Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника микробиология

’Подсчет количества колоний разного типа

Определение показателей микробной обсемененности (на основании числа колоний, степени разведения исследуемого материала, объема посевной дозы) и идентификация выделенных культур.

Рис. 2 Схема лабораторной диагностики дисбактериоза

Терапия. Для лечения дисбактериозов (восстановления нормальной микрофлоры толстой кишки) используются 2 группы препаратов: пробиотики, пребиотики.Пробиотики - фармакологические препараты, содержащие штаммы живых микробов-антагонистов и их метаболиты, которые улучшают микробную экологию кишечника. Роды микроорганиз­мов, составляющих основу пробиотиков:Bifidobacterium,Lactobacillus,Enterococcus,Streptococcus,Escherichia,Bacillus,Saccharomyces. Примеры препаратов пробиотиков: ко- либактерин, бифидумбактерин, лактобактерин, споробактерин, бактисубтил, энтерол. По- ликомпонентные препараты содержат два и более видов микробов:бификол, бифилакт, линекс, биоспорин.

Пребиотики- неперевариваемый пищевой ингредиент, который избирательно стимули­рует рост и биологические свойства нормальной микрофлоры. Примеры пребиотиков: инулин, олигофруктоза.

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ.

Основные представители нормальной микрофлоры кожи, ротовой полости, дыха­тельных путей, мочевыводящих путей, половых путей. Гомеостатитческие функ­ции нормофлоры. Понятие о колонизационной резистентности.

Микрофлора кишечника. Основные представители, их количественное содержание. Обратить внимание студентов на современные нормативы содержания бактерий в кишечнике.

Дисбактериозы. Определение, классификации. Микробиологические критерии дисбиоза. Степени дисбактериоза кишечника.

Методы лабораторной диагностики дисбиоза кишечника: классический (бактерио­логический) и экспресс-методы (скрининговые).

Принципы коррекции и профилактики дисбиозов. Основные группы препаратов и их механизм действия.

САМОСТОЯТЕЛЬНЫЕ ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ.

Цель: Овладеть навыком бактериологической диагностики дисбактериоза кишечника.

Методика (метод серийных разведений)

Из пробирки с надписью "Испражнения. Разведение 10' 1 " 0.1 мл суспензии фека­лий перенести стерильной пипеткой в пробирку с 9.9 мл изотонического раствора хлорида натрия и тщательно перемешать. Получается разведение испражнений 10’ 3 .

Подобным образом готовятся разведения 10' 5 , 10' 7 и 10' 9 .

Из пробирок с разведениями фекалий 10' и 10' 1.0 мл суспензии посеять глубо­ким уколом в полужидкую среду на основе пептона Бактофок. Пробирки инкубировать в термостате при 37° С в течение 96 ч.

Из пробирки с разведением фекалий 10' 7 0.1 мл суспензии посеять на чашки Пет­ри со средой Эндо (для выделения бактерий дизентерийной и кишечно-тифозной группы) и 5% кровяным агаром (для изоляции многих видов микроорганизмов и выявления бакте­рий с гемолитической активностью). Из пробирки с разведением фекалий 10' 5 0.1 мл сус­пензии посеять на чашку Петри с желточно-солевым агаром (для выделения стафилокок­ков и учета продукции лецитиназы). Капли суспензии тщательно растереть шпателем. Чашки инкубировать в термостате при 37° С в течение 18-24 ч.

Произвести учет результатов посевов: подсчитать количество колоний каждого типа на всех чашках, дать полную характеристику колоний (размеры, форма, цвет, про­зрачность, характер поверхности и краев и т. д.). По одной колонии каждого типа пересе­ять на скошенный 1.5% мясо-пептонныйагар. Пробирки инкубировать в термостате при 37° С в течение 18-24 ч.

Произвести идентификацию чистых культур: изготовить микропрепарат и окра­сить его по Г раму; определить биохимические свойства энтеробактерий (с помощью ЭН- ТЕРОтеста) и стафилококков (с помощью СТАФИтеста). Установить вид выделенных микроорганизмов.

Подсчитать количество микроорганизмов каждого вида в 1 г фекалий. Для этого количество колоний на чашке Петри умножают на 10 (поскольку на питательные среды засевалось по 0.1 мл суспензии) и на показатель разведения (10 5 или 10 7 >. Пример: на сре­де Эндо выросло 17 колоний кишечной палочки. Содержание ее в 1 г фекалий составляет 17х10х10 7 , то есть 1.7x10 9 КОЕ/г.

Содержание бифидобактерий определяется по наличию типичных для них кле­ток с характерным расположением в соответствующем разведении. Бифидобактерии - грамположительные (окрашивание часто неравномерное), чрезвычайно вариабельные по форме палочки; обычно несколько изогнутые, булавовидные и часто разветвленные. Рас­положение клеток одиночное, парами, V-образное, иногда цепочками, палисадом или ро­зетками; иногда встречаются раздутые кокковидные формы.

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Булатов В. П., Камалова Аэлита Асхатовна, Удачина Э. И., Зинкевич О. Д., Сафина Н. А.

В статье представлен современный взгляд на проблему дисбактериоза кишечника у детей , методы диагностики и их трактовка. Представлены собственные исследования характера микрофлоры кишечника по содержанию Ig-расщепляющей (протеолитической) активности фекалий у 133 детей с хронической гастродуоденальной патологией. Показано, что метод может быть полезным для характеристики кишечной микробиоты

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Булатов В. П., Камалова Аэлита Асхатовна, Удачина Э. И., Зинкевич О. Д., Сафина Н. А.

Modern methods of diagnostics intestinal dysbiosis

The article presents a modern approach to the problem of intestinal dysbiosis in children , methods of diagnosis and treatment. Presented own research into the nature of intestinal microflora on the content of Ig-cleaving (proteolytic) activity of fаeces in 133 children with chronic gastroduodenal pathology. It is shown that the method may be useful for the characterization of intestinal microbiota.

В.П. БУЛАТОВ, A.A. КАМАЛОВА, Э.И. УДАНИНА, О.Д. ЗИНКЕВИЧ. Н.А. САФИНА, А.Р. ШАКИРОВА

Казанский государственный медицинский университет Казанская государственная медицинская академия Детская республиканская клиническая больница МЗ РТ

Современные методы диагностики дисбактериоза кишечника

ІКамалова Аэлита Асхатовна

кандидат медицинских наук, ассистент кафедры госпитальной педиатрии с курсами

поликлинической педиатрии и последипломного образования Казанского государственного медицинского университета 420138, г. Казань, ул. Дубравная, д. 65, кв. 59, тел. 8-917-272-42-07, e-mail: aelitakamalova@gmail.com

В статье представлен современный взгляд на проблему дисбактериоза кишечника у детей, методы диагностики и их трактовка. Представлены собственные исследования характера микрофлоры кишечника по содержанию Ig-расщепляющей (протеолитической) активности фекалий у 133 детей с хронической гастродуоденальной патологией. Показано, что метод может быть полезным для характеристики кишечной микробиоты.

Ключевые слова: дети, дисбактериоз кишечника, диагностика.

V.P. BULATOV, A.A. KAMALOVA, E.i. UDACHINA, O.D. ZiNKEViCH, N.A. SAFiNA, A.R. SHAKIR0VA

Kazan State Medical University Kazan State Medical Academy Children's Republican Clinical Hospital RT

Modern methods of diagnostics intestinal dysbiosis

The article presents a modern approach to the problem of intestinal dysbiosis in children, methods of diagnosis and treatment. Presented own research into the nature of intestinal micro flora on the content of Ig-cleaving (proteolytic) activity of fаeces in 133 children with chronic gastroduodenal pathology. It is shown that the method may be useful for the characterization of intestinal microbiota. Keywords: children, intestinal dysbiosis, diagnostics.

В настоящее время не вызывает сомнений тот факт, что изменение количественного и качественного состава микрофлоры кишечника практически всегда сопровождает любое неблагополучие в пищеварительной системе. Не отвечая критериям самостоятельной нозологической единицы, дисбактериоз кишечника

является как следствием, так и одним из звеньев патогенеза патологии желудочно-кишечного тракта. С одной стороны, дисбактериоз кишечника всегда вторичен, поскольку возникает при любом изменении внутренней среды кишки вследствие действия патогенных факторов или прямого влияния на кишечную

Классификация дисбактериоза кишечника по И.Б. Куваевой и К.С. Ладодо (1991)

Первая степень Латентная фаза дисбиоза: проявляется только в снижении на 1-2 порядка количества защитной микрофлоры — бифидобактерий, лактобацилл, а также полноценных кишечных палочек — до 80% от общего количества. Остальные показатели соответствуют физиологической норме (эубиозу). Как правило, начальная фаза не вызывает дисфункций кишечника и возникает как реакция организма практически здорового человека на воздействие неблагоприятных факторов, таких как, например, нарушение режима питания и др. В этой фазе возможно вегетирование в кишечнике незначительного количества отдельных представителей условно-патогенной флоры. Клинических проявлений дисбактериоза в этой фазе нет.

Вторая степень Пусковая фаза более серьезных нарушений характеризуется выраженным дефицитом бифидобактерий на фоне нормального или сниженного количества лактобацилл или сниженной их кислотообразующей активности, дисбалансом в количестве и качестве кишечных палочек, среди которых нарастает доля лактозонегативных или цитрат-ассимилирующих вариантов. При этом на фоне дефицита защитных компонентов кишечного микробиоценоза происходит размножение либо плазмокоагулирующих стафилококков, либо протеев, либо грибов рода Candida. Вегетирование в кишечнике протеев или плазмокоагулирующих стафилококков в этой фазе развития дисбактериоза чаще транзиторное, чем постоянное. Функциональные расстройства пищеварения выражены неотчетливо — спорадически жидкий стул зеленоватого цвета с неприятным запахом, со сдвигом рН в щелочную сторону, иногда, напротив, задержка стула, иногда отмечается тошнота.

Третья степень Фаза агрессии аэробной флоры характеризуется отчетливым нарастанием содержания агрессивных микроорганизмов — при этом размножаются до десятков миллионов в ассоциации золотистые стафилококки и протеи, гемолитические энтерококки, наблюдается замещение полноценных эшерихий бактериями родов Klebsiella, Enterobacter и др. Эта фаза дисбактериоза проявляется дисфункциями кишечника с расстройствами моторики, секреции ферментов и всасывания. У больных отмечается учащенный разжиженный стул, часто зеленого цвета, снижение аппетита, ухудшение самочувствия, дети становятся вялыми, капризными.

Четвертая степень Фаза ассоциативного дисбиоза характеризуется глубоким разбалансированием кишечного микробиоценоза с изменением количественных соотношений основных групп микроорганизмов, изменением их биологических свойств, накоплением токсических метаболитов. Характерно вегетирование энтеропатогенных серотипов E.coli, сальмонелл, шигелл и других возбудителей острых кишечных инфекций. Возможно размножение клостридий. Эта фаза дисбиоза характеризуется функциональными расстройствами пищеварительной системы и нарушениями общего нутритивного статуса, дефицитом массы тела, бледностью кожных покровов, снижением аппетита, частым стулом с примесью слизи, зелени, иногда крови, с резким гнилостным или кислым запахом.

микрофлору. С другой стороны, дисбактериоз кишечника сам может приводить к повреждению кишечного эпителия, тем самым нарушая процессы пищеварения и усугубляя клиническое течение заболеваний желудочно-кишечного тракта.

В настоящей статье мы коснемся преимущественно диагностики нарушений микроэкологии толстого кишечника.

Толстая кишка представляет собой биотоп с высокой степенью обсемененности. В ней обнаружено более 400 видов микроорганизмов. Показано преобладание анаэробной микрофлоры, представленной на 90% бактероидами и бифидобактериями (главная флора). Аэробы составляют 10% — кишечные палочки, лактобациллы, энтерококки и др. (сопутствующая флора). Остаточная флора, составляющая менее 1% от общего количества микроорганизмов, представлена клебсиеллами, протеем, дрожжами, клостридиями, энтеробактером и цитробактером и др. Необходимо отметить одну особенность микрофлоры толстого кишечника — по мере продвижения от проксимальных отделов к дистальным увеличивается ее обсемененность. В проксимальном отделе общее число микроорганизмов составляет 108 -109, а в прямой кишке — 1011-1012 в 1 г кала. Более 90% массы кала приходится на бактерии. Нормальная микрофлора кишечника колонизирует как просвет кишечного тракта, так и поверхность слизистой оболочки кишки, формируя при этом пристеночную или мукозную микрофлору (М-микрофлора)

и полостную микрофлору (П-микрофлора). Основную защитную функцию выполняет мукозная микрофлора [1, 2, 3, 4].

На сегодня существуют следующие методы лабораторной диагностики дисбактериоза кишечника [2, 4]:

1. Бактериологический анализ (определение состава фекальной микрофлоры, отражающей микробный состав лишь дистальных отделов кишечника — наиболее доступный метод, однако недостаточно точный).

2. Биохимический экспресс — метод определения протео-литической активности супернатантов фекалий.

3. Высоковольтный электрофорез на бумаге для обнаружения р-аспартилглицина, р-аспартиллизина, р-аланина, 5-аминовалериановой и Y-аминомасляной кислот и др.

4. Ионная хроматография, определяющая в фекалиях биогенные амины, желчные и карбоновые кислоты, ароматические соединения.

5. Газожидкостная хроматография для определения в фекалиях летучих жирных кислот.

6. Микроскопия фекального мазка.

В результате многолетнего изучения кишечной микрофлоры РВ. Эпштейн-Литвак и Ф.Л. Вильшанская (1970) разработали методы лабораторной диагностики дисбактериоза, основанные на бактериологическом исследовании кала. Эти методы

Активность протеолитических ферментов у детей с гастродуоденальной патологией

Протеолитическая активность ферментов мг/д/час/г кала Группы детей с гастродуоденальной патологией Контрольная группа Р

Неэрозивные гастродуодениты Эрозивные гастродуодениты ЯБДПК

Группа 1 n=55 Группа 2 n=31 Группа 3 n=33 n=14

Общая 9,79 (2,64-21,91) 12,64 (3,178-21,05) 13,31 (5,363-28,58) 7,625 (2,386) Р1-К Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Нами выявлено, что показатели 1-й группы детей статистически значимо отличаются от 2-й и 3-й групп по общей про-теолитической активности и активности тиоловых ферментов. Также необходимо отметить, что ферменты тиолового типа вносят наибольший вклад в протеолитическую активность фекалий. Таким образом, нами установлено повышение общей протеолитической активности копрофильтратов по мере прогрессирования гастродуоденальной патологии от неэрозивных форм к эрозивно-язвенным поражениям.

На наш взгляд, в плане диагностики дисбиоза кишечника изучение иммуноглобулин-расщепляющей активности микрофлоры представляется перспективным направлением, так как способность продуцировать данные ферменты считается фактором патогенности и может служить качественной характеристикой кишечной микробиоты.

1. Урсова Н.И. Современные технологии в коррекции дисбактериозов кишечника у детей. — Москва, 2003. — 83 с.

2. Минушкин О.Н., Ардатская М.Д., Бабин В.Н., Домарадский И.В., Дубинин А.В. Дисбактериоз кишечника // Российский медицинский журнал, 1999. — № 3. — С. 40-44.

3. Казначеева Л.Ф. и др. Методы коррекции дисбиотических нарушений кишечника у детей в схемах и таблицах. — Новосибирск, 2007. — 48 с.

4. Хавкин А.И. Нарушения микроэкологии кишечника. Принципы коррекции. — Москва, 2004. — 40 с.

54 ПРАКТИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНА

'б (45) ноябрь 2010 г.

5. Барановский А. Ю., Кондрашина Э.А. Дисбактериоз кишечника. 3-е изд. — СПб: Питер, 2008. — 240 с.

6. Зинкевич О.Д., Тюрин Ю.А., Сафина Н.А. Скрининговая диагностика дисбактериоза кишечника человека по уровню активности протеолитических ферментов в копрофильтратах // Методические рекомендации — Казань, 2003. — С. 18.

7. Барсук А.Л., Сумина А.В., Кузин В.Б., Козлов РС. Практическое обоснование низкой диагностической ценности микробиологического исследования кала на дисбактериоз // Вопросы диагностики в педиатрии, 2009. — № 2. — С. 7-11.

8. Куваева И.Б., Ладодо К.С. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей. — М., 1991.

9. Swidsinski A. et al. Структура микробиоценоза кала у больных с хронической идиопатической диареей и у здоровых лиц // Клиническая гастроэнтерология и гепатология. Русское издание. — 2009. — Т. 2. — № 4. — С. 302-313.

10. Агапова О.В., Бондаренко В.М. Бактериальные IgA про-теазы // Журн. микробиол., 1998. — № 2. — С. 121-125.

11. Горская Е.М., Бондаренко В.М., Шогенова Ю.С., Лыкова Е.А., Мазанкова Л.Н., Волосникова И.В., Бродинова Н.С., Изачик Н.А. Протеолитическая активность содержимого толстой кишки в норме и при микроэкологических нарушениях // Журн. микробиол., 1995. — № 3. — С. 116-120.

12. Тюрин Ю.А. Протеиназная активность микрофлоры кишечника при острых кишечных инфекциях у детей.: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. — Казань, 2003.

13. Зинкевич О.Д., Анохин В.А., Тюрин Ю.А. Роль протеолитических ферментов в норме и патологии человека // Инфекции и иммунитет. Сборник статей. — Казань, 2003. — С. 15-18.

14. Williams A.G., Coombs G.H. Multiple protease activities in Giardia intestinalis trophozoites // Int. J. Parasitol. — 1995 — Vol. 25 (7) — Р 771-778.

15. Azghani A.O., Gray L.D., Johnson A.R. A bacterial protease perturbs the paracellular barrier function of transporting epithelial monolayers in culture // Infect Immun. — 1993. — Vol. 61. — No 6. — P. 2681-2686.

16. Holder I.A., Wheeler R. Experimental studies of the pathogenesis of infections owing to Pseudomonas aeruginosa: elastase, an IgG protease // Can J Microbiol. — 1984. — Vol. 30. — No 9. — P. 1118-1124.

17. Mintz C.S., Miller R.D., Gutgsell N.S., Malek T Legionella pneumophila protease inactivates interleukin-2 and cleaves CD4 on human T cells //Infect Immun. — 1993. — Vol. 61. — No 8. — P. 3416-3421.

18. Бондаренко В.М., Шахмарданов М.З. Шигеллезы: теория и практика. — М., 2002. — С. 44-58.

19. Hutton D.A., Pearson J.P, Allen A., Foster S.N. Mucolysis of the colonic mucus barrier by faecal proteinases: inhibition by interacting polyacrylate// Clin Sci (Colch). — 1990. — Vol. 78. — № 3. — P. 265-271.

20. Tarlton J.F., Whiting C.V., Tunmore D., Bregenholt S., Reimann J., Claesson M.H., Bland PW. The role of up-regulated serine proteases and matrix metalloproteinases in the pathogenesis of a murine model of colitis // Am. J. Pathol. 2000. — Vol. 157 (6). — Р 1927-1935.

21. Ruseler-van Embden J.G., van Lieshout L.M. Increased proteolysis and leucine aminopeptidase activity in faeces of patients with Crohn's disease. Digestion // 1988. — Vol. 40 (1). — Р 33-40.

22. Bohe M. Pancreatic and granulocytic endoproteases in faecal extracts from patients with active ulcerative colitis// Scand J Gastroenterol. — 1987. — Vol. 22 (1) — P. 59-64.

23. Кузиков А.Н., Бондаренко В.М., Лыкова Е.А. Особенности казеинолитической активности содержимого толстой кишки при дисбиотических состояниях // Журн. микробиол., 1998. — № 1. — C. 80-83.

КАЗАНСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ПОРТАЛ

для врачей и медицинских учреждений

бесплатные электронные адреса

с защитой от спама, с доступом с любого компьютера или телефона, с возможностью приема больших файлов, календарем и множеством других функций.

Микробиологическое исследование, которое позволяет оценить состав микрофлоры кишечника – концентрацию и соотношение "полезных", условно-патогенных и патогенных микроорганизмов в кале, определить специфическую активность основных пробиотиков в отношении выявленных микроорганизмов и их чувствительность к бактериофагам и антибиотикам. К нормальной микрофлоре кишечника ("полезные" бактерии) относятся лактобактерии, бифидобактерии, энтерококки, кишечные палочки (типичные), анаэробная флора (бактероиды). Условно-патогенная флора – это энтеробактерии, неферментирующие бактерии, стафилококки, анаэробные бактерии (клостридии), грибы. Патогенными микроорганизмами являются сальмонеллы, шигеллы, патогенные эшерихии. При выявлении патогенных и/или условно-патогенных микроорганизмов будет определена их чувствительность к антимикробным препаратам (антибиотикам и бактериофагам) и пробиотикам. При обнаружении микроорганизмов, составляющих нормальную микрофлору, чувствительность к антибиотикам и бактериофагам не определяется, т.к. не имеет диагностического значения.

Дисбиоз кишечника, определение пробиотиков-антагонистов.

Синонимы английские

Intestinal dysbiosis, antagonistic activity of probiotics and bacteriophage sensitivity test, Intestinal dysbacteriosis.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
• Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Дисбактериоз (дисбиоз) кишечника – это нарушение состава и количественного соотношения бактериальных и грибковых микроорганизмов желудочно-кишечного тракта. В норме слизистая оболочка ЖКТ является средой обитания так называемых комменсальных микроорганизмов, обеспечивающих целый ряд защитных функций в обмен на микронутриенты, используемые человеком. Большинство кишечных комменсалов относятся к родам Lactobacillus, Bifidobacterium и Bacteroides (облигатные бактерии), хотя состав и количество микроорганизмов сильно варьируются в зависимости от отдела ЖКТ. Так, желудок характеризуется наименьшей плотностью бактерий, среди которых преобладают Lactobacillus, Streptococcus и Helicobacter pylori. В тонкой кишке обнаруживается до 10 3 -10 6 КОЕ/мл бактерий, преимущественно Streptococcus и Lactobacillus. Наибольшая плотность комменсальных микроорганизмов наблюдается в толстой кишке (10 8 -10 9 КОЕ/мл), где преобладают Bacteroides, Clostridium, Fusobacterium и Bifidobacterium. Комменсальные микроорганизмы находятся в динамическом взаимодействии с кишечным эпителием и, таким образом, являются механическим препятствием для инвазии патогенов. Кроме того, они секретируют ряд противомикробных соединений (например, дефензины). Бактерии-комменсалы способны регулировать иммунный ответ слизистых оболочек кишечника и в некоторых случаях подавлять воспалительные, в том числе аллергические, реакции. Нарушение баланса микробиоты возникает в результате длительного или бесконтрольного лечения антибактериальными препаратами, при нарушении моторики ЖКТ (послеоперационный период, прием слабительных препаратов), мальабсорбции (хронический алкоголизм, хронический панкреатит) и при некоторых других состояниях. Дисбактериоз может приводить к развитию заболеваний ЖКТ и других органов. Так, в настоящее время получены данные о его роли в патогенезе болезни Крона, неспецифического язвенного колита и целиакии, а также синдрома хронической усталости и атопического дерматита.

Основным способом диагностики дисбактериоза является микробиологический метод, при котором производят качественную и количественную оценку облигатных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов в кале. На основании результатов исследования делают вывод о дефиците облигатных микроорганизмов или об избыточном росте условно-патогенных или патогенных бактерий. Микробиологическое исследование – это один из наиболее специфических и чувствительных методов исследования, применяемых при диагностике дисбактериоза. Следует, однако, помнить, что бактериологический состав кала (он используется в качестве биоматериала) несколько отличается от бактериологического состава слизистой оболочки кишки. Кроме того, результат теста может зависеть от многих других факторов, таких как недавнее употребление антибактериальных препаратов, продуктов, богатых пробиотиками, или слабительных средств.

С учетом растущей устойчивости условно-патогенных и патогенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам все большую роль в терапии дисбактериоза играют альтернативные методы лечения с помощью пробиотиков. Пробиотики – это группа препаратов, содержащих бактерии-комменсалы, или дрожжевые грибы. Считается, что они защищают организм от избыточной условно-патогенной и патогенной микробиоты. Совокупность защитных свойств пробиотиков в отношении какого-либо микроорганизма называется антагонистической активностью и может быть определена с помощью микробиологического исследования. В ходе анализа оценивается антагонистическая активность основных используемых в гастроэнтерологической практике пробиотиков. Определение антагонистической активности пробиотиков проводят перед назначением указанных препаратов для лечения дисбактериоза. Оно может быть дополнено анализом на чувствительность выявленных микроорганизмов к антибиотикам и бактериофагам.

Результат анализа оценивают с учетом дополнительным лабораторных и инструментальных данных.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики и лечения дисбактериоза кишечника, контроля его лечения;
• чтобы установить причины кишечных расстройств;
• для подбора рациональной терапии антибиотиками.

Когда назначается исследование?

• При обследовании пациента после длительного курса лечения антибактериальными препаратами;
• при обследовании пациента с указанием на бесконтрольный прием антибактериальных препаратов и слабительных средств в анамнезе;
• при выявлении устойчивости условно-патогенных и патогенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам;
• при обследовании пациента с хроническим панкреатитом, хроническим алкоголизмом и другими состояниями, сопровождающимися мальабсорбцией;
• при хронической диарее;
• после долгого лечения антибиотиками, глюкокортикостероидами, иммунодепрессантами, химиотерапевтическими препаратами;
• при аллергических заболеваниях, которые плохо поддаются лечению (например, атопическом дерматите);
• после воздействия химических веществ или ионизирующей радиации – если есть симптомы дисфункции кишечника;
• при длительном периоде выздоровления после острых кишечных инфекций.

• Специальность ВАК РФ 03.00.07
• Количество страниц 207

Оглавление диссертации Нилова, Елена Александровна

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ДИСБАКТЕРИОЗ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА И МЕТОДЫ ЕГО МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ.

1.1 Микробиоценоз толстого кишечника и факторы, влияющие на его состав.

1.2 Дисбактериоз толстого кишечника.

1.3 Методы, применяемые для диагностики дисбактериоза толстого кишечника.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Объем исследований.

2.2 Питательные среды.

2.3 Методы микробиологических исследований.

2.4Методы статистической обработки результатов исследований.

ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ТРАНСПОРТИРОВКИ ОБРАЗЦА ИСПРАЖНЕНИЙ НА РЕЗУЛЬТАТЫ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 4. ОЦЕНКА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ БИФИДОБАКТЕ-РИЙ.

4.1 Сравнение ростовых свойств полужидких питательных сред для бифидобакте-рий.

4.2 Использование редуцирующих факторов в составе плотных сред для бифи-добактерий.

4.3 Влияние условий хранения питательных сред для выделения бифидобактерий на их ростовые свойства.

4.4 Оценка применения элективных факторов при конструировании питательных сред для бифидобактерий.

ГЛАВА 5. ЗНАЧЕНИЕ МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ ИСПРАЖНЕНИЙ ДЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ДИСБАКТЕ-РИОЗА ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА.

5.1 Титрационный способ посева в полужидкие питательные среды для выделения бифидобактерий.

5.2 Выбор рациональной схемы посева методом десятикратных разведений.

5.3 Сравнение методик посева на плотные питательные среды.

ГЛАВА 6. ОСОБЕННОСТИ МИКРОФЛОРЫ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА ПРИ НЕКОТОРЫХ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ.

Многие методы исследования (газожидкостная хроматография, использование анаэробных станций, транспортировка материала в анаэробных условиях или исследование материала непосредственно после дефекации и др.), рекомендуемые для диагностики дисбактериоза толстого кишечника [Тамм А.О. и соавт., 1987; Донских Е.Е., Гончарова Г.И., 1988; Митрохин С.Д., Никушкин Е.В., 1998; Багрян-цева О.В. и соавт., 1999; Ардатская М.Д. и соавт., 2001 и др.], не приемлемы для работы в бактериологических лабораториях.

Все вышеизложенное свидетельствует о том, что, несмотря на многолетнюю историю и широкое применение метода бактериологической диагностики дисбак-териоза толстого кишечника, проблема его совершенствования является чрезвычайно актуальной задачей.

Цель работы: Целью настоящей работы явилась оценка значимости отдельных факторов, влияющих на эффективность бактериологической диагностики дисбак-териоза толстого кишечника и разработка на этой основе рекомендаций, направленных на упрощение техники исследования и повышение достоверности результатов.

1. Оценить влияние условий транспортировки испражнений на результаты бактериологической диагностики дисбактериоза толстого кишечника.

2. Изучить влияние элективных факторов на ростовые свойства питательных сред для выделения бифидобактерий.

3. Усовершенствовать технику исследования при бактериологической диагностике дисбактериоза толстого кишечника.

Научная новизна исследования. Впервые дана критическая оценка наиболее распространенным методическим подходам, используемым при диагностике дисбак-териоза толстого кишечника и определяющим достоверность результатов. Проведена оценка влияния условий транспортировки испражнений на результаты, получаемые при бактериологической диагностике дисбактериоза толстого кишечника. Изучено влияние рН, антибиотиков и других антибактериальных препаратов на ростовые и элективные свойства питательных сред для бифидобактерий. Получены новые данные о влиянии отдельных элективных факторов и их оптимальных соотношениях в составе питательных сред для бифидобактерий. Проведено углубленное исследование возможностей использования методики посева испражнений по Gold. Показаны различия изменений в микробиоценозе толстого кишечника при некоторых патологических состояниях.

Практическая значимость работы. Разработаны рекомендации по оптимизации схемы бактериологической диагностики дисбактериоза толстого кишечника. Показана возможность доставки материала в течение четырех часов при условии его забора в количестве более 5 г и транспортировке при низкой температуре. Рекомендованы к использованию элективные факторы при конструировании питательных сред для выделения бифидобактерий. Предложена пропись полужидкой элективной питательной среды для этих микроорганизмов. Показана необходимость внедрения в работу бактериологических лабораторий анаэробной техники для выделения анаэробов и, прежде всего, бактероидов.

Материалы работы отражены в Информационном письме № 22-01-11-381 от

Кроме того, результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс кафедры микробиологии, иммунологии и вирусологии СПГМА им. И.И. Мечникова для врачей-интернов, ординаторов и слушателей факультета усовершенствования врачей (Акт о внедрении от 05.06.2003 г.). Основные положения, выносимые на защиту:

1. Зависимость результатов бактериологического исследования на дисбактериоз толстого кишечника от времени транспортировки материала и массы взятой пробы.

2. Использование предложенной нами питательной среды (СКС-М с рН 6,0) для выделения бифидобактерий способствует улучшению диагностики дисбактериоза толстого кишечника.

3. Техника определения количества бифидобактерий в испражнениях с помощью трехрядного метода значительно повышает точность исследований.

4. Посев на дисбактериоз по Gold является высокочувствительным и информативным методом.

Апробация работы. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ. Основные положения работы доложены на отчетных научно-практических конференциях сотрудников и молодых ученых СПбГМА им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург, 2000, 2002, 2003) и на заседании общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов НИИ им. Пастера (Санкт-Петербург, 2001).