Вирус некротического пожелтения жилок свеклы

BNYVV0

Вирусные болезни

Вирус некротического пожелтения жилок свеклы (ВНПЖС), Beet necrotic yellow vein virus (BNYVV), гриб-переносчик — Polymyxa betae

Скорость распространения инфекции значительна. В странах Западной Европы ризоманией в 1990 г. было заражено 15% обследованных площадей, а в 2000 г. — уже 38%.

Болезнь впервые описана в Европе (Италия) в 50 годах прошлого века и очень быстро распространилась по другим странам. Ризомания присутствует практически во всех зонах свеклосеяния: Европа (Австрия, Бельгия, Болгария, Хорватия, Чехия, Дания, Франция, Германия, Греция, Венгрия, Италия, Нидерланды, Польша, Румыния, Россия, Украина, Словакия, Словения, Испания, Швеция, Швейцария, Великобритания, Сербия и Черногория), Азия (Китай, Иран, Япония, Казахстан, Киргизия, Ливан, Монголия, Турция, Сирия), Африка (Египет), Северная Америка (США). В настоящее время появляются сообщения о том, что ризомания проникла и на территорию России.

Опубликована информация, что на протяжении двух лет во всех зонах свеклосеяния России проводился мониторинг заболеваемости ризоманией, который подтвердил наличие вируса и гриба-переносчика повсеместно, однако его концентрация в почве пока недостаточна для нанесения значительного экономического ущерба. В любом случае, тот факт, что гриб Polymyxa betae имеется на всей территории выращивания сахарной свеклы, говорит о большом потенциале для распространения ризомании.

Наиболее благоприятными для развития гриба являются почвы, обладающие рН 7–8. Для перемещения зооспор гриба требуется высокая влажность почвы.

Оптимальная температура для развития гриба 20–28°С. При пониженных температурах (от +15 до +19°С) цикл развития патогена полностью не завершается. При температуре почвы ниже 13°С гриб практически теряет свою активность.

Особо подверженными развитию ризомании в России окажутся зоны концентрации свеклосеяния вокруг сахарных заводов центрально чернозёмного региона, с отлаженной технологией производства свеклосырья, а также районы с поверхностным залеганием грунтовых вод, пойменные и поливные участки ЮФО и СКФО. Мировой опыт свидетельствует, что в первую очередь заражаются ризоманией наиболее плодородные и обихоженные земли.

На надземной части:

Симптомы могут отсутствовать при поражении некоторыми штаммами вируса, при незначительной степени инфицирования, в прохладную погоду.

В остальных случаях листья становятся бледно-зеленого или желтого цвета. Иногда наблюдается пожелтение или некроз жилок листка. К концу вегетации центральные листки имеют удлиненные черенки и суженные листовые пластинки. Растения теряют тургор и отстают в росте.

На подземной части:

Вирус не может самостоятельно заражать растение. Даже перемещение в пределах одного растения он осуществляет в основном с помощью почвенного гриба Polymyxa betae.

Переносчиком инфекции являются зооспоры и цистоспоры. Гриб присутствует почти во всех зонах свеклосеяния. Его сравнительно невысокая патогенность увеличивается в случаях носительства вируса (вирофорности) в несколько раз. Следует отметить, что P. betae является облигатным паразитом. Вне растения-хозяина он может находиться только в виде цистосорусов (скопление цист по 100–300 шт.), которые могут сохраняться до 30 лет. При появлении благоприятных условий цистосорусы прорастают первичными зооспорами, которые инфицируют клетки растения-хозяина. Там гриб развивается и дает вторичные зооспоры, которые осуществляют заражение соседних растений.

Помимо свеклы, поражаются также растения некоторых видов семейств Маревые (Chenopodiaceae), Аизовые (Aizoaceae) и амарантовые (Amaranthaceae).

На незараженные территории вирус попадает в цистоспорах гриба с частичками почвы.

  • орудия труда;
  • сельскохозпродукция (картофель, саженцы и т.д.);
  • животные (как при поверхностном загрязнении, так и с экскрементами — споры гриба проходят через пищеварительный тракт животных неповрежденными);
  • сильный ветер, дождь, разносящие комочки почвы;
  • поливная вода, зараженная сточными водами сахарных заводов.

Передача вируса через семена, выращенные на инфицированной территории, является в настоящий момент спорным вопросом. Исследователи склоняются к тому, что она возможна только при механическом поверхностном загрязнении семян. Если семена подвергались предпосевной обработке (шлифовка, глазурирование/инкрустация, дражирование), то инфекция на них отсутствует.

вирус (возможно) Свекла пожелтения жилок

Свекла некротический вирус пожелтения жилок (BNYVV) представляет собой вирус растений , переданный plasmodiophorid Polymyxa betae. BNYVV является членом рода Benyvirus и отвечают за ризомании, болезнь сахарной свеклы (Rhizo: корень; мания: безумие) , который вызывает пролиферацию тонких корешков, и приводит к меньшему корню крана с пониженным содержанием сахара. Зараженные растения менее способны поглощать воду, и увядание можно наблюдать в течение теплого периода года. Если инфекция распространяется на все растение, вены пожелтение, некроз и желтые пятна появляются на листьях, давая вирусу название.

содержание

Хосты и симптомы


BNYVV заражает все из следующих видов: Бета обыкновенных (свекла), бета обыкновенного вара. cicla , бета обыкновенная вар. гиЬга , бета обыкновенная вар. saccharifera (сахарная свекла), Chamomilla аптечного (общий ромашка), Chenopodium (лебеда), Chenopodium лебеда (лебеда), Cichorium intybus (цикорий), бодяк полевой (ползучий расторопши), вьюнок полевой (вьюнок), дурман обыкновенный (дурман), дескурайнии Sophia (flixweed), гелиотроп Europaeum (общий гелиотроп), Nicotiana аЬасит (табак), подорожник большой (широколиственный подорожник), редька полевая (дикая редька), Spinacia Oleracea (шпинат), шпинат новозеландский (Новая Зеландия шпинат), Tribulus Terrestris ( прокола лоза), Вероника Плющелистная и дурнишник обыкновенный (дурнишник). Растения , которые страдают от инфекций BNYVV в основном изобилием все подвиды Бета Vulgaris , в частности бета - вульгарным вар. saccharifera (сахарная свекла), и Spinacia Oleracea (шпинат).

В бета-VULGARIA вар. saccharifera (сахарная свекла), симптомы чаще всего местные в корнях и листьях, но могут быть найдены системно в редких случаях. Симптомы рассматриваются по-разному в зависимости от того, когда заражение происходит на заводе. На ранних этапах жизни и в начале вегетации, а болезни называют ризоманией вызываются в результате вируса. Ризомании является рост мелких волосатых вторичных корней, которые являются мертвыми и, таким образом, предотвращают надлежащее поглощение воды. Из-за ризомании, сахарная свекла подвергается тяжелой инфекции, где все растение отстает в росте, листья завяли, и смерть может произойти. Из-за тяжести с ранним началом инфекции, наиболее распространенным симптомом BNYVV, желтый мозаики на листьях, редко рассматривается как растение часто умирает до того, как вирус может распространяться. Для середины сезона и менее серьезных инфекций, результаты ризомании в корневом гниении хранения и сжимающем, в результате чего корня набухать рядом с короной. В этом случае, ризомании не вызывает завод умереть, который позволяет вирусу может сделать свой путь к листьям, в результате желто-бледное обесцвечивание, пролиферации и вертикального роста. В конце сезона инфекций, как корни, так и листья появляются бессимптомно.

Spinacia Oleracea ( шпинат ) , также может быть заражен той же цепи BNYVV. Для этого растения, полное заражение растений может произойти всего за четыре недели , вызывающие желто-зеленую поляну вены на молодых листьях, жестких и / или гофрированные листья, некроз, низкорослости, увядание, и , возможно , смерть. В отличии от свеклы сахарной, системная инфекция почти всегда видела в шпинате из - за легкую передачу через корни растений.

Среда

BNYVV был впервые обнаружен в Японии в 50-е годы и в Италии CIRCA 1959 г. В последующие два десятилетия, вирус распространился в центральной, восточной и южной Европы. В настоящее время, вирус обнаружен в 22 европейских странах, в шести азиатских странах и некоторых штатах США (Айдахо, Небраска, Нью-Мексико, Техас, Вашингтон, Вайоминг).

Поскольку BNYVV является вирус, он не может двигаться сам по себе , таким образом , делая вектор или другие виды транспорта необходимость для того , чтобы заразить нескольких хостов. Наиболее распространенным способом для вируса разогнаться является Polymyxa Betae , plasmodiophoromycete грибковые-как вектор. Важным аспектом П. Betae является то , что он не заражает само растение, а оно функционирует как блок для хранения вируса BNYVV. В П. Betate , вирус может дремал в течение более 10 лет , что делает его легко диспергируется в районах с большим количеством осадков и фермами с орошением. Два других основной способ BNYVV является распространение инфицированных корней растений и зараженной свекла stecklings.

Сосредоточение внимания на П. Betae , условия , которые благоприятствуют этот вектор имеет высокую корреляцию с количеством заболеваний видели в растениях. Для того , чтобы П. Betae выпустить вирус, он требует высокой влажности почвы. Это может быть результатом чрезмерного количества осадков, чрезмерного полива, и / или плохих дренажных систем , которые все способствуют тяжелым случаям заболевания. Наряду с влагой почвы, качество почвы также играет определенную роль в тяжести заболевания. Плохая структура почвы является основным фактором, вызывающим серьезные случаи BNYVV делая севооборот и возделывание необходимость свести к минимуму вероятность серьезной вспышки. Температура мудра, П. Betae преуспевает в более высокой температуре почвы (около 25 градусов по Цельсию) , что делает идеальное время посадки падения весны или в начале лета, самых поздней.

управление

Поскольку BNYVV не может передаваться через семена или пыльцу, она использует Polymyxa Betae для разгона через его покоящиеся споры называемых cystosori. Cystosori можно найти в почве или в сухих корнях растений , где они могут оставаться в состоянии покоя в течение более чем 10 лет , что делает устранение этого вируса очень сложно.

Наиболее важной формой управления для BNYVV является управление водными ресурсами. Поскольку П. Betae процветает во влажных условиях, сильный дождь и орошение , создавая высокую влажность почвы вызывают наиболее тяжелые случаи заболевания прививки. Это делает управление водными ресурсов решающее в начале вегетационного периода до точки , где культиваторы призываются воздерживаться от любого типа орошения на срок до шести недель после первого прорастания растения. Орошение также может создать поверхностный сток , который может передавать инфекционное P. Betae других здоровых полей , что приведет к разрушению этой области , а также , что делает управление стекания воды столь же важно , как управление оросительными.


Другая форма рассеивания является результатом взаимодействия человека. Покоящиеся споры P. Betae , расположенные в почве могут быть подобраны фермой загрязнена оборудованием / инструментами, человеческим движением и перемещение скота делает идентификацию зараженных полей очень важны. Это инфицированная почву можно также найти в навозе , который может инфицировать поля, используя его в качестве удобрения. В настоящее время лечение инфицированной почвы не только очень сложно, но и очень дорого. Некоторые использования химических веществ и фумигация были обнаружены лишь несколько эффективен, но стоимость либо сильно перевешивает потенциальные выгоды. Это позволяет избежать перекрестного загрязнения решающего значения для лечения болезни. Зараженные поля должны быть выделены как можно больше в связи с распространением возбудителя будучи возможно через только небольшое количество почвы. Благодаря П. Betae быть очень трудно убить, если избежать загрязненной почвы не представляется возможным , чем использование одноразовой или резиновой обуви рекомендуются для того , чтобы обеспечить надлежащую очистку. Чистка обуви и машин должна быть сделана на зараженном участок из - за небольшое количество возбудителя, которое требуется , чтобы начать широкую инфекцию.

Из - за сложности управления П. Betae , наиболее перспективная формой управления является достижением устойчивых культур. Там было сосредоточиться на двух генов , в частности, Rz1 из B. вульгарные SPP. вульгарный и Rz2 из B. вульгарного SPP. тагШт. Эти гены сосредоточены на ограничение транслокации и размножения вируса в корнях, но не предотвратить заражение все вместе. Сопротивление также полезно в затягивании и ограничение накопления первоначального посевного материала в почве.

480 руб. | 150 грн. | 7,5 долл. ', MOUSEOFF, FGCOLOR, '#FFFFCC',BGCOLOR, '#393939');" onMouseOut="return nd();"> Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно , доставка 10 минут , круглосуточно, без выходных и праздников

Виноградова, Светлана Владимировна. Использование 3'-нетранслируемой области вируса некротического пожелтения жилок свеклы в качестве индуктора устойчивости к ризомании : диссертация . кандидата биологических наук : 03.01.03 / Виноградова Светлана Владимировна; [Место защиты: Моск. гос. ун-т им. М.В. Ломоносова].- Москва, 2012.- 139 с.: ил. РГБ ОД, 61 12-3/912

Введение к работе

Актуальность проблемы

В мировой практике рентабельность выращивания сахарной свеклы L.) во многом зависит от эффективности борьбы с болезнями и вредителями этой культуры. Сахарная свекла поражается рядом вирусных заболеваний, из которых наиболее экономически значимыми являются ризомания (вызываемая вирусом некротического пожелтения жилок свеклы -Beet necrotic yellow vein benyvirus, BNYVV) и желтуха (Beet yellows closterovirus, BYV). Ризомания регистрировалась практически во всех районах возделывания культуры в Старом и Новом Свете (McGrann et ah, 2009). При поражении ризоманией сахаристость корнеплодов снижается от 8% до 50-60% (Asher, 1993), а снижение урожайности может достигать 30-90% (Johanson, 1985).

Успех борьбы с ризоманией зависит от создания устойчивых сортов, гибридов и линий, в том числе полученных путем внедрения источников устойчивости к BNYVV генно-инженерными методами.

Экспрессия в растениях фрагментов З'-нетранслируемой области (З'-НТО) вирусных РНК геномов имеет определенные преимущества, поскольку вирусные РНК стабильны в течение короткого времени и не являются иммуногенами. З'-НТО BNYVV представляет интерес в качестве нового индуктора устойчивости к ризомании на основе посттранскрипционного умолкания генов или сайленсинга (post-transcriptional gene silencing, PTGS). Для индуцирования сайленсинга часто используют трансгенную экспрессию шпилечной или двунитчатой РНК (Hamilton et ah, 1998; Chuang and Meyerowitz, 2000; Johansen and Carrington, 2001). Шпилечные конструкции, содержащие фрагменты вирусного генома, применялись ранее для создания трансгенных растений сахарной свеклы, томата, огурца и дыни, лайма (Lennefors et ah, 2006; Fuentes et ah, 2006; Pandolfini et ah, 2003; Leibman et ah, 2011; Lopez et ah, 2010). Было показано, что устойчивость в этих случаях индуцируется благодаря

PTGS, что подтверждается присутствием в трансгенных растениях siPHK. В настоящей работе мы сравнивали устойчивость модельных трансгенных растений Nicotiana benthamiana, экспрессирующих двунитчатую форму З'-НТО генома BNYVV, и растений, экспрессирующих мРНК гена белка оболочки (БО) этого вируса.

Цель и задачи работы

Целью работы было изучение З'-НТО генома BNYVV в качестве индуктора PTGS и устойчивости к ризомании в трансгенных растениях.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

конструирование бинарных векторов, обеспечивающих экспрессию в растениях инвертированных повторов З'-НТО BNYVV, формирующих шпилечную структуру (BNYVVsil), или мРНК гена БО (BNYVVcp);

получение трансгенных растений N benthamiana, экспрессирующих одновременно BNYVVsil (или BNYVVcp) и ген bar, обеспечивающий устойчивость к гербициду BASTA;

определение уровня устойчивости к BNYVV трансгенных растений гомозиготного поколения Т2.

Научная новизна

Проведена оценка устойчивости трансгенных растений поколения Т2 к механической инокуляции BNYVV. Растения Т2 BNYVVsil проявляли толерантность к инфекции BNYVV, симптомы вирусной инфекции развивались на них с задержкой. Таким образом, подтверждена возможность использования BNYVVsil как потенциального источника устойчивости к ризомании в растениях сахарной свеклы.

Практическая значимость

На модели растений N. benthamiana показана возможность получения трансгенов, сочетающих признаки устойчивости к гербициду и вирусной инфекции. Толерантность к ризомании была основана на стабильной экспрессии в растениях двунитчатых форм З'-НТО BNYVV. Экспрессия в модельных трансгенных растениях двух кДНК, введенных с помощью одного бинарного вектора, показывает возможность получения трансгенных растений сахарной свеклы, несущих два ценных признака - устойчивость к гербициду и к инфекции BNYVV.

Апробация работы

Личный вклад автора заключается в проведении экспериментальных и теоретических исследований. Основные результаты работы получены лично автором при его непосредственном участии в планировании и проведении экспериментов. Имена соавторов указаны в соответствующих публикациях.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе две статьи в журналах, входящих в перечень ВАК.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 139 страницах машинописного текста и включают 56 рисунков и 5 таблиц. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, выводов, списка литературы из 250 источников и приложения.


Цена:

Авторы работы:

Научный журнал:

Год выхода:

БИООРГАНИЧЕСКАЯ ХИМИЯ, 1996, том 22, № 1, с. 29 - 33

ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА НА ОСНОВЕ МОНОКЛОИАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУСА ГЕКРОТИЧЕСКОГО ПОЖЕЛТЕНИЯ ЖИЛОК ЛИСТЬЕВ САХАРНОЙ СВЕКЛЫ

Plncmumym биоорганической химии им. М.М. Шемякина и 10.А. Овчинникова РАН, 117871, Москва, ГСП-7, ул. Миклухо-Маклая, 16110; * Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург; ** Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения РАН, Пермь

Поступила в редакцию 19.04.95 г.

Получено пять стабильных гибридомных линий, продуцирующих моноклональные антитела к вирусу некротического пожелтения жилок листьев сахарной свеклы (Beet necrotic yellow vein virus). Для всех моноклональных антител определен подкласс. Разработана иммуноферментная тест-система для определения вируса в экстрактах листьев зараженных растений. Сравнивали прямой сэнд-вич-ИФА с применением только моноклональных антител и систему с использованием биотинили-рованных моноклональных антител и конъюгатов стрептавидина с пероксидазой из хрена или с гомополимером пероксидазы из хрена. I 1оказано, что иммуноферментная диагностическая тест-си-стема на основе моноклональных антител с применением конъюгата стрептавидина с полимерной пероксидазой из хрена обладает максимальной чувствительностью и позволяет определять вирус в экстрактах листьев зараженных растений в разведении до 1/12000.

Ключевые слова:, вирус некротического пожелтения жилок листьев сахарной свеклы, моноклональные антитела, иммуноферментная тест-система.

Вирус некротического пожелтения жилок листьев сахарной свеклы (ВЫУ УУ) относится к группе фуровирусов. Вызываемая данным вирусом ризомания отмечена в последнее время в значительной части регионов, связанных с выращива-нием сахарной свеклы, и на сегодняшний день представляет серьезную проблему. ВИУУУ переносится сложным путем с участием почвенного гриба Ро1утуха Ьеше. Данный вирус содержит четыре типа вирионов, инкапсулирующих одноце-почечные молекулы РНК разной длины. Было показано, что по крайней мере одна молекула РНК играет существенную роль в переносе вируса от гриба к корням растения, а другая участвует в дальнейшем распространении заболевания [1].

Сокращения: MA - моноклональные антитела; BNYVV -вирус некротического пожелтения жилок листьев сахарной свеклы; ПХ - пероксидаза из хрена; BS А - бычий сывороточный альбумин; PBS - фосфатно-солевой буфер (0.01 M Na-фосфэт, 0.15 M NaCl, pH 7.2); Bi - биотин; HAT-среда, содержащая 10

4 iVI гипоксантин, 4 x 10

7 M амииоптерин и 1.6 x 10

5 M тимидин; HT - среда, содержащая КГ4 M гипоксантин и 1.6 x 10

s M тимидин; Str -стрептаеидин.

* Автор для переписки.

В последние годы было проведено интенсивное иммунохимическое изучение ВИУУУ с использованием как поликлональных, так и моноклональных антител 2. Для локализации эпитопов па поверхности вириона была использована имму-ноэлектронная микроскопия [5], а антигенный анализ белка оболочки вируса был проведен с применением синтетических перекрывающихся пептидов [6].

Наиболее перспективный подход к снижению потерь урожая, обусловленных присутствием ВЫУУУ, заключается в использовании устойчивых сортов, что в свою очередь требует разработки тест-системы для выявления возбудителя заболевания. На сегодняшний день диагностические наборы для обнаружения ВЫУУУ методом ИФА на основе поликлональных антител выпускаются фирмой ВоеЬгк^ег-МаппЬеш. Максимальная чувствительность коммерческих тест-систем составляет 5 - 10 нг/мл. В России аналогичные диа-гностикумы не производятся. Значительный экономический ущерб, связанный с распространением ризомании, с одной стороны, и трудности получения достаточного количества высокоочищепно-го вируса для производства высококачественных

Рис. 1. Определение РШУУУ в экстрактах листьев зараженных растений с помощью различных вариантов прямого сэндвич-ИФА с использованием конъюгата к4-ПХ (/). Для сенсибилизации твердой фазы использовали МА (а), ЯЗ (б), Я4 (в), (г). 2 - отрицательный контроль с экстрактом листьев растений, инфицированных вирусом табачной мозаики.

сывороток - с другой, обусловили необходимость создания тест-системы для диагностики вируса на основе моноклональных антител (МА). Решение этой задачи и явилось целью данной работы.

Таблица 1. Некоторые характеристики гибридом, продуцирующих МА к ВЫУУУ

Гибридом а Субкласс иммуноглобулинов Титр моноклональных антител в жидкости

К2 ^С2а 8 х 103 10б

Я4 16С1 Ю4 5 х 106

К5 ^С2а 104 5 х 106

Таблица 2. Чувствительность определения В]МУУУ в различных вариантах прямого сэндвич-ИФА (максимальное разведение экстракта листьев зараженных растений, дающее положительную реакцию)

Сенсибилизирующие МА Конъюгат

1/320 1/1000 1/1000

ЯЗ 1/200 1/1000 1/700

Я4 1/300 1/1000 1/700

Я5 1/200 1/640 1/320

В результате трех независимых гибридизаций было получено 11 клонов, продуцирующих МА к Иммунизацию животных проводили очищенным антигеном ВИУУУ; на этапе тестирования гибридных клонов в качестве антигена был использован экстракт из листьев зараженных растений. 7 клонов, обладающих наибольшей пролиферативной активностью и максимальным титром антивирусных антител, были отобраны для дальнейшего клонирования. Некоторые характеристики пяти стабильных гибри-домных линий, полученных после двукратного клонирования, представлены в табл. 1.

При разработке тест-системы для обнаружения ВИУУУ был использован подход, примененный ранее при создании диагностикума для вируса штриховатой мозаики ячменя [7]. Предварительно были проведены эксперименты по определению оптимальных условий для сорбции МА на твердую фазу. Показано, что наилучшие результаты достигаются при нанесении МА в карбонат-би-карбонатном буфере при рН 9.6; оптимальная концентрация покровных МА составляла 1 - 2 мкг/мл. Затем были испытаны все возможные комбинации пяти сенсибилизирующих и трех детектирующих МА для обнаружения BNYVV методом прямого сэндвич-ИФА (моноклональный сэндвич-ИФА). Установлено, что максимальная чувствительность достигалась в трех вариантах прямого сэндвич-ИФА с использованием конъюгата И4-ПХ и МА И1, ИЗ или 13.4 для сенсибилизации твердой фазы (табл. 2). В этом случае BNYVV обнаруживался в экстрактах листьев инфицированных растений в разведении до 1/1000. При этом практически отсутствовала реакция с экстрактами листьев здоровых или инфицированных вирусом табачной мозаики растений (рис. 1а - 1в). Обладающая такой же чувствительностью система Ш-К.5-ПХ оказалась менее пригодной для выявления BNYVV, так как в этом случае наблюдался сравнительно высокий уровень неспецифических реакций (рис. 1г).

Для усиления ферментативного сигнала и повышения чувствительности разрабатываемой тест-системы была использована стрептавидин-биотиновая система. Как известно, биотинилиро-вание антител происходит в мягких условиях и не приводит к нарушению биологических функций макромолекул [8], тогда как введение ферментной метки непосредственно в детектирующие МА зачастую ухудшает способность антител к связыванию с антигеном 10. Стрептавидин, имеющий нейтральную изоэлектрическую точку и не несущий углеводных остатков, позволяет существенно уменьшить уровень неспецифических реакций по сравнению с использованием для таких целей ави-дина. При замене в прямом сэндвич-ИФА конъюгата И4-ПХ на биотинилированные МА 114-В1 с использованием в качестве детектирующего

реагента конъюгата стрептавидина с ПХ чувствительность обнаружения BNYVV увеличилась в 2 раза. Дальнейшее усиление ферментативного сигнала может быть достигнуто при применении стрептавидина, конъюгированного с гомополи-мером ПХ [12]. Данный способ повышения чувствительности иммуноанализа имеет такие неоспоримые преимущества, как простота постановки реакции, минимальные изменения схемы эксперимента и отсутствие необходимости в дополнительном лабораторном оборудовании. Были использованы конъюгаты стрептавидина с пероксидазой из хрена разной степени полимеризации, включая 20, 40 и 80 (Str-nX20, Str-nX40 и Str-nX80). Показано, что наибольшая чувствительность анализа, в 10 - 12 раз превосходящая чувствительность прямого сэндвич-ИФА, достигается при введении в систему конъюгата Str-nX40 (рис. 2). Два других конъюгата, значительно различающиеся по степени полимеризации ПХ, тем не менее дают одинаковое усиление сигнала и повышают чувствительность тест-системы в 5 - 6 раз по сравнению с использованием моноклонального конъюгата. Возможно, это связано с особенностями эпитопной структуры таких сложных в антигенном отношении объектов, как вирусы растений. Предложенный вариант иммунодиагностической тест-системы для выявления BNYVV обладает достаточно высокой чувствительностью и может быть использован для широкомасштабных работ, связанных с диагностикой ризомании.

В работе использовали среды DMEM, НАТ-DMEM, HT-DMEM, телячью эмбриональную сыворотку (Gibco, Англия), адъювант Фрейнда (Calbiochem, США), кроличьи поликлональные антитела к BNYVV (Всероссийский НИИ защиты растений, Санкт-Петербург), кроличьи антимышиные антитела, конъюгированные с пероксидазой из хрена (DAKO-Immunoglobulines, Дания), пероксидазу из хрена (Boehxinger-Mannheim, ФРГ), opmo-фенилендиамин, пристан, Твин-20, N-окси-сукцинимидный эфир аминогексаноилбиотина (Sigma, США), полиэтиленгликоль-1500, диме-тилсульфоксид (Merck, ФРГ), бычий сывороточный альбумин, Тритон Х-100, трис (Serva, ФРГ), белок-А-сефарозу (Pharmacia, Швеция), 96-лу-ночные планшеты для иммуноанализа (Linbro, Flow Lab, Англия), 24- и 96-луночные планшеты для культур клеток (Flow Lab, Англия), конъюгаты стрептавидина с полимерной пероксидазой из хрена (SDT Inc., Россия).

Накопление и выделение BNYVV. Для получения МА был использован из

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

НОВИКОВ В. К., ПАВЛОВА И. С., ПЛАКСИН Д. Ю., СУХАЧЕВА Е. А. — 1995 г.

ЕРОХИНА Т. Н. — 1995 г.

ЖЕРДЕВ А. В., ЗИНЧЕНКО А. А., ЛЮБАВИНА И. А., ПАВЛОВА И. С. — 1997 г.

АГРАНОВСКИЙ А.А., АТАБЕКОВ И.Г., ВИНОГРАДОВА С.В., КАМИОНСКАЯ А.М., РАВИН Н.В., РАКИТИН А.Л., СКРЯБИН К.Г. — 2011 г.

Сахарная свекла является одной из наиболее важных сельскохозяйственных культур, ведь ценность ее трудно преувеличить: она идет на изготовление сахара и на корм скота. Высокое содержание в свекле сахарозы делает ее привлекательной для вредителей, на любом этапе вегетации она подвержена поражению болезнями, поэтому крайне важно научиться определять и предотвращать данные проблемы.

Болезни сахарной свеклы

Далее мы перечислим основные заболевания и их симптомы, а также озвучим меры борьбы с ними и укажем необходимые для этого препараты.

Фомоз


На листьях возникают округлые желто-коричневые некротические пятна, постепенно они разрастаются и сливаются. Листья со временем отмирают. При хранении свеклы болезнь интенсивно развивается к весне. Корнеплоды начинают гнить, а на срезе видны пустоты и твердые черные ткани.

Протравливание семян, подкормка минеральными удобрениями, своевременная уборка, очистка полей от послеуборочных остатков.

Мучнистая роса


Этой болезнью сахарная свекла обычно заражается в июле, так как гриб-возбудитель интенсивно развивается при сухой и жаркой погоде и может снизить урожайность на 20-30%.

На листовых пластинах появляется белый рассыпчатый налет, напоминающий муку. Листья постепенно желтеют и отмирают.

Церкоспороз


Одна из главных болезней сахарной свеклы. Другое название – пятнистость листьев. Встречается в регионах сеяния повсеместно. Болезнь может снизить количество сахара в плодах до 50% и погубить до 70% всего урожая.

Мелкие бурые или серые пятна на листьях, скручивание листовой пластины, усыхание и отмирание листьев.

Соблюдение севооборота, известкование кислых почв, использование качественного материала для посадки.

Ризомания


Вызывается вирусом некротического пожелтения жилок. Одна из самых масштабных болезней, поражающих сахарную свеклу. Передается через почву, переносится паразитическим растением повиликой и очень жизнеспособна – патоген может жить несколько лет.

Дезинфекция инвентаря, качественная уборка растительных остатков, применение фунгицидов.


Поражает проростки, задерживая всходы. Надземная часть растения увядает, сахаристость корнеплодов значительно снижается.

Изреженность всходов, утончение стеблей, пожелтение листьев, побурение и загнивание корня.

Борьба с сорняками, обогащение почвы удобрениями, соблюдение севооборота, применение фунгицидов.

Вредители сахарной свеклы

Далее перечислены наиболее опасные для свеклы насекомые-вредители. Вы узнаете, как они выглядят и какими способами с ними можно бороться.

Совки


Подгрызающие, или листогрызущие совки – серьезный вредитель. Одна гусеница способна за день уничтожить до 15 растений сахарной свеклы, а отложить одна самка способна от 500 до 2000 яиц.

Разновидностей совок достаточно много, гусеницы обычно землисто-серого цвета, до 4-5 см в длину. Яйца водянисто-белые, овальной формы. Листья выгрызаются до жилок.

Использование инсектицидов, соблюдение севооборота и оптимальных сроков посева, своевременное уничтожение сорняков.


Свекловичная листовая тля – серьезный вредитель, который может нанести сильный ущерб посадкам сахарной свеклы. Многочисленные колонии высасывают сок из листьев, а также переносят вирусы желтухи и мозаики. В результате снижается масса и сахаристость корнеплодов.

Тело размером около 2 мм, овальной формы, черно-коричневого цвета. Поврежденные листья скручиваются, отстают в развитии. На листьях можно увидеть клейкие выделения, иногда с плесенью.

Уничтожение сорняков, окашивание краевых участков поля, освобождение лесополос от калины и бересклета (растений-хозяев). Комплексное применение инсектицидов.

Свекловичная блошка


Эти жуки, особенно при сухой и жаркой погоде, наносят ощутимый урон посевам свеклы. Уже в апреле-мае они расселяются на молодые ростки, выгрызают ткань растения, оно усыхает и гибнет либо сильно задерживается в развитии.

Инсектициды, которыми обрабатывают как всходы, так и семена перед посевом. Качественная уборка растительных остатков, под которыми блошки могут зимовать. Соблюдение сроков посевов и уничтожение сорняков.

Долгоносик


Свекольный долгоносик, или свекольный слоник – прожорливый опасный вредитель. Он перегрызает и съедает маленькие ростки. Встречается повсеместно. Два-три жука могут полностью уничтожить молодые всходы свеклы на квадратном метре.

Взрослая особь длиной около 1,5 см, отличительной особенностью является наличие длинного хоботка. Поврежденные растения желтеют, листья засыхают, масса плода уменьшается.

Регулярная обработка междурядий, уничтожение сорняков до всходов свеклы, рыхление почвы, опрыскивание посадок инсектицидами.

Для того чтобы урожай сахарной свеклы радовал обильностью, необходима постоянная работа на поле, ведь болезни и вредители сахарной свеклы способны полностью уничтожить посевы. Крайне важно удаление сорняков, с этой целью используют гербициды: довсходовые, которые борются с сорными растениями через почву, а также послевсходовые, направленные на уничтожение уже взошедших сорняков. Использование фунгицидов и инсектицидов дает возможность сохранить посевы, а протравливание семян минимизирует риски занесения болезней.

Немаловажно соблюдать севооборот, ведь правильное чередование культур – одно из лучших средств борьбы с болезнями и вредителями.

Читайте также:

Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!
При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.

Copyright © Иммунитет и инфекции

Свекла некротический вирус пожелтения жилок (BNYVV)
классификация Вирус
Группа: