Высоковирулентные штаммы вируса гриппа а

ГРИПП ПТИЦ (Grippus avium), классическая чума птиц, синусит уток, вирус южноафриканских крачек, острая вирусная болезнь, характеризующаяся поражением органов пищеварения, дыхания, высокой смертельностью. Грипп кур установлен во Франции, ФРГ, США, Шотландии и СССР; грипп уток — в СССР, США, Великобритании, Чехословакии, Италии, Венгрии; грипп перепелов и фазанов — в Италии; грипп крачек — в странах Сев. Африки; грипп буревестника — в Австралии. Антигенная вариабельность вируса Г. п. и наличие высоковирулентных штаммов позволяют отнести его к особо опасным болезням, способным причинить большой экономич. ущерб. Различные штаммы вируса Г. и. могут вызывать от 10 до 100% гибели среди заболевших и поражать одновременно от одного до трёх [трех] видов птиц.

Этиология. Возбудитель Г. п.— РНК-содержащий вирус, относящийся к сем. Orthomyxoviridae, по комплементсвязывающему антигену (РНП) родствен вирусу гриппа А человека и животных. Для пириона характерны полиморфность, преобладающая сферич. форма, размер 60—180 нм. Вирион имеет липопротеидную оболочку с радиально расположенными на ней шипиками, к-рая заключает в себе свёрнутое [свернутое] кольцо РНП. Геном вириона состоит из 6 или более типов РНК. Вирус обладает инфекционной, гемагглютинирующей и нейраминидазной активностью. Хорошо размножается в развивающихся 10—11-суточных эмбрионах кур. Вируссодержащая аллантоисная жидкость обладает способностью агглютинировать эритроциты мн. видов животных. При культивировании вируса в культуре тканей мн. штаммы обладают цитопатич. действием и гемадсорбирующими свойствами. Штаммы вируса Г. п., выделенные от различных видов птиц, могут отличаться по вирулентности, спектру патогенности и структуре поверхностных антигенов (гемагглютинина и нейраминидазы). Вирус быстро инактивируется под действием 3%-ного р-ра едкого натра и фенола, 0,1%-ного р-ра формальдегида.

Эпизоотология. Вирус Г. п. выделен от всех видов домашних птиц, а также от перепелов, фазанов, крачек и буревестника. Есть предположения о переадаптации штаммов вируса гриппа человека к птицам или др. животным и наоборот. Все штаммы вируса, независимо от поражаемых ими видов животных, в процессе репродукции в одной системе, способны к рекомбинации, в результате чего формируются новые антигенно изменённые [измененные] подтипы вируса. В ряде случаев штаммы, выделенные в птицеводческих х-вах при массовой гибели кур, в лабораторных условиях оказывались невирулентными. Последнее свидетельствует о роли в заболевании Г. п. дополнительных стрессов: условий содержания, наличия секундарных инфекций, напр. микоплазмоза и т. д. Источник возбудителя инфекции — больные птицы, с экскретами и секретами к-рых выделяется большое кол-во активного вируса. Путь заражения — воздушно-капельный. Факторы передачи вируса — инфицированная обменная тара (лотки для тушек и яиц), корма, товарная продукция (тушки птиц, яйца, перо), полученная в инкубационный период или от клинически больной птицы, Определённую [Определенную] роль в распространении болезни могут играть и дикие птицы (голуби, воробьи, галки и вороны). Г. п. протекает в виде энзоотии и эпизоотии.

Иммунитет. Переболевшая или вакцинированная птица приобретает напряжённый [напряженный] иммунитет только против гомологичного подтипа вируса.

Симптомы и течение. Инкубац. период от 20—30 ч до 2 сут. Болезнь проявляется резким снижением яйценоскости, поедаемости корма, жаждой, угнетением, признаками поражения органов дыхания, диареей. У больной птицы перья взъерошены, незадолго перед гибелью — цианоз гребня и серёжек [сережек] .

Патологоанатомич. изменения. При вскрытии обнаруживают катаральные и катарально-геморрагич. поражения слизистых оболочек пищеварительного тракта и дыхательных путей, множествен. точечные кровоизлияния на селезёнке [селезенке] , печени, почках и сердце (см. вклейку к стр. 144—145).

Диагноз основан на выделении вируса и идентификации его в серологич. реакциях. Для идентификации возбудителя Г. п. в СССР выпускаются наборы стандартных антисывороток и антигенов.

Лечение. Получены положительные результаты при лечении птиц амидантаном, к-рый дают больным птицам с кормом на протяжении 10—12 сут.

Профилактика и меры борьбы. Вет.-сан. и зоогигиенич. мероприятия проводятся в соответствии с инструкцией. Для профилактики Г. п. подтипа А используют живую вакцину из штаммов Р у и Р 5 . Для др. антигенных вариантов используют убитые вакцины, приготовленные из гомологичных штаммов вируса Г. п.

Лит.: Горбунова А. С., Пысина Т. В., Грипп животных, М., 1973; Сюрин В. Н., Осидзе Н. Г., Грипп птиц, в кн.: Малоизвестные заразные болезни животных, М., 1973; Вирусы гриппа и грипп, пер. с англ., М., 1978.

1. Разработаны: ФГУЗ ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора (Г.А. Шипулин, А.Т. Подколзин, С.Б. Яцышина), ФГУЗ РосНИПЧИ "Микроб" (В.В. Кутырев, А.Н. Куличенко, С.А. Щербакова, И.Н. Шарова, Т.Ю. Красовская, М.Н. Ляпин, Н.А. Осина), ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора (И.Г. Дроздов, А.Н. Сергеев, С.В. Нетесов, А.П. Агафонов, А.М. Шестопалов, Е.А. Ставский, М.А. Суслопаров, А.Ю. Алексеев, А.Г. Дурыманов, С.И. Золотых, Ю.Н. Рассадкин, В.А. Терновой).

2. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 9 ноября 2006 г.

3. Введены впервые.

ВГПА - вирус гриппа птиц типа А

Биобезопасность - биологическая безопасность

ЛПУ - лечебно-профилактические учреждения

МФА - метод иммунофлуоресцирующих антител

ОТ-ПЦР - метод обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции

1.1. В настоящих Методических указаниях определены порядок сбора, упаковки, хранения, транспортирования и выполнения лабораторных исследований биологического материала от больных (и умерших) пациентов при лабораторной диагностике заболеваний, вызванных высоковирулентными штаммами вируса гриппа птиц типа А (ВГПА).

1.2. Методические указания предназначены для специалистов органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебно-профилактических и других организаций, независимо от организационно-правовой формы.

Все работы по сбору, транспортированию и подготовке проб клинического и секционного материала осуществляют в строгом соответствии с требованиями СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)", СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности", МУ 1.3.1794-03 "Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I - II групп патогенности".

3.1. При эпизоотическом неблагополучии в России и за рубежом по ВГПА и при отсутствии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей на данной территории:

3.1.1. Забор материала от пациентов (или умерших) с подозрением на инфекцию ВГПА проводят в лечебно-профилактических учреждениях (ЛПУ).

3.1.2. Первичное исследование материала от больного осуществляют на базе вирусологических лабораторий ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации или лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора (Прилож. 3) с обязательным применением двух методов - ОТ-ПЦР и иммунофлуоресцирующих антител (МФА).

Применяемые на этом этапе тест-системы должны обеспечивать первичную идентификацию возбудителя как вируса гриппа типа А и дифференциацию штаммов этого вируса по типу гемагглютинина (например Н5).

3.1.3. Подтверждающее тестирование положительных образцов осуществляется в референс-лаборатории - ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора также с обязательным использованием двух методов: ОТ-ПЦР и вирусологического исследования. Результаты анализов в каждом случае передают в ЛПУ, направившее материал на исследование, и в учреждения Роспотребнадзора (управление Роспотребнадзора по субъекту Российской Федерации и ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации) в день получения результата.

3.1.4. При получении положительных результатов подтверждающего тестирования референс-лаборатория проводит изоляцию вируса, изучение его свойств и депонирование.

3.1.5. Полученную в ходе исследования комплементарную ДНК, образующуюся в результате реакции обратной транскрипции РНК, подвергают молекулярно-генетическому исследованию в ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора.

Максимальное внимание должно уделяться случаям ВГПА с предположительной передачей от человека человеку. Регистрация подобных случаев требует незамедлительного проведения комплекса противоэпидемических мероприятий и изучения генетических особенностей изолята ВГПА.

3.2. При наличии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей ВГПА на данной территории:

3.2.1. Забор материала проводят в ЛПУ при подозрении на заболевание ВГПА.

3.2.2. Первичное исследование материала осуществляют на базе вирусологических лабораторий ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации или лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора (Прилож. 3) с использованием ОТ-ПЦР исследований.

3.2.3. Обязательное подтверждающее тестирование в референс-лаборатории не проводится. Направление материала в референс-лабораторию осуществляется в случаях возникновения противоречивых результатов при первичном тестировании.

4.1. Сбор клинического материала и его упаковку осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения, обученный требованиям и правилам биологической безопасности при работе и сборе материала, подозрительного на зараженность ВГПА. Забор производят в стерильные одноразовые флаконы, пробирки, контейнеры стерильными инструментами. Все виды работ проводят с соблюдением противоэпидемического режима, согласно СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)".

4.2. Упаковка, условия хранения и транспортирования материала для проведения лабораторной диагностики ВГПА должны соответствовать требованиям СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности" и настоящих Методических указаний (Прилож. 2).

4.3. Для исследования забирают следующие виды клинического материала:

- смывы из полости носа и ротоглотки (для ОТ-ПЦР-анализа);

- мазки из полости носа (для МФА и ОТ-ПЦР-анализа) и ротоглотки (для ОТ-ПЦР-анализа);

- носоглоточное отделяемое (для выделения вируса, ОТ-ПЦР- анализа);

- фекалии (для ОТ-ПЦР-анализа).

Перечисленные выше процедуры по забору клинического материала врачи осуществляют в противочумных костюмах IV типа (или длинном хирургическом халате с завязками на спине, шапочках), дополненных ватно-марлевыми повязками или респираторами типа ШБ-1 (или РБ) "Лепесток-200". На руки надевают резиновые перчатки, защитные очки.

Целесообразно также включать в исследование аспираты из трахеи, бронхоальвеолярный лаваж и биоптаты легких при возможности их забора. Данные процедуры осуществляет врачебный персонал, одетый в противочумный костюм I типа (или длинный хирургический халат с завязками на спине, дополненный фартуком, бахилами, косынкой, очками, ватно-марлевой повязкой или респиратором типа ШБ-1 (или РБ) "Лепесток-200" и перчатками).

Выбор времени забора клинического материала очень важен, так как наиболее высокое содержание вируса в дыхательных органах человека регистрируется в течение первых четырех дней после появления признаков заболевания. Образцы должны быть собраны в течение 3 сут. после появления клинических признаков, указанных в п. 6.1.

Для постмортальной диагностики используют аутоптаты легких, трахеи и селезенки.

От одного больного должно забираться не менее трех видов клинического материала. Обязательно следует забирать мазки из полости носа и ротоглотки и носоглоточное отделяемое. Каждый образец материала помещают в отдельную транспортную емкость.

4.4. Сбор материала производят в пробирки со стабилизирующей средой, приготовленной согласно Прилож. 4, и/или в пробирки с транспортной средой, предоставляемой (или рекомендуемой) фирмой - производителем тест-систем.

4.5. Отправку материала в лабораторию осуществляют в транспортной таре со стабилизирующей средой (Прилож. 4).

5.1. Все материалы, доставляемые в лабораторию, должны быть герметично "дважды упакованы":

1) в транспортную емкость (плотно закрывающиеся пластмассовые пробирки или флаконы с завинчивающимися крышками); плотно закрытый верхний конец транспортной емкости вместе с крышкой герметизируют различными пластификаторами (парафин, парафильм и др.); емкость маркируют;

2) в полиэтиленовый пакет подходящего размера с ватой (или другим гигроскопичным материалом) в количестве, достаточном для адсорбции всего образца в случае его утечки; полиэтиленовый пакет следует герметично заклеить или запаять.

5.1.1. Образцы от одного пациента могут быть упакованы в один полиэтиленовый пакет. Не допускается упаковывать образцы материалов от разных людей в один и тот же пакет.

5.1.2. В полиэтиленовый пакет вкладывают бланк направления с указанием: наименования направляющего учреждения, Ф.И.0. больного, возраста, места жительства, предварительного диагноза, эпидемиологического анамнеза, вида материала, даты и времени взятия материала.

5.2. Герметично закрытые полиэтиленовые пакеты помещают в термоизолирующий плотно закрывающийся контейнер (термос), приспособленный для транспортирования биологических материалов.

5.2.1. В термоконтейнеры и термосы помещают охлаждающие элементы или пакеты со льдом. К наружной стенке термоконтейнера или термоса прикрепляют этикетку с указанием вида материала, условий транспортирования, названия пункта назначения. Сроки и условия транспортирования упакованных проб клинического материала указаны в Прилож. 2.

5.3. Транспортирование проб клинического материала в референс-лабораторию, вирусологические лаборатории и лаборатории учреждений противочумной системы Роспотребнадзора осуществляется нарочным(и), информированным о правилах доставки материала в соответствии с п. 3.4 СП 1.2.036-95.

6.1. При отсутствии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей на данной территории лабораторные исследования с целью диагностики ВГПА следует проводить у пациентов с респираторными заболеваниями тяжелого течения и неясной этиологии:

а) при наличии как минимум двух из перечисленных симптомов:

- фебрильная лихорадка с температурой тела выше 38 °С;

- затрудненное дыхание или дыхательная недостаточность;

- водянистая диарея при отсутствии слизи и крови в фекалиях;

б) в комбинации хотя бы с одним из следующих эпидемиологических признаков в период 1 - 7 дней перед появлением симптомов:

- посещение мест регистрации заболевания ВГПА у птиц или людей;

- тесный контакт (в радиусе 1 м) с лицом, являющимся подозрительным, вероятным или подтвержденно-инфицированным ВГПА;

- контакт с погибшими, больными птицами (уход, убой, ощипывание, разделка тушек, подготовка к употреблению домашней или дикой птицы) или с их останками, а также объектами окружающей среды, контаминированными их фекалиями на территории, где в течение последнего месяца были заподозрены или подтверждены случаи инфекции ВГПА у животных или людей;

- манипуляции с образцами клинического материала (от животных или людей), подозрительными на зараженность ВГПА, в лаборатории или в иной обстановке;

- употребление сырых или недостаточно приготовленных продуктов из домашней птицы на территории, где в течение последнего месяца были заподозрены или подтверждены случаи инфекции ВГПА у животных или людей;

- тесный контакт с подтвержденно-инфицированным ВГПА животным (например, кошка или свинья), но недомашними или дикими птицами.

Данный случай расценивается как подозрительный случай ВГПА.

Вероятный случай ВГПА - лицо, умершее от необъясненного острого респираторного заболевания, которое расценивается как эпидемиологически связанное по времени, месту и экспозиции с вероятным или подтвержденным случаем ВГПА, а также лицо, отвечающее критериям для подозрительного случая и одному из дополнительных критериев:

а) инфильтраты или признаки острой пневмонии на рентгенограмме грудной клетки плюс признаки дыхательной недостаточности (гипоксемия, выраженное тахипноэ) или

б) положительный результат лабораторного подтверждения инфекции, вызванной вирусом гриппа А, но недостаточное лабораторное подтверждение инфекции ВГПА.

6.2. При наличии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей ВГПА на данной территории показанием к обследованию являются клинические симптомы, приведенные в п. 6.1. Дополнительные эпидемиологические признаки являются необязательными.

6.3. Исследование секционного материала от умерших на наличие вируса ВГПА проводят при:

- сходстве клинической картины заболевания, приведшего к летальному исходу, с описанной в п. 6.1 или невозможности исключения такой клинической картины в анамнезе и при наличии в анамнезе хотя бы одного из перечисленных в п. 6.1 дополнительных эпидемиологических признаков.

6.4. Исследования проводят с использованием диагностических тест-систем, разрешенных к применению в установленном порядке. Для выявления ВГПА методом ОТ-ПЦР предпочтение должно отдаваться диагностическим тест-системам, которые обеспечивают максимальную контаминационную безопасность исследований.

6.5. При проведении первичного тестирования на наличие вируса ВГПА должны исследоваться не менее 2 видов клинического материала (например: мазки из полости носа и из ротоглотки) с использованием как минимум двух методов - ОТ-ПЦР и МФА.

6.6. При получении отрицательных результатов исследования всех образцов выдается окончательный отрицательный ответ.

При отсутствии регистрации заболевания людей, вызванных ВГПА, на данной территории при получении хотя бы одного положительного результата при МФА исследовании или использовании ОТ-ПЦР выдается предварительный положительный ответ и образцы направляют для подтверждающего тестирования в референс-лабораторию.

В период регистрации заболевания людей, вызванных ВГПА на данной территории, обязательное подтверждающее тестирование не проводят и при получении хотя бы одного положительного результата при использовании ОТ-ПЦР выдается окончательный положительный ответ.

6.7. При подтверждении в референс-лаборатории положительного результата первичного тестирования при исследовании хотя бы одного вида клинического материала выдается окончательный положительный ответ.

При получении в референс-лаборатории отрицательных результатов исследования двух видов клинического материала проводится повторное тестирование. При получении аналогичного результата выдается окончательный отрицательный ответ.

7.1. Первичное исследование материала от больного, подозрительного на зараженность вирусом ВГПА, проводят в лабораториях, имеющих разрешение на работу с ПБА III - IV групп патогенности.

Подтверждающее тестирование осуществляется в референс-лаборатории.

7.2. Проведение работ, не связанных с накоплением вируса, образованием аэрозолей инфицированного материала (окраска и просмотр мазков, постановка серологических реакций с необеззараженным, диагностическим материалом, серологические исследования с необеззараженным материалом) осуществляют в противочумном костюме IV типа, дополненном ватно-марлевой повязкой или респиратором типа ШБ-1 (или РБ) "Лепесток-200" и резиновыми перчатками. Работы проводят в боксе биологической безопасности II класса.

7.3. Проведение работ по заражению культур клеток или куриных эмбрионов, а также связанных с возможностью образования аэрозоля, осуществляют в боксах безопасности III класса. Работы проводят в противочумном костюме IV типа, дополненном ватно-марлевой повязкой или респиратором типа ШБ-1 (или РБ) "Лепесток-200" и резиновыми перчатками.

7.4. В лабораториях, проводящих диагностику заболеваний, вызванных ВГПА, должна быть аптечка экстренной профилактики, укомплектованная в соответствии с СП 1.3.1285-03 и дополненная двумя из следующих противовирусных препаратов: циклоферон, амиксин, ремантадин, альгирем, арбидол и озельтамивир (тамифлю).

7.5. Режимы обеззараживания различных объектов при лабораторной диагностике ВГПА (в соответствии с СП 1.3.1285-03).

7.5.1. Обеззараживание поверхностей помещения (пол, стены, двери), оборудования, рабочих столов и другого - двукратным протиранием с интервалом 15 мин. 6%-м раствором перекиси водорода, 3%-м раствором хлорамина (экспозиция 120 мин.) или 0,1%-м раствором ДП-2Т (1 таблетка на 1 л воды), либо любым дезинфицирующим средством, обладающим вирулицидной активностью, с последующей обработкой УФ в течение 60 мин.

Запрещено одновременное использование 6%-го раствора перекиси водорода и 3%-го раствора хлорамина в пределах одной лаборатории в связи с опасностью взрывоподобного характера протекания химической реакции при смешении этих растворов.

7.5.2. Обеззараживание защитной одежды осуществляют:

а) кипячением в 2%-м растворе соды в течение 30 мин. с момента закипания;

б) замачиванием на 30 мин. при 50 °С в 3%-м растворе перекиси водорода с 0,5% моющего средства.

7.5.3. Обеззараживание перчаток - замачиванием на 60 мин. в 6%-м растворе перекиси водорода с 0,5% моющего средства или в 3%-м растворе хлорамина.

7.5.4. Обеззараживание лабораторной посуды, автоклавируемых дозаторов, наконечников, вируссодержащих жидкостей, агарозного геля, инструментария из металла проводится методом автоклавирования - давление 2,0 кГс/кв. см (0,2 Мпа), температура (132 +/- 2) °С, время 45 мин.

7.5.5. Обеззараживание дозаторов - двукратным протиранием поверхностей дозатора с интервалом 15 мин. 6%-м раствором перекиси водорода с последующей обработкой в парах формалина в течение 60 мин.

1. Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)".

2. Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности".

3. Методические указания МУ 1.3.1794-03 "Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I - II групп патогенности".

4. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 23.10.05 N 751 "Об учреждении Временного регламента взаимодействия территориальных управлений Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации и федеральных государственных учреждений здравоохранения - центров гигиены и эпидемиологии в субъектах Российской Федерации".

5. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 31.03.05 N 373 "О совершенствовании системы эпидемиологического надзора и контроля за гриппом и острыми респираторными вирусными инфекциями".

Федеральное государственное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Роспотребнадзора (Адрес: 630559, п. Кольцово Новосибирской области. Тел.: (383)-336-60-10 или 336-75-40, факс: (383)-336-74-09).

480 руб. | 150 грн. | 7,5 долл. ', MOUSEOFF, FGCOLOR, '#FFFFCC',BGCOLOR, '#393939');" onMouseOut="return nd();"> Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно , доставка 10 минут , круглосуточно, без выходных и праздников

Дубровина, Ирина Анатольевна. Трансмиссивность современных штаммов вируса гриппа в экспериментах in vivo : диссертация . кандидата биологических наук : 03.02.02 / Дубровина Ирина Анатольевна; [Место защиты: Ин-т полиомиелита и вирус. энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН].- Санкт-Петербург, 2013.- 94 с.: ил. РГБ ОД, 61 14-3/470

Введение к работе

Актуальность темы. Грипп – это тяжелая вирусная инфекция, которая поражает людей вне зависимости от возраста и национальности и остается серьезной проблемой здравоохранения во всем мире. Заболевания гриппом сопровождаются высокой смертностью, особенно у маленьких детей и пожилых людей (Thompson et al., 2003). Эпидемии гриппа происходят каждый год и охватывают до 15% населения Земли. Пандемии возникают каждые 10–40 лет. В 2009 году мир оказался на пороге первой пандемии 21–го века, вызванной вирусами, подобными А/Калифорния/7/2009 (H1N1)pdm.

Сегодня, наряду с уже повсеместно циркулирующим калифорнийским штаммом А (H1N1), потенциальную угрозу пандемии несут высоко патогенные вирусы гриппа птиц, которые уже преодолели видовой барьер, передаваясь от птиц к человеку (, 2002). В дальнейшем могут произойти новые генетические изменения, которые позволят птичьим вирусам передаваться уже непосредственно от человека к человеку.

Три основных свойства вируса гриппа определяют его пандемические потенции: новизна штамма для иммунной системы, вирулентность и способность передаваться от человека к человеку, то есть трансмиссивность. Именно степень трансмиссивности циркулирующих штаммов определяет тяжесть вызываемых ими пандемий или эпидемий (Lowen et al., 2009). Несмотря на бесспорно ключевую роль трансмиссивности вируса гриппа в распространении эпидемических и пандемических штаммов, природа и механизмы их контагиозности продолжают обсуждаться. Поэтому существует насущная необходимость глубокого понимания проблемы трансмиссивности вируса гриппа. Раскрытие механизмов, лежащих в ее основе, позволит более эффективно контролировать грипп и изыскивать новые пути и методы его профилактики.

На сегодняшний день наиболее эффективным методом защиты от гриппа является вакцинопрофилактика. В последние годы живая гриппозная холодоадаптированная (ХА) реассортантная вакцина (ЖГВ) как средство защиты от гриппа заняла лидирующее положение в мире среди других профилактических противогриппозных препаратов. По мнению экспертов Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), использование живых противогриппозных вакцин является эффективным путем защиты восприимчивой популяции не только от сезонно возникающих эпидемий, но и глобальных пандемий гриппа.

Начиная с 1977 года регулярно публиковались результаты клинических исследований по выделению вакцинных штаммов ЖГВ, в которых (Rudenko et al., 1991; Murphy, 1993; Talbot, 2005; Nichol, 2006; Block, 2008; Mallory et al, 2011), за единственным исключением (Vesikari et al, 2006, 2008), не была зарегистрирована их передача при тесном контакте привитых и не привитых лиц. Только в работах Vesikari с соавт. (2006, 2008) описан единичный случай выделения вакцинного штамма американской вакцины FluMist от ребенка, получившего препарат плацебо. Однако, в связи с изменением антигенной структуры циркулирующих вирусов, появлением новых эпидемических и пандемических вирусов, а также с опасностью циркуляции в человеческой популяции вирусов гриппа птиц и животных (в частности, свиней), требуется проведение новых, углубленных исследований трансмиссивности вакцинных штаммов.

Таким образом, к моменту начала нашей работы систематических исследований подобного рода в мире не проводилось.

Все вышесказанное определяет важность изучения феномена трансмиссивности вируса гриппа, а доказательство необоснованности приведенных выше опасений позволит подтвердить безопасность применения ЖГВ не только в эпидемический, но и в пандемический по гриппу периоды.

Основной целью настоящей работы явилось изучение трансмиссивности и особенностей реассортации in vivo вирусов гриппа, обладающих разным уровнем вирулентности для экспериментальных животных.

Для решения поставленной цели в задачи исследования входило:

1. Отработка модели трансмиссивности вируса гриппа в экспериментах на морских свинках.

2. Изучение трансмиссивности пандемических, потенциально пандемических и сезонных штаммов вируса гриппа в экспериментах in vivo и сравнительная оценка степени их контагиозности для лабораторных животных.

3. Оценка возможности передачи холодоадаптированных вирусов (доноров аттенуации) и вакцинных штаммов ЖГВ от зараженных контактным животным.

4. Изучение особенностей реассортации сезонных и пандемически опасных вирусов гриппа с ХА штаммами в экспериментах in vivo.

Научная новизна исследования.

Впервые в России в экспериментах in vivo проведено систематическое изучение способности к трансмиссивности широкого спектра вирусов гриппа.

Показано, что разные штаммы вируса гриппа обладают способностью к передаче на расстоянии различной степени выраженности (от высокой до полного ее отсутствия). Наиболее трансмиссивными оказались вирус NIBRG–23 (H5N1), унаследовавший НА и NA от вируса гриппа птиц A/turkey/Turkey/1/2005, и выделенный от человека вирус гриппа свиней A/Индиана/10/2011 (H3N2)v. Вызвавший пандемию 2009 года вирус А/Калифорния/07/2009 (H1N1)pdm проявлял меньшую контагиозность.

В экспериментах на лабораторных животных впервые продемонстрировано полное отсутствие трансмиссивности ХА штаммов вируса гриппа (доноров аттенуации и вакцинных штаммов ЖГВ).

Теоретическая и практическая значимость работы.

В результате моделирования смешанной инфекции in vivo обоснована несостоятельность опасений о возможности формирования при массовой вакцинации населения живой гриппозной вакциной реассортантных вирусов, обладающих повышенным уровнем патогенности.

Показано, что реассортация in vivo происходит менее эффективно, если один из участников скрещивания является ХА вирусом.

Подтверждена безопасность массового применения не только сезонной, но и пандемической живой гриппозной вакцины.

Положения, выносимые на защиту.

Холодоадаптированные штаммы вируса гриппа активно реплицируются в ВДП экспериментальных животных, но не способны к передаче от вакцинированных контактным особям.

Теоретически возможная реассортация высоко вирулентных вирусов с ХА штаммами живой гриппозной вакцины не приведет к формированию реассортантов, обладающих непредсказуемо высоким уровнем вирулентности и трансмиссивности и потенциально способных вызвать новую эпидемию или даже пандемию, что подтверждает высокую безопасность применения ЖГВ.

Личный вклад автора в проведенные исследования заключается в его непосредственном участии в выполнении всех разделов данной работы.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 5 в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 93 страницах текста, включая 27 таблиц и 7 рисунков. Список цитируемой литературы содержит 108 источников, из них 5 отечественных и 103 иностранных.