Эфемерная лихорадка крупного рогатого скота
Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Сент Джордж T.Д.
Описанный феномен нарушения свертывания крови возникает у большей части заболевших эфемерной лихорадкой животных, что позволяет пользоваться его обнаружением в диагностических целях. Исключить эфемерную лихорадку этим простым методом удается в течение нескольких часов на основании отсутствия нарушения свертывания крови животных, находящихся на разных стадиях болезни.
Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Сент Джордж T.Д.
Effect of ephemeral fever of cattle on the appearance and contraction of blood clots
The disturbance of blodd cloting has been observed in a large proportion of cattle with bovine ephemeral fever. It can be use for express diagnostic of this disease.The clots contracted normally in the incubation period but not during the latter part of the illness. The clot appearance returned to normal after recovery. The yield of serum from such abnormal clots could not be increased by prolonged centrifugation of the clots. Aust Vet J Vol, 2000, 78, 12, 857-858.
КРУПНЫЙ РОГАТЫЙ скот
Образование и ретракция сгустка крови при эфемерной лихорадке крупного рогатого скота
Т.Д. Сент Джордж (Квинсленд, Австралия)
Ключевые слова: кровь, крупный рогатый скот, эфемерная лихорадка
Сокращения: КРС — крупный рогатый скот; ПК — пробы крови
Зфемерная лихорадка заболевание КРС, сопровождающееся высокой температурой на протяжении 2. 4 дней. Ее вызывает рабдовирус (вирус эфемерной лихорадки КРС типа 1), переносчиком которого являются комары |4|. В большинстве случаев болезнь проявляется лишь небольшим угнетением, перенеся которое животные быстро выздоравливают, но изредка их клиническое состояние усугубляется такими осложнениями как паралич.
Для изучения гематологических изменений, сопровождающих эфемерную лихорадку, ежедневно для анализов брали кровь от большого числа естественно больных и 150 экспериментально зараженных животных. ПК оставляли при комнатной температуре до образования сгустка. После ретракции сгусток отделяли от сыворотки. Кровь, взятая в инкубационный период инфекции обычно нормально сворачивалась. На клинической стадии болезни процесс свертывания крови нарушался, а после выздоровления вновь восстанавливался. От сгустка крови клинически больных животных отделялось очень мало сыворотки, и повысить ее объем посредством увеличения времени инкубации или центрифугирования не удавалось.
В 1987 г. от 8 телок стерильно взяли кровь и разлили ее но 25 мл в пустые стерильные контейнеры (для получения сгустка) и по 10 мл в пробирки с натриевой солью этилендиамин-тетраусусной кислоты (для оценки содержания фибриногена). Часть ПК и ее фракций использовали для проведения вирусологического, серологического, биохимического и гематологического исследований. После 48-часовой инкубации при комнатной температуре ПК взвешивали, отделяли от них сыворотку, определяли массу сгустка и то, какую она составляет часть от первоначально взятой ПК (рис. 1). Кон-
центрацию фибриногена и величину рН несвернувшихся ПК определяли 1 раз в день и с интервалом в 4 ч соответственно 13,5].
Гакже наблюдали за процессом свертывания крови. В период лихорадки время образования сгустка увеличивалось -такие изменения сохранялись в течение 2. 4 дней. При нарушении свертывания крови пропадала или значительно снижалась ретракция сгустка, он становился полосатым из-за появления белых волокон, а вокруг него появлялся беловатый гель. Последний формировался в периферической части сгустка и выделялся в начальной стадии ретракции. Признаки нарушения свертывания крови хорошо заметны в пробирке с ПК одной из восьми больных эфемерной лихорадкой телок (рис. 2).
Рис. 1. Лихорадка и свертывание крови при эфемерной лихорадке КРС
Рис. 2. Кровь, взятая у телки, больной эфемерной лихорадкой (слева), с признаками нарушения ретракции сгустка и отделения сыворотки. Справа нормально свернувшаяся ПК
Па рисунке 1 показано, как повышается относительное количество сыворотки при свертывании крови, взятой в первые 40 ч после начала лихорадки. В этот период снижалась концентрация фибриногена, и в течение 6 ч нормализовалась температура тела животных. Такая температурная реакция типична для эфемерной лихорадки: очень часто через 2. 36 ч. после начала клинической стадии инфекции температура тела животных снижается до нормальной, а затем повышается в еще большей степени, чем раньше. Представленные на рисунке 1 данные указывают на то, что действие фактора, вызвавшего воспалительный процесс, в указанный короткий период прекращается.
Д. Фенвик [ 1] также описал при молочной лихорадке коров нарушение свертывания крови, проявившееся замедлением образования сгустка и прекращением его ретракции. Он считал, что такая коагулопатия обусловлена снижением концентрации кальция в крови. Действительно, после повышения
48 60 72 84 96 108 120 132
20 18 ■16 • -14 -12 10
КРУПНЫЙ РОГАТЫЙ скот
температуры тела у телки, данные о свертывании крови которой приведены на рис. 1, содержание кальция в крови снизилось на 20 % по сравнению с предшествующим периодом.
Провели экспериментальное изучение влияния двухвалентных ионов (кальция, магния, меди, цинка и железа) на формирование сгустка. С этой целью в ПК животных, больных эфемерной лихорадкой, добавляли растворы солей перечисленных элементов (по отдельности или в комбинации с кальцием). Ни один из элементов, включая кальций, не оказывал существенного влияния на процесс образования и ретракции сгустка.
В лихорадочный период рН крови повышалась только на 0,2 — маловероятно, что такие изменения повлияли на свертывание крови. Концентрация тромбоцитов в крови при эфемерной лихорадке также значительно не изменяется [2, 6]. Диссеминированной внутрисосудистой коагуляции при этом заболевании не наблюдают [6]. При экспериментальном течении болезни эритроцитоза не происходит.
Описанный феномен нарушения свертывания крови возникает у большей части заболевших эфемерной лихорадкой животных, что позволяет пользоваться его обнаружением в диагностических целях. Исключить эфемерную лихорадку этим простым методом удается в течение нескольких часов на основании отсутствия нарушения свертывания крови животных, находящихся на разных стадиях болезни.
В настоящее время при маститах коров применяют две основные группы лекарственных средств: препараты для лечения клинических и субклинических маститов в период лактации и препараты, применяемые при запуске коров (т. е. в начале периода сухостоя).
Лечение в лактационный период
Основная цель терапии маститов во время лактации состоит в восстановлении молочной продуктивности коров, т.к. основные потери при воспалении молочной железы обусловлены снижением надоев и качества молока. Лечение следует начинать как можно раньше, чтобы предотвратить дальнейшее поражение тканей вымени, переход острого процесса в хронический и передачу инфекции другим коровам в стаде. Для максимального уменьшения потерь, связанных с выбраковкой молока, курс терапии и срок ожидания1 должны быть как можно более короткими. Поэтому при выборе антимикробных препаратов отдают предпочтение тем, которые проявляют быстрое и интенсивное бактерицидное действие на основных возбудителей мастита.
В России зарегистрированы и сертифицированы три препарата компании Пфайзер для лактирующих коров: Ампиклокс IX, Синулокс IX и Линкоцин Форте Б. Они поставляются в одноразовых пластиковых шприцах для интра-цистернального введения в комплекте со специальными дезинфицирующими салфетками.
Ампиклокс IX содержит 75 мг ампициллина и 200 мг клоксациллина.
В состав Синулокса IX входят 200 мг амоксициллина тригидрата, 50 мг клавулановой кислоты (в форме кальция
1 Срок ожидания — период времени после завершения лечения, после которого молоко можно использовать в пищу.
1. Fenwick D. The downer cow syndrome. Aust Vet J, 1969, 45, 184—188.
2. Mackerras I.M., Mackerras M.J., Burnet F.M. Experimental studies of ephemeral fever in Australian cattle. CSIR Bull № 136, Melbourne. 1940, 1—230.
3. McSherry B.J., Horney F.D., de Groot J.J. Plasma fibrinogen levels in normal and sick cows. Can J Comp Med, 1970, 34, 191—197.
4. St.George T.D. Bovine ephemeral fever. Chapter 4. In: Coetzer J.A.W., Thompson G.R. and Tustin R.C. (Eds.). Infectious Diseases of Livestock with Special Reference to South Africa.Oxford Univ Press, Capetown. 1994.
5. Uren M.F., St.George T.D., Murphy G.M. Studies on the pathogenesis of bovine ephemeral fever in experimental cattle III. Virological and biochemical data . Vet Microbiol, 1992, 30, 297—307.
6. Young P.L. Studies of the pathology and pathogenesis of bovine ephemeral fever virus infection of cattle [PhD Thesis], Univ Queensland. 1979.
T.D. St George. Effect of ephemeral fever of cattle on the appearance and contraction of blood clots. Aust Vet J, 2000, 78, 12, 857—858. The disturbance of blood doting has been observed in a large proportion of cattle with bovine ephemeral fever. It can be use for express diagnostic of this disease.The clots contracted normally in the incubation period but not during the latter part of the illness. The clot appearance returned to normal after recovery. The yield of serum from such abnormal clots could not be increased by prolonged centrifugation of the clots.
клавуланата) и 10 мг преднизолона. Клавулановая кислота защищает молекулу амоксициллина от воздействия фермента (5-лактамазы, а преднизолон оказывает противовоспалительное действие. Как следствие, синулокс действует на устойчивые к пенициллину штаммы бактерий, к нему не вырабатывается резистентность.
Линкоцин форте Б — водный раствор для интрацистер-нального введения, содержащий в качестве действующих веществ 330 мг линкомицина гидрохлорида и 100 мг неомици-на сульфата в 10 г основы.
Курс лечения этими препаратами предусматривает трехкратное (с интервалом в 12 ч) введение содержимого шприца в каждую пораженную четверть вымени. При трехкратном режиме доения, дойки не пропускают. Перед каждым введением препарата молоко из больных четвертей вымени выдаивают с последующей утилизацией. После дойки сосок снаружи обрабатывают специальными дезинфицирующими салфетками. В отверстие соска вводят канюлю шприца и медленно выдавливают препарат в пораженную долю вымени. Затем сосок обрабатывают погружением в дезинфицирующий раствор. Во время лечения молоко из больных четвертей вымени нельзя использовать для пищевых целей.
Если молоко содержит большое количество хлопьев, а клинические признаки мастита выражены (вымя горячее, отечное и т.д.), то частое сдаивание (каждые 2 ч) позволяет уменьшить количество бактерий и накопление токсинов в молочной железе. Назначают противовоспалительные и про-тивоотечные препараты. При тяжелом течении мастита, которое сопровождается общей реакцией организма животного (угнетением, снижением аппетита, повышением температуры тела и т.д.) может потребоваться парентеральное введение
Эфемерная лихорадка КРС
Эфемерная лихорадка КРС (трехдневная эпизоотическая лихорадка, грипп, болезнь тугоподвижиости; Febris aefemera — лат., Bovine ephemeral fever — англ.) - остро протекающая в виде эпизоотии или отдельных вспышек вирусная болезнь крупного рогатого скота, проявляющаяся кратковременной лихорадкой, воспалением слизистых оболочек носа, ротовой полости, пищевода, глаз, ригидностью мышц, тугоподвижностыо и хромотой.
Распространенность. Болезнь регистрировали под разными названиями в различное время в Африке, в странах Азии, Японии, Индии, Индонезии, Пакистане, Австралии и др. Диагностировали ее (как грипп) также в Финляндии, ФРГ, Чехословакии, Нидерландах, Дании, случаи болезни выявлены в Китае.
В последнее время ее регистрировали в Японии (I. Inaba, 1973), Африке (Davles el tl., 1975), Австралии (F. Parsonson, 1978, G. Combs, 1978), Индии (II. Malvlya, 1977).
Экономический ущерб при эфемерной лихорадке обусловливается снижением продуктивности мясного и молочного скота и качества получаемой от него продукции, работоспособности и гибелью до 10% заболевших животных.
Возбудитель — РНК-содержащий вирус, форма вирионов в виде пули или конуса (I. Ito et al., 1969, G. Lecatsas et al., 1969), размер его 70—80х140—170 нм, по морфологии сходен с возбудителем везикулярного стоматита, но его геном представлен двуспиральной РНК. Плотность вируса 1,196 г/мл, чувствителен к эфиру, хлороформу, трипсину, не стабилизируется двухвалентными катионами, к прогреванию при 50 °С устойчив, но при 56 °С разрушается за 10—30 мин, быстро погибает под действием ультрафиолетовых лучей, полностью за 10 мин инактивируется при рН ниже 2,5 и выше 12. Оптимальная зона рН 7,2—7,6 (W. Heusche, 1970). Нативный вируссодержащий материал инактивируется при 25 °С в течение 5 суток, при 37 °С—1—2 суток, при 4°С за 1—1,5 недели, при —20° С не рекомендуется сохранять его более 40 дней. Хорошо сохраняется вирус при температуре —70—80 °С и при +4 °С в лиофилизированном состоянии. Термостабильность вируса повышается при хранении в защитных средах: 0,5%-ном растворе гидролизата лактальбумина на растворе Хенкса, растворе Хенкса, фосфатио-буферном растворе, содержащих 10% сыворотки крови и в пропорции 1 : 1 к вируссодержащей суспензии.
Вирус эфемерной лихорадки имеет антигены, вызывающие образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих антител, обнаруживаемых в сыворотке крови животных на 2—3-й неделе после заражения. Вируснейтрализующие антитела достигают пика у реконвалесцентов через 1—2 месяца после заражения и сохраняются более 400 дней (В. Н. Сюрин, 1979). Большинство исследователей считают, что вирус эфемерной лихорадки идентичен в антигенном отношении. Однако имеются сведения (Н. Standfast et al., 1973) о наличии в Австралии нескольких серотипов этого вируса. По данным японских исследователей, вирус антигенно родствен возбудителю катаральной лихорадки овец, способен размножаться в культурах клеток ВНК-21, HmLu-1, Hmt, Vero, а также в клетках БЭП. Оптимальная температура инкубации 30—34 °С. Вирус 2—3 пассажа на мышах-сосунах по сравнению с полевым быстрее адаптируется к культуре клеток (S. Tzipori, P. Spradbrow, 1974). ЦПД в культуре обычно проявляется на 3—5-й день инкубации на 2—3-м пассаже, а при последующих пассажах ЦПД обнаруживается через 36 ч. Полная деструкция клеток наступает на 4—5-е сутки при накоплении вируса до 106 ТЦДбо/мл- Иммунофлуоресценцией и электронной микроскопией вирус в культуре можно обнаружить через 24 ч после заражения.
При заражении в мозг 1—3-дневных мышат, крысят и хомячков вирус эфемерной лихорадки вызывает параличи, гибель их в 1-м пассаже (в 17% случаев) в среднем на 12-е сутки, на 3—8-м пассаже гибнут все животные в течение 3—5 суток после заражения. Имеются разноречивые данные и о восприимчивости молодых кроликов при заражении в мозг. Вирус поражает крупный рогатый скот, буйволов, яков, особенно восприимчив к нему хорошо упитанный скот в возрасте старше года. Заболевание неконтагиозное в отсутствии насекомых, его можно воспроизвести внутривенным заражением (Н. Standfast et al., 1973). Имеются сообщения о восприимчивости (без клинического проявления бо-лезни) к вирусу овец (W. Hall et al., 1975).
Эпизоотологические данные. В естественных условиях возбудитель болезни передается кровососущими насекомыми. Наиболее вероятным переносчиком считают комаров Culex annulirostis, Anopheles annulipes. Широта распространения болезни зависит от миграции животных, наличия и плотности переносчиков. Проявляется она в теплое влажное время года, в период биологической активности кровососущих насекомых. Так, в 1967—1968 гг. в Австралии болезнь распространилась за 6 недель на 2 тыс. км фронтом 500—800 км, следуя направлению господствующих ветров. Количество пораженных животных в стаде и стад в зонах может варьировать от 1—2 до 80% (Т. St. George et al., 1973), в отдельных случаях — до 100%, при этом следует учитывать, что определенная часть животных (до 50—75%) может переболевать инаппарантно.
Патогенез. Наиболее вероятное место размножения вируса в организме — эндотелий сосудов. Высокая концентрация его выявлена в лейкоцитах. Изменения в сосудах являются причиной воспалительных процессов, отеков, перерождения мышц, хромоты и парезов. У зараженных животных происходит иммунобиологическая перестройка организма, в сыворотке крови появляются противовирусные антитела. Нейтрализующие антитела в течение 6—7 месяцев обнаруживаются у телят, родившихся от иммунных коров. Длительность иммунитета варьирует у переболевших животных от нескольких месяцев до 1,5—2 лет.
Клинические признаки. Инкубационный период болезни 2—11 дней. Характеризуется она внезапным повышением температуры до 41—42 °С. Через 1—5 дней (чаще через 3) она понижается до нормальной, иногда через 1—5—7 дней возможны ремиссии. Болезнь проявляется угнетением, отсутствием аппетита, истечениями из глаз, носа и рта, чаще всего серозно-слизистого характера, сухостью зеркальца, помутнением роговицы (признак наблюдается редко), кашлем, учащенным дыханием, эмфиземой, иногда удушьем, вследствие чего животное чаще всего и гибнет, болезненностью связок, тугоподвижностью, перемежающейся хромотой, тремором мышц, прекращением жвачки, атонией и реже тимпанией, снижением удоя, иногда до полного прекращения, явлениями пареза и паралича мышц конечностей, туловища. Клинические признаки через 1—5 дней (чаще через 3) проходят. Болезнь протекает обычно остро, реже подостро, иногда и инаппарантно. Все клинические признаки (за исключением лихорадки) редко встречаются у одного животного, обычно они характерны в целом для стада.
Патологоанатомические изменения чаще локализуются в легких— кровоизлияния в слизистой оболочке верхних дыхательных путей, носовой полости, глотки, гортани, трахеи, губ, десен, иногда с образованием эрозий. Отмечают случаи пневмонии, серофибриноза, лимфаденита, полиартрита, тендовагинита, фасцита. Гистологическим исследованием устанавливают гиалиновое перерождение мышц пищевода, реже языка, в тканях легких — признаки эмфиземы, пневмонии; в лимфоузлах и селезенке — отложение гемосидерина.
Диагноз ставят с учетом клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных, результатов биопробы (при внутривенном введении) на иммунных и неиммунных животных (метод перекрестной иммунизации) или серологических исследовании по выявлению антител в РН и РСК. Вируснейтрализующие антитела обнаруживаются через 1—2 недели после заражения и сохраняются до 50 недель, максимальный титр их 1 : 1024. Комплементсвязывающие антитела выявляются через 2—3 недели, сохраняются до 9 недель, максимальный титр их 1 : 16. Используют также метод флуоресцирующих антител для обнаружения вируса в лейкоцитах больного скота, методы выделения возбудителя при внутримозговом заражении новорожденных мышей, хомяков, инокуляции культур клеток ВНК-21, Vero и др., и идентификации с использованием методов серологического анализа (МФА, РН,. РСК) и электронной микроскопии. Антигены для РСК получают экстракцией из мозга мышат с применением сахарозы, ацетона,, эфира, или из вируссодержащей культуральной жидкости, используя современные методы концентрирования. РН ставят с выделенным вирусом в культуре клеток или на 1—3-дневных мышатах. В качестве положительной используют сыворотку реконвалесцентов, полученную через 3—4 недели после переболевания, или сыворотку гипериммунизированных животных (G. Gombs, 1978).
Лучшим материалом для воспроизведения болезни является дефибринированная (встряхиванием) кровь, суспензия лейкоцитов; в качестве вируссодержащего материала может использоваться и 10%-ная суспензия тканей лимфоузлов и селезенки, взятых в период лихорадки.
При анализе эпизоотической ситуации проводят индикацию вируса в суспензии кровососущих насекомых посредством заражения новорожденных мышей, культур клеток или крупного рогатого скота, с последующей идентификацией возбудителя, однако индикация может быть успешной только при отлове значительного количества насекомых.
Эфемерную лихорадку следует дифференцировать от чумы крупного рогатого скота, ящура, злокачественной катаральной горячки, катаральной лихорадки овец и болезни Ибараки, вирусной диареи и комплекса респираторных инфекций крупного рогатого скота, вызываемых рино-, адено-, рото-, герпес-вирусами и другими возбудителями.
Профилактика и меры борьбы. Для специфической профилактики применяют сыворотки реконвалесцентов или гипериммунные сыворотки животных. Сыворотка в дозе 250 мл предохраняет животное от заражения. Имеющиеся живые культуральные вирус-вакцины и инактивированные, изготовленные из вируссодержащей крови, или из культуральной жидкости, обеспечивают иммунитет у вакцинированных животных в течение нескольких месяцев. Живые и убитые вакцины имеют свои преимущества и недостатки, которые детально обсуждены в специальной литературе (A. Del-la-Porta, W. Snowdori, 1979; S. Tzipori, P. Spardbrow, 1978; J. Fra-cis, 1977). В Японии наиболее удовлетворительные результаты получены при последовательном применении аттенуированной и инактивированной вакцин (J. Inaba et al., 1974).
К мерам профилактики и борьбы относятся также строгое соблюдение ветеринарно-санитарных правил содержания скота, своевременное проведение карантинно-ограничительных мероприятий и экспрессной диагностики, изоляция больных, ограничение ИХ миграции, профилактическая дезинсекция, уничтожение переносчиков в период эпизоотии и другие меры, препятствующие контакту восприимчивых животных с кровососущими насекомыми.
[Bovine ephemeral fever, Three day sickness, Stiff sickness (англ.); Fievre de trois joursdu boeuf (франц.), Dreitagekrankheit des Rindes (нем.)]
Эфемерная лихорадка — трехдневная лихорадка, болезнь неподвижности, эпизоотическая лихорадка КРС — острая, быстропротекаюшая, лихорадочная болезнь КРС.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Болезнь характеризуется внезапным повышением температуры тела до 41—42 "С. Через 1—2 дня она понижается до нормальной. В это время отмечается быстропроходящий лейкоцитоз и лейкопения, учащенное дыхание, что сопровождается появлением эмфиземы. Иногда вследствие удушья наступает смерть. У некоторых больных животных развивается подкожная эмфизема в задней части шеи, в передней части грудной клетки или в области лопатки. У отдельных животных отмечают насморк, слезо - и слюнотечение, одышку, болезненность в суставах, мышечный тремор и параличи конечностей. Наблюдается сухость передней части морды, общее недомогание, анорексия, прекращение жвачки, снижение (иногда полное прекращение) удоя, хромота, неспособность стоять из-за артрагии. При снижении температуры до нормальной эти симптомы исчезают. При гематологическом исследовании характерно наличие своеобразной формы ядер у лейкоцитов.
Патологоанатомические изменения чаще локализуются в легких; там находят кровоизлияния в слизистой оболочке верхних дыхательных путей, носовой полости, глотке, гортани, трахеи. В редких случаях легкие становятся похожими на большие воздушные шары, эмфизема распространяется на диафрагму, на внутримышечные и подкожные участки шеи и брюшной полости. В паренхеме легких нечетко выражены участки гепатизации. Типичными патологоанатомическими изменениями является серофибриоз, множественный артикулопериостит, периартрит, лимфаденит. У многоплодных коров, отелившихся нормально, изменялись показатели картины крови, макро - и микроминеральные изменения, а резкое снижение уровня Са в плазме крови часто сопровождалось внезапным параличом и другими признаками, характерными для острой формы ЭЛ.
Морфология и химический состав. Вирус открыт впервые японскими исследователями Цубаки и др. в 1951 г. Вирионы пулевидной формы, размер 140-70 нм, имеют полый осевой канал и сходны с вирусами везикулярного стоматита, фландерс, бешенства и Керн Каньон, относящихся к семейству рабдовирусов. В отличие от них вирус ЭЛ не имеет поперечной полосатости. Длина вириона 176 нм, диаметр у основания 88 нм. Вирионы южноазиатского штамма вируса конусовидной формы, австралийского и японского штаммов — пулевидной. На всех этапах развития вирионы имеют усеченные Т-частицы. Несмотря на определенное сходство вируса ЭЛ с другими рабдовирусами, он отличается от них тем, что внутренняя структура вирусной частицы представляет 6-гранную белковую массу, а нуклеиновая кислота 2-нитевая. Плавучая плотность 1,196 г/см3, вирионы устойчивы к РНК-зе. При ультрацентрифугировании в течение 2 ч при 4 °С большая часть вируса осаждается при 73000 g.
Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, дезоксихолату и трипсину. Частично инактивируется при рН 7,4 или 8,0, инактивация наступает при рН 6,1 (60 мин) и рН 9,1 (90 мин), полностью инактивируется при рН 3. Нагревание при 56 °С в течение 20 мин ведет к полной инактивации. В условиях 34 и 37 °С происходит постепенное снижение инфекционности, а при 30 °С она не снижается в течение 24 ч. При дальнейшем нагревании в тех же условиях инфекционность вируса понижается приблизительно на 10°.7 ТЦД50 B сутки. Вируссодержащая кровь при +2 -2 °С не снижает инфекционности 48 ч. Лиофилизированная вируссодержащая кровь при -40 °С остается патогенной даже после 958 дней хранения. Вируссодержащая культуральная жидкость (при выращивании в культуре ВНК-21) в условиях -80 °С сохраняла патогенность через 278 дней, а при -20 °С уже на 73-й день наблюдалось значительное снижение титра инфекционности. При 4 °С вируссодержащий материал можно сохранять не более 40 дней. Многократное замораживание и оттаивание не влияют на инфекционный титр вируссодержащего материала.
Антигенная структура. АГ структура не изучена, обнаружен лишь растворимый КС АГ. У крыс, зараженных в мозг, появляются ВНА. У зараженных кроликов, свиней и овец AT не обнаружены. КС АГ в более высоком титре накапливается в культуре клеток ВНК-21 к 5-му дню культивирования при 30 "С, далее титр его постепенно снижается.
ВНА у КРС появляются на 2-й, а КСА — на 3-й неделе после заражения. ВНА у животных-реконвалесцентов достигают своего пика через 2 месяца после заражения и сохраняются более 400 дней. Затем титр их резко снижается. Между наличием AT и восприимчивостью к инфекции имеется прямая связь. Материнские AT у телят обнаруживаются до 6—7-месячного возраста. Стандартным штаммом вируса ЭЛ является ВВ7721. Большинство исследователей считает, что этот вирус в АГ-отношении идентичен. Однако в литературе появились данные, указывающие на то, что в Австралии существует несколько серотипов вируса.
Гемагглютинирующие свойства не изучены. Локализация вируса, вирусоноситель-ство и вирусовыделение не изучены. Известно лишь, что самая высокая инфекцион-ность эритроцитов у больного животного совпадает с периодом виремии.
Экспериментальная инфекция. Вирус размножается в мозге мышей, хомячков и крысят-сосунов. Экспериментально болезнь можно воспроизвести у телят при внутривенном заражении кровью естественно больных животных. У молодняка КРС (1,5—2-летнего возраста) заболевание наблюдали на 4-й день; температурная реакция регистрировалась на протяжении 3 дней. Мышат-сосунов заражают интрацеребраль-но фракцией лейкоцитов крови больных животных. У зараженных мышат через 1—3 дня наблюдали недомогание, а на 10-й день и позже появлялись симптомы паралича задних конечностей. Исход летальный. Интрацеребральное заражение мышат-сосунов в 3-дневном возрасте и старше не вызывало их гибели. Мыши не являются адекватной моделью для изучения ЭЛ.
Вирус можно выделять на хомячках и однодневных крысятах-сосунах. После 3-х последовательных пассажей на мышатах-сосунах вирус удается адаптировать к мозгу крысят-сосунов и к культурам клеток. Однако он обычно утрачивает патоген-ность и АГ-активность в отношении КРС. Вирус ЭЛ шт. Юмагучи оказался более вирулентным для суточных мышей, тогда как шт. Ml976 КРС5 проявил низкую патоген-ность для этих животных. Односуточные морские свинки, взрослые нелинейные белые мыши, хомячки и крысы оказались нечувствительными к интрацеребральному заражению вирусом ЭЛ шт. Ml976 КРС5 и Юмагучи.
Культивирование. Кроме мозга мышат, крысят и хомячков-сосунов, вирус культивируется в клетках ВНК-21, Т, перевиваемой линии опухолевых клеток хомячка, индуцированных саркомой Рауса (шт. Шмидт-Руппин), в первичной культуре клеток почки хомячка, в перевиваемой линии клеток ВЕК-1, полученных из почки эмбриона КРС и прошедших в течение четырех лет 103 пассажа. В первичных культурах клеток эмбриона хомячка, почек и эмбриона крысы, почек и семенников телят вирус размножается, не вызывая ЦПИ. Вирус не размножается и не вызывает ЦПИ В культурах клеток почки и эмбриона мышей, почки морской свинки, цыплят, лейкоцитов, костного мозга, щитовидной, вилочковой железы и надпочечника телят. Различные штаммы после серийного пассирования в мозге мышат-сосунов или в клетках ВНК-21 сравнительно быстро теряют патогенность для КРС. Для выделения вируса используют культуру клеток Vero, где титр вируса достигает 10-3-4 ТЦД5о/мл.
Изучены оптимальные условия бляшкообразования в культуре этих клеток. Отмечен феномен аутоинтерференции, связанный с присутствием дефектных интерферирующих частиц в культуре клеток. Для культивирования вируса оптимальная температура 30—34 °С. Повышению титра инфекционности вируса способствует добавление в инфицированную культуру клеток кортизона. Вирус размножался в организме москитов Culex annulirostris при внутригрудной инъекции. Развитие вируса связано с клеточными мембранами. Характер размножения его в клетках ВНК-21 сходен с размножением вирусов везикулярного стоматита, Фландерс, Керн Каньон.
Источники и пути передачи инфекции. ЭЛ — трансмиссивная болезнь. Переносчиками вируса служат москиты Culex annulirostris и, вероятно, также Anopheles annulipes. Болезнь проявляется в теплое влажное время года, в период биологической активности кровососущих насекомых и протекает в виде энзоотии и эпизоотии. Инфекция наносит значительный экономический ущерб из-за больших потерь массы, молочной продуктивности, абортов, временного бесплодия и гибели тяжелобольных животных.
Вирус монопатогенен, в естественных условиях поражается только КРС. Овцы, козы, свиньи и лошади невосприимчивы.
Иммунитет и специфическая профилактика. Иммунитет не изучен. В Японии удовлетворительные результаты получены при применении аттенуированной вакцины. Оптимальный интервал между введениями составлял 1—5 недель. Из вируссодержа-щей крови, обработанной кристаллвиолетом, удалось получить инактивированную вакцину, которую вводят двухкратно подкожно по 10 мл с интервалом 3—7 дней. В крови привитых животных образуются ВНА, Выявляемые более 2 лет. Кроме того, предложена ГОА-формолвакцина с использованием вируса, репродуцированного в культуре HmLu-1. При 4 °С вакцина сохраняет активность в течение 9 месяцев. Она безвредна для стельных коров. Рекомендуется двукратная иммунизация с последующей ревакцинацией через год поздней осенью или ранней весной. Для получения гипериммунной сыворотки КРС иммунизируют вируссодержашей дефибринирован-ной кровью, суспензией селезенки и лимфоузлов, взятых во время лихорадки. Гипериммунная сыворотка в дозе 250 мл предохраняет животное от прямого заражения. Перспективна и живая вакцина, но это связано с большими трудностями, так как в гетерогенной биологической системе вирус быстро теряет свою патогенность и иммунизирующие свойства.
Серийное пассирование вируса ЭЛ в линии клеток HmLu-1 ведет к быстрой аттенуации его в отношении КРС. Аттенуированный вирус не вызывает у животных образования ВНА. Однако максимальное накопление их и устойчивость к заражению у КРС происходит после подкожного введения аттенуированного вируса (около 105 ТЦД 5о/мл) и затем через 2—4 недели после внутримышечной инъекции фор-молвакцины. Иммунизация КРС по такой схеме безвредна даже для стельных коров.
В 1982—1984 гг. в Клинсвенде проведена оценка иммунных реакций 24 стад КРС после различных схем вакцинации против ЭЛ. Использовали вакцину, приготовленную на основе шт. 919, аттенуированного на телятах и клетках Vero, в сочетании с адъювантом QuilA и гелем ГОА. Две последовательных инокуляции вакцины, смешанной непосредственно перед введением с адъювантом QuilA, индуцировали самый высокий титр ВНА и обеспечивали высокую защиту от естественного контрольного заражения вирулентным вирусом, по крайней мере, в течение 12 месяцев. В то же время, после однократного введения вакцины с этим адъювантом и двухкратного введения титр AT был значительный, но не обеспечивал напряженной защиты от вирулентного вируса. Отмечена четкая взаимосвязь титра ВНА и уровня иммунозащиты. При перемежающемся пассировании культуры клеток ВНК-21 получен аттенуированный вариант вируса ЭЛ, который утратил вирулентность для КРС, но сохранил иммуногенные свойства. Минимальная иммунизирующая доза равна 100 ТЦД50, а прививочная — 10000 ТЦД 5о. После однократной подкожной вакцинации иммунитету КРС наступает через 21 день и длится не менее 6 месяцев.
Читайте также:
