчатой структуры [21].

Серологические методы. Диагностика анаплазмоза (особенно в начале болезни и при анаплазмоносительстве) зачастую бывает затруднена. Своеобразная мелкая форма возбудителя в виде точки и возможное наличие в эритроцитах здоровых животных различных включений (тельца Жолли и др.) могут приводить к постановке ложных диагнозов.

Именно эти трудности в идентификации анаплазм вызвали необходимость изыскивать специфические и более эффективные средства диагностики. Для диагностики анаплазмоза и анаплазмоносительства в лаборатории протозоологии ВИЭВ разработаны и используются серологические методы. Также было выявлено, что А. marginale и А. ovis имеют общие антигены, что позволило изготавливать антиген из возбудителя анаплазмоза овец для серологической диагностики заболевания у животных обоих видов [5, 7, 8].

Георгиу Х, Белименко В.В.

Anaplasma marginale в эритроцитах коровы.

по Романовскому об. 10, ок. 90

РДСК. Данный метод широко применяют в лабораторной диагностике анаплазмоза. Его недостаток — не всегда удается выявить комплементсвязывающие антитела у анаплазмоносителей, в результате чего анаплазмоз из неблагополучных районов может распространиться в благополучные. Антиген для реакции получают из крови сплен-эктомированных животных, зараженных анаплазмозом. Установлено, что чем выше паразитемия у подопытного животного, тем выше титр получаемого антигена [3.8. 14].

РНГА. Это простой и довольно чувствительный по сравнению с РДСК метод. В России его впервые применил Х. Георгиу при анаплазмозе крупного рогатого скота и овец, используя антигены, употребляемые в реакции связывания комплимента. Также он провел сравнительную оценку РНГА с другими серологическими реакциями [2, 6, 8].

ИФА. Это высокочувствительный и высокоспецифичный метод (в зарубежной литературе эта реакция получила название ELISA [12, 19]), имеющий ряд преимуществ по сравнению с другими серологическими тестами. В настоящее время в серодиагностике кровепаразитарных заболеваний наибольшее практическое применение получил твердофазный ИФА. Метод основан на использовании иммобилизированных антител (антигенов), что обеспечивает быстрое и эффективное разделение свободного и связавшегося с антителами ферментного конъюгата. В России ИФА тест-систему для диагностики анаплазмоза рогатого скота разработал Х. Георгиу [6, 8, 12].

РДПв агаровом геле. В лабораторной диагностике метод не применяют. Однако его успешно использовали в экспериментальных целях для диагностики анаплазмоза у больного крупного рогатого скота и кроликов, иммунизированных анаплазменным антигеном (А. marginale и А. ovis) [3, 5].

Иммунофлуоресцентные методы. Непрямой метод иммунофлуоресценции (РФА) используют для обнаружения и идентификации возбудителей в крови и во внутренних органах животных и ретроспективной диагностики кровепаразитарных болезней у переболевших ж:ивотных.

Прямой метод иммунофлуоресценции применяют с целью идентификации возбудителей в крови и в мазках-отпечатках из внутренних органов больных ж:ивотных [21].

Молекулярно-биологические методы. При экспериментальных исследованиях достаточно широко применяют

ПЦР с целью идентификации возбудителя A. marginale и A. ovis в крови больных и переболевших животных, а также для индикации возбудителей в иксодовых клещах и насекомых. Кроме того, метод используют для изучения нуклеотидного состава ДНК и молекулярно-биологических свойств и особенностей различных штаммов и изолятов возбудителей [1, 13, 15, 17, 18, 23].

В настоящее время для диагностики анаплазмоза применяют различные методы: микроскопические, серологические и молекулярно-биологические. Решающим в диагнозе является положительный результат микроскопических исследований мазков крови, окрашенных по Романовскому. Наиболее чувствительные методы серологической диагностики — ИФА и РНГА. Для успешной диагностики следует комбинировать различные методы.

2. Ахмадов, Н.А. Серологические исследования анаплазмоза крупного рогатого скота в Таджикистане / Н.А. Ахмадов, Х. Георгиу, В.В. Белименко, Х.О. Давладов // Доклады ТАСХН. — 2012. — №2. — С. 52-54.

3. Георгиу, Х. Серологическая диагностика анаплазмоза у овец / Х. Георгиу // Сборник научных трудов МВА. — 1980. — Т.116. — С. 72-76.

4. Георгиу, Х. Комплементсвязывающие антитела и паразитемия у овец при анаплазмозе / Х. Георгиу // Труды ВИЭВ. — 1982. — Т. 56. — С. 95-98.

5. Георгиу, Х. Серологическая диагностика анаплазмоза рогатого скота / Х. Георгиу, Н.А. Казаков, С.Д. Родин // Труды ВИЭВ. — 1983. — Т. 57. — С. 35-42

6. Георгиу, Х. Диагностическая ценность ИФА и РНГА при анаплазмозе / Х. Георгиу // Тезисы докладов и сообщений IV Съезда ВОПР, 1987. — С. 125-126.

7. Георгиу, Х. Серологические реакции для диагностики анаплазмоза / Х. Георгиу, Н.И. Степанова // Ветеринария. — 1987. — №5. — С. 43-45.

8. Георгиу Х. Сравнительная оценка серологических тестов (РДСК, РНГА и ИФА) для диагностики анаплазмоза рогатого скота и нутталлиоза лошадей / Х. Георгиу: автореф. дис. . док. биол. наук: — М., 1997. — 56 с.

9. Гулюкин, М.И. Мониторинг эпизоотической ситуации по протозойным кровепаразитарным болезням домашних животных в Российской Федерации (2007-2012) / М.И. Гулюкин, В.Т. Заблоцкий, В.В. Белименко // РВЖ.СХЖ. — 2013. — №2. — С. 36-40.

10. Заблоцкий, В.Т. Профилактика кровепаразитарных болезней домашних животных / В.Т. Заблоцкий, В.В. Белименко // Веткорм. — 2013. — № 4. — С. 38-40.

11. Корниенко-Конева, З.П. Анаплазмоз крупного рогатого скота / З.П. Корниенко-Конева // Труды ВИЭВ. — 1957. — Т. 21 — С.112-121.

13. Aubry P. Sensitivity and Specificity of a Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Relative to Quantitative Reverse Transcriptase PCR for Detection of Anaplasma marginale and A. phagocytophilum / P. Aubry, J. Pare // J Clin Microbiol. — 2012 August. — V. 50. — N. 8. — P. 28-38.

аспирант, кафедра: "Ветеринарная медицина", Московский Государственный Университет Пищевых Производств

109316, Россия, Московская область, г. Москва, ул. Талалихина, 33, ауд. 340

Blyumenkrants Dmitry Alekseevich

Postgraduate at the Department of Veterinary Medicine, Moscow State University of Food Production

109316, Russia, Moskovskaya oblast', g. Moscow, ul. Talalikhina, 33, aud. 340

Blumenkrantsda@gmail.com

Дата направления статьи в редакцию:

Предметом исследования является рассмотрение дифференциально-диагностических признаков анаплазмоза животных. В настоящее время в условиях обеспечения стабилизации отрасли животноводства важной задачей является снижение падежа и поддержание высокого уровня репродуктивности животных. Одним из факторов, вызывающих гибель высокопродуктивных сельскохозяйственных животных и снижения их репродуктивной способности является анаплазмоз. Наличие благоприятных природно-климатических условий, нарушение или невыполнение инструкций по проведению плановых ветеринарных мероприятий обуславливают широкое распространение заболевания, нанося значительный экономический ущерб животноводству. Выявление анаплазм на ранних этапах развития заболевания зачастую затруднено в связи с своеобразной формой возбудителя, обусловливая необходимость проведения наиболее чувствительных серологических методов диагностики. Снижение хозяйственной и племенной ценности приводит к вынужденному убою и выбраковке животных, увеличивая общие экономические потери хозяйств от анаплазмоза. В статье приведены данные о распространении и дифференциально-диагностические признаки анаплазмоза животных, на основании аналитического обзора источников литературы. Основными выводами проведённого исследования являются: установление широкого распространения инвазирования сельскохозяйственных животных возбудителями рода Anaplasma. Хроническое течение и паразитоносительство отмечено как основная форма течения заболевания. Экстенсивность инвазии варьирует от 1,54% до 46,9%, не зависимо от районов обитания и способов содержания животных, что свидетельствует о стабильном наличии анаплазм в кровососущих членистоногих, обусловливая высокие показатели циркуляции возбудителя в хозяйствах. Решающим в диагностике анаплазмоза является положительный результат микроскопических исследований мазков крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Серологические методы являются основными для видовой идентификации анаплазм. При этом одной из наиболее значимых является реакция иммунофлюоресценции.
Ключевые слова: дифференцирование, выявление, диагностика, распространение, очаговость, эпизоотология, возбудитель, переносчик, анаплазмоз, серологические методы

The article studies differential diagnostic signs of anaplasmosis in animals. Currently, in the context of ensuring the stabilization of livestock farming, an important task is to reduce mortality and maintain the high level of animal reproduction. One of the factors causing loss of highly productive farm animals and reducing their reproductive ability is anaplasmosis. Favourable weather and climate conditions and breach or nonobservance of instructions requesting to carry out scheduled veterinary activities lead to wide distribution of the disease which damages the economic industry. Identification of anaplasm on the early stages of the disease is often difficult due to the peculiar form of the pathogen, necessitating the conduct of the most sensitive serological diagnostic methods. The decrease of economic and breeding value leads to compulsory slaughter and culling thus increasing the general economic losses of farms caused by anaplasmosis.The article presents the data about the distribution and differential diagnostic characters of anaplasmosis in animals, based on the analytical review of scientific sources and literature. The author establishes the widespread infestation of farm animals with Anaplasma agents. Chronicity and parasitosis are referred to as the main features of the course of the disease. The prevalence varies from 1.54% to 46.9% regardless of the habitat and the conditions of animal management which indicates the permanent presence of Anaplasma in tongue worms determining the high rates of circulation of the disease agents in farms. The decisive factor in anaplasmosis diagnosis is the positive result of microscopic examination of Romanovsky-Giemsa stained blood smears. Serological methods are essential for Anaplasma species identification. At the same time, one of the most significant tests is the immunofluorescence test.

Serological methods, differentiation, revealing, diagnostics, Spread, focality, epizootology, pathogen, carrier, anaplasmosis

Актуальность работы. В настоящее время в условиях обеспечения стабилизации отрасли животноводства важной задачей является снижение падежа и поддержание высокого уровня репродуктивности животных. Одним из факторов, вызывающих гибель высокопродуктивных сельскохозяйственных животных и снижения репродуктивной способности является анаплазмоз [4,17] .

Анаплазмоз – трансмиссивное заболевание, возбудителем которого является внутриклеточный микроорганизм рода Anaplasma , отряда Riсkettsiales , семейства Anaplasmatacеa . Основными клиническими признаками данного заболевания является анемия, прогрессирующее исхудание, снижение продуктивности и нарушение воспроизводительной функции животных. Распространение данного заболевания напрямую связано с ареалом обитания клещей семейства иксодовых, аграсовых и кровососущих насекомых – переносчиков возбудителя анаплазмоза [14,9] .

Наличие благоприятных природно-климатических условий, нарушение или невыполнение инструкций по проведению плановых ветеринарных мероприятий обусловливают широкое распространение заболевания, нанося значительный экономический ущерб животноводству. Снижение хозяйственной и племенной ценности приводит к вынужденному убою и выбраковке животных, увеличивая общие экономические потери хозяйств от анаплазмоза [2,3] .

Цель работы – изучение дифференциально-диагностических признаков анаплазмоза животных.

Обзор литературы. Заболевание регистрируется во многих странах мира, в частности странах Балтии, Средней Азии, Латинской Америки, при исследовании 1161 образца крови сельскохозяйственных животных процент положительных реакций на анаплазмоз составил: в Турции - 31,4%, в Ираке - 66,6%, Судане – 41,6%, в Португалии - 82,5% [19] .

При исследовании 2500 образцов крови у жвачных животных Северных регионов Китая, средняя распространенность моноинфекции у каждого вида составляла 17,6% (A. phagocytophilum), 4,8% (A. bovis) и 40,5% (A. ovis). В ассоциативной форме заболевание обнаруживалось у 8,0% животных [20] .

В северной части республики Таджикистан из общего числа образцов крови крупного рогатого скота (1110 мазков) возбудитель, в форме моноинфекции анаплазмоз обнаружен у 15,4%, в смешанной инвазии у 29,2% исследуемых животных, отношение анаплазмоза к общей заболеваемости в республике составило 44,6 % случаев [6] .

Экстенсивность инвазии варьирует от 1,54% до 46,9%, не зависимо от ареалов обитания и способов содержания сельскохозяйственных животных, свидетельствуя о постоянном наличии анаплазм в переносчиках возбудителя – кровососущих членистоногих, что обеспечивает высокие показатели циркуляции и инвазивности продуктивных животных в хозяйствах [10] .

Отличительными чертами анаплазмоза является сезонность и природная очаговость, что обусловлено переносчиками возбудителя – клещами, семейства иксодовых и аграсовых. На ряду с этим, длительная, иногда пожизненная циркуляция возбудителя анаплазмоза в организме переболевшего животного – анаплазмоносительство, при условии снижения резистентности организма предрасполагает к рецидивам. Высокие показатели инвазивности анаплазмами могут быть обусловлены церкуляцией в регионе возбудителей других инфекционных заболеваний, таких как хламидиоз, лептоспироз, сальмонеллез и др., снижая иммунную резистентность здоровых и переболевших животных, приводя к проявлению заболевания в ассоциативной форме [11] .

Наличие в неблагополучных регионах большого количества кустарников, сорняков, необработанных пастбищ служит благоприятными условиями для развития переносчиков возбудителя, распространение анаплазмоза обусловливают природно-климатические и географические особенности региона [1] .

Географическое расположение северных регионов в лесостепной и подтаёжных зонах обеспечивает высокий показатель средней заражённости животных, при среднем количестве неблагополучных районов севера [2] .

Источником возбудителя анаплазмоза служат заражённые и больные животные. Возбудитель может передаваться механическим путём от зараженных животных к здоровым через нестерильные инструменты при проведении зоотехнических мероприятий [14] .

Пики заболеваемости животных анаплазмозом в независимости от региона совпадают с пиком нападения клещей-переносчиков семейства аграсовых и иксодовых – первичный пик нападения приходится на весну с 13 – 15 мая (с момента начала пастбищного периода) со вторым пиком 10 – 14 июня [3] .

Сезонность заболевания отражается в неодинаковом проявлении клинических признаков на протяжении года. Данная особенность обусловлена различными климатическими условиями регионов, выражающихся в различных показателях температур, напрямую влияющих на активность клещей – переносчиков возбудителя и перехода от стойлового периода содержания к пастбищному.

Наблюдения за больными и переболевшими животными свидетельствуют о сложности патогенеза и эпизоотического процесса при анаплазмозе животных [8] . Анаплазмоз протекает в форме моноинфекции, но и может принимать ассоциативную форму, при такой форме течения клинические признаки проявляются более выражено, форма заболевания более тяжелая, у беременных животных может вызывать аборты. Снижение резистентности организма, обусловленное внешними факторами или другими заболеваниями при анаплазмоносительстве, вызывают активизацию условно – патогенной микрофлоры, которая на ранних сроках развития заболевания подавляет естественные защитные факторы, снижая общий фон иммунологических показателей [5] .

В неблагополучных районах низкая интенсивность инвазии приводит к течению заболевания в субклинической форме, анаплазмоносительство может продолжаться длительный период, включающий в себя пожизненную инвазивность анаплазмами, что при условии снижения общей резистентности организма может вызывать спорадические случаи проявления клинических признаков острого течения заболевания [1] .

В целях дифференциальной диагностики анаплазмоза сельскохозяйственных животных используют такие методы: микроскопические, серологические и молекулярно-биологические. Серологические методы, основанные на использовании реакции антител - антигена возбудителя анаплазмоза, имеют недостаточно высокую чувствительность и не позволяют дифференцировать А. marginale от непатогенных для крупного рогатого скота видов анаплазм [16] . К наиболее чувствительным методам серологической диагностики анаплазмоза относят ИФА и РНГА. Зачастую диагностика данного заболевания с помощью серологических методов затруднительна. Своеобразная мелкозернистая точечная форма возбудителя, наличие в эритроцитах здоровых животных различного рода включений (телец Жолли и др.) могут приводить к постановке ложных диагнозов [12] .

Экспериментальные исследования по изучению возможности применения РНИФ в качестве диагностического теста при анаплазмозе крупного рогатого скота, позволило установить возможность использования данной серологической реакции, для обнаружения антител в крови инфицированных и подозреваемых в заражении возбудителем анаплазмоза животных. Анализ результатов исследований показал, что реакция непрямой ИФА, является эффективным диагностическим тестом для обнаружения возбудителя анаплазмоза крупного рогатого скота в клещевом материале, выявляя при этом до 45±11,1 - 50±15,8% заражённых особей [2] .

РНГА является простым и наиболее чувствительным по сравнению с РДСК методом. В России данный метод впервые применил Х. Георгиу при анаплазмозе крупного рогатого скота и овец, используя антигены, употребляемые в реакции связывания комплимента. В результате при проведении РНГА гемагглютинирующие антитела выявлялись в среднем на 5 дней раньше, чем комплементсвязывающие и почти одновременно с появлением анаплазм в мазках периферической крови. РНГА является чувствительным тестом для диагностики анаплазмоза и выявляет его в более ранние сроки в сравнении с РДСК [12] .

Сравнительная оценка РНИФ, РНГА и световой микроскопии позволяет сделать вывод о преимуществе первых двух тестов, из которых наиболее чувствительной реакцией является РНИФ - 90,5%, несколько ниже - 90% РНГА, световая микроскопия - 86% РНИФ и РНГА являются более технологичными по отношению к световой микроскопии и могут применяться единовременно с проведением массовых серологических исследований крупного рогатого скота на бруцеллез, лейкоз и другие инфекционные болезни [7] .

Метод РДСК широко применяют в лабораторной диагностике анаплазмоза. Его недостатком является непостоянное выявление комплементсвязывающих антител у анаплазмоносителей. Антиген для реакции получают из крови сплен-эктомированных животных, зараженных анаплазмозом Установлена прямая корреляционная зависимость между высоким уровнем паразитемии у животного с высоким титром получаемого антигена [12] .

При сравнении результатов применения метода РДСК отмечено начало выявления комплементсвязыпамцих антител у телят в среднем на 20-25 день после заряжения, титры антител составляют - 1:5. Далее происходит повышение уровня титра антител и к 30-45 дню достигает своего максимума - от 1:40 до 1:320. После этого выявляется постепенное снижение уровня антител и к 65-75 дню после заражения, наблюдаясь, в среднем, в разведении сыворотки -1:10 до 1:20. С целью выявления комплементевязнвающих антител проводимое микроскопирование мазков крови у телят для установления сроков появления анаплазм в периферической крови показало несовпадение обнаружения анаплазм с появлением комплементсвязывающих антител. Анаплазмы в мазках периферической крови появляются на 10 дней раньше, чем комплементсвязывающие антитела в сыворотках крови у телят. Часто пик комплементсвязывающих антител наблюдается после угасания паразитемии и начала восстановления крови [13] .

Более быстрая и точная диагностическая информация получена с помощью выявления ДНК анаплазм в крови сельскохозяйственных животных при момощи ПЦР. Преимуществом полимеразной цепной реакции является высокий уровень чувствительности и специфичности, позволяя обнаружить анаплазм на ранних этапах развития заболевания, включая латентную фазу и с наибольшей долей вероятности дифференцировать возбудителя анаплазмоза от других сходных по клиническому проявлению болезней животных [16] . Чувствительность метода позволяет выявить 100 копий гена msp4 A. marginale и более. Проведенные испытания свидетельствуют о 100%-ной повторяемости и воспроизводимости метода ПЦР [8] .

Решающим в постановке диагноза является положительный результат микроскопических исследований мазков периферической крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Результаты микроскопических исследований мазков крови могут быть недостоверны на ранних стадиях течения заболевания и в случаях заболеваний, сопровождающихся тяжелой формой анемии [16] . Анаплазмы в мазках обнаруживаются, как круглые, размером 0,2 - 1,2 мкм эритроцитарные включения. Зачастую возбудитель обнаруживается в лейкоцитах и тромбоцитах, в форме округлых образований почти темного цвета. Анаплазмы занимают преимущественно переферическое, реже – центральное положение в эритроцитах. Один эритроцит может содержать от одного до четырёх возбудителей [8] .

При дифференциальной диагностике анаплазм, необходимо учитывать культуральные свойства возбудителя. На вторые - третьи сутки выращивания на культуре клеток Vero, наблюдаются дегенеративные изменения восприимчивых клеток, обнаруживалось изменеие клеточной структуры характеризующеся истончением клеточных мембран. Анаплазмы поражают не только цитоплазматическое пространство, но и проникая в клеточное ядро, разрушают ядерную оболочку [2] .

Выводы. Анализируя данные литературы можно сделать вывод, что установлено широкое распространение инвазирования сельскохозяйственных животных возбудителями рода Anaplasma. Хроническое течение и паразитоносительство отмечено как основная форма течения заболевания. Экстенсивность инвазии варьирует от 1,54% до 46,9%, не зависимо от районов обитания и способов содержания животных, что свидетельствует о стабильном наличии анаплазм в кровососущих членистоногих, обусловливая высокие показатели циркуляции возбудителя в хозяйствах. Решающим в диагностике анаплазмоза является положительный результат микроскопических исследований мазков крови, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Серологические методы являются основными для видовой идентификации анаплазм. При этом одной из наиболее значимых является реакция иммунофлюоресценции.