Что такое пиф анализ инфекции

Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.

ПЦР-диагностика: суть подхода

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:

ВИЧ;
герпеса;
различных половых инфекций, в частности хламидиоза, уреаплазмоза, гарднереллеза, микоплазмоза и трихомониаза;
кандидоза;
гепатитов;
мононуклеоза;
листериоза;
цитомегаловируса;
туберкулеза;
вируса папилломы человека;
клещевого энцефалита.

Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.

У диагностики методом ПЦР много плюсов:

Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.

Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.

Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.

Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.

Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.

Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.

Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.

Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.

ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.

Заболевания, передающиеся половым путем, не только неприятные, но еще и довольно опасные. Одно из самых распространенное из них — хламидиоз. Он может протекать бессимптомно, но при этом нанести большой вред всему организму. Как не пропустить появление совершенно незаметных признаков инфекции и что делать, чтобы избавиться от деликатной проблемы раз и навсегда?

Хламидиоз: что это и когда назначают анализы на выявление инфекции

Инфекционное заболевание, вызываемое бактериями хламидиями (Chlamydia trachomatis) в медицине известно как хламидиоз. Это одно из самых часто встречающихся заболеваний, которые передаются половым путем (ЗППП). Отметим, что Chlamidia trachomatis имеет некоторые свойства, присущие вирусам, поэтому хламидиоз порой трудно диагностировать и лечить.

Когда хламидии попадают в организм человека, они начинают активно размножаться в слизистой и уже через 10 часов внедряются в клетки и разрушают их.

У мужчин хламидии в первую очередь поражают мочеполовую систему — сначала уретру и мочеточники, затем предстательную железу, семенные пузырьки. Далее сценарий развития болезни тот же, что у женщин.

Следует знать, что хламидиоз передается не только половым путем, но и через внешнюю среду, однако такой способ инфицирования крайне редок. Зато ребенок, прошедший через зараженные родовые пути матери, заболевает в более чем половине случаев, также высок риск внутриутробного заражения. Поэтому при планировании беременности врач обязательно назначает анализ на хламидиоз.

Чаще всего на первом этапе хламидиоз протекает бессимптомно. Лишь спустя годы (латентный период может длиться до нескольких лет) возникают первые признаки инфекции — небольшое повышение температуры, интоксикация или слабость. Через десять дней эти симптомы могут исчезнуть и далее появляться редко и в слабовыраженной форме. Бывает так, что хламидиоз дает о себе знать так же, как и многие другие ЗППП: неприятными или даже болезненными ощущениями при мочеиспускании, зудом половых органов. Возможны так называемые стекловидные выделения (у женщин). Если не выявить хламидиоз и не начать его лечить, он вызовет другие заболевания мочеполовой системы, которые легко диагностировать по ярко выраженным симптомам: нетипичные выделения, резкая боль при мочеиспускании, постоянные боли в области половых органов, зуд и жжение.

Если человек обнаружил у себя какой-либо из вышеперечисленных симптомов, необходимо сдать анализ на хламидии. Существует несколько типов анализов, которые отличаются стоимостью и точностью результатов. Диагностировать хламидиоз можно с помощью анализа крови, мочи, слюны, конъюнктивной жидкости, мазка или соскоба из влагалища и шейки матки — у женщин или соскоба из уретры и эякулята — у мужчин. Биоматериал можно исследовать различными методами.

Самый дешевый, быстрый (10–15 минут), но при этом и ненадежный метод выявления инфекции (точность 20–25%) — так называемый экспресс-тест (метод иммунохроматографии). Для его проведения требуется специальная тест-система, которая позволяет визуально оценивать результаты. Приобрести ее можно в аптеке. Метод редко назначается врачом, обычно его выбирает сам пациент, желающий по собственной инициативе выяснить факт инфицирования.

Цитоскопические методы обнаружения хламидий, являясь качественными, назначаются при острой фазе болезни, в случае хронической формы хламидиоза они неэффективны. Анализ заключается в помещении в ацетон или метанол биоматериала (у мужчин это соскоб из уретры, секрет простаты, у женщин — соскобы из влагалища, шейки матки, уретры), хламидия под воздействием реагентов меняет окраску и легко выявляется под микроскопом. Точность метода в части выявления хламидийной инфекции очень невысока — 10–15%. Часто проводится бесплатно в рамках ОМС в виду дешевизны.

Иммуноморфологические методы анализа соскоба с уретры или цервикального канала (прямая и непрямая иммунофлюоресценция) представляют собой обнаружение антигенов хламидий. Показания к назначению: острая или хроническая фаза хламидиоза, бесплодие непонятного происхождения, беременность с ОАА (отягощенный акушерский анамнез — наличие осложнений в предыдущей беременности). Точность анализа невелика — 50%.

Методы иммуноферментного анализа крови применяют для того, чтобы определить фазу заболевания, оценить эффективность проводимой терапии, установить хламидийное происхождение поражений негенитальных органов. Точность исследования — 60%. Показателен лишь через 5–20 дней после инфицирования, когда начнется выработка специфичных антител к хламидии.

Наиболее чувствительным в диагностики хламидиоза на сегодня признан метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) . В ходе исследования выявляется ДНК хламидий, что позволяет со 100%-ной уверенностью судить о наличии или отсутствии инфекции. Для анализа требуется соскоб из уретры или цервикального канала (для женщин), секрет предстательной железы и эякулят (для мужчин), осадок мочи, соскоб с конъюнктивы глаз, кровь, слюна. Результаты готовы уже через один-три дня.

Врач (венеролог, уролог, гинеколог) также может назначить микробиологическое исследование , или так называемый посев на хламидии. Особенность анализа в том, что он позволяет не только диагностировать хламидиоз с высокой точностью (до 90%), но и выявить наиболее эффективный антибиотик для лечения инфекции. Так как в ряду перечисленных этот метод наиболее дорогостоящий и трудоемкий (исследование требует не менее 7 дней), его назначают в случае яркой симптоматики хламидиоза или иных факторов, позволяющих врачу оценить риск заражения как высокий, а также для подбора оптимальной терапии.

Для того чтобы результаты были точны и диагноз однозначен, к сдаче биоматериала для анализа нужно подготовиться.

Если вы сдаете на анализ кровь (из вены), то важно это делать натощак, иначе результат может быть искажен. Для большей точности стоит ограничить употребление жирной и жареной пищи за двое суток до пробы, алкоголь лучше исключить вообще. Также в день анализа лучше не курить.

При сдаче мочи требуется отказаться от половых контактов. Лучше собирать первую утреннюю мочу (через пару секунд после начала мочеиспускания).

Если же предполагается взятие на анализ мазка или соскоба, то за два дня до процедуры нужно воздерживаться от половых контактов. За два часа до анализа врачи рекомендуют не ходить в туалет. Женщинам лучше сдавать биоматериал в первый же день после окончания менструации. У женщин берут мазок или соскоб из шейки матки, влагалища и уретры, у мужчин — из мочеиспускательного канала. Иногда на анализ может быть взята семенная жидкость.

Редко для определения хламидиоза врачи назначают анализ синовиальной жидкости — материала в полости сустава, выделяемого синовиальной оболочкой. Чтобы взять эту пробу, делают пункцию локтевых, коленных или иных суставов. Единственная мера подготовки — стерильность сустава.

Однозначно расшифровать результаты сможет только врач (микробиолог, уролог, гинеколог, венеролог). Однако саму методику интерпретации не помешает знать и пациенту.

Как мы уже отмечали наиболее специфичными, точными и часто назначаемыми анализами на сегодня являются методы ИФА и ПЦР. О расшифровке их результатов мы и поговорим далее.

В случае ИФА определяется концентрация антител к хламидии:

сначала — IgM (появляются через 5 дней после инфицирования, пик концентрации достигается к 10-му дню);
после — IgA (обнаруживаются через 10 дней после инфицирования);
далее — IgG (появляются через 15–20 дней после заражения).

Хламидийная инфекция вызывается Chlamydia trachomatis – грамотрицательной бактерией, принадлежащей семейству Chlamydiaceae. Вид Chlamydia trachomatis включает различные серовары, которые вызывают отдельные нозологические формы заболеваний. Сероваровы A, B, C вызывают трахому, L1, L2, L3 – венерическую лимфогранулему. Наибольшее распространение в странах Европы, Южной и Северной Америки и в России получили серовары D–K, которые передаются при половых контактах и вызывают урогенитальную хламидийную инфекцию (УХИ). Возможна перинатальная передача с развитием у новорожденных конъюнктивита или пневмонии. C.trachomatis имеет уникальный среди других возбудителей ИППП жизненный цикл. Инфицирование эпителиальных клеток происходит метаболически неактивными формами хламидий – элементарными тельцами (ЭТ). Внутри клеток ЭТ трансформирутся в ретикулярные тельца (РТ) – метаболически активные, делящиеся формы. Накопление внутри эпителиальных клеток новых генераций РТ и их параллельная трансформация обратно в ЭТ истощает ресурсы клеток хозяина, приводя их к гибели, высвобождению ЭТ и новому циклу инфицирования. Неосложненная хламидийная инфекция протекает у мужчин чаще всего в форме уретрита, у женщин – в форме слизисто-гнойного цервицита. Симптомы и проявления УХИ неспецифичны, для постановки диагноза УХИ необходимы лабораторные исследования для выявления возбудителя или его маркеров. Значительная часть случаев УХИ – от 40 до 60% протекает в бессимптомной или малосимптомной форме и проявляется уже на стадии осложнений. Основными осложнениями УХИ являются: эпидидимит, эндометрит, сальпингит, сальпингоофорит, внематочная беременность, трубное бесплодие, болезнь Рейтера.

Показания к назначению лабораторных исследований. У мужчин: наличие симптомов и клинических проявлений уретрита, эпидидимита или эпидидимоорхита; у лиц, практикующих аногенитальные контакты – проктита; при физикальном осмотре – наличие выделений из уретры.

У женщин: наличие симптомов воспалительного процесса в нижних отделах урогенитального тракта и органах малого таза, боли в низу живота, патологические выделения из влагалища; наличие слизистых или слизисто-гнойных выделений из цервикального канала, нарушение менструального цикла, болезненность при половых контактах; подготовка к хирургическому вмешательству на органах малого таза; подготовка к беременности, отягощенный акушерско-гинекологический анамнез, связанный с инфекционной патологией.

У лиц обоего пола без симптомов и признаков воспалительного процесса урогенитального тракта: наличие перечисленных выше симптомов и признаков или установленная УХИ у полового партнера; в возрастной группе до 25 лет – многочисленные половые партнеры или половые контакты с новым половым партнером без барьерной контрацепции.

Дифференциальная диагностика. Гонорея, урогенитальный трихомониаз, инфекция, вызванная M.genitalium.

Этиологическая диагностика включает визуальное обнаружение C.trachomatis, выделение культуры C.trachomatis, выявление АГ, ДНК и РНК C.trachomatis и АТ к микроорганизму.

Материал для исследований

Мазки/соскобы со слизистых оболочек цервикального канала и уретры женщин – микроскопические исследования, культуральные исследования, выявление АГ, обнаружение ДНК, РНК;
мазки/соскобы со слизистой влагалища, мазки (соскобы) со слизистой прямой кишки – выявление ДНК, РНК;
мазки/соскобы с конъюнктивы глаз – культуральные исследования, выявление ДНК;
моча (у мужчин) – выявление ДНК;
сыворотка крови – выявление АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Для визуального выявления C.trachomatis возможно применение световой или люминесцентной микроскопии. При применении световой микроскопии используется фиксированный препарат биологического материала, окрашенный по Романовскому- Гимзе, в котором выявляют измененные клетки цилиндрического эпителия, содержащие ЭТ и РТ C.trachomatis, получившие название телец ГальберштедтераПровачека. Диагностическая чувствительность исследования не превышает 10%. Распространенным приемом выявления хламидий является определение АГ микроорганизма методом ПИФ. С помощью люминесцентной микроскопии в препарате, обработанном флуоресцентно-меченными АТ к хламидиям, по характерному свечению обнаруживаются ЭТ C.trachomatis. Микроскопические исследования, в первую очередь ПИФ, достаточно просты в исполнении и не требует дорогостоящего оборудования, однако весьма требовательны к качеству полученного биологического материала, технике нанесения препарата на стекло и специфичности используемых АТ. Материал для выполнения ПИФ должен содержать достаточное количество клеток цилиндрического эпителия, его получают из цервикального канала (по показаниям – из уретры) и у мужчин из передней уретры. Для интерпретации результата необходимо наличие в препарате не менее 5–10 клеток цилиндрического эпителия (отражает качество получения биоматериала) в поле зрения и не менее 10 флуоресцирующих ЭТ. Диагностическая чувствительность метода ПИФ варьирует в широких пределах – от 10 до 65%. Максимальная чувствительность и специфичность метода отмечена у пациентов с клиническими проявлениями инфекции и высокой бактериальной нагрузкой, минимальная – при бессимптомных или малосимптомных формах.

Для выявления АГ C.trachomatis за рубежом был разработан ряд тестов на основе ИФА. Диагностическая чувствительность выявления АГ C.trachomatis находится в пределах 55–78%. Указанные тесты получили широкое распространение в зарубежной лабораторной практике, однако в РФ не применяются.

Для выявления ДНК C.trachomatis в РФ используют преимущественно ПЦР с различными вариантами детекции продуктов реакции и метод выявления РНК C.trachomatis на основе НАСБА. Диагностическая чувствительность метода ПЦР для диагностики УХИ находится в пределах от 90 до 98%, специфичность достигает 96–98%. Диагностическая чувствительность метода НАСБА достигает 98%, диагностическая специфичность – до 100%.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Микроскопическое исследование препаратов с окраской по Романовскому-Гимзе в настоящее время не используется и не рекомендуется для диагностики УХИ. В то же время, всем пациентам с симптомами и клиническими проявлениями урогенитальной инфекции показано микроскопическое исследование с окраской по Граму для установления лабораторных признаков воспаления (повышенное содержание ПМЯЛ).

Применение метода ПИФ целесообразно в качестве метода быстрой диагностики при наличии у пациентов выраженных проявлений инфекционно-воспалительного процесса в урогенитальном тракте при условии соблюдения всех требований получения биологического материала. Метод не подходит для скрининга, диагностики хронических форм хламидийной инфекции, контроля лечения и исследования образцов мочи и слизистой влагалища, прямой кишки, ротоглотки.

С учетом того, что для проведения культурального исследования необходима технология ведения эукариотических клеточных линий и соответствующие для этого лабораторные условия, то применение метода в рутинной лабораторной практике ограничено. Метод в первую очередь имеет большое значение в научных исследованиях, когда требуется выделить живой возбудитель для его дальнейшего изучения.

Определение АТ к C.trachomatis может быть использовано для эпидемиологических исследований, с целью интегральной оценки доли лиц в популяции, контактировавшей с C.trachomatis. В клинической практике определение АТ показано при ретроспективном анализе возможной хламидийной этиологии при бесплодии, длительных хронических воспалительных процессах урогенитального тракта. Однако и в этом случае положительные результаты обнаружения АТ должны рассматриваться в контексте других клинических, анамнестических и лабораторных данных.

В настоящее время выявление ДНК методом ПЦР считаются основой лабораторной диагностики УХИ. Исследование показано и для контроля результатов лечения. При использовании метода ПЦР с учетом скорости элиминации ДНК C.trachomatis контроль лечения необходимо проводить не ранее 3–4 недель. РНК возбудителя является более ранним маркером ответа на терапию, поэтому с помощью метода НАСБА можно оценивать эффективность лечения через 1–2 недели после окончания курса.

Особенности интерпретация результатов лабораторных исследований. Результаты, полученные методом ПИФ, рекомендуется подтверждать с помощью культурального или молекулярно-биологических методов.

Положительные результаты культурального исследования не требуют дополнительного подтверждения и означают наличие инфекции. Отрицательный результат означает как отсутствие возбудителя, так и может свидетельствовать о неоптимальных условиях для его культивирования.

При обнаружении ДНК C.trachomatis у пациентов с клинической симптоматикой урогенитальной инфекции или наличии факторов, способствующих инфицированию, дополнительного исследования не требуется, диагноз урогенитальной инфекции считается установленным. У пациентов, у которых обнаружена ДНК C.trachomatis, но отсутствуют субъективные и объективные признаки инфекционно- воспалительного заболевания и факторы риска, для подтверждения диагноза рекомендуется провести исследование для выявления РНК C.trachomatis методом НАСБА. Наличие ДНК и РНК патогена является объективным лабораторным признаком инфекции.

При оценке результатов выявления АТ следует учитывать, что их наличие или отсутствие не отражает наличие или отсутствие инфекции в данный момент времени.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Клинико-метаболические особенности течения хламидийной инфекции у новорожденных детей: (1)

Современные проблемы диагностики и лечения гонорейной и трихомонадной инфекции: Cовременные проблемы диагностики и лечения гонорейной и трихомонадной инфекции

Серодиагностика хламидиозов. Хлами-IgG-ДС-Tr первая отечественная иммуноферментная рекомбинантная тест-система для выявления антител класса G к Chlamydia trachomatis: Серодиагностика хламидиозов.

Эпидемиологические аспекты хламидийной инфекции: хламидийная инфекция, эпидемиология, обзор.

Диагностика урогенитальной хламидийной инфекции методом полимеразной цепной реакции: хламидиоз, полимеразная цепная реакция.

Состояние иммунной системы у беременных и новорожденных группы высокого риска по внутриутробному инфицированию: Литература

Состояние фетоплацентарной системы при высоком риске внутриутробного инфицирования плода: Литература

Особенности клинического состояния и персистенция Chlamydia trachomatis у детей, перенесших внутриутробную хламидийную инфекцию: Литература

Клинико-микробиологическая характеристика вульвовагинитов у девочек: Литература

Состояние факторов неспецифической защиты организма женщин при хламидиозе: Литература

Структурные характеристики жидкокристаллических фаз секрета предстательной железы при простатите хламидийной этиологии: секрет предстательной железы, простатит, хламидии.

Эндолимфатическая антибиотикотерапия хламидийного уретропростатита : Клиническая характеристика больных.

Актуальные вопросы диагностики урогенитального трихомониаза

Клинико-микробиологическая характеристика вульвовагинитов у девочек: вульвовагинит, хламидиоз, неспецифическая бактериальная инфекция, трихомониаз, бактериальный вагиноз, кандидоз.

Бактериальный вагиноз в детском возрасте: особенности течения и основные принципы лечения: бактериальный вагиноз, анаэробный вульвовагинит, метронидазол, орнидазол, далацин, лечение.

Клинические особенности течения и принципы лечения урогенитального хламидиоза у девочек: детский урогенитальный хламидиоз, вульвовагинт, макролиды.

Азитромицин (сумамед) основные свойства и особенности применения в терапии внебольничной пневмонии: tabfive

Диагностика урогенитальной хламидийной инфекции методом полимеразной цепной реакции: Литература

Внебольничная пневмония: стандарты эмпирической антибактериальной терапии: (1)

Инфекционные болезни (общее учение)

Лабораторная диагностика хламидийной инфекции

Институт аллергологии и клинической иммунологии, Москва (Окончание)

Доставка биоматериала в ПЦР-лабораторию производится в холодовом термоконтейнере или термосе со льдом. Важной отличительной особенностью ПЦР-диагностики является относительно низкая стоимость оборудования для проведения анализа, сочетающаяся с универсальностью метода, что позволяет выявлять весь спектр клинически актуальных инфекционных агентов.

1 . Острая фаза заболевания.

2. Хроническая фаза заболевания.

3. Установление этиологии хронического инфекционного процесса урогенитального тракта.

4. Беременность с отягощенным акушерским анамнезом.

5. Бесплодие неясного генеза.

6. Контроль эффективности проведенного антибактериального лечения. В случае выявления фрагмента ДНК хламидии трахоматис после курса химиотерапии следует провести культуральную диагностику для исключения "ложноположительного с клинической точки зрения результата". Если проведение культуральной диагностики невозможно, то необходимо через 5-6 недель (полное обновление эпителиального покрова мочеполовых путей) провести повторное исследование методом ПЦР.

7. Выявление хламидий у ВИЧ-инфицированных лиц, больных туберкулезом, вирусным гепатитом и со вторичными иммунодефицитными состояними (онкологические больные после курсов химио- и лучевой терапии, трансплантации костного мозга, получающие иммуносупрессивную терапию).

Ниже приведены данные по выявлению хламидии трахоматис различными методами исследования. Использованы выборки из исследований, в которых хотя бы одним из методов они были бы обнаружены. Видно преимущество ПЦР как при исследовании первичных материалов (таблица 2), так и при детекции ДНК хламидий в клеточной культуре, зараженной клиническим материалом (таблица 3). В таблице 4 приведены данные о недостатках и достоинствах этих методов [7].

Таблица 2. Сравнительная чувствительность прямых методов исследования (ПИФ, ПЦР, ИФА) при выявлении С.trachomatis в клинических образцах
Методы детекции	Выявление хламидий (в %) в одних и тех же пробах
ПИФ	68,9
ПЦР	94,8
ИФА	25,62

Таблица 3. Сравнительная чувствительность прямых методов исследования (ПИФ, ПЦР) при выявлении C.trachomatis в клеточной культуре, зараженной клиническим материалом
Методы детекции	Выявление хламидий (в %) в одних и тех же пробах
ПИФ	94
ПЦР	96,2

Таблица 4. Достоинства и недостатки различных методов обнаружения Chlamydia trachomatis
Хар-ка метода	ПИФ	Культ. посев	ИФА-методы	ПЦР
Исследуемый материал	Любой	Большинство	Ограничения из-за неспецифичности реакций	Любой
Значение правильно взятых проб	Решающее	Решающее	Решающее	Решающее
Условия транспортировки проб	Если препарат фиксирован - условия не важны	Быстрая доставка или хранение при низкой температуре	Не имеет значения, если проба взята в буфер	Менее важны, чем для культуры клеток
Условия хранения	На короткое время при +4 0 , длительно при -20 0 С	+4 0 С - сутки-двое, длительное хранение в жидком азоте	3-5 дней при +4 0 С. Замораживание снижает чувствительность	На короткое время +4 0 С, две недели - 20 0 С, длительное время - в жидком азоте
Проверка адекватности взятия материала	Мазки оценивают во время тестирования	Не практикуется	Не практикуется	Определяется, присутствует ли ДНК
Потребность в специальном оборудовании	Люминесцентный микроскоп	Центрифуга	Комплект для ИФА	Амплификатор и оборудование для электрофореза
Обработка проб	Простая	Трудоемкая	Становится проще для новых тестов	Требует строгой предосторожности, чтобы не контаминировать ДНК
Чтение результатов	Субъективное и утомительное	Субъективное, умеренно утомительное	Объективное, простое	Объективное, простое
Время выполнения	30 минут	12-72 часа	3 часа	4,5-5 часов
Cпособы проверки результатов	Повторный просмотр	Повторный просмотр	Повторение теста	Повторная проба или переваривание эндонуклеазой
Зависимость результатов от	Опыта микроскописта	Чувствительности клеточной культуры	Присущей мощности теста	Хорошего контроля и отсутствия контаминации
Способность к поддержанию штамма	Нет	Да	Нет	Нет
Использование как контроля эффективности лечения	Ограничено	Рекомендуется	Ограничено	Рекомендуется с ограничениями

Изменения иммунного статуса при хламидийной инфекции. Изменения иммунной системы при острых поражениях нижнего отдела урогенитального тракта (уретрит, цервицит), как правило, неотчетливы. При хронизации и распространении процесса ( сальпингит , простатит, артриты ) они приобретают стойкий характер.

У больных хламидийной инфекцией отмечается снижение уровня нейтрофилов и повышение содержания эозинофилов . При исследовании клеточного звена иммунитета непрямым иммунофлюоресцентным методом с помощью моноклональных антител, определении концентрации Ig G, A, M методом радиальной иммунодиффузии могут выявляться следующие нарушения: в гуморальном звене - снижение Ig G и IgA при снижении относительного содержания клеток СD 72 (В- лимфоцитов ). Дисбаланс клеточного звена иммунитета выражается в достоверном снижении клеток СD4 (относительное содержание), тенденции к повышению СD8, очевидно, за счет роста цитотоксических клеток и, как следствие, снижение иммунорегуляторного индекса. Факторы неспецифического иммунитета характеризуются значительным повышением относительного содержания популяции естественных киллеров, а также недостаточной функциональной активностью опсоно-фагоцитарной системы [13].

Клиническая картина хламидийного инфекционного процесса характеризуется скрытным течением и малосимптомностью. Хламидиоз имеет тенденцию к хронизации и характеризуется появлением таких осложнений, как бесплодие, невынашивание беременности, экстрагенитальные поражения. Хламидии часто встречаются в ассоциации с другими возбудителями мочеполовых инфекций, такими, как, микоплазмы , уреаплазмы, гонококки, трихомонады. В диагностике хламидийного инфекционного процесса первостепенное значение имеют лабораторные методы, позволяющие установить этиологический диагноз.

В настоящей работе изложены современные лабораторные методы выявления хламидийной инфекции. Предел чувствительности и специфичности каждого метода учитывают при оценке показаний для их использования. Одно хламидийное включение, выявляемое культуральным методом, соответствует 600 копиям ДНК и 87 иммунофлюоресцирующим частицам. Считается, что изоляция возбудителя в клеточной культуре, так же, как и определение антигенов с помощью иммунофлюоресцентного и иммуноферментного анализа, происходит лишь в 60-70% случаев положительных по молекулярно-биологическим данным (полимеразная цепная реакция и лигазная цепная реакция).

Недостатком молекулярно-биологических методов является высокая вероятность контаминации ДНК, в результате чего возможно появление ложноположительных результатов. Возможны также ложноотрицательные результаты из-за присутствия в пробах различных ингибиторов ПЦР и ЛЦР.

В настоящее время не существует лабораторного метода, позволяющего избежать как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов. При диагностике хламидиоза необходима комплексная лабораторная диагностика (ПИФ, ИФА, культуральный метод, ПЦР, выявление титров антител к антигенам возбудителя), позволяющая выявить возбудителя, определить стадию заболевания, обосновать необходимость назначения антибактериальных препаратов. Изучение иммунного статуса и обоснованное применение иммуномодуляторов позволит повысить эффективность лечения в отдаленные после заражения сроки.

1. Башмакова М.А., Бочкарев Е.Г., Говорун В.М., Савичева А.М., Парфенова Т.М. // Хламидиоз. Современные подходы к диагностике и лечению.- М., 1999.-61 с.

2. Козлова В.И., Пухнер А.Ф. // Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий. -М.: ИИД "Филинъ".-1997.-536 с.

3. Поздеев О.К., Покровский В.И. Внутриклеточные паразиты: бактерии семейства Chlamydiae, Rickettsiacea и Bartonellaceae// Медицинская микробиология.- М. Гэотар Медицина. - 1999.- с.529-551.

4. Cавичева А.М., Башмакова М.А., Шипицина Е.В., Шалепо К.В., Мартикайнен З.М., Зациорская С.Л., Рыбина Е.В., Новикова Л.Н., Тараскина А.Е. Клиническая оценка генитальных инфекций // Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний. Материалы 3-ой Всероссийской научно-практической конференции.- М.- 2000.- с.79-82 .

5. Савичева А.М. Урогенитальный хламидиоз и репродуктивное здоровье женщин.// Тез. докл. VII Рес. Съезда дерматологов-венерологов. Казань.- 1996.-ч.3.-с.121.

6. Савичева А.М. Хламидиоз - болезнь молодых. // Материнство.-1996.-N2.-с.14-16.

7. Савичева А.М., Башмакова М.А. Урогенитальный хламидиоз у женщин и его последствия. Под ред. Айламазяна Э.К. - Н.Новогород: Издательство НГМА.- 1998.- 182 с.: ил.

8. Серов В.Н., Краснопольский В.И., Делекторский В.В. и др. Хламидиоз. Клиника, диагностика, лечение. Методические рекомендации.- М.- 1997 г.-23 с.

9. Alaniz Sanchez A. Chl. trachomatis and displasia cervical.// Ginecol. Obsterrics.-1995.-Sep.-vol.63.-p.377-381.

Читайте также: