Вирусы и лазерная терапия

УДК 618. 14-085. 849. 19. 015. 2: 615. 832

1. Ежов В.В., 2. Торчинов А.М., 3. Маныкин А.А,
4. Дымковец В.П, 5. Полухова Е.В., 6. Варев Г.А.

Рак шейки матки (РШМ) остается одной из самых актуальных проблем гинекологии. Заболеваемость неуклонно растет. По данным некоторых авторов она составляет приблизительно 30% от всех гинекологических заболеваний. Кроме того, контингент заболевших женщин молодеет и практически не зависит от наличия родов в анамнезе.

Ежегодно в мире регистрируется около 500 тысяч случаев заболевания и 270 тысяч смертей. Многими авторами доказана связь возникновения РШМ с наличием у больных папилломавирусной инфекции (ПВИ) высокого онкогенного риска. К ним относятся типы – 16, 18, 45, 31, 33, 52, 58, 35, 59, 56, 39, 51, 73, 66, 68 и т.д. Наиболее часто встречающийся вид плоскоклеточного рака ассоциирован с серотипами 16 и 18. Мишенью для онкогенного воздействия ПВИ являются: зоны трансформации, метаплазии и резервные клетки, то есть стык цилиндрического и многослойного плоского эпителия. Эти зоны находятся в процессе постоянной и многократной митотической активности, что и способствует развитию ассоциированных с ПВИ предраковых и раковых изменений.

Главным средством борьбы с возникновением РШМ является комплексная профилактика, которая условно делится на три этапа. Первичная профилактика включает вакцинацию вирусоподобной вакциной для создания иммунитета к ПВИ. Вторичная профилактика РШМ предполагает выявление и лечение больных с дораковой патологией шейки матки. Третичная профилактика – комбинированное и комплексное лечение начальных стадий РШМ.

Методы лечения патологии шейки матки, ассоциированной с ПВИ также условно разделяют на контактные (деструктивные) и общие. К первой группе относят: лазерную абляцию, криодеструкцию, радиохирургическую конизацию, фотодинамическую терапию и хирургическое лечение. Ко второй группе относят медикаментозные препараты сдерживающие размножение ПВИ и защищающие организм от вирусного влияния.

Каждый из методов лечения патологии шейки матки имеет свои преимущества и недостатки. Необходимость решения данной проблемы требует консолидации имеющихся знаний и поиска новых методов адекватной терапии, а также возможных комбинаций имеющихся способов лечения, используя накопленный за многие годы опыт.

В последнее время активно изучается применение полупроводниковых лазерных аппаратов, в частности при проведении фотодинамической терапии патологии шейки матки с использованием современных фотосенсибилизаторов. Основным параметром проведения этого способа лечения является длина волны лазерного излучения.

С 2007 года нами на базе кафедры акушерства и гинекологии Московского государственного медико-стоматологического университета в гинекологическом отделении ГКБ №52 г. Москвы проводится лечение дораковой патологии шейки матки (небольших размеров). Для этого нами используется диодный инфра красный лазерный аппарат ЛАЗЕРМЕД 1-10 длиной волны излучения 1060 нм с применением углеродного красителя – активированного угля, далее УК. Метод получил название – контактная инфракрасная лазерная терапия (КИЛТ). В ранних публикациях мы приводили данные о биофизических особенностях изучаемого метода. На наш способ лечения выдан государственный патент Российской Федерации № 2330630 от 10.08.2008 г.

Принципиальным моментом нашего метода является сочетание легкого деструктивного с дополнительным терапевтическим эффектом.

Плотность энергии, воздействующей на биоткани, можно менять за счет за счет изменения параметров излучения и дистанции до обрабатываемого объекта.

При использовании специальной насадки со встроенной коллимирующей линзой пучок не сразу расфокусируется и на расстоянии 10-12 см диаметр пятна составляет приблизительно 0,5 см. Соответственно, плотность мощности на этом расстоянии 50Вт/см2. Эта дистанция соответствует глубине влагалища до шейки матки и позволяет обрабатывать её поверхность не используя гибкий световод. В связи с высоким коэффициентом отражения используемого лазерного излучения от поверхности биоткани перед лечением на поверхность экзоцервикса наносился УК. Спектральная характеристика коэффициента поглощения этого материала свидетельствует об улавливании УК всего диапазона излучения.

При воздействии лазерного излучения на мелкозернистую структуру УК происходит быстрое поглощение квантовой энергии с выделением большого количества теплоты в поверхностном слое биоткани, что усиливает деструктивный эффект ЛМ. Вместе с тем излучение с длиной волны 1,06 мкм обладает и терапевтическим действием за счет большой глубины проникновения этого излучения в ткани организма и составляет 20-60 мм, в зависимости от характера биоткани. В результате полного сгорания УК открывается поверхность для возможной повторной обработки. Глубина однократной 5 минутной КИЛТ на шейке матки составляет приблизительно 1,5 см.

Нами пролечено методом КИЛТ 84 обследованные пациентки с патологией шейки матки, инфицированные ПВИ (16 и 18 серотипы). Возраст женщин колебался от 19 до 62 лет. Средний возраст составил 29,3+0,03 года. Патология была представлена небольшой эктопией с признаками хронического воспаления (27 больных), эктропионом без выраженной деформации (30 больных), лейкоплакия (22 женщины) и дисплазией 1-2 степени (5 пациенток).

Всем женщинам проводилось стандартное обследование включающее: расширенную кольпоскопию, полное бактериоскопическое и бактериологическое исследование влагалищных мазков, ДНК полимеразная цепная реакция скрытой инфекции, цитологическое и гистологическое исследования. При наличии патогенной микрофлоры проводилась соответствующая комплексная медикаментозная терапия. Исследования проводились до лечения, через 4-6 недель и 6-8 месяцев после лечения. К лечению методом инфракрасной лазерной терапии допускались пациентки только с ПВИ, чаще всего 16 и 18 серотипов.

В настоящей работе нами освещаются только некоторые аспекты воздействия инфракрасной лазерной терапии на патологию шейки матки, в частности оценка элиминации вируса папилломы человека 16 и 18 серотипов с шейки матки после следующей менструации и отдаленные результаты через 6-8 месяцев.

1. 1. До начала лечения у 84 женщин обнаружен16 или 18 серотип ПВИ. Из них у 48 больных выявлено наличие только 16 серотипа, а у 18 женщин – 18 серотипа, причем еще у 18 пациенток отмечено наличие 16 и 18 серотипов ПВИ одновременно (см. Рисунок 1).

Через 1-1,5 месяца после лечения отмечены следующие показатели:

- у 53 больных 16 серотип ПВИ не обнаружен, что составляет 80,02+0,02 р Адрес:
123056, г. Москва, ул. Грузинский вал, д. 26, стр. 3

Вы удивлены? Лазерная стоматология не стоит на месте, а стоматологический лазер подходит не только для решения проблем полости рта, но и для лечения герпеса.

Герпес представляет собой вирусное заболевание и часто проявляется характерной пузырьковой сыпью, которая может появиться как на слизистых оболочках, так и на кожных покровах. Научные исследования подтвердили существование более восьмидесяти видов вируса герпеса, из которых восемь вызывают у человека различные заболевания: от банальной ветряной оспы до цитомегаловируса. Что же касается пузырьковой сыпи, появление которой на губах в период зимних простуд доставляет массу неприятных ощущений большинству людей, то ее причиной является вирус простого герпеса первого типа. А вылечить ее можно стоматологическим лазером.

Почему на губах появляется сыпь?

Появление герпетической сыпи говорит о том, что человек является носителем вируса, который может попасть в организм как через бытовые предметы или при близком контакте, так и воздушно-капельным путем. Но присутствие вируса герпеса в организме не ставит здоровье человека под угрозу, поскольку иммунная система активно блокирует его при помощи антител. Но в холодное время года, когда наблюдается всплеск различных простудных заболеваний и нагрузка на иммунную систему возрастает, вирус может проявиться, вызвав общую слабость и характерные высыпания. Также причиной его активизации могут стать:

• постоянные эмоциональные и физические нагрузки, ослабляющие организм;
• частые стрессы;
• переутомление;
• чрезмерное УФ-облучение;
• травмы ротовой полости и губ — тут на первом месте татуаж, а также протезировании и лечение зубов, которое практически никогда не обходится без микроповреждений слизистой оболочки.

Появление сыпи: основные стадии

I стадия

Начальная стадия появления герпетической сыпи характеризуется повышенной чувствительностью в определенной области, появлением легкого зуда или едва заметного покалывания. При этом визуально никаких раздраженных участков на губах нет.

II стадия

По мере развития заболевания чувствительная область становится все более болезненной, отмечается ее покраснение и появление на воспаленном участке мелких полупрозрачных пузырьков, которые часто сливаются в общую массу.

III стадия

На третьей стадии отмечается появление язвочек, которые образуются на месте лопнувших пузырьков. В этот период человек испытывает наиболее неприятные ощущения, не слишком эстетично выглядит и является потенциальным источником инфекции для окружающих.

IV стадия

На четвертой стадии начинается процесс заживления язв посредством появления на них тонкой корочки. В это время поврежденная область крайне ранима, поскольку корочки можно легко повредить, и снова откроются ранки.

V стадия

На завершающем этапе кожа губ в местах заживших язв становится излишне пигментированной, что выглядит не слишком красиво. Но через несколько дней к кожному покрову возвращается его естественный цвет.

Лечение симптомов простого герпеса с помощью лазера

Лазерная методика, которой в совершенстве владеют специалисты нашей клиники, является наиболее современным способом лечения проявлений вируса простого герпеса. Она позволяет быстро снять воспаление, избавиться от пузырьков и язв, а также минимизировать неприятные последствия высыпаний.

Излучение стоматологического лазера с длиной волны 810 нм, который используется также при стерилизации зубных каналов и лечении пародонта, полностью безопасно для тканей человеческого организма, но на бактерии и вирус герпеса оно действует разрушающе. Поэтому после лазерного лечения появившиеся на губах симптомы герпеса полностью исчезнут в течение двух-четырех дней, и вы снова будете радовать окружающих красивой улыбкой.

Применение стоматологического лазера эффективно на всех стадиях развития герпетической инфекции, поскольку он:

• снимает болевые ощущения;
• купирует воспалительный процесс, останавливая развитие инфекции и исключая появление новых высыпаний;
• ускоряет регенерацию тканей и способствует их активному заживлению, сокращая восстановительный период.

Чтобы остановить процесс распространения инфекции на начальной стадии, достаточно одного сеанса лазерной терапии. А если уже появились многочисленные высыпания и язвы, может потребоваться несколько процедур.

Комплексный подход — гарантия хорошего результата

Лечение лазером позволит быстро и безболезненно избавиться от герпетических высыпаний на губах. И чем раньше будет проведена процедура, тем быстрей наступит облегчение и улучшаться визуальные показатели. Но если герпес слишком часто заявляет о себе, стоит пройти полное обследование и комплексное лечение, которое предполагает применение не только лазера, но и противовирусных препаратов.

Записаться на лечение герпеса лазером Вы можете по телефонам клиники или через форму обратной связи. Ждем Вас!

При воздействии лазерного излучения на живую биосистему поглощается лишь его часть, в то время как другая отражается. При внешнем облучении отражается от 43 до 55% электромагнитных волн оптического диапазона. Глубина проникновения лазерного излучения зависит от его длины волны, самая высокая наблюдается в инфракрасном спектре. Поглощение лазерного света зависит от свойств облучаемых тканей: паренхиматозные органы поглощают до 95–100% излучения, костная и мышечная ткань — до 70–80%, кожный покров — до 30%.

На молекулярном уровне под воздействием лазерного излучения происходит следующая последовательность реакций:

1. поглощение света фотоакцепторами;
2. возникновение внутреннего фотоэлектрического эффекта, фотопроводимости, фотоэлектродвижущей силы;
3. электролитическая диссоциация ионов;
4. электронное возбуждение атомов и молекул, попавших под воздействие лазерного света;
5. миграция энергии электронного возбуждения;
6. первичный фотофизический акт;
7. появление первичных фотопродуктов.

На клеточном уровне под действием лазерного света запускаются следующие биологические реакции:

1. изменение ионной проницаемости и энергетической активности клеточных мембран;
2. стабилизация мембран лизосом;
3. активация или восстановление повреждённого ядерного аппарата и системы ДНК-РНК-белок;
4. активация окислительно-восстановительных, биосинтетических процессов и основных ферментных систем;
5. увеличение образования аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ);
6. усиление митотической активности клеток и их пролиферация.

Таким образом, механизмы биологического воздействия лазерного излучения на организм человека крайне многообразны. В основе данного воздействия лежат каскадные биофизические и биохимические реакции, происходящие при поглощении лазерного излучения тканями и клетками, восприятием и передачей действия лазерного излучения жидкими средами организма органам и тканям, что приводит к корректировке работы регуляторных комплексов.

В результате действия лазерного излучения изменяются энергетические параметры внутренней среды организма человека. В связи со снижением чувствительности болевых рецепторов, уменьшением отека и напряжения тканей проявляется его обезболивающее и противовоспалительное действие. Увеличение скорости кровотока и рост количества функционирующих капилляров улучшает питание периферических тканей, что вместе с ускорением метаболических реакций и усилением деления клеток способствует процессу регенерации. Доказано, что лазерное излучение в терапевтическом диапазоне оказывает четко выраженный спазмолитический и десенсибилизирующий эффекты, повышает активность общих и местных факторов иммунной защиты, стабилизирует мембраны клеток. Это позволяет рассматривать его как антиоксидант физической природы, который по результату своего действия не отличается от химических антиоксидантов.

В связи с высоким интересом к применению неинвазивных методик лечения патологии печени нами было проведено изучение влияния инфракрасной лазерной терапии (ИКЛТ) на клетки печени при её хронических заболеваниях, а также воздействие данного метода терапии на обменные и регенераторные процессы, происходящие в гепатоцитах.

Стала оценка эффектов ИКЛТ в комплексной терапии больных хроническими диффузными заболеваниями печени (ХДЗП).

Практическая значимость работы заключалась в получении новых данных по использованию инфракрасной лазерной терапии в клинике, установлении данных о пролонгированном действии лазеротерапии, получении достоверной информации об эффективности использования ИКЛТ в комплексном лечении ХДЗП.

При исследовании в сыворотке крови больных опытной и контрольных групп стандартных печеночных проб — трансаминаз, билирубина, продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) — малонового альдегида, диеновых конъюгатов, ферментов антиоксидантной защиты (АОЗ) — каталазы, супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы, печеночно-специфических ферментов — серин — и треониндегидрогеназы, N-ацетил-β-D-глюкозаминидазы, сывороточных уроканиназы и гистидазы выявлено, что более отчетливая и достоверная стабилизация лабораторных показателей происходила у больных, получавших наряду с базисным лечением терапию ИКЛТ. У пациентов после лечения наблюдалось улучшение аппетита, нормализация сна, уменьшение болезненности в проекции печени. Побочных эффектов ИКЛТ отмечено не было. Спустя 3 и 6 месяцев после окончания курса лечения наблюдалось стабилизация исследуемых показателей, что говорило об отсроченном эффекте инфракрасной лазеротерапии.

ИКЛТ обладает достоверным корригирующим воздействием на цитолитический, мезенхимально-воспалительный синдромы, пигментообразующую функцию печени, субъективное состояние больных ХДЗП. ИКЛТ обладает также выраженным антиоксидантным эффектом при заболеваниях печени, что выражается в снижении концентрации продуктов ПОЛ и активации ферментов АОЗ. Метод является неинвазивным. Все это позволяет рассматривать инфракрасную лазеротерапию в качестве эффективного компонента комплексной терапии больных хроническими диффузными заболеваниями печени.

Было изучено структурно-функциональное состояние компонентов периферической крови у 20 пациенток с типичной формой генитального герпеса при проведении эндоваскулярной лазерной терапии. Контрольную группу составили 10 здоровых женщин репродуктивного возраста. Выявленные в работе ультраструктурные особенности состояния эритроцитов, тромбоцитов, нейтрофилов, моноцитов и неклеточных макромолекулярных компонентов периферической крови у женщин с генитальным герпесом дают более полную информацию для понимания влияния лазерного излучения на вирусную инфекцию. Эндоваскулярное лазерное облучение крови может явиться методом выбора лечения больных с данной патологией. В.Н. Серов, С.Г. Цахилова, П.Д. Бонарцев, А.М. Абубакирова, Т.А. Федорова, Н.В. Орджоникидзе, Т.Г. Хлыстова, Э.М. Бакуридзе
Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН
(директор центра - академик РАМН, проф. В.И. Кулаков), Москва.

В настоящее время известен ряд хронических заболеваний влагалища и шейки матки, возникающих в результате инфицирования половых путей аденовирусами, цитомегаловирусом, Вирусами Коксаки A, ECHO и др. [15]. Но чаще всего гениталии поражаются вирусом простого герпеса (ВПГ). Эта инфекция представляет значительную проблему для репродуктивного здоровья населения, так как первичное инфицирование вирусом простого герпеса или рецидивы заболевания во время беременности могут привести к внутриутробной инфекции, вызывающей повреждения, после которых дальнейшее развитие плода становится невозможным или сопровождается тяжелыми осложнениями, а инфицирование во время родов может быть причиной тяжелых неонатальных и постнатальных заболеваний новорожденных [12, 16, 19, 20].

Вирус герпеса относится к ДНК-содержащим вирусам, имеет сложную структуру, вирионы диаметром 150-200 нм содержат протеин, спермин, глико- и липопротеиды. Вирус чувствителен к эфиру, фенолу, формалину, алкоголю, нагревание до 55 о С разрушает его в течение 30 мин [1].

Вирус начинает размножаться в месте инокуляции, где появляются типичные пузырьковые высыпания, и проникает в кровяное русло. Установлено, что вирус может оседать в виде элементарных телец в эритроцитах, а также поражать лейкоциты, лимфоциты, макрофаги. Таким образом, вирусемия является одной из причин диссеминации вируса в организме, обусловливает интенсивность клинических проявлений болезни [1].

Выявлены два серотипа ВПГ: ВПГ-1 и ВПГ-2. По общепринятому мнению, ВПГ-2 отводится этиологическая роль при генитальных, а ВПГ-1 - при экстрагенитальных поражениях. Генитальный герпес - одно из наиболее распространенных заболеваний, передаваемых половым путем, занимающий второе место после трихомоноза [18]. Первичное инфицирование половой сферы происходит преимущественно в период начала активной половой жизни в возрасте 18-25 лет при контакте с партнером, страдающим генитальным герпесом. Второй пик заболеваемости у женщин в отличие от мужчин приходится на возраст 45 лет и старше [14]. Для генитального герпеса характерно тяжелое течение с частыми рецидивами болезни, нарушающими нормальную половую функцию пациента. Многие исследователи подчеркивают, что болезнь создает конфликтные ситуации в семье, является источником нервно-эмоциональных нарушений у больного, приобретая социальный характер. Предполагают, что 50-60% лиц в группе с низким уровнем жизни имеют антитела к ВПГ-2 к середине жизни, эти антитела обнаружены только у 10-20% лиц в группе с высоким уровнем жизни и у 35% женщин среднего класса [20].

Клинические проявления первичного герпеса наблюдаются обычно в течение 2-3 нед. Сроки возникновения рецидива варьируют, но у 50% больных они появляются в ближайшие 6 мес. При этом симптомы выражены слабее и менее продолжительны, чем при первичной инфекции (7-10 дней). При увеличении длительности заболевания и в связи с проводимым лечением клиническая картина может изменяться [19]. Характерным для патогенеза герпетической болезни является нарушение иммунного ответа [6, 8, 13, 17]. В противовирусной защите организма принимают участие факторы клеточного и гуморального иммунитета. Факторы клеточного иммунитета участвуют в подавлении репродукции вируса, в процессах миграции и удержании макрофагов, лимфоцитов в очаге воспаления. Кроме того, факторы клеточного иммунитета, с одной стороны, вызывают лизис инфицированных клеток и способствуют высвобождению внутриклеточного вируса для последующей нейтрализации его антителами, с другой - влияют на соседние нормальные клетки, предупреждая их инфицирование [4, 17].

Лечение больных с генитальным герпесом представляет собой сложную задачу. Оно должно быть комплексным, направленным на подавление репродукции вируса при одновременной стимуляции факторов специфической и неспецифической защиты организма. Одним из перспективных немедикаментозных методов лечения является фотогемотерапия, в частности эндоваскулярное лазерное облучение крови (ЭЛОК). Лечебный эффект достигается за счет воздействия лазерного излучения на форменные элементы крови, белковые структуры плазмы, антиоксидантную систему. В результате облучения крови отмечается активизация ферментов в эритроцитах, улучшение реологических показателей и снижение коагуляционных свойств крови, происходят изменения в иммунной системе, нормализуются процессы перекисного окисления липидов, энергетический баланс организма, отмечается бактерицидный эффект [7]. Все большее подтверждение находит концепция о едином потоке каскадных клеточных и ферментативных реакций, обеспечивающих взаимодействие указанных систем регуляции [10]. Электронная микроскопия дает уникальную возможность изучать одновременно функциональное состояние элементов систем гемостаза, иммунитета и неспецифической резистентности, их макромолекулярных комплексов, т. е. проводить многотестовое исследование компонентов крови на ультраструктурном (биохимическом) уровне.

Целью настоящей работы являлось изучение структурно-функционального состояния компонентов периферической крови у женщин (вне беременности) с типичной формой генитального герпеса при проведении эндоваскулярной лазерной терапии.

В исследуемую группу были включены 20 пациенток в возрасте от 20 до 45 лет с типичной формой генитального герпеса. Под наблюдением гинеколога они находились в течение 5 лет и более. Контрольную группу составили 10 здоровых женщин репродуктивного возраста. Диагноз генитального герпеса подтвержден наличием антигенов ВПГ, обнаруженных прямым методом флюоресцирующих антител в соскобах эпителия вульвы, влагалища, шейки матки. Результаты считались положительными при двукратном выявлении изумрудно-зеленого свечения ВПГ и специфических герпес-вирусных включений в цитоплазме эпителиальных клеток в исследуемом материале. Больные жаловались на эпизодически появляющиеся типичные герпетические мелкопузырьковые высыпания различного диаметра, расположенные группами или одиночно на малых половых губах, слизистой оболочке влагалища или шейке матки. Пациентки отмечали общее недомогание, головную боль, выраженное увеличение лимфатических узлов, пониженную работоспособность. Больных беспокоили изнурительный зуд и жжение в области наружных половых органов, не поддающиеся какому-либо лечению, что в значительной мере являлось препятствием для половой жизни, приводило к нервно-психическим нарушением, неврастеническим и депрессивным расстройствам.

Медикаментозное лечение этих больных давало временный эффект. Частота рецидивов заболевания колебалась от 3 до 12 раз в год и составила 4,8+/-1,2 раза в год, средняя продолжительность ремиссии была 2,4+/-0,8 мес. Все пациентки имели регулярный менструальный цикл. Половой жизнью вне брака жили 8 женщин, остальные 12 состояли в браке. Смена 2-3 половых партнеров и более имела место у всех пациенток. Удалось выяснить, что у 4 половых партнеров периодически на половых органах отмечались герпетические высыпания.

У 4 (20%) пациенток исследуемой группы было невынашивание беременности, 2 (10%) женщины страдали бесплодием. У всех больных с типичной формой генитального герпеса отмечался хронический сальпингоофорит.

Для эндоваскулярного лазерного облучения крови использовалось гелий-неоновое излучение с применением аппарата УЛФ-01. Мощность излучения на выходе составила 1 мВт, длина волны - 0,63 нм, время экспозиции - 15-30 мин. Процедуры проводились ежедневно в течение 7-10 дней. Одновременно осуществлялось лечение половых партнеров пациенток исследуемой группы лекарственными средствами и ЭЛОК. Забор крови у больных производился из локтевой вены до и после курса ЭЛОК. У женщин контрольной группы забор крови для исследования производился однократно на 5-б-й день менструального цикла.

Для исследования клеточных и макромолекулярных компонентов использовался электронно-микроскопический препарат концентрата клеток периферической крови. Изучали эритроциты, тромбоциты, гранулоциты, лимфоциты, моноциты и компоненты плазмы, находящиеся между клетками: ультрамикрофибриллы, ультрамикрогранулы, макромолекулярные комплексы, фрагменты клеток и атипичные компоненты. Исследуемую венозную кровь с гепарином отстаивали 15-20 мин, использовали верхний слой плазмы образовавшегося лейкоконцентрата. Собранную в конические пробирки плазму с клетками центрифугировали при скорости 1000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость удаляли, а к осадку приливали для префиксации клеток 1% раствор глутаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4) и центрифугировали в течение 10 мин, а затем 3 раза промывали в процессе центрифугирования в буферном растворе и дополнительно фиксировали 1% раствором четырехокиси осмия в 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4) в течение 30 мин. После окончания процедуры фиксации электронно-микроскопический препарат концентрата клеток крови готовился по обычной методике [2,3].

Ультратонкие срезы получали с помощью ультрамикротома LKB-V (Швеция), контрастировали уранил-ацетатом и цитратом свинца, анализировали и фотографировали на трансмиссионном электронном микроскопе JEM-100 СХ (Япония). Исследовали несколько ультратонких срезов каждого экспериментального варианта и параллельных препаратов, оценивали качественные и количественные ультраструктурные признаки клеток и клеточных популяций. Важно подчеркнуть, что приготовленные описанным способом электронно-микроскопические препараты структурных компонентов периферической крови позволяют изучать клетки в их естественной совокупности без предварительного повреждающего фракционирования, поскольку только электронная микроскопия дает возможность исследовать сколь угодно сложную структурную смесь. Кроме того, предварительная процедура обработки клеток крови, включающая осаждение и центрифугирование, как бы повторяет стадии ряда иммунологических тестов (например, реакции розеткообразования и т. п.), вследствие чего создаются условия для контактного взаимодействия клеток. Перечисленные условия способствуют выявлению наиболее полного разнообразия функциональных состояний клеток крови.

В результате электронно-микроскопического исследования структурных компонентов крови у больных до начала ЭЛОК выявлено наличие остатков микроорганизмов между клетками крови, которые были, очевидно, в состоянии деструкции в результате действия иммунных механизмов (рис. 1, 2). Однако микроорганизмы находили и внутри клеток (лимфоцитах), но в спорообразном состоянии (наличие толстой оболочки). Наблюдался также фагоцитоз нейтрофилами фрагментов клеток, содержащих микроорганизм (рис. 3,4).

Наряду с обнаружением микроорганизмов в крови были выявлены и признаки цитопатического эффекта, которые можно предположительно связать с вирусной инфекцией. Так, отмечались повреждения поверхностной мембраны эритроцитов в виде почкообразных выпячиваний, часто отрывающихся от клетки в окружающую плазму (рис. 5, 6). Вирусоподобные частицы также наблюдались в углубленнях эритроцитов (рис. 7). Цитопатический эффект в более ярком виде выявлялся при исследовании тромбоцитов: на их поверхности имелись тонкие короткие и длинные отростки, а рядом множество вирусоподобных частиц (рис. 8). В межклеточной плазме также находили скопления вирусоподобных частиц, разделенных и контактирующих между собой (рис. 9, 10). Среди клеток имелись сильно поврежденные клетки (цитолитическое состояние) или их крупные фрагменты, в которых можно было видеть множество вирусоподобных частиц, часто прилегающих к внутренней поверхности мембраны клеток.

Подобная ультраструктурная картина периферической крови была выявлена и после курса ЭЛОК, но значительно чаще отмечалось присутствие бактерий и вирусоподобных частиц вне клеток, межклеточной плазме или во фрагментах разрушенных клеток. В межклеточной плазме обнаружены высокая контрацепция (плотность) неклеточных компонентов в виде макромолекулярных хлопьев и высокая активация тромбоцитов, нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов, которая выражалась в виде дегрануляции (высвобождении специфических гранул и лизосом), реакции фагоцитоза и синтеза иммуноглобулинов в развитой гранулярной эндоплазматической сети (активированные В-лимфоциты), а также в виде сильной контактной активности и особенно в местах нахождений бактерий и вирусоподобных частиц (рис. 11, 12).

Таким образом, многофакторный электронно-микроскопический анализ структурных компонентов периферической крови у женщин с генитальным герпесом позволил получить определенное представление о лечебном эффекте ЭЛОК. Известно, что при лазерном облучении клеток крови in vitro отмечена высокая фоточувствительность эритроцитов, содержащих естественный пигмент гемоглобин и обладающих большой светопоглощающей способностью. Вместе с тем некоторые авторы показали, что лазерное облучение клеток крови, не вызывая повреждения эритроцитов человека, обусловливает повышение их резистентности, активацию функции мембраны клеток с изменением электрических и сорбционных свойств ее поверхности [5]. Воздействие на лимфоциты красным светом гелий-неонового лазера с длиной волны 0,63 нм оказывает стимулирующее влияние на их функциональную активность, активирует иммунокомпетентные клетки крови [9]. При морфологическом исследовании периферической крови наблюдается повышение содержания нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, моноцитов [11]. Это связано со стимуляцией лейкопоэза, с выбросом зрелых клеток из синусов костного мозга, сосудов селезенки и легких. Основной точкой приложения действия лазерного гелий-неонового излучения в лимфоцитах являются поверхностная мембрана клетки с ее рецепторами и ядрышко, которые активизировались при лазерном воздействии. Есть также достаточные основания связать увеличение в крови числа нейтрофилов и моноцитов в состоянии сильно выраженной активации с высоким уровнем иммунных и антигенных комплексов, фрагментов клеточных рецепторов. В связи с этим, активацию нейтрофилов, моноцитов можно отнести к компенсаторным процессам, направленным на удаление из кровеносного русла в плазму разрушенных инфекционных агентов под воздействием гелий-неонового излучения. Никоэнергетическое лазерное облучение крови прежде всего вызывает разрушение поврежденных клеток с выходом бактерий и вирусов из клеток в межклеточную плазму, где они в свою очередь становятся доступными для иммунокомпетентных клеток и обезвреживаются в процессе фагоцитоза, действия специфических иммуноглобулинов с последующим контактным связыванием иммунных комплексов для нейтрализации инфекционных частиц. Такое представление подтверждается присутвием в периферической крови у пациенток высокоактивированных тромбоцитов, нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов на фоне высокой концентрации в плазме макромолекулярных компонентов. В плазме они подвергаются воздействию иммунокомпетентных клеток.

Эти результаты согласуются с вирусологическими исследованиями, проведенными через 2-3 нед. после лазеротерапии. Выявлено незначительное увеличение экскреции вирусов. Кроме того, у 5 женщин в первую неделю после лазеротерапии отмечались легкие явления ОРЗ, что было расценено как активация элиминации вирусов слизистой оболочки верхних дыхательных путей. По результатам катамнеза и наблюдения пролеченных пациенток в течение 2-8 мес. выявлено увеличение продолжительности ремиссии на 5,4-1,1 мес. После повторного обследования в 72% случаев вирус простого герпеса не обнаружен.

Таким образом, реакция крови, развивающаяся при лазерном облучении, является одной из важных составляющих клинического эффекта биостимуляционной лазерной терапии. Выявленные в настоящей работе ультраструктурные особенности состояния эритроцитов, тромбоцитов, нейтрофилов, моноцитов и неклеточных макромолекулярных компонентов периферической крови у женщин с генитальным герпесом, как нам представляется, дают более полную информацию для понимания влияния лазерного излучения на вирусную инфекцию. ЭЛОК может явиться методом выбора лечения больных с данной патологией.