Вирусу гепатита d для репликации необходимы

Геном BГD представлен однонитевой, циклической молекулой РНК, состоящей приблизительно из 1700 нуклеотидов. В BГD, циркулирующем в крови больных острой или хронической дельта-инфекцией, РНК BГD образует палочковидную неразветвленную структуру. Характер плотной упаковки генома определяется высокой степенью комплиментарности нуклеотидов, входящих в его состав. Причем, сочетание пар оснований гуанин-цитозин, составляет до 60%. Анализ нуклеотидных последовательностей РНК BГD нескольких изолятов вируса выявил их частичную гетерогенность (от 72,1% до 92,0% гомологии). В геноме BГD имеется несколько открытых рамок считывания, как на геномных, так и на антигеномных нитях РНК. Причем, в отличие от вироидов и сателлитных вирусов растений в РНК закодирован вирусспецифический полипептид - HDAg (пятая открытая рамка считывания, локализованная на комплементарной зоне РНК BГD).

Выявлено две разновидности HDAg с молекулярными массами в 24 и 27 кД. На их поверхности расположен общий эпитоп, определяемый при помощи моноклональных антител человеческого происхождения. Считается, что малая форма HDAg необходима для репликации BГD, а большая для постройки вирусной частицы. Дельта-антиген локализуется в ядрах инфицированных гепатоцитов, в ядрышках и/или нуклеоплазме.

HDAg имеет выраженную РНК-связывающую активность. Связывание происходит благодаря узнаванию антигеномной уникальной вторичной структуры РНК BГD, что определяет строгую специфичность связывания и объясняет отсутствие взаимодействия с другими вирусными и клеточными РНК. При нагревании BГD происходит укрепление связи HDAg с РНК, которая становится устойчивой к действию мочевины, гуанидина или меркаптоэтанола. Дельта-антиген устойчив к нагреванию, действию кислот и нуклеаз, но разрушается в присутствии щелочей и протеаз. Он обладает антигенной активностью и может быть использован для конструирования диагностических препаратов.

Механизм прикрепления, проникновения и раздевания BГD в клетках мало изучен. Вместе с тем считается, что HBsAg, покрывающий дельта-антиген, кодированный S-геном вируса гепатита В (включая pre-SI, pre-S2 и S-зону),необходим для прикрепления BГD к поверхности гепатоцита. При этом в отличие от частиц Дейна, в которых HBsAg представлен частицами с pre-Sl, pre-S2 и S-пептидами в соотношении 1:1:4, в дельта-вирусе это соотношение составляет 1:5:95.

Инфицированные гепатоциты содержат как геномные (+), так и антигеномные (-) молекулы РНК BГD в соотношении 5-30:1. РНК BГD представлена линейными и циклическими формами. Общее количество молекул РНК BГD может достигать 100000-300000 копий в одной клетке.

Репликация РНК BГD происходит в ядре зараженного гепатоцита; по аналогии с вироидами она может быть описана следующим образом: на кольцевой молекуле геномной РНК (+) при помощи клеточного фермента (возможно ДНК-зависимой РНК-полимеразы II) синтезируется комплиментарная (-) цепь РНК. Синтез нуклеиновой кислоты осуществляется согласно модели раскручивающегося кольца с вытеснением 5' конца РНК с последующим синтезом плюс-цепи. Возможно, антигеномные нити РНК сворачиваются в кольцо с последующим синтезом геномных РНК BГD. Расщепление линейных олигомерных структур РНК осуществляется при помощи клеточных ферментов. Процесс РНК РНК копирования может происходить по симметричному и асимметричному пути.

Вопросы, связанные с транскрипцией и трансляцией гена, кодирующего HDAg, до сих пор полностью не решены. Имеется скудная информация и о таких этапах морфогенеза, как сборка и выход вируса из гепатоцита.

Вирус гепатита D не может участвовать в развитии гепатитной инфекции без одновременной репликации вируса гепатита В. Этот факт определяет две возможные формы их взаимодействия:

Последнее время получены экспериментальные данные, что дельта-вирус может размножаться в организме приматов и без участия вируса гепатита В, но при этом никаких повреждений не наблюдается. Предположительно наружная оболочка дельта-вируса формируется из клеточных белков, вследствие чего его обнаружение затруднено.

Анализ инфекционной активности дельта-вируса показал, что она приблизительно на пять порядков ниже по сравнению с ВГВ. Инфицирование дельта-вирусом может вызвать острое заболевание, заканчивающееся выздоровлением или формированием хронического носительства BГD. Экспериментальное заражение дельта-вирусом человекообразных обезьян-носителей HBsAg и сурков-носителей вируса гепатита сурков вызывает острую суперинфекцию. При этом через 2 недели после заражения в гепатоцитах животных удается идентифицировать дельта-антиген, который по своим физико-химическим и иммуногенным свойствам идентичен дельта-антигену из гепатоцитов больного человека. Полученный при экспериментальной дельта-вирусной инфекции у сурков дельта-антиген с успехом используется для приготовления коммерческих диагностических препаратов, применяющихся для выявления серологических маркеров дельта-инфекции у людей.

Дельта-вирусную инфекцию удалось также воспроизвести и при заражении дельта-вирусом пекинских уток-носителей вируса гепатита пекинских уток.

Дельта-вирус может быть обнаружен в гепатоцитах и в крови больных острой и хронической дельта-инфекцией. Применение иммуноэлектронной микроскопии, при которой используются антитела к HBsAg, позволяет изучать морфологию дельта-вируса. Маркерами, свидетельствующими о наличии дельта-вируса в исследуемом материале, служат дельта-антиген и/или PHK BГD.

Для обнаружения дельта-антигена в биопсийном или аутопсийном материале применяют метод флюоресцирующих антител и иммунопероксидазные методы, когда комплекс дельта-антигена и антител к нему, меченных пероксидазой хрена, визуализируют при помощи гистохимической реакции на пероксидазу.

Детекцию РНК BГD проводят при помощи кДНК-гибридизации с зондами, полученными генноинженерным путем, или же методом амплификации кДНК ВГD , позволяющим выявлять до 10 3 молекул РНК BГD.

Культивирование BГD в клеточных линиях, в том числе печеночного происхождения с интегрированным геномом ВГВ, до сих пор были неудачны. Вместе с тем, описаны эксперименты по продукции BГD в линии клеток гепатомы человека (HUH-7) и почек мартышек (COS7) после их трансфекции РНК ВГD.

Основные факты

Вирус гепатита D (HDV) представляет собой вирус, для репликации которого необходим вирус гепатита B (HBV). Инфицирование HDV происходит только одновременно с HBV или в виде суперинфекции по отношению к HBV.
Передача вируса чаще всего происходит перинатальным путем от матери ребенку, а также при контакте с кровью или другими биологическими жидкостями.
Вертикальная передача от матери ребенку происходит редко.
Не менее 5% всех людей с хронической инфекцией также инфицированы HDV. Другими словами, во всем мире число инфицированных HDV составляет 15-20 млн. человек. Тем не менее, это только приблизительная цифра, поскольку многие страны не ведут учета распространенности гепатита D.
С 1980 г. наблюдается снижение общего числа случаев инфекции гепатита D в мире. Эта тенденция, главным образом, связана с успехами глобальной программы вакцинации против гепатита В.
Коинфекция HDV-HBV считается самой тяжелой формой хронического вирусного гепатита ввиду более быстрого смертельного исхода от болезней печени и гепатоклеточной карциномы.
В настоящее время показатели эффективности курсов лечения, в целом, невысоки.
Инфекцию гепатита D можно предотвратить посредством иммунизации против гепатита В.

Гепатит D — это болезнь печени, протекающая как в острой, так и хронической форме, вызываемая вирусом гепатита D (HDV), для репликации которого необходим вирус HBV. Заражение вирусом гепатита D происходит только в присутствии вируса гепатита B. Коинфекция HDV-HBV считается наиболее тяжелой формой хронического вирусного гепатита гепатита ввиду более быстрого смертельного исхода от болезней печени и гепатоклеточной карциномы.

Единственным способом предотвращения инфекции HDV является вакцина против гепатита B.

Острый гепатит: одновременное инфицирование HBV и HDV может приводить к гепатиту в умеренной или тяжелой форме или даже к фульминантному гепатиту, но обычно за этим следует полное выздоровление, и хронический гепатит D развивается редко (менее чем в 5% случаев острого гепатита).

Суперинфекция: HDV может инфицировать человека, уже имеющего хроническую инфекцию HBV. Суперинфекция HDV при хроническом гепатите B ускоряет развитие более тяжелых форм болезни в любом возрасте у 70-90% людей. Суперинфекция HDV ускоряет развитие цирроза почти на 10 лет по сравнению с моноинфекцией HBV, несмотря на то, что HDV подавляет репликацию HBV. Механизм, ввиду которого HDV вызывает более тяжелый гепатит и ускоренное развитие фиброза по сравнению с моноинфекцией HBV остается неясным.

Риску инфицирования HDV подвержены хронические носители HBV.

Люди, у которых нет иммунитета к HBV (как естественного после болезни, так и в результате иммунизации вакциной против гепатита B), подвергаются риску инфицирования HBV, что сопряжено с риском инфицирования HDV.

Высокая распространенность гепатита D среди людей, употребляющих инъекционные наркотики, указывает на то, что употребление наркотиков является серьезным фактором риска коинфекции HDV.

Сексуальные контакты с высоким уровнем риска (например, у работников секс-индустрии) – также фактор повышенного риска инфекции HDV.

Миграция из стран с высокой распространенностью HDV в страны с низкой его распространенностью может оказывать влияние на эпидемиологическую ситуацию в принимающей стране.

Инфекция HDV диагностируется путем выявления высоких титров иммуноглобулина G (IgG) и иммуноглобулина M (IgM), антител к HDV, и подтверждается путем выявления РНК HDV в сыворотке.

Однако широкий доступ к диагностике HDV отсутствует, как и стандартизированный подход к анализу на наличие РНК HDV, который используется для мониторинга ответа на противовирусную терапию.

При отсутствии возможности количественного анализа РНК HDV целесообразным маркером для мониторинга реакции на лечение является HBsAg. Снижение титра HBsAg часто свидетельствует об исчезновении поверхностного антигена и клиренсе HDV, хотя исчезновение поверхностного антигена редко встречается при лечении.

В текущих руководствах обычно рекомендуется прием пегилированного интерферона альфа в течение как минимум 48 недель независимо от форм ответа на лечение. Общий уровень устойчивого вирусологического ответа низкий, однако это лечение является независимым фактором, ассоциированным с меньшей вероятностью прогрессирования заболевания.

Для пациентов с фульминантным гепатитом и болезнью печени на последних стадиях может рассматриваться возможность трансплантации печени. Необходимы новые терапевтические средства и стратегии. Новые препараты, такие как ингибитор пренилирования или ингибиторы входа HBV, дали предварительные положительные результаты.

ВОЗ не публиковала конкретных рекомендаций в отношении гепатита D. Тем не менее, рекомендованные меры по предотвращению передачи HBV, такие как иммунизация против гепатита B, безопасная практика инъекций, обеспечение безопасности крови и услуги по снижению вреда, заключающиеся в предоставлении стерильных игл и шприцев, эффективны для предотвращения передачи HDV.

В мае 2016 г. Всемирная ассамблея здравоохранения приняла первую “Глобальную стратегию сектора здравоохранения по вирусному гепатиту на 2016-2021 гг.”. В этой стратегии подчеркивается решающая роль всеобщего охвата услугами здравоохранения, а задачи стратегии находятся в соответствии с задачами в рамках Целей в области устойчивого развития. Главной целью стратегии является ликвидация вирусного гепатита в качестве проблемы общественного здравоохранения, и это отражено в глобальных задачах по сокращению числа новых случаев инфекции вирусного гепатита на 90% и сокращению смертности от вирусного гепатита на 65% к 2030 году. Действия, которые должны проводить страны и Секретариат ВОЗ для выполнения этих задач, изложены в стратегии.

Для оказания поддержки странам в ходе выполнения глобальных целей по гепатиту в рамках Повестки дня в области устойчивого развития на период до 2030 г. ВОЗ проводит работу по следующим направлениям:

повышение осведомленности, укрепление партнерств и мобилизация ресурсов;
разработка основанной на фактических данных политики и сбор данных для информационного обеспечения практических действий;
предотвращение передачи инфекции;
расширение услуг в области скрининга, ухода и лечения.

Кроме того, ежегодно 28 июля ВОЗ проводит Всемирный день борьбы с гепатитом для повышения осведомленности о вирусном гепатите и более глубокого осмысления связанных с ним проблем.

В мире насчитывается около 400 млн лиц с хронической инфекцией, вызванной вирусом гепатита В (Hepatitis B virus, HBV). Из них от 15 до 25 млн имеют признаки инфицирования вирусом гепатита D (Hepatitis D virus, HDV). Данный вирус считается вирусом – спутником HBV и для своей репликации и сборки использует ферменты и белки (HBsAg) HBV. Он несколько похож на вироиды растений, но выделен в отдельное семейство и отдельный вид гепатотропных вирусов. HDV характеризуется эндемичностью распространения: его обнаруживают преимущественно в Южной Европе, определенных регионах Азии, Африки и Латинской Америки. В России эндемичность по HDV установлена в отношении Астраханской области и ряда районов восточнее Урала. Вирус вызывает коинфекцию и суперинфекцию, которые протекают как острый гепатит либо первично хронические формы с высокой активностью, быстрым развитием цирроза печени с тяжелым прогрессирующим течением и повышенной частотой развития гепатом. Показано значение генетического фактора (антигены HLA) в развитии той или иной формы дельта-инфекции. В последние годы наблюдается тенденция не только к снижению встречаемости вируса в эндемичных регионах и смягчению тяжести течения гепатита и цирроза печени дельта-вирусной этиологии (патоморфоз), но и к повышению частоты выявления HDV в зонах усиленной миграции населения.

Вирус гепатита D (Hepatitis D virus, HDV) был открыт в 1977 г. М. Rizzetto и коллегами при исследовании биоптатов печени, полученных от больных хронической инфекцией, вызванной вирусом гепатита В (Hepatitis B virus, HBV), c наиболее выраженными повреждениями печени. Иммунофлуоресцентный анализ гепатоцитов показал наличие специфического антигена – дельта-антигена (HDAg). Одновременно в сыворотках крови данных пациентов были обнаружены специфические антитела к этому антигену (HDAb) [1–3].

Таким образом, геном HDV оказался самым мелким из всех известных вирусов РНК, содержащих около 1682 пар нуклеотидов, и напоминал вирусы растений. В 1986 г. HDV был назван первым вирусом животных с идентифицированной циркулярной РНК, что свидетельствовало о его происхождении от растительных вирусов. По размеру и вторичной структуре он схож с растительными аироидами и вирусоидами [7, 8].

Еще одной необычной особенностью РНК HDV стала открытая в 1989 г. способность к саморасщеплению (из-за присутствия фермента рибозима) на геномную и антигеномную последовательность РНК, представляющую собой цепочку из 85 нуклеотидов, которые самостоятельно расщепляются и связываются воедино. Рибозимы также встречаются в вироидах растений, хотя и имеют иную структуру, чем вирус дельта [9, 10].

Лишь в 1993 г. были опубликованы результаты важнейшего исследования T.B. Fu и J. Taylor [11], позволившие расширить знания о роли HBV и гепатоцитов в репликации HDV. Транскрипция геномной и антигеномной вирусной РНК осуществляется при участии РНК-полимеразы двух гепатоцитов. Предполагалось, что особая форма вирусной РНК может распознаваться РНК-полимеразой-2 как стандартная двухцепочечная ДНК. Конечный итог репликации – преобразование геномной и антигеномной РНК, катализированной рибозимом, с разъединением продукта транскрипции (геномная – антигеномная РНК) в форму циркулярной РНК вируса HDV [11–14].

Таким образом, HDV – дефектный РНК-вирус, требующий HBsAg от HBV для сборки вириона, его высвобождения и передачи. Вирус представляет собой частицу размером 36 нм с внутренним рибонуклеопротеиновым комплексом примерно 20 нм в диаметре, состоящим из РНК-содержащего генома, объединенного со структурным белком – HDAg, окруженным оболочечным гликопротеином HBsAg. В инфицированных клетках формирование рибонуклеопротеида не зависит от HBV, однако без покрытия HBsAg он не может выходить из клетки и инфицировать другие гепатоциты. Следовательно, HDV является вирусом – спутником HBV и может инфицировать лиц, которые либо одновременно получают HBV (коинфекция), либо уже являются носителями HBsAg (суперинфекция). Важный момент: при наличии антител к HBsAg (иммунные к HBV-инфекции) пациенты невосприимчивы к HDV [15–17].

Международным комитетом по таксономии вирусов (International Committee on Taxonomy of Viruses, ICTV) HDV признан новым видом вирусов позвоночных, единственным представителем которого является семейство Deltaviridae, а видом – Deltavirus. Хотя HDV имеет простое строение и по способу репликации похож на фитопатогены, вироиды и вирусоиды, он существенно отличается от других вирусов и считается особым видом. HDV обычно классифицируется как сателлитный вирус, или спутник HBV: основной биологический принцип его функционирования заключается в том, что HDV не способен к инфекции в отсутствие HBV [12, 18, 19].

На поверхности HDV имеется сферическое липопротеиновое покрытие, содержащее HBsAg [20]. Внутри вириона находится рибонуклеопротеин, состоящий из вирусного генома и HDAg. Вирусный геном состоит из одноцепочечной циркулярной РНК (ssRNA) молекулярной массой около 1,7 кДа с отрицательной полярностью. Из-за большого количества гуанина и цитозина около 74% нуклеотидов в этой молекуле комплементарны сами по себе, могут образовывать особую вторичную структуру и объединяться с HDAg [21, 22].

HDAg – единственный белок, кодируемый HDV. Этот фосфопротеин может находиться в двух особых формах: короткой – HDAg-S и длинной – HDAg-L молекулярной массой 24 кДа (195 аминокислот) и 27 кДа (214 аминокислот) соответственно.

Как показали результаты исследований, HDAg-S способствует репликации РНК, тогда как HDAg-L обеспечивает образование покрытия HDV RNA и сборку вириона [23–27].

Различия между двумя формами HDAg – 19 дополнительных аминокислот в С-терминальном регионе HDAg-L. Обе изоформы HDAg совместно имеют многочисленные функциональные домены, включая RNA-связывающий домен (RBD), ядерный локализационный сигнал (NLS), спирально свернутый домен (ССD), и С-терминальную часть последовательности, богатой пролином и глицином. 19 дополнительных аминокислот протеина HDAg-L являются сигнальной последовательностью для сборки вируса (VAS), который является высоко вариабельным и имеет специфическую последовательность для каждого генотипа. Будучи ключевым в сборке вирусной частицы, он служит связующим звеном при взаимодействии HBsAg и мембраны. HDAg подвергается нескольким посттранскрипционным модификациям, таким как фосфорилирование, ацетилирование и метилирование, а в случае с HDAg-L – изопренилирование. Метилирование Арг13, ацетилирование Лиз72 и фосфорилирование Сер177 и Сер123 связаны с внутриклеточной локализацией HDAg и репликацией РНК. Большая часть из этих изменений важны для участия HDAg-S в репликации HDV РНК, которая происходит путем прямой стимуляции продолжения транскрипции через замену транскрипционного фактора супрессии транскрипции, связанного с РНК-полимеразой-2 [32–42].

Репликация генома полностью управляется РНК, то есть весь синтез новой РНК осуществляется с использованием непосредственно РНК HDV как матрицы, без промежуточного образования матричной ДНК для репликации. В гепатоцитах HDV синтезирует комплементарную РНК, получившую название антигеномной, на основе генома исходной РНК вируса. Геном и антигеном содержат один рибозимный домен по 85 нуклеотидов, способный к саморасщеплению и самосвязыванию. Это необходимо для репликации вирусной РНК [43–46].

HDV использует способ репликации, называемый двойным скользящим кругом, что очень напоминает репликацию вироидов, вирусоидов и вироидоподобных сателлитных РНК [47].Главной особенностью этого типа репликации является использование циркулярной цепи РНК в качестве исходной матрицы, которая транскрибируется РНК-зависимой РНК-полимеразой хозяина или вируса-помощника. Заслуживает внимания тот факт, что HDV – единственный человеческий патоген, который использует фермент хозяина [48–50].

Исследования последних десятилетий расширили понимание репликации HBV, что позволяет предположить участие аналогичных механизмов в развитии начальных этапов инфицирования гепатоцитов [52, 53].

В начале поверхностные белки – производные оболочки вируса HBV связываются с гепарансульфат-протеогликанами (HSPG). Эта связь, несмотря на низкую аффинность, важна при инфекционном процессе, так как помогает адгезии вириона к клеточному рецептору, Na + -таурохолат ко-транспортному полипептиду (NTCP). Лишь после первого шага – связи с NTCP возникает высокоаффинная связь, запускающая процесс проникновения вирусной частицы за счет эндоцитоза внутрь клетки. После проникновения в клетку рибонуклеопротеид HDV высвобождается в цитоплазму и переносится, транслоцируется при участии HDAg в клеточное ядро через сайт с ядерной локализацией (NLS). Переносится рибонуклеопротеид транспортными белками клетки – импортинами [54–59].

В ядре, особенно в нуклеоплазме, геномная РНК транскрибируется РНК-полимеразой-2 в немодифицированную м-РНК, которая в свою очередь мигрирует в цитоплазму, где транслируется в HDAg-S (требующий для репликации РНК HDV). В ядре, точнее в нуклеосоме, геномная РНК траскрибируется с помощью РНК-полимеразы-1 в комплементарную РНК-матрицу, называемую антигеномной РНК. В нуклеоплазме антигеномная РНК транскрибируется РНК-полимеразой-2 в новую геномную РНК [41, 60].

Позднее часть антигеномной РНК, чтобы стать матрицей для редактированной геномной РНК, подвергается редактированию через ADAR1. Так редактируется м-РНК и далее становится источником HDAg-L.

Согласно данным исследований, ошибки, возникающие в процессе работы полимераз и катализируемых ADAR1 редактирование Янтарь/W, а также рекомбинации РНК, способствуют генетической гетерогенности HDV. Причем ряд исследований показал, что рекомбинации не являются чем-то редким [61–63].

В исследовании B.T. Sy и соавт. показано, что происходит в геноме HDV при рекомбинации в положении nt908, локализованной ниже рибозимной активности (Rz), до полиаденилирования и формирования полиадениловой сигнальной последовательности. Эта рекомбинация может способствовать вариабельности генотипов HDV [64].

Две изоформы HDAg посылаются в ядро, где они связываются с новой нередактированной геномной РНК, образуя новый рибонуклеопротеин, который переносится в цитоплазму. Таким образом, РНК-HDV может реплицироваться в гепатоцитах и образовывать РНК-HDV без помощи HBV [17]. Вместе с тем HBV необходим для активной HDV-инфекции: при сборке вириона HDAg-L будет взаимодействовать с HBsAg в эндоплазматической сети с образованием инфекционной вирусной частицы, где после высвобождения новых вирусных частиц через комплекс Гольджи эти частицы начнут инфицировать другие клетки [64, 65].

Генотипы и эпидемиология

По оценкам исследователей, в мире насчитывается 400 млн хронических носителей HBV, из которых у 15–20 млн имеются серологические свидетельства наличия HDV [63, 66].

Разнообразие генетики вирусов связано с географическим происхождением изолятов. Выявлено и классифицировано восемь генотипов, которые идентифицированы, – с HDV-1 до HDV-8 [67–70].

Традиционно к регионам с высокой эндемичностью HDV относят Центральную и Северную Африку, бассейн Амазонки, Восточную Европу и Средиземноморье, Средний Восток и части Азии [69]. HDV-1 распространен повсеместно [75] и выявлен в США, Европе и на Среднем Востоке, а также в России, Африке, Азии и Бразилии [24, 71–76].

HDV-2, ранее известный как генотип IIa, обнаруживается в Японии, на Тайване и в России [77–79]. HDV-3 был изолирован в Амазонском регионе (Перу, Колумбия, Эквадор, Бразилия) [80–83]. Этот генотип относится к наиболее агрессивным среди всех генотипов HDV и характеризуется развитием острых гепатитов, нередко с фульминантным течением [72, 82]. HDV-4 (ранее генотип IIb) выявляется на Тайване и в Японии [84]. Генотипы HDV-5, HDV-6, HDV-7 и HDV-8 в основном обнаруживаются в Африке [67].

В странах СНГ и Прибалтике встречаемость HDV у хронических носителей HВsAg низкая (большая часть Европейской части России, Украина, Белоруссия). Молдавия считается гиперэндемичной по HDV. Маркеры HDV широко распространены в Средней Азии, Казахстане, Азербайджане (15–17%), а также в ряде регионов Сибири [85–94].

При проведении исследований в Астраханской области нами было установлено, что у носителей HBsAg частота обнаружения HDAb составляет 2,7%. При этом среди лиц с острым HВV-гепатитом HDAb обнаруживается почти в 10% случаев. За период 1990–2010 гг. сывороточные маркеры HDV (HDAb) были исследованы у 266 пациентов с хроническим гепатитом (ХГ) и циррозом печени (ЦП). При этом со временем наблюдалась отчетливая тенденция к снижению частоты выявления HDAb в Астраханском регионе. Так, за 1990–2000 гг. HDAb выявлен у 50,3% больных ХГ и ЦП, а за 2001–2010 гг. – лишь у 25%. Причем у четверти всех лиц с наличием сывороточных маркеров HDV при проведении иммуноферментного анализа HBsAg не обнаружен. Этот факт указывает на необходимость определения маркеров HDV даже в отсутствие признаков HBV-инфекции. Кроме того, доказана связь между частотой ХГ D и ЦП D и алкогольным фактором. Как уже отмечалось, после 2000 г. маркеры HDV, согласно полученным данным, стали встречаться при ХГ и ЦП более чем вдвое реже, чем в предшествовавшем периоде наблюдения (25 0,05), а при ЦП – с 89 до 44% (р

Наборы реагентов для экстракции РНК и ДНК

Плазма и сыворотка

Концентраты (элюаты) воды

ликвор, амниотическая жидкость, мазки из носа, зева

ликвор, моча, слюна

высаживание нуклеиновых кислот

сорбция нуклеиновых кислот на частицах силикагеля

сорбция нуклеиновых кислот на частицах магнетизированного силикагеля

Объем биоматериала, мкл

Объем элюции, мкл

Используемые магнитные штативы

Вирус гепатита А (ВГА, HAV)

Вирусный гепатит А – одна из наиболее распространенных в мире кишечных инфекций. Это острое заболевание печени, передающееся фекально-оральным путем. Возбудителем является вирус гепатита А (HAV), относящийся к семейству Picornaviridae. Эпидемиологическая обстановка по ВГА в России остается неблагоприятной - в последние годы отмечается увеличение числа вспышек.

Решение диагностических и эпидемиологических аспектов проблемы гепатита А во многом определяется возможностями используемых методических подходов.

Выявление РНК вируса гепатита А методом ПЦР имеет значительные преимущества по сравнению с ИФА и биохимическими тестами при выявлении вируса в крови контактных лиц, т.к. РНК возбудителя появляется в крови на третьей неделе от момента заражения и является первым диагностическим маркером, обнаруживаемым в крови пациента (Рис.1). В то время как Аnti-HAV IgM появляются в крови от нескольких дней до нескольких недель после появления РНК вируса гепатита А, АЛТ - через две недели.

Также выявление РНК вируса гепатита А методом ПЦР имеет значительное преимущество в чувствительности (как минимум в 1000 раз) по сравнению с детекцией антигена вируса в объектах окружающей среды (питьевые и сточные воды, воды из поверхностных водоемов и т.д.).

Информация для заказа:

Название	Назначение	Тестов	Формат детекции	Кат. №
Выявление РНК HАV в качественном формате	FRT	R-V4(RG,iQ)
Выявление РНК HАV в качественном формате	FEP	V4-FEP

Вирус гепатита В (ВГВ, HBV)

Вирусный гепатит В – широко распространенная инфекция человека, вызываемая ДНК-содержащим вирусом гепатита В, относящегося к семейству Hepadnaviridae.

Вирусный гепатит В представляет собой серьезную проблему здравоохранения. В настоящее время по данным ВОЗ в мире насчитывается около 500 миллионов человек, инфицированных вирусом гепатита В. Общее количество больных хроническим гепатитом В достигает 50 млн. человек.

Результаты лабораторных исследований играют ведущую роль для подтверждения диагноза вирусного гепатита В, установления диагноза хронического вирусного гепатита В, мониторинга активности вирусной репликации у носителей HBsAg, мониторинга эффективности противовирусной терапии.

Выявление ДНК вируса гепатита В c помощью ПЦР используется с целью:

- ранней диагностики острого вирусного гепатита В. Выявление ДНК HBV c помощью ПЦР позволяет эффективно обнаруживать возбудителя в период инфицирования до сероконверсии, так как ДНК HBV появляется в крови в среднем на 3 недели раньше маркера HBsAg.

- выявления скрытых форм вирусного гепатита В (“оccult” hepatitis B). HBsAg в сыворотке таких инфицированных не выявляется, в то время как ДНК HBV выявляется в плазме крови и ткани печени;

- выявления мутантных по HBsAg штаммов вируса гепатита В.

Определение вирусной нагрузки с помощью ПЦР используется для:

- установления диагноза хронического вирусного гепатита В;

- мониторинга эффективности противовирусной терапии;

- мониторинга активности вирусной репликации у носителей HbsAg.

Генотипирование вируса гепатита B целесообразно:

- в рамках эпидемиологического надзора за вирусом гепатита B, для мониторинга циркулирующих генотипов и прогноза развития эпидемиологической ситуации;

- для индивидуализации терапии и более точного прогноза ее эффективности.

Выявление мутаций устойчивости вируса гепатита B (HBV) к противоретровирусным препаратам позволяет проводить антивирусную терапию максимально экономично и эффективно.

Информация для заказа:

Название	Назначение	Формат детекции	Особенности	Кат. №
Выявление ДНК HBV в качественном формате	FRT	R-V5-Mod (RG,iQ,Mx,Dt)
	FEP	V5-FEP
АмплиСенс® HBV-Монитор-FL	Количественное определение ДНК HBV (определение вирусной нагрузки)	FRT	Содержит набор РИБО-преп для выделения ДНК	TR-V5-P-M (RG,iQ,Mx,Dt)
			Содержит набор РИБО-сорб для выделения ДНК	TR-V5-S-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
			Содержит набор МАГНО-сорб для выделения ДНК	TR-V5-M-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
			Форма комплектации для использования с автоматическими станциями для экстракции нуклеиновых кислот; не содержит набор для выделения ДНК	R-V5-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
АмплиСенс® HBV-генотип-FL	Генотипирование HBV (выявление генотипов A, B, C и D)	FRT	R-V5-G-F
				АмплиСенс® HBV-Resist-Seq	Выявление мутаций лекарственной устойчивости HBV (анализ фрагмента ревертазного домена Р-гена)	SEQ	Содержит реагенты для секвенирования на секвенаторах Applied Biosystems	TM-V5-F-1
	M-V5-F-2

Вирус гепатита С (ВГС, HCV)

Вирус гепатита С - РНК содержащий вирус, относящимся к семейству Flaviviridae. Заражение вирусом гепатита С происходит преимущественно при попадании вируса в кровь (при парентеральных вмешательствах или при гемотрансфузиях). Хронический вирусный гепатит С – одно из наиболее распространенных заболеваний печени, ведущих к развитию цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы.

Ведущую позицию в лабораторной диагностике ВГС занимают молекулярно-биологические методы, позволяющие: 1) установить факт инфицированности; 2) установить наличие показаний к противовирусному лечению; 3) выбрать оптимальную схему лечения; 4) своевременно оценить эффективность проводимого лечения и 5) оценить устойчивый ответ на лечение.

Выявление РНК HСV в качественном формате применяется для ранней диагностики острого вирусного гепатита С. РНК ВГС обнаруживается в плазме крови в среднем к 11 дню после заражения. Это позволяет диагностировать острый гепатит С задолго до сероконверсии, что особенно важно для ранней диагностики и проверки донорской крови.

Количественная оценка уровня РНК HСV (вирусная нагрузка) в плазме крови применяется для мониторинга эффективности лечения, что отражено в консенсусном мнении международных экспертов по лечению ХГС и в рекомендациях по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом С Минздрава России от 2013 года. Низкой вирусной нагрузкой принято считать значения менее 400 000 - 800 000 МЕ/мл.

Информация для заказа:

Название	Назначение	Формат детекции	Особенности	Кат. №
АмплиСенс® HСV-FL	Выявление ДНК HCV в качественном формате	FRT	R-V1-Mod (RG,iQ,Mx,Dt)
АмплиСенс® HСV-FL	Выявление ДНК HCV в качественном формате	FEP	V1-FEP
АмплиСенс® HСV-монитор-FL	количественное определение ДНК HCV (определение вирусной нагрузки)	FRT	Содержит набор РИБО-преп для выделения РНК	TR-V1-P-M (RG,iQ,Mx,Dt)
			Содержит набор РИБО-сорб для выделения РНК	TR-V1-S-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
			Содержит набор МАГНО-сорб для выделения РНК	TR-V1-M-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
			Форма комплектации для использования с автоматическими станциями для экстракции нуклеиновых кислот; не содержит набор для выделения ДНК	R-V1-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
АмплиСенс® HСV 1/2/3-FL	Генотипирование HCV	FRT	Выявление генотипов 1, 2, 3 (без дифференциации субтипов)	R-V1-G-4x (RG,iQ,Mx)
АмплиСенс® HСV-генотип-FL		FEP	Выявление генотипов 1, 2, 3 (без дифференциации субтипов)	V1-G-FEP
		FRT	Выявление генотипов 1а, 1b, 2, 3а и 4	R-V1-G(1-4)-2x (RG,iQ,Mx,Dt,SC)
		FRT	Выявление генотипов 1а, 1b, 2, 3а, 4, 5а и 6	R-V1-G(1-6)-2x (RG,iQ,Mx,Dt,SC)
АмплиСенс® Геноскрин- IL28B-FL	Генетических полиморфизмов в гене IL28B	FRT	Выявление аллельных вариантов однонуклеотидных полиморфизмов rs12979860 и rs8099917 в гене интерлейкина 28 В (IL 28В)	R-O5-100-F (RG,iQ,Dt,CFX)

Вирус гепатита D (ВГД, HDV, вирус гепатита Дельта)

Вирус гепатита D - РНК-содержащий вироид (несовершенный вирус), относящийся к семейству Deltavirus. HDV нуждается в хелперной функции вируса гепатита В, который обеспечивает вирус гепатита Дельта белками поверхностной оболочки (HBsAg). Поэтому HDV способен к эффективной репликации только в присутствии HBV.

HDV-инфекция может протекать в двух формах: коинфекции и суперинфекции. Коинфекцией называется инфекционный процесс, когда происходит одновременное заражение вирусами гепатита B и D. Суперинфекция – это инфекционный процесс, который развивается при заражении вирусом гепатита D больного хроническим гепатитом В или носителя вируса гепатита В. Коинфекция носит характер острого тяжелого заболевания с высоким риском развития фульминантного гепатита (до 20%). При суперинфекции, когда заболевание наслаивается на уже измененную ткань печени, в 70-80% случаев инфекция ведет к быстрому развитию цирроза.

РНК HDV является первым диагностическим маркером, обнаруживаемым в крови пациента, антитела к D-Ag появляются на 2-3 недели позже. Выявление РНК HDV c помощью ПЦР позволяет обнаруживать возбудителя в период инфицирования до сероконверсии, что особенно важно для ранней диагностики.

Распознавание HDV-инфекции на фоне гепатита В весьма важно, поскольку течение болезни, терапевтические подходы и прогноз при гепатите Дельта отличаются от таковых при гепатите В без гепатита Дельта. Количественное определение РНК вируса гепатита D в плазме крови необходимо проводить в процессе интерферонотерапии для оценки ее эффективности.

Информация для заказа:

Название	Назначение	Формат детекции	Особенности	Кат. №
АмплиСенс® HDV-FL	Выявление РНК HDV в качественном формате	FRT	Набор реагентов для обратной транскрипции и амплификации кДНК HDV	R-V3 (RG,iQ,Mx,Dt)
АмплиСенс® HDV-FL	Выявление РНК HDV в качественном формате	FEP		V3-FEP
АмплиСенс® HDV- монитор-FL	Количественное определение РНК HDV (определение вирусной нагрузки)	FRT	Для использования с автоматическими станциями для экстракции нуклеиновых кислот и наборами для ручного выделения РНК; не содержит набор для выделения РНК	R-V3-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
АмплиСенс® HBV/HDV-FL	Выявление ДНК HBV и РНК HDV в качественном формате	FRT	R-V56 (RG,iQ,Mx,Dt)

Вирус гепатита G (HGV/GBV-C)

Вирус гепатита G – РНК-содержащий, лимфотропный вирус, относящийся к семейству Flaviviridae, к которому относится и вирус гепатита С (HCV). Инфицирование HGV происходит при непосредственном попадании вируса в кровь (при парентеральных вмешательствах или при гемотрансфузиях) или через слизистые оболочки, повреждения кожного покрова (при половых контактах, вертикальной передаче).

HGV был впервые изолирован в 1995 году из крови пациента с хроническим гепатитом, у которого отсутствовали маркеры других вирусных гепатитов, из-за чего и был изначально отнесен к вирусам, вызывающим заболевания печени. Основным диагностическим маркером вируса гепатита G является определение РНК HGV методом ПЦР.

Информация для заказа:

Название	Назначение	Формат детекции	Кат. №
Выявление РНК HGV в качественном формате	FRT	R-V2-50-F(RG,iQ,Mx,Dt)
Выявление РНК HGV в качественном формате	FEP	V2-50F-FEP

Нормативные документы и публикации о вирусных гепатитах>>

Читайте также: