Выявление антител к вирусам гриппа a h5n1 в сыворотках

Определение уровня популяционного иммунитета у взрослого населения Российской Федерации к сезонным и потенциально пандемическим вирусам гриппа

Методические рекомендации (MP) разработаны ФГБУ "НИИ гриппа" Министерства здравоохранения Российской Федерации (авторский коллектив: д.м.н., проф. А.А.Соминина, О.С.Коншина, Е.М.Войцеховская, к.б.н. Е.В.Кузнецова, к.м.н. B.C.Вакин, к.м.н. Е.А.Смородинцева).

21 ноября 2016 г.

Введены впервые.

Аннотация

Контроль за состоянием противогриппозного популяционного иммунитета (ПИ), являющегося следствием естественной циркуляции вирусов гриппа и вакцинации, имеет важное значение для определения пропорции восприимчивого населения к постоянно меняющимся циркулирующим вирусам гриппа и прогнозирования этиологии и тяжести предстоящих сезонных эпидемий. В последние годы установлены корреляции между уровнем ПИ и тяжестью эпидемий в отдельных городах страны. Низкий уровень ПИ является фактором риска быстрого развития тяжелых эпидемий. Кроме того, ПИ является чутким индикатором начала циркуляции нового пандемического вируса, как это было установлено в 2009 г.

Определение уровня популяционного иммунитета является составной частью традиционного надзора за гриппом. В соответствии с действующей системой надзора (Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 31 марта 2005 г. N 373) надзор за гриппом осуществляется на регулярной основе в ряде региональных опорных баз (ОБ) - Федеральных бюджетных учреждениях здравоохранения "Центр гигиены и эпидемиологии" (ФБУЗ ЦГиЭ), сотрудничающих с Федеральным центром по гриппу и ОРЗ (ФЦГ) и Национальным центром по гриппу ВОЗ (НЦГ) при ФГБУ "Научно-исследовательский институт гриппа" Министерства здравоохранения Российской Федерации. Исследованию подлежат сыворотки здоровых доноров крови в возрасте от 18 до 60 лет. Исследования проводятся дважды в год - в предэпидемический период (октябрь) и постэпидемический период (апрель). Каждая ОБ исследует по 100 сывороток доноров в указанные выше сроки. Результаты в виде протоколов исследований представляются в ФГБУ "НИИ гриппа" Минздрава России, где они обрабатываются и анализируются.

В целях стандартизации исследований и приведения их в соответствие международным требованиям при подготовке настоящих Методических рекомендаций были использованы разделы Руководства ВОЗ (WHO Global Influenza Surveillance Network: Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza, 2011) и российские стандарты постановки РТГА (МУ 3.3.2.1758-03, Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа).

1. Область применения

1.1. Метод предназначен для определения уровня популяционного иммунитета к вирусам гриппа в предэпидемический по гриппу период и по окончании эпидемии путем выявления антител к сезонным вирусам гриппа A(H1N1)pdm09, A(H3N2), В (Викторианской и Ямагатской линий) с последующими расчетами средних геометрических титров антител и процента серонегативных лиц к каждому из возбудителей.

1.2. В случае регистрации появления на эпидемической орбите потенциально пандемических вирусов или вспышек неясной этиологии метод рекомендуется использовать для обнаружения антител к известным, патогенным для человека и животных вирусам гриппа A(H5N1), A(H5N6), A(H5N8), A(H2N2), A(H7N9), A(H9N2) с использованием диагностических препаратов, разработанных в ФГБУ "НИИ гриппа" Минздрава России.

2. Введение

Популяционный иммунитет (ПИ) основной массы взрослого населения в возрасте 18-60 лет к современным вирусам гриппа, являющийся отражением их циркуляции на территории страны и активной иммунизации населения гриппозными вакцинами, служит одним из основных факторов, влияющих на развитие, этиологию и тяжесть эпидемий.

Исследования сывороток взрослых доноров позволяют оценить уровень ПИ в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), по результатам которой определяют средние геометрические титры (СГТ) антител и процент восприимчивого населения (серонегативных лиц) к циркулирующим вирусам.

При постановке РТГА рекомендуется применение единой методологии с использованием стандартизованных препаратов гриппозных диагностикумов, резистентных к неспецифическим ингибиторам сывороток человека, а в качестве контроля их активности и специфичности - диагностических сывороток, содержащих антитела к антигенно актуальным вирусам гриппа. Для обеспечения специфичности реакции рекомендуется использование исключительно куриных эритроцитов.

3. Описание метода

- РТГА проста в исполнении, экономична и обеспечивает возможность быстрого определения специфических антител к различным субтипам возбудителей сезонных эпидемий и потенциально пандемическим вирусам.

- Метод рекомендован ВОЗ также для оценки иммуногенности гриппозных вакцин.

- Защитными титрами антител, обеспечивающими защиту от гриппа в 50% случаев, принято считать титры в РТГА, равные 1:32 и выше.

- Метод может быть использован в практических вирусологических лабораториях, что позволяет определять содержание противовирусных антител в сыворотках людей в непосредственной близости к очагам необычных вспышек респираторных заболеваний.

Показания к применению метода:

- Определение уровня популяционного иммунитета взрослого населения к современным штаммам вируса гриппа.

- Расшифровка этиологии вспышек респираторных заболеваний, вызванных вирусами, которые не удается идентифицировать традиционными методами (ПЦР, иммунофлуоресцентный анализ) при использовании препаратов для детекции потенциально пандемических вирусов гриппа.

- Раннее распознавание распространения в популяции нового пандемического штамма вируса.

Противопоказания: Отсутствие материально-технического обеспечения

- Планшеты круглодонные для иммунологических реакций

- Эритроциты кур

- Фосфатно-солевой буферный раствор, рН 7,4±0,2 (ФСБ)

- Раствор лимоннокислого натрия

- Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72

- Наконечники к дозаторам, стерильные, одноразовые

- Пробирки с пробками, объемом 5 мл, стерильные, одноразовые

- Диагностикумы гриппозные для реакции торможения гемагглютинации сухие, РУ N ФСР 2009/05253 от 09.07.2009 г.;

- Сыворотка диагностическая гриппозная для реакции торможения гемагглютинации сухая (СДГ), РУ N ФСР 2009/05257 от 09.07.2009 г.

- Ламинарный бокс 2 класса защиты

- Дозатор одноканальный, со сменным объемом 20-200 мкл,

- Дозатор одноканальный, со сменным объемом 100-1000 мкл

- Дозатор одноканальный, со сменным объемом 1000-5000 мкл

- Дозатор 8-канальный, со сменным объемом 20-200 мкл

- Дозатор 12-канальный, со сменным объемом 20-200 мкл

- Рефрижератор (4°С) с морозильной камерой (-25°С) для хранения сывороток доноров

- Центрифуга лабораторная (до 3000 об/мин)

- Баня водяная

3.3.3. Приготовление растворов

3.3.3.1. Фосфатно-солевой буферный раствор (0,01 М, рН 7,4±0,2)

а) Растворить последовательно 38,25 г натрия хлористого и 7,12 г натрия фосфорнокислого двузамещенного в 4,5 л дистиллированной воды (раствор А).

Грипп птиц – высококонтагиозная вирусная болезнь птиц, характеризующаяся поражением органов пищеварения, дыхания, высокой смертностью.

Мероприятия по профилактике гриппа

- размещение различных возрастных групп птицы в территориально обособленных зонах с необходимыми зооветеринарными разрывами; комплектование птичников и зон одновозрастной птицей;

- соблюдение межцикловых профилактических перерывов с проведением тщательной очистки и дезинфекции помещений.

Мероприятия по ликвидации гриппа

При подозрении на заболевание птиц гриппом принимают срочные меры по уточнению диагноза, для чего направляют на исследование в ветеринарную лабораторию свежие трупы павших или убитых в агональном состоянии птиц (не менее 5 голов) или органы (головной мозг, легкие, селезенка) в замороженном виде или в 50%-ном растворе глицерина и сыворотку крови от подозрительной по заболеванию птицы (не менее 10 проб из партии). Патологический материал направляют наречным с соблюдением правил, исключающих рассеивание возбудителя болезни.

Диагноз на грипп устанавливают на основании результатов лабораторных исследований, включая выделение и индентификацию возбудителя, с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков болезни и патологоанатомических изменений.

В неблагополучных по гриппу птиц хозяйствах, населенных пунктах проводят следующие мероприятия:

а) при возникновении заболевания в отдельном птичнике (изолированном зале) или на отдельном изолированном отделении (птицеферме) клинически больную и слабую птицу убивают бескровным методом и уничтожают или утилизируют. Остальную птицу считают условно здоровой и убивают на мясо, при этом соблюдают меры, исключающие распространение инфекции;

б) при возникновении гриппа в нескольких помещениях в хозяйстве проводят ежедневно тщательную выбраковку и убой больной и ослабленной птицы;

в) при установлении гриппа у птиц индивидуального пользования больную птицу неблагополучных дворов уничтожают, а оставшуюся условно здоровую убивают и используют для питания в проваренном виде.

При убое больших партий птицы тушки могут быть реализованы на ближай­шие пищевые предприятия для промышленной переработки при высоких температурах (изготовление колбасных изделий, консервированных продуктов).

Яйца, заложенные в инкубатор из неблагополучных птичников, утилизируют или уничтожают. Инкубатории, находящееся в них оборудование и инвентарь очищают, моют и дезинфицируют в соответствии с инструкцией по проведению ветеринарной дезинфекции, дезинвазии, дезинсекции и дератизации. Яйцо для инкубации завозят из хозяйств, благополучных по заразным болезням птиц. Каждую партию вновь выведенного молодняка выращивают в

изолированном помещении полностью освобожденной от птицы и санированной зоне. Устанавливают строгий контроль за содержанием и кормлением. Молодняк, достигший 45-дневного возраста, вакцинируют инактивированными вакцинами в течение срока, необходимого для замены всего поголовья птицы в хозяйстве.

Яйцо, полученное от неблагополучной по гриппу птицы, проваривают в течение 10 минут и реализуют в пределах района, области (края) или республики, не имеющей областного деления, или после дезинфекции аэрозольным методом допускают к вывозу на ближайшие предприятия пищевой промышленности для приготовления хлебобулочных и кондитерских изделий.

Пищевое яйцо, собранное из птичников, где не зарегистрировано заболевание птиц гриппом, реализуют на общих основаниях в пределах района, области (края) или республики, не имеющей областного деления.

При выявлении гриппа птиц в племенных хозяйствах запрещается до их оздоровления вывоз племенной продукции в другие хозяйства.

Пух, перо, полученное от убоя условно здоровой птицы, просушивают в сушильных установках (К 1-60/24/11) при температуре 85—90°С в течение 15 мин. Если в сушильных установках не обеспечивается такая температура, то при достижении в емкости сушильного барабана с пухом и пером температуры 70°С отключают подачу в него воздуха и при работающем смесителе (вал с лопастями) в емкость барабана вливают 36—38%-ный раствор формальдегида из расчета 10 мл/м 3 , после через 2—3 минуты в емкость барабана сушильной установки подают воздух и высушивают пух, перо не менее 10 минут.

При отсутствии сушильных установок пух, перо дезинфицируют в любых приспособленных емкостях 3%-ным горячим (45—50°С) раствором формальдегида в течение 30 минут с последующей сушкой.

В оздоравливаемом хозяйстве проводят систематическую выбраковку и убой некондиционной и малопродуктивной птицы и аэрозольную дезинфекцию помещений в присутствии птицы высокодисперсными аэрозолями молочной кислоты, руководствуясь при этом «Инструкцией по проведению аэрозольной дезинфекции птицеводческих

Помет и глубокую подстилку вывозят на пометохранилища и обеззараживают биотермическим методом, а в индивидуальных хозяйствах, сжигают.

В случае появления в птицеводческих хозяйствах (на фермах) заболевания птиц гриппом, вызванным ГП-1 (классическая чума) или другими высокопатогенными вариантами вируса, исполком районного (городского) Совета народных депутатов по представлению главного ветеринарного врача района (города) выносит решение об установлении карантина в неблагополучном по гриппу птиц хозяйстве и утверждает состав специальной комиссии по борьбе с гриппом.

Специальная комиссия: разрабатывает комплекс мер, направленных на ликвидацию и недопущение распространения болезни; устанавливает сроки санации и комплектования таких хозяйств птицей, исходя из конкретных условий.

Карантин с хозяйства, неблагополучного по гриппу птиц, вызванного вирусом ГП-1 или другим высокопатогенным вариантом вируса (не встречающимся в СССР), снимают после убоя всей птицы и проведения заключительной дезинфекции.

В дополнение к временной инструкции о мероприятиях по борьбе с гриппом птиц от 17 августа 2005 года

утверждены новые рекомендации по организации противоэпизоотических мероприятий по гриппу птиц подписанные заместителем руководителя Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору Е.А. Непоклоновым.

Необходимо осуществлять, следующие дополнительные мероприятия.

Для коммерческих птицеводческих хозяйств

В субъектах Российской Федерации, входящих в состав Сибирского и Уральского Федеральных округов обеспечить функционирование всех коммерческих птицеводческих хозяйств в режиме предприятия закрытого типа, включая;

Личные подворья граждан

Обеспечить до отлета перелетной водоплавающей птицы исключительно подворное содержание птицы в личных хозяйствах граждан во всех населенных пунктах, где при выгульном ее содержании не исключен контакт с дикой водоплавающей птицей.

Обеспечить учет количества птицы во всех населенных пунктах, обследование ее клинического состояния и учет отхода птицы.

Организовать мониторинг бессимптомной циркуляции вируса При этом рекомендуется использовать РТГА или ИФА для выявления антител к гсмагтлютининам Н5 и Н7 вирусов гриппа или ПЦР для обнаружения вируса в патологическом материале если есть падеж птицы с неясной клиникой, либо в помете, если падеж отсутствует. Для исследования указанными методами материал направлять в аккредитованные лаборатории, имеющие возможность использования данных методов.

В случае возникновения подозрения на инфицирование птицепоголовья проводить ограничительные мероприятия, включая:

• устройство дезбарьеров для автотранспорта и пешеходов на выездах из населенного пункта;
• запрет на вывоз из населенного пункта птицы, птицепродуктов, кормов для птицы;
• убой бескровным методом всей ослабленной и больной (вне зависимости от того имеет ли она симптомы, характерные для гриппа птиц) птицы. Убитую
• птицу утилизировать (биотермические ямы с использованием средств дезинфекции, сжигание или проваривание в течение 30 минут). Во время убоя проводить отбор патологического материала и отправку его для исследования на грипп птиц.

Основанием для подозрения является:

• повышенный падеж птицы.
• заболевание птицы с характерной клиникой.
• одновременное заболевание птицы в нескольких подворьях одного населенного пункта,
• выявление антител к гемагглютининам Н5 и Н7.

После наложения, ограничений проводить клинический осмотр птицепоголовья в населенном пункте, отправлять для лабораторного исследования патологический материал. При отсутствии падежа отправлять для исследования на наличие вируса помет птиц.

В том случае если в населенном пункте имеется падеж птицы с характерной клиникой и лабораторными методами подтверждена циркуляция вируса субтипов Н5 или Н7, накладывать карантин и по готовности проводить мероприятия по убою всей птицы в населенном пункте, с последующей дезинфекцией и механической очисткой. Карантин соблюдать в течение 3 недель после завершения первого цикла дезинфекции.

В том случае, если циркуляция вируса лабораторными методами не подтверждена в двух тестах, проведенных с разрывом по времени в 1 неделю, ограничения по гриппу сохранять в течение 3 недель после их наложения, проводя необходимые исследования по дифферинциальной диагностике других болезней. Снятие ограничений оформлять актом, к которому прикладывают результаты лабораторных исследований.

Описание болезни

Возбудитель гриппа птиц — РНК-содержащий вирус Influenza virus A, отнесен к семейству Orthomyxoviridae, а по комплемент-связывающему антигену (РНП) родственен вирусу гриппа A человека и животных. Для вириона размером от 60 до 80 нм характерны полиморфность, преобладающая сферическая форма. Вирион имеет липопротеидную оболочку с радиально расположенными на ней шипиками, которая заключает в себе свёрнутое кольцо РНП. Геном вириона состоит из 6 или более типов РНК. Вирус Хорошо размножается в развивающихся 10-11 суточных эмбрионах кур, а так же обладает инфекционной, гемагглютинирующей и нейраминидазной активностью. Вируссодержащая аллантоисная жидкость обладает способностью агглютинировать эритроциты многих видов животных. При культивировании вируса в культуре тканей многие штаммы обладают цитопатическим действием и гемадсорбирующими свойствами. Штаммы вируса гриппа, выделенные от различных видов птиц, могут отличаться по вирулентности, спектру патогенности и структуре поверхностных антигенов (гемагглютинина и нейраминидазы). Вирус быстро инактивируется под действием 3% раствора едкого натра и фенола, 0,1% раствора формальдегида, но длительно сохраняется при низких температурах и высушивании.

Вирус гриппа птиц типа А обладает широкой вариабельностью: известно пятнадцать вариантов структуры гемагглютинина и девять нейраминидазы, именно комбинации этих двух гликопротеинов и определяют подтип вируса. Для птиц наиболее патогенны сероварианты H5 и H7, которые отнесены к высокопатогенным вирусам гриппа птиц (классической чуме птиц).

К гриппу восприимчивы все виды домашних и диких птиц, млекопитающие, в том числе кошки, собаки, свиньи и человек. Дикие перелетные птицы являются природным резервуаром и переносчиком вирусов гриппа. Источником инфекции служат больные и переболевшие птицы, выделяющие вирус во внешнюю среду со слюной, пометом и аэрогенно. При остром течении болезни возможна трансовариальная передача вируса.

Особенностью гриппа птиц является хаотичное распространение инфекции – рядом с птичниками с больными птицами могут располагаться птичники со здоровыми курами. Тяжелее грипп переносят куры яичного направления, а также птицы при напольном содержании. Острое течение болезни проявляется угнетением, слизистыми истечениями из носа и клюва, синюшностью сережек и гребня, коматозным состоянием птиц. Подострое течение характеризуется слабостью птиц, слезотечением, диареей, снижением яйцекладки, ухудшением качества снесенных яиц.

При вскрытии у павших птиц обнаруживают кровоизлияния на слизистых пищевода и респираторного тракта, на серозных покровах, в жировой ткани брыжейки и сердца, на границе мышечного и железистого желудка, катаральный или гемморагический энтерит, а у кур-несушек – желточный перитонит.

Предварительный диагноз на грипп птиц ставят на основании эпизоотологических данных, клинической картины и патологоанатомических изменений. Окончательно диагноз подтверждают результатами лабораторных исследований по выделению возбудителя, или обнаружению РНК вируса гриппа или обнаружения антител к вирусу гриппа птиц Н5 или Н7 (если не проводилась вакцинация).

Для серологических исследований используют ИФА, РЗГА, РДП. Обнаружение специфических антител у не вакцинированных птиц на 2-4 сут после начала заболевания, а также 2-4-кратное увеличение титров антител и количества серопозитивных птиц при исследовании парных сывороток, свидетельствует о переболевании гриппом и диктуют необходимость проведения дальнейших вирусологических исследований.

В последние годы в мире участились случаи заболевания птиц гриппом, вызванным высокопатогенными вирусами с гемагглютинином Н5 и Н7 — Н5N1, H5N2, H5N3, H5N5, H5N6, H5N8, H7N1, H7N3, H7N7 и др., а также случаи выявления низкопатогенных серотипов Н5 и Н7.

Основной мерой профилактики болезни в птицеводческих хозяйствах является биологическая защита, направленная на недопущение попадания возбудителя болезни в хозяйство путем строгого соблюдения ветеринарно-санитарных правил, обеспечения инженерной защиты зданий и сооружений от проникновений диких и синантропных птиц и грызунов.

На птицеводческих предприятиях необходимо обеспечить прохождение обслуживающим персоналом санитарной душевой обработки и переодевания в санпропускниках в спецодежду при приходе на работу, надлежащую дезинфекцию автотранспорта, оборотной тары. Установить обязательный ежедневный контроль за выполнением этих мероприятий. Не допускать скармливание птицы кормов непрошедших термическую обработку. Осуществлять регулярный контроль за недопущением содержания работниками предприятия птиц на подворьях.

Кроме этого, на птицепредприятиях следует проводить ежедневное отпугивание синантропных и диких птиц и не допускать россыпь кормов на территории. Не должно быть доступа синантропных, диких птиц и грызунов в кормоцеха, склады кормов и их ингредиентов, бункеры с кормами, расположенные у птичников, должны быть закрыты крышками. С целью проведения мониторинговых исследований необходимо регулярно проводить отстрел диких и синантропных птиц на территории и рядом с территорией хозяйства. Трупы отстрелянных птиц должны направляться для исследования на грипп и другие заразные болезни в ветеринарную лабораторию.

Необходимо проводить мониторинг гриппа птиц в хозяйстве. С этой целью следует не реже 1 раза в квартал, а лучше чаще отправлять в ветеринарную лабораторию для вирусологических и ПЦР-исследований трупы птиц или органы от павших птиц (трахея, легкие, экссудат, костный мозг, головы, кишечник с содержимым, селезенку), помет, а для серологических исследований сыворотку крови от птиц разных возрастов.

Серологический мониторинг позволяет обнаружить в сыворотке крови птиц антитела к вирусу гриппа. Раннее выявление циркуляции вируса в хозяйстве позволит вовремя применить комплекс противоэпизоотических мероприятий и ликвидировать болезнь в первичном очаге.

Вакцина изготавливается на основе масляного адъюванта Montanide ISA 70, благодаря чему обладает выраженными иммунобиологическими свойствами, хорошей стабильностью и низкой реактогенностью.

В лабораторных и при широких производственных испытаниях показано, что ФЛУ ПРОТЕКТ Н5 вызывает у птиц формирование иммунного ответа к гриппу птиц типа А, вызываемого высоковирулентными штаммами возбудителя, содержащего гемагглютинин Н5, через 21-28 сут после вакцинации, который сохраняется в течение 12 мес. Вакцина предназначена для профилактики гриппа у всех видов птиц в благополучных, угрожаемых и неблагополучных племенных, товарных, фермерских, личных и подсобных хозяйствах.

Перед применением флаконы с вакциной выдерживают при 18-20° С в течение 8-10 ч. Иммунизации подлежат птицы от 3 недельного возраста и старше. Вакцину вводят подкожно в дорсальную часть средней трети шеи в объеме 0,5 см3. Повторное введение вакцины ФЛУ ПРОТЕКТ Н5 проводят за 4 недели до начала яйцекладки. В дальнейшем ревакцинацию проводят один раз в год.

Допускается возможность иммунизации цыплят в суточном возрасте в дозе 0,2 см3 с ревакцинацией через 30 суток в объеме 0,5 см3. Перед применением и во время использования флакон с вакциной периодически встряхивают до восстановления однородности эмульсии. Через 21-28 сут после иммунизации проводят контроль напряженности иммунитета к вирусу гриппа птиц, исследуя не менее 25 проб сыворотки крови в РТГА с вирусом гриппа типа А подтипа Н5 или ИФА.

Вакцинация считается успешной, если не менее чем у 90% привитых птиц титр антител к вирусу гриппа в ИФА в 2 и более раза превышает минимальное положительное значение, предусмотренное инструкцией по применению используемого диагностического набора. Титр антител к вирусу гриппа в РТГА не менее чем у 90% привитых птиц должен быть 6,0 log2(1:64) и выше.

Производителям птицеводческой продукции важно строго выполнять комплекс ветеринарно-санитарных, организационно-хозяйственных мероприятий по охране хозяйства от заноса возбудителей заразных болезней птиц в сочетании с проведением серологического и вирусологического мониторинга. Только при этих условиях можно обеспечить благополучие предприятий по гриппу птиц.

В личных подсобных хозяйствах граждан необходимо обеспечить безвыгульное содержание домашних птиц, проводить разъяснительную беседу о недопущении попадания на территорию хозяйства посторонних лиц и предметов.

Эпидситуация по высокопатогенному птичьему гриппу H5N1 за рубежом

А.В. Гольдштейн
Представительство компании санофи пастер в России и странах СНГ

В настоящее время активная циркуляция высокопатогенных вирусов гриппа H5N1 в странах Юго-Восточной Азии среди домашних и диких птиц продолжается. Вспышки зарегистрированы во многих районах Вьетнама и Индонезии, в некоторых районах Камбоджи, Таиланда, Китая, а также возможно в Лаосе. Более 150 миллионов голов домашней птицы погибли от инфекции или были забиты. Экономические потери в сельскохозяйственном секторе стран Азии оцениваются приблизительно в 10 млрд. долларов [3]. Несмотря на предпринятые меры по контролю за распространением инфекции, она продолжает распространяться и вызывать вспышки среди домашних и диких птиц. Так в начале августа 2005 г. в Монголии на озерах Эрхел (Erhel) и Кхант (Khunt), расположенных в северной части страны, обнаружены павшие птицы, в числе которых дикие утки, гуси и лебеди. На озере Эрхел обнаружено около 80 павших птиц, на озере Кхант - 9 павших птиц. Лабораторные исследования, проведенные в Центральной ветеринарной лаборатории Монголии методом полимеразной цепной реакции с использованием обратной транскриптазы (RT-PCR), выявили в образцах, взятых у погибших птиц, вирус гриппа типа А [3]. Субтипирование полученных штаммов вируса, проведенное Департаментом сельского хозяйства США, определило подтип вируса как H5N1 [5]. Это первый случай обнаружения высокопатогенного вируса гриппа у диких птиц, не имевших явного контакта с домашней птицей. Весьма интересным теперь будет выяснить филогенетеческие связи выявленного вируса с вирусом H5N1, выделенным у птиц в России и Казахстане, учитывая тот факт, что данная местность в Монголии находится в непосредственной близости от их границ. Случаев заболевания человека в Монголии пока не зарегистрировано.

Сложная ситуация по птичьему гриппу сохраняется и в Китае. Вспышка гриппа H5N1 наблюдается в настоящее время среди диких птиц природного заповедника на озере Куингхай (Quinghai), расположенного вблизи города Куанджи (Quanji) провинции Куингхай [3]. Погибло более 6 тыс. птиц. Среди пораженных инфекцией видов птиц: дикие гуси, большие черноголовые чайки, бурые чайки, утки, бакланы. В области вспышки, вдоль путей миграции птиц и в прилежащих регионах начата интенсивная программа вакцинации с использованием более 3 млн. доз вакцины. Установленное эпидемиологическое наблюдение за близлежащими фермами, в которых сейчас находится около 2 млн. птиц, пока не выявило случаев заболевания у них или у людей. Исследование вирусов H5N1, выделенных в ходе этой вспышки, показало, что они сходны с вирусами, циркулирующими в Юго-Восточной Азии в последние 2 года. По данным Всемирной организации здоровья животных (OIE), опубликованным 12 августа 2005 г. [4], предварительный филогенетический анализ структуры гена нейраминидазы вирусов H5N1, выделенных в России, показал, что он практически идентичен гену того же вируса, изолированного у гуся с озера Куингхай. В Таиланде с 1 по 31 июля прошла вторая национальная кампания по выявлению случаев птичьего гриппа у животных. В ходе кампании на одной из деревенских ферм зарегистрировано 13 случаев гибели птиц от гриппа H5N1. Всего в Таиланде от птичьего гриппа погибло 16736 птиц, еще 121819 было забито [3].

18 августа 2005 г. министерство сельского хозяйства, лесоводства и рыболовства Японии заявило об обнаружении позитивных на вирус птичьего гриппа цыплят на одной из ферм в префектуре Саитама (Saitama), расположенной на востоке Японии, вблизи Токио, и производившей куриные яйца [1]. Выделенный вирус относится к подтипу H5, однако предполагается, что это менее патогенный вариант вируса, поскольку, по сообщению министерства, массовой смерти птиц на ферме не наблюдается. Тем не менее, правительство префектуры приняло решение об уничтожении почти 100 тыс. цыплят на данной ферме, а также о запрете перевоза цыплят и куриных яиц в радиусе 5 км от нее.

В Индонезии инфекция среди птиц также приобрела широкое распространение [3]. Случаи заболевания птиц высокопатогенным птичьим гриппом отмечены в 21 из 30 провинций Индонезии. Последние случаи инфекции, обнаруженные у бройлерных цыплят и бойцовых петухов на о. Южный Сулавеси, привели к уничтожению 382872 птиц. Кроме того, вирус птичьего гриппа был обнаружен у свиней на двух фермах в провинции Бантен. Все свиньи, находившиеся на этих фермах, были забиты.

Первый случай летального гриппа H5N1 у человека в Индонезии был зарегистрирован 12 июля [7]. В образцах, взятых у 38-летнего мужчины из юго-западного пригорода г. Джакарта (о. Ява), референсной лабораторией ВОЗ в Гонконге, а также лабораторией Центров по профилактике и контролю заболеваний (CDC, США) был обнаружен вирус подтипа H5N1. Первой заболела его 8-летняя дочь - 24 июня. Отмечалась лихорадка и диарея, затем кашель. Девочка была госпитализирована 28 июня, где 14 июля она скончалась с явлениями респираторного дистресс-синдрома. Годовалая сестра девочки заболела 29 июня, отмечались лихорадка, диарея, затем кашель, в финале заболевания - респираторный дистресс-синдром. Пациентка умерла 9 июля. Отец девочек заболел 2 июля, отмечались лихорадка, легкие проявления простуды, в дальнейшем кашель. Он был госпитализирован 7 июля и умер 12 июля. Генотипирование амплифицированных с помощью ПЦР изолятов вируса, полученных от умершего мужчины, показало их высокую гомологичность с вирусами, изолированными от домашних птиц на этом же острове, а также отсутствие реассортации генома у выделенного от пациентов вируса [3]. Серологический анализ парных сывороток, взятых у старшей дочери пациента с интервалом в 3 дня, показал резкое нарастание специфических антител к вирусу H5N1 в реакции микронейтрализации [8]. Результаты лабораторных исследований образцов, взятых у младшей дочери пациента, пока еще неизвестны. В настоящее время проводится интенсивное эпидемиологическое расследование, а также лабораторное обследование территории, где проживали пациенты. Министр сельского хозяйства Индонезии заявил, что вирус подтипа H5 был обнаружен в птичьих фекалиях в птичьей клетке, находившейся в доме через дорогу от дома пациентов. В мазках из глотки и клоаки птицы, находившейся в данной клетке, вирус гриппа подтипа Н5 обнаружен не был. В настоящий момент это единственный выявленный возможный путь заражения семьи. Лабораторное обследование образцов из других близлежащих объектов дало отрицательные результаты. Сейчас министерством здравоохранения Индонезии наблюдается 300 контактных лиц. К настоящему моменту ни у одного из них симптомов гриппа не наблюдается. Кроме того, взяты образцы крови для анализа на антитела к вирусу H5N1, результаты ожидаются в ближайшее время. В связи с данным случаем по всей стране усилен эпидемиологический надзор, проводится медико-образовательная программа, определены 44 стационара, которые должны быть готовы принять новых возможных больных. Следует отметить, что в 15 км от места, где проживали пациенты, находится небольшая свиноводческая и птичья ферма, животные которых были поражены высокопатогенным вирусом птичьего гриппа в феврале и апреле 2005 г.[3].

За месяц до возникновения первого летального случая в Индонезии зарегистрирован первый случай инфекции вирусом гриппа H5N1 без возникновения симптомов [3]. Диагноз был поставлен на основании обнаружения антител в сыворотке.

Наиболее напряженной обстановка по птичьему гриппу продолжает оставаться во Вьетнаме. В июне в центральной провинции Кванг Три (Quang Tri) обнаружены утки серопозитивные к вирусу H5N1. В связи с этим, около 10 тыс. уток было уничтожено. По данным ФАО, 20% стай водоплавающих в данной провинции были заражены вирусом H5N1 [3]. Всего ветеринарным бюро провинции Кванг Три забито 23 тыс. водоплавающих птиц, в основном уток, и 38 инфицированных стай. Кроме того, будут проверены еще 144 стаи и в случае обнаружения в них вируса H5N1 они также будут уничтожены. С 1 августа в двух провинциях Вьетнама в качестве эксперимента начата кампания по вакцинации домашней птицы против птичьего гриппа. В ходе этой кампании правительство Вьетнама планирует использовать 35,5 млн. доз вакцины. Первые 20 млн. доз данной вакцины будут импортированы из Нидерландов и Китая. Если экспериментальная кампания даст положительный эффект подобную же вакцинацию планируется как можно быстрее начать в остальных 46 провинциях страны с высоким риском заболевания. Стоимость всей программы вакцинации составит 35 млн. долл. Во Вьетнаме продолжают регистрироваться случаи заболевания у людей. 5 августа 2005 г. министерство здравоохранения Вьетнама оповестило о подтверждении диагноза птичьего гриппа у 3 человек из разных провинций страны. Двое из них погибли [9]. По ситуации на середину августа 2005 г. число случаев птичьего гриппа у человека, зарегистрированных во Вьетнаме с середины декабря 2004 г., составило 63 случая, из которых 20 были летальными.

Суммарное число лабораторно-подтвержденных случаев, вызванных высокопатогенным вирусом гриппа птиц Н5N1 у человека представлено в таблице (данные ВОЗ по состоянию на 5 августа 2005 г. [10]).

Международная группа вирусологов и эпидемиологов из Австралии, Канады, Гонконга, Японии, Великобритании и США работала во Вьетнаме во второй половине июня 2005 г. Целью группы было изучение изменения свойств вируса H5N1 в сторону увеличения эффективности его передачи от человека к человеку. Эксперты завершили свою работу 29 июня. Как сообщает ВОЗ, группа не обнаружила фактов, которые бы позволили предполагать, что заболевания птичьим гриппом у человека стали возникать с большей частотой или что вирус легко распространяется от человека к человеку [1]. Кроме того, сеть референсных лабораторий ВОЗ по вирусу H5 (who.int/csr/disease/avian_influenza/guidelines/ref…) и Сеть сотрудничающих центров и референсных лабораторий ВОЗ (who.int/csr/disease/influenza/collabcentres/en/ind…) проанализировали всю совокупность имеющихся данных с целью оценки адекватности прототипных штаммов вируса H5N1, выбранных ВОЗ в 2004 г. для создания вакцины против данного вируса. Результаты генетического и антигенного анализов вирусов H5N1, изолированных у человека и животных в 2004 и 2005 гг., не дали убедительных оснований для изменения рекомендаций ВОЗ в отношении прототипных вакцинных штаммов [6]. ВОЗ продолжит наблюдать за антигенными и генетическими изменениями циркулирующих штаммов вируса H5N1, особенно у людей.

ВОЗ подчеркивает, что своевременный отбор и верификация прототипных штаммов вакцины против вируса H5N1 зависит в основном от тесного сотрудничества между заинтересованными странами и ВОЗ, касающегося в первую очередь быстрого обмена изолятами вируса, особенно, полученных от людей, и аналитическими данными [11]. 6 августа 2005 г. ученые Национального института аллергии и инфекционных болезней США опубликовали результаты предварительного клинического исследования вакцины против вируса гриппа H5N1 [2, 12]. Вакцина испытывалась в 4-х разных концентрациях, всего в исследовании приняло участие 452 здоровых взрослых. Вакцина была изготовлена на заводе компании санофи пастер в Свифтуотере (Пенсильвания, США). Предварительные результаты, полученные на 115 участниках, были обнародованы 13 августа. Для достижения иммунного ответа, который обеспечивает защиту, потребовалось введение двух доз вакцины, в каждой из которых содержалось по 90 мкг антигена, что является наиболее высокой из 4-х тестированных концентраций. Напомним, что в обычной вакцине против гриппа содержится по 15 мкг гемагглютинина трех штаммов вируса гриппа. Учитывая такой режим вакцинации противопандемической H5N1-вакциной (2 дозы по 90 мкг) и имеющиеся глобальные производственные мощности производства противогриппозных вакцин, оценивающиеся в 300 млн. доз обыкновенной трехвалентной гриппозной вакцины в год, можно предположить, что в случае возникновения пандемии гриппа H5N1 будет возможно защитить около 25 млн. человек, что составляет около 4% населения планеты. Очевидно также и то, что резко и в короткие сроки нарастить объемы производства гриппозной вакцины не представляется возможным, а имеющиеся мощности, сконцентрированные в Северной Америке и Западной Европе, загружены на 100%. Важно учитывать также и то, что необходимость массового производства противопандемической вакцины приведет к сильному дефициту стандартной трехвалентной противогриппозной вакцины, с помощью которой ежегодно в мире предотвращаются десятки тысяч смертей. Таким образом, данный режим вакцинации, хотя и обеспечивает защиту привитого, с точки зрения возможностей проведения массовой вакцинации, необходимой в случае начала пандемии гриппа, никак не может считаться оптимальным - необходимо снизить дозу антигена в вакцине, не потеряв при этом ее защитных свойств. Помочь решить эту задачу могут адъюванты. В настоящее время Национальный институт аллергии и инфекционных болезней США начинает исследования противопандемической H5N1-вакцины с тремя различными адъювантами [12]. Кроме того, будут исследованы другие стратегии, позволяющие снизить количество антигена в одной дозе вакцины, например, внутрикожное введение вакцины. В дальнейшем планируется испытание вакцины у детей и пожилых людей, поскольку доказанная иммуногенность вакцины у молодых взрослых не гарантирует достаточной иммуногенности в других возрастных группах.

В настоящее время, принимая во внимание предположение, что на старте пандемии необходимого количества вакцины не будет ни в одной стране, ВОЗ продолжает рекомендовать странам использовать самый широкий спектр мер подготовки к пандемии [12]. Надежда на создание вакцины обоснована, но причиной бездействия она быть не может.

1. Avian influenza - Asia: Japan (Saitama), poultry, H5. ProMed Digest, 18 August 2005, No. 361, Vol. 2005
2. Butler D. Bird flu vaccine not up to scratch. Nature News, 10 August 2005
3. FAO-AIDE News. Avian Influenza Disease Emergency. Update on the Avian Influenza situation (As of 31.07.2005) - Issue No. 32, 31.07.2005
4. OIE Disease Information. Vol. 18, No. 32, 12 August 2005
5. Wildlife Conservation Society Release, 18 Aug 2005
6. WHO. Available evidence suggests no need to change the WHO recommended influenza A/H5N1 vaccine prototype strains, 20 July 2005
7. WHO. Avian influenza - situation in Indonesia - update 25, 21 July 2005
8. WHO. Avian influenza - situation in Indonesia - update 26, 29 July 2005
9. WHO. Avian influenza - situation in Vietnam - update 27, 05 August 2005
10. WHO. Cumulative Number of Confirmed Human Cases of Avian Influenza A/(H5N1) Reported to WHO, 05 August 2005
11. WHO. Guidance for the timely sharing of influenza viruses/specimens with potential to cause human influenza pandemics, March 2005
12. WHO. H5N1 avian influenza - first steps towards development of a human vaccine, 12 August 2005