Что такое грамположительные инфекции

Ключевые слова: трансплантация почки, бактериальные инфекции, чувствительность к антибиотикам, резистентность к антибиотикам.

Эффективное лечение инфекции возможно лишь при адекватной антибактериальной терапии. Мы посвятили свое исследование анализу спектра микрофлоры в различных биологических средах у больных после трансплантации почки, а также изучению чувствительности флоры к антибиотикам.

Цель: проанализировать микрофлору, выделенную из различных видов биоматериала у реципиентов почечного трансплантата, а также на основании чувствительности к антибиотикам обосновать рекомендации по рациональной антибиотикотерапии.

Материалы и методы. Были проанализированы результаты микробиологического исследования 153-х пациентов после трансплантации почки с подозрением на инфекцию на основании клинических и лабораторных данных. Обследованы пациенты с различными бактериальными инфекциями: пиелонефритом почечного трансплантата (в ряде случаев с формированием апостем), бактериальной или грибково-бактериальной пневмонией, катетер-ассоциированным ангиосепсисом, инфекциями ложа трансплантата и послеоперационной раны и др. Материалом для анализа служили результаты посевов: мочи (714 проб), крови на стерильность (104 пробы), раневого отделяемого (103 пробы), мокроты (50 проб).

Взятие проб, первичный посев клинического материала и идентификация выделенных микроорганизмов осуществлялись согласно утвержденным нормативным документам [1, 3]. Первичный посев мочи, раневого отделяемого и мокроты осуществляли количественным методом на плотные питательные среды: агар с 5 % кровью барана, ЖСА по Чистовичу, Эндо, Сабуро, тиогликолиевую. Идентификацию выделенных чистых культур осуществляли общепринятыми методами. Результаты выражали в колониеобразующих единицах на мл. Исследование крови проводили качественным методом с использованием аппарата Bactec с прилагающимися к нему стандартизированными питательными средами (фирма Bacton Dickinson, США). Антибиотикочувствительность определяли дискодиффузионным методом. Чувствительность к ряду антибиотиков — линезолиду, ванкомицину, линкомицину определялась только у грамположительных бактерий.

Полученные результаты и обсуждение. В 379-ти образцах (39 %) роста микрофлоры не отмечено. В 593-х образцах (61,1 % всех образцов) были обнаружены бактерии или грибы.

Анализ результатов посевов мочи показал, что рост микрофлоры наблюдался в 70 % случаев. В 14 % случаев выделялась ассоциативная флора. Среди ассоциаций в 62 % случаев это были ассоциации грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, в 23 % — грамотрицательных и грибов, в 15 % — грамположительных и грибов.

Доли встречаемости в монокультуре составили 47 % для грамотрицательных и 43 % для грамположительных микроорганизмов, 10 % для грибов рода Candida. Среди грамположительных бактерий преобладали энтерококки — 35 %, а из грамотрицательных — энтеробактерии, которые составили 36 %. Энтеробактерии были представлены тремя видами: Klebsiella spp. — 21 %, E. coli — 10 %, Enterobacter spp. — 5 %. Неферментирующие грамотрицательные бактерии высевались в 7 % случаев, из которых доля P. aeruginosa составила 4 %. Среди идентифицированных до вида грибов рода Candida в равных соотношениях выделялись C. albicans и C. glabrata, составившие 17 и 19 % соответственно.

У ряда больных в результате хирургических и урологических осложнений, таких как лимфоцеле, абсцесс, экстравазация мочи вследствие дефекта неоуретероцистоанастомоза или некроза мочеточника, наблюдалось инфицирование послеоперационной раны или ложа трансплантата (забрюшинной клетчатки). Было проанализировано 103 пробы раневого отделяемого, из которых рост наблюдался в 42 % случаев. В пробах с ростом 88 % составили монокультуры, из которых в половине случаев высевались грамположительные, в 45 % грамотрицательные микроорганизмы, а грибы составили 5 %. Ассоциации были только грамположительные + грамотрицательные бактерии. Анализ видового состава раневого отделяемого показал, что среди грамположительных кокков преобладали стафилококки, половина из которых приходилась на S. heamolyticus. Ведущими среди энтеробактерий были Klebsiellapneumoniae (20 %), а среди неферментирующих грамотрицательных бактерий — Acinetobacterspp. (8 %).

Микробиологическое исследование крови проводилось в случае наличия четких признаков генерализованной инфекции. Высеваемость патогенов в крови составила 5 %, которые были выделены в монокультуре и были представлены в 40 % случаев коагулазонегативными стафилококками и в 60 % энтерококками (E. faecium и E. faecalis).

Показанием для микробиологического исследования мокроты служило подозрение на развитие респираторной инфекции. Было исследовано 50 проб мокроты. Во всех исследуемых образцах был рост, при этом 20 % проб были обсеменены монокультурами, представленными в 6 % грамотрицательной флорой, в 10 % грамположительной и в 4 % грибами рода Candida. Среди ассоциаций 39 % составили 3-компонентные, сформированные грамотрицательными, грамположительными бактериями и грибами. Далее по частоте встречаемости следуют грамположительные микроорганизмы в ассоциации с грибами — 34 % и грамотрицательные с грамположительными бактериями, составившие 19 %. В единичных пробах определялись грамотрицательные микроорганизмы в ассоциации с грибами. Анализируя частоту встречаемости отдельных видов, следует отметить, что наибольший процент выделения приходится на грибы рода Candida — 62 % с преобладанием вида С. albicans. Стафилококки встречались в 54 % случаев и немного реже стрептококки 38 %, а также энтерококки (22 %). Энтеробактерии в 20 % случаев были представлены клебсиеллами, в 8 % кишечной палочкой и в 6 % энтеробактером. Неферментирующие грамотрицательные бактерии составили 10 %.

Таким образом, при анализе микрофлоры, выделенной из различных видов материала у пациентов после трансплантации почки, было определено, что в моче и в раневом отделяемом грамотрицательные и грамположительные микроорганизмы выделялись примерно с равной частотой с небольшим преобладанием грамположительных микроорганизмов. Полученные данные расходятся с научными публикациями ряда авторов, по мнению которых основной причиной инфекций мочевой системы являются грамотрицательные бактерии [5, 6]. Как в моче, так и в раневом отделяемом в основном выделялись монокультуры возбудителей. Ведущими возбудителями среди грамположительной флоры в моче были энтерококки, в ране — стафилококки. Частота встречаемости основного грамотрицательного возбудителя — Klebsiella spp. в моче и в раневом отделяемом была примерно одинаковой — 20–21 %.

В мокроте основными микроорганизмами были грибы рода Candida, а также грамположительные кокки. Грамотрицательные бактерии встречались значительно реже, чем грамположительные. В подавляющем большинстве случаев флора в мокроте носила смешанный характер. При этом в мокроте во всех образцах были выявлены возбудители.

В крови, напротив, частота встречаемости возбудителей оказалась невысока — 5 %. Выявленная микрофлора была представлена 2-мя видами грамположительных бактерий — энтеро- и стафилококками.

Следующим этапом работы явился анализ чувствительности выделенных микроорганизмов к антибиотикам. Наиболее часто встречаемая грамположительная флора, а именно Enterococcusspp. и Staplylococcusspp., обладала высокой чувствительностью к ванкомицину, линезолиду, доксициклину и умеренной — к амоксиклаву. В целом, стафилококки обладали более высокой чувствительностью к антибиотикам, чем другие часто встречаемые в нашем исследовании микроорганизмы. Klebsiella spp. и E. colispp. обладали высокой чувствительностью к имипенему, эртапенему, умеренной чувствительностью к амоксиклаву, офлоксацину и кларитромицину. К большинству цефалоспоринов с разной степенью выраженности была устойчива вся флора.

Подбор эмпирической антибактериальной терапии, как правило, основывается на выявлении предполагаемого первичного очага инфекции. В этой связи для практического применения может быть полезным анализ чувствительности не конкретных возбудителей, а микрофлоры в целом в различных биологических средах. Нами был проведен такой анализ.

Грамположительная флора, выявленная в крови, была устойчива ко всем поколениям цефалоспоринов, высокочувствительна к эртапенему и доксициклину, а все грамположительные бактерии — к ванкомицину и линезолиду. Примерно половина возбудителей в крови была чувствительна к амоксиклаву и кларитромицину, меропенему и имипенему. В лечении раневой инфекции весьма эффективными препаратами были карбапенемы и доксициклин, офлоксацин и кларитромицин. Грамположительная флора имела умеренную чувствительность к ванкомицину и высокую к линкомицину, а половина возбудителей была чувствительна к линкомицину. При анализе чувствительности возбудителей при лечении респираторных бактериальных инфекций выявляемая флора была наиболее чувствительна к антибиотикам по сравнению с микроорганизмами в моче, крови и раневом отделяемом. В том числе — чувствительность к цефалоспоринам была выше, чем при инфекциях других локализаций. Высокая чувствительность возбудителей наблюдалась к карбапенемам, фторхинолонам, защищенному пенициллину — амоксиклаву. Грамположительные бактерии были высокочувствительны к линезолиду и ванкомицину, а менее половины из них — к линкомицину.

В лечении урологических инфекций после трансплантации почки цефалоспорины обладали невысокой эффективностью. Примерно половина возбудителей была чувствительна к карбапенемам, а также офлоксацину, амоксиклаву и доксициклину. Грамположительная флора обладала чувствительностью к ванкомицину и линезолиду. Большая часть грамположительных бактерий была устойчива к линкомицину.

При анализе всего биоматериала можно сказать следующее: к цефалоспоринам и ципрофлоксацину, самым часто применяемым антибиотикам для эмпирической терапии, чувствительны не более 20 % всех выделенных микроорганизмов. Практически все грамположительные бактерии были высокочувствительны к ванкомицину и линезолиду. К карбаменемам чувствительны не более 50 % возбудителей. Умеренную чувствительность возбудители имеют к офлоксацину, амоксиклаву и доксициклину.

Таким образом, мы можем заключить, что, несмотря на данные литературы, грамотрицательная флора не всегда является основным возбудителем инфекций (в том числе и инфекций мочевой системы) у реципиентов почечного трансплантата. По нашим данным, грамположительная и грамотрицательная флора встречается примерно в равных долях.

Эмпирическая антибиотикотерапия наиболее часто используемыми антибиотиками — цефалоспоринами и фторхинолонами, по нашим данным, оправдана лишь при респираторных инфекциях. При этом чувствительность к карбапенемам лишь ненамного превосходит чувствительность к офлоксацину, амоксиклаву, доксициклину и кларитромицину. При подозрении на наличие ангиогенного сепсиса оправданной является терапия антибиотиками, воздействующими преимущественно на грамположительную флору. При раневой инфекции и инфекции мочевой системы высокой эффективностью обладают карбапенемы, а также офлоксацин, кларитромицин и амоксиклав. Положительным обстоятельством является тот факт, что грамположительная флора остается высокочувствительной к ванкомицину и линезолиду.

Выводы. В нашем трансплантологическом центре грамположительные бактерии встречаются несколько чаще, чем грамотрицательные. В связи с высокой степенью поливалентной резистентности возбудителей бактериальных инфекций даже к современным антибиотикам принципы эмпирической антибактериальной терапии требуют частичного пересмотра. Ежегодный мониторинг и анализ спектра бактериальной микрофлоры в трансплантологическом центре может способствовать улучшению результатов трансплантаций почек.

Государственная лицензия ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России
на образовательную деятельность:
серия ААА № 001052 (регистрационный № 1029) от 29 марта 2011 года,
выдана Федеральной службой по надзору в сфере образования и науки бессрочно

Свидетельство о государственной аккредитации ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России:
серия 90А01 № 0000997 (регистрационный № 935) от 31 марта 2014 года
выдано Федеральной службой по надзору в сфере образования и науки
на срок по 31 марта 2020 года

Адрес редакции: 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52
тел./факс: (383) 229-10-82, адрес электронной почты: mos@ngmu.ru

Средство массовой информации зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) —
Свидетельство о регистрации СМИ: ПИ № ФС77-72398 от 28.02.2018.




08.02.2016
Уважаемые авторы! Открыт прием статей во 2-й номер 2016 года (выход номера — середина мая 2016 г.).
Подробнее >>

11.01.2016
Уважаемые авторы! Продолжается прием статей в 1-й номер 2016 года (выход номера — конец февраля 2016 г.).
Подробнее >>

28.12.2015
Уважаемые авторы! Сетевое издание входило в Перечень ВАК до 30 ноября 2015 г. Работа по включению издания в новый Перечень ВАК продолжается.
Информация о формировании Перечня ВАК
Подробнее >>

Даптомицин был разработан компанией Lilly в начале 80-х гг. прошлого века и был назван LY146032. Компания приостановила исследования в 1991 г. ввиду сложившегося мнения о токсичном действии препарата на скелетную мускулатуру. Cubist Pharmaceuticals выкупила права на препарат в 1997 г. в связи с растущим интересом к инфекциям, вызываемым резистентными грамположительными бактериями и уверенностью, что суточная доза 4-6 мг/кг может быть клинически эффективной без риска развития миопатии. Препарат был одобрен FDA в сентябре 2003 г. для лечения осложнённых инфекций кожи и мягких тканей.

Даптомицин высокоактивен против грамположительных бактерий. Активность определяется концентрацией кальция, присутствие которого в среде способствует 2-4 кратному увеличению активности. При рекомендованных концентрациях кальция отсутствовали сообщения о выделении клинических изолятов грамположительных бактерий, резистентных к даптомицину, а спонтанная резистентность все-таки достаточно редкое явление, несмотря на то, что у двух пациентов в ходе клинических испытаний были выделены резистентные к даптомицину штаммы (S.aureus и E.faecalis). Препарат не активен против грамотрицательных бактерий.

Обзор клинических испытаний

Кожа и мягкие ткани

В сравнительном исследовании показано, что выздоровление достигнуто у 29 из 31 (97%) пациентов, получавших даптомицин, по сравнению с 37 из 39 (95%) пациентов, получавших традиционную терапию.

Было проведено два исследования. Одно - в Южной и Центральной Америке - было прекращено, когда даптомицин показал значительно более высокую неэффективность, чем цефтриаксон. Второе исследование продемонстрировало эквивалентность даптомицина и препаратов сравнения при внебольничной пневмонии. Недостатки даптомицина по сравнению с цефтриаксоном служат отражением плохого проникновения в эпителиальную внутриклеточную среду. Объяснением того, что во втором исследовании сравниваемые режимы были эквивалентны, предположительно является проведение альтернативной терапии за 24 часа перед включением. Окончательный вывод состоит в том, что даптомицин не рассматривается как препарат, пригодный для лечения пневмонии.

Исследование III фазы проводится в настоящее время в дозе 6 мг/кг/день при бактериемии и эндокардите, вызванных S.aureus.

Одобрение FDA: Препарат одобрен для лечения осложнённых инфекций кожи и мягких тканей, вызванных чувствительными штаммами следующих возбудителей: S.aureus, S.pyogenes, S.agalactiae, S.dysgalactiae и E.faecalis (только ванкомициночувствительные штаммы). Препарат на разрешён для лечения пневмонии.

Комментарий. Даптомицин - антибиотик с новым механизмом действия, первый за многие годы. Он относится к категории антибиотиков, активных против резистентных грамположительных кокков вследствие своей предсказуемой активности в отношении почти всех штаммов MRSA, S.epidermidis и ванкомицинорезистентных энтерококков. Его недостаточная эффективность при пневмонии привлекла внимание к роли некоторых из современных работ, подчеркивающих значение пенетрации препарата в эпителиальную внутриклеточную среду, изучению которых до сих пор уделялось недостаточное внимание.

Торговое название Кубицин
Класс Циклический липопептид
Фармакология
92%
Фармакодинамика Зависимая от концентрации бактерицидная активность со стойким постантибиотическим эффектом
Спектр S.aureus - MRSA, MSSA, VISA/VRSA;

Enterococcus, включая VRE;

S.pneumoniae, включая пенициллино-резистентные;

Доза 4 мг/кг в/в каждые 24 ч (изучается 6 мг/кг)
Изменение дозы при почечной недостаточности СLCr 1000 Ед/л
Стоимость $135/500 мг флакон

Daptomycin: another novel agent for treating infections due to drug-resistant gram-positive pathogens.

Впервые такой термин ввел в науку ученый Грам. Он использовал при окрашивании бактерий специальный краситель и те бактерии на которые краситель действовал получили название грамположительные, а на которые не действовал грамотрицательные.

Метод Грама - это способ окрашивания бактерий, чтобы было проще их изучать, выделять бактерии по их биохимическим свйоствам.

Если бактерии после окрашивания и промывания растворителем полностью обесцвечивались , то это грамотрицательные бактерии. Если сохраняли фиолетовый цвет - грамположительные.

Понимаете, нет никакого целеполагания в биологии. Просто это форма жизни, которая приспособилась жить, потихоньку причиняя вред другой форме. Но это не цель жизни бактерий, им наше здоровье не важно.

Хороший ответ 1 0 1

На этот вопрос отвечает земечательный антрополог Станислав Дробышевский в видео от ПостНауки ниже.

(сначала речь пойдет о приматах, затем будет затронута и общая картина, где будет фигурировать и ваш вопрос в том числе, но лучше прослушать полностью, потому что первое дополняет второе)

Что касается его последнего комментария про "маленьких сереньких с хвостиком", то рекомендую, чтобы составить представление, посмотреть на т.н. Пургаториуса, -- нашего вероятного очень-очень дальнего предка:) См. вот эту ссылку

Наконец, в довесок, я бы предложил посмотреть еще одно видео про увеличение мозга непосредственно у человека, т.к. Станислав хорошо разбирает все факторы, этому увеличению сопутствовавшие, что может прояснить, по аналогии, что нужно было бы другим, нечеловеческим линиям теоретически сделать, чтобы прийти к такому же.

Хороший ответ 4 1

Я понимаю так (если понимаю неправильно, пусть знающие люди меня поправят), что, в общем смысле, энтропия – это степень упорядоченности какой-либо системы, мера беспорядка, хаоса. И чем выше беспорядок, тем, соответственно, выше энтропия. И наоборот. Понятие энтропии используется во многих науках, но чаще, как правило, связывается со вторым законом термодинамики, который гласит, что в изолированной системе энтропия не может уменьшаться. Если говорить совсем простыми словами, то система – это нечто организованное, то, что имеет свою структуру, а изолированной можно назвать систему, на которую не оказывается воздействие извне (хотя совсем уж независимую систему найти трудно, так как все предметы и объекты друг с другом взаимодействуют, но это детали). Так вот, оставленное на солнце яблоко со временем сгниет, человек постареет. Энтропия всегда растет. Вселенная стремится к беспорядку. И именно из-за действия энтропии, как предполагается, время не может идти назад, хотя в физике не существует точного закона, постулирующего, что время обязательно должно идти только вперед. Если время пойдет назад, то все явления и вещи начнут сами по себе магическим образом упорядочиваться: разлетевшиеся бумаги сложатся ровной стопочкой, разбитый стакан соберется в целый без единой трещины, люди начнут молодеть. Повернуть время вспять значит упорядочить систему, то есть нарушить второй закон термодинамики. Нет, разбитый стакан, конечно, можно склеить в целый, и дома можно сделать уборку, однако при этом придется затратить какую-то часть энергии, и никакого нарушения в итоге не выйдет. Склеивание стакана и уборка дома – это только видимость уменьшения энтропии, так как даже аккуратно разложенные по местам вещи имеют свойство со временем разлагаться, так что от вездесущей энтропии нам не уйти.

Хороший ответ 1 1

Предположу что под "кошмарными" имеются в виду резистентные к рутинным антибиотикам штаммы бактерий :) Проблема насущная, на самом деле, и не только в США - там она выраженней ввиду более хорошего финансирования, следовательно, более широких возможностей в плане выбора антибиотиков, которые не по 5 рублей литру (я про оригинальные, не дженерики из песка и палок в Мумбаях сделанные). Назначение без наличия четких критериев, неправильного подбора группы а/б, дозы, режима приема, длительности курса, особенностей самого пациента и т.д. - на выходе получаем недостаточную элиминацию возбудителя, остатки былой роскоши которого много знают и много умеют (приобретенная резистентность; есть ещё врождённая, где микроб изначально скала дуэйн - тоже заноза в ж, но не о них сейчас). Приходится переходить на резервные группы а/б - привет токсичность (аминогликозиды в этом плане всех уделали); к тому же сформироваться устойчивость может прекрасно и к ним. И что дальше? Нерациональное применение а/б - больная тема для всех стран, где они есть, и возникновения вышеупомянутой проблемы - логичное следствие эйфории от первоначального успеха терапии бактериальных инфекций, смертность прежде от которых была колоссальной; назначали в итоге чуть ли не на любой чих. Пожинаем плоды необразованности, собственно. Хорошо, что проблеме сейчас уделяется огромное внимание, ВОЗ активно деятельствует, разработаны критерии назначения АБТ - все это позволит немного замедлить этот снежный ком.

Суперинфекция - одно из осложнений антибиотикотерапии, бывает экзо- и эндогенная. Вторая возникает вследствие подавления а/б нормальной флоры, в результате чего условно-патогенная и патогенная, в норме достаточно тихушная, rise like a phoenix со всеми вытекающими. Экзо - это больше про нозокомиальную (внутрибольничную) тему, где микроб того же штамма, что и вне больницы, в условиях стационара обычно злее, заковыристей и устойчивей, и любить насесть на ослабленные тела => лечить все равно надо, и агрессивными высокими дозами, которые небезопасны.


Окрашивание по Граму или Окрашивание по Граму , также называемый метод Грама , представляет собой способ окрашивания используется для различения и классификации бактериальных видов на две большие группы ( грамположительных и грамотрицательных ). Название происходит от датского бактериолог Hans Christian Gram , который разработал технику.

Окрашивание по Граму различает бактерии от химических и физических свойств их клеточных стенок путем обнаружения пептидогликано , который присутствует в клеточной стенке грамположительных бактерий. Грамотрицательные клетки также содержат пептидогликана, но очень небольшой слой из него , который растворяется при добавлении спирта. Поэтому клетка теряет свой первоначальный цвет от основного пятна. Грамположительные бактерии сохраняют кристалл фиолетового красителя , и , таким образом окрашивается фиолетовые, в то время как грамотрицательные бактерии не делают; после того, как Промывка, контрастирующий добавляются (обычно сафранин или фуксин ) , которые будут окрашивать эти грамотрицательные бактерий розового цвета. Оба грамположительных бактерии и грамотрицательные бактерии подобрать контрастную. Контрастное, однако, является невидимым на грам-положительных бактерий , из - за более темного кристаллического фиолетового пятна.

Грам почти всегда первый шаг в предварительной идентификации бактериального организма. Хотя Грама является ценным диагностическим инструментом в клинических и научных исследованиях, не все бактерии могут быть окончательно классифицированы по этой методике. Это приводит к грам-переменные и грамотрицательных неопределенным групп.

содержание

история

Метод назван в честь его изобретателя, датский ученый Ганс Христиан Грам (1853-1938), который разработал технику, работая с Карлом Фридлендер в морг городской больницы в Берлине в 1884. Gram разработал свою технику не с целью отличить один тип бактерий от другого , но чтобы сделать бактерии более заметными в окрашенных участках легочной ткани. Он опубликовал свой метод в 1884 году, и включил в своем кратком отчете о наблюдении , что тиф бацилла не сохраняет окраску.

Пользы

Окрашивание по Граму является бактериологический лабораторный метод , используемый для дифференциации бактериальных видов на две большие группы ( грамположительных и грамотрицательных ) на основе физических свойств их клеточных стенок . Окрашивание по Граму не используется для классификации археи , ранее archaeabacteria, так как эти микроорганизмы дают весьма различные ответы , которые не следуют их филогенетических групп .

Грам не является непогрешимым инструментом для диагностики, идентификации, или филогенеза, и это крайне ограниченного применение в экологической микробиологии . Он используется в основном для предварительной идентификации морфологической или установить , что существует значительное количество бактерий в клинических образцах. Он не может идентифицировать бактерии на видовом уровне, и для большинства заболеваний, не следует использовать в качестве единственного метода идентификации бактерий. В клинических микробиологических лабораториях, он используется в сочетании с другими традиционными и молекулярными методами для идентификации бактерий. Некоторые организмы являются грам-переменной ( это означает , что они могут испачкать либо отрицательный или положительный); некоторые из них не окрашивали либо красителя в технике Грама и не видели. В современной экологической или молекулярной лаборатории микробиологии, большинство идентификации осуществляются с помощью генетических последовательностей и других молекулярных методов, которые являются более конкретными и информативным , чем дифференциальное окрашивание.

Грам был предложен , чтобы быть столь же эффективным диагностическим инструментом , как ПЦР в одном первичном исследовательском отчете о гонококковом уретрите.

Граму проводят на теле жидкости или биопсии , когда инфекция подозревается. Граму дают результаты гораздо быстрее , чем культивирование , и особенно важно , когда инфекция будет сделать важное различие в лечении пациента и прогнозе; примеры являются спинномозговой жидкостью для менингита и синовиальной жидкости для септического артрита .


Грамположительные бактерии имеют толстую сетчатую клеточную стенку , изготовленную из пептидогликана (50-90% от клеточной оболочки), и в результате окрашивали фиолетовым с кристаллическим фиолетовым, тогда как грамотрицательные бактерии имеют более тонкий слой (10% клеток конверт), так что не сохраняет фиолетовую окраску и противопоказана окрашенный розовые от сафранина. Есть четыре основных шага по Граму:

  • Применение первичного пятна ( кристалл фиолетового ) к тепловой фиксированной мазке бактериальной культуры. Термофиксации убивают некоторые бактерии , но в основном используются для прикрепления бактерии к слайду , так что они не прополоскать во время процедуры окрашивания.
  • Добавление йодида , который связывается с кристаллическим фиолетовым и улавливает его в клетке
  • Быстрое обесцвечивание с этанолом или ацетоном
  • Контрастный с сафранином . ФУКОРЦИН иногда заменяет сафранинтак как он более интенсивно пятна анаэробных бактерий, но она меньшеобычно используетсякачестве контрастирующего.
Резюме Грама
применениереактивсотовый цвет
ГрамположительныйГрамотрицательный
Первичный красителькристаллический фиолетовыйпурпурныйпурпурный
Ловушки агентйодпурпурныйпурпурный
Decolorizerспирт / ацетонпурпурныйбесцветный
Счетчик пятноSafranin / ФУКОРЦИНпурпурныйрозовый

Кристалл фиолетовый (CV) диссоциирует в водных растворах в CV +
и хлорид ( Cl -
) Ионы. Эти ионы проникают через клеточную стенку и клеточную мембрану как грамположительных , так и грамотрицательных клеток. CV +
ион взаимодействует с отрицательно заряженными компонентами бактериальных клеток и окрашивает клетки фиолетовыми.

Йодид ( I -
или я -
3 ) взаимодействует с CV +
и образует крупные комплексы кристаллического фиолетового и йода (CV-I) в пределах внутренних и внешних слоев клетки. Йод часто упоминаются как протрава , но является улавливание агента , который предотвращает удаление CV-я сложный и, следовательно, цвет клетки.

При добавлении decolorizer, таких как спирт или ацетон, он взаимодействует с липидами клеточной мембраны. Грамм-негативные клетки теряют свою внешнюю мембрану липополисахарида, а внутренний слой пептидогликан слева подвергаются. В CV-я комплексы отмывают от грамотрицательной клетки вместе с наружной мембраной. В противоположность этому, грамположительные клетка становится обезвоженной от обработки этанолом. Большой CV-I комплексов защемлен в грамположительных клетку из-за многослойный характер его пептидогликан. Шаг обесцвечивания имеет решающее значение и должен быть приурочен правильно; кристалл фиолетовый краситель удаляется из обоих грам-положительных и отрицательных клеток, если агент обесцвечивание остается слишком долго (считанные секунды).

После того, как обесцвечивание, граммы-положительные клетки остаются фиолетовыми и грамотрицательная клетка теряет свою фиолетовую окраску. Контрастное, который, как правило, положительно заряженные Safranin или основной фуксин, применяется последним, чтобы дать обесцвечивают грамотрицательных бактерий розовый или красный цвет.

Примеры

Грамположительные бактерии обычно имеют одну мембрану ( monoderm ) , окруженный густой пептидогликана. Это правило следует два филы: Firmicutes (для классов , кроме молликут и Negativicutes и) Actinobacteria . В противоположность этому , члены Chloroflexi (зеленые без серы бактерии) являются monoderms , но обладают тонким или отсутствует (класс Dehalococcoidetes ) пептидогликана и может окрашивать отрицательным, положительным или неопределенными; Члены Deinococcus-Thermus группы пятна положительного , но являются diderms с толстым пептидогликаны.

Исторически сложилось так , что грамположительные формы составляли фила Firmicutes , имя в настоящее время используется для самой большой группы. Она включает в себя многие известные роды , такие как Bacillus , Listeria , Staphylococcus , Streptococcus , Enterococcus и Clostridium . Он также был расширен , чтобы включить молликуты , бактерии , такие как Mycoplasma , которые не имеют клеточных стенок и поэтому не может быть окрашивали по Граму, но полученные из таких форм.

Некоторые бактерии имеют клеточные стенки , которые особенно искусны в сохранении пятна. Они будут появляться положительное окрашивание по Граму , даже если они не являются тесно связаны с другими грам-положительных бактерий. Это так называемые кислотостойкими бактерии , и может быть дифференцировано только от других грамположительных бактерий с помощью специальных процедур окрашивания .

Грамотрицательные бактерии , как правило , обладают тонким слоем пептидогликана между двумя мембранами ( diderms ). Большинство бактериальных фил являются грамотрицательные, в том числе цианобактерий , зеленых серных бактерий , и большинство протеобактерий (исключение составляют некоторые члены Rickettsiales и насекомых-эндосимбионтов в Enterobacteriales ).

Некоторые бактерии, после окрашивания Грама, выход гр-переменной шаблон: сочетание розовых и пурпурных клеток видны. В культурах Bacillus, Butyrivibrio и Clostridium, уменьшение толщины пептидогликана в процессе роста совпадает с увеличением числа клеток, которые Грам-отрицательным. Кроме того, во всех бактерий, окрашенных с помощью Грама, возраст культуры может повлиять на результатах окраски.

Грамотрицательные бактерии неопределенными действительно предсказуемо не реагируют на Граму и, следовательно, не может быть определена либо как грамположительные или грамотрицательные. Примеры включают в себя множество видов Mycobacterium , в том числе микобактерий туберкулеза и М. лепры .

Орфографический примечание

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Copyright © Иммунитет и инфекции