Вирус гепатита с его инактивация

Наличие большого числа источников инфекции среди населения является фактором риска инфицирования во время незащищенных половых контактов, при введении внутривенных наркотических препаратов, а также при несоблюдении профилактических мер в организациях коммунально-бытового назначения, медицинских лечебно-профилактических учреждений, в том числе негосударственной формы собственности.

ЧТО ТАКОЕ ВИРУС ГЕПАТИТА В

Вирус гепатита B относится к ДНК-содержащим, имеет размеры 42 - 45 нм.

ЧЕМ ОПАСEН ВИРУС ГЕПАТИТА В

Опасность вирусного гепатита В обусловлена его высокой инфекционностью, всеобщей восприимчивостью населения, повсеместностью распространения, высокой частотой хронизации, тяжестью течения, стойким сохранением показателей летальности и ассоциированным с вирусом гепатита В первичным раком печени, высоким социально-экономическим ущербом.

Так, количество летальных случаев составляет 0,5 – 0,7 % от числа заболевших острым гепатитом В. Риск перехода острого гепатита В в хронический процесс у новорожденных составляет от 25 до 90 %, а у подростков и взрослых 5- 10 %. У 30 % пациентов с хроническим гепатитом В высокой активности в среднем через 30 лет развивается цирроз печени, а у 13-67 % заболевание приобретает в течение жизни прогрессирующее течение, что приводит к формированию гепатоцеллюлярной карциномы. С момента первичного инфицирования гепатитом В до развития цирроза печени может проходить 40, а гепатоцеллюлярной карциномы – 50 лет.

К тому же, по мнению большинства исследователей, риск внутрибольничного инфицирования гепатитом В выше, чем гепатитом С и ВИЧ-инфекцией. Например, при однократном проколе иглой риск инфицирования медработника составляет в случае наличия у пациента гепатита В (10-60 %), гепатита С (1,8-10 %), ВИЧ-инфекции (0,1-0,2 %).

УСТОЙЧИВОСТЬ ВИРУСА ГЕПАТИТА В К ФАКТОРАМ ВНЕШЕНЕЙ СРЕДЫ, ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИМ СРЕДСТВАМ

Возбудитель в цельной крови и ее препаратах сохраняется годами, при температуре -20 °C - 15 лет. Поверхностный антиген вируса обнаруживают на постельных принадлежностях, медицинских инструментах, загрязненных сывороткой крови, при хранении в условиях комнатной температуры в течение нескольких месяцев.

Вирус инактивируется при кипячении в течение 30 мин., при прогревании при температуре 60 °C в течение 10 ч. На него губительно действуют перекись водорода, хлорамин, формалин и другие дезинфицирующие средства в соответствующей концентрации. Вирус не чувствителен к кислым значениям pH, но разрушается в щелочной среде.

Для дезинфекции поверхностей больничной среды и изделий медицинского назначения используют дезинфицирующие средства с вирулицидным действием (как правило концентрация активного вещества выше, чем для бактериальных инфекций), тестированных на двух тест-вирусах: вирусе полиомиелита I типа (вакцинном штамме Sabin (LSc-2ab) и аденовирусе V типа (штамм Аденоид 75) либо на вирусе гепатита B уток [5].

Все манипуляции, которые могут привести к повреждению кожных покровов и слизистых оболочек, осуществляются с применением стерильных инструментов и материалов. Изделия многократного применения перед стерилизацией подлежат предстерилизационной очистке

Возможно возникновение резистентности вируса гепатита В к противовирусным препаратам, особенно при длительной лекарственной терапии пациентов.

КАКИЕ БОЛЕЗНИ ВИРУСА ГЕПАТИТА В ВЫЗЫВАЕТ У ЛЮДЕЙ?

Вирус гепатита В вызывает заболевания острым и хроническим гепатитом В, а также вирусоносительство.

Источниками инфекции являются больные острым и хроническим гепатитом B, а также хронические вирусоносители.

К естественным путям передачи вирусного гепатита В относятся:

- перинатальное инфицирование (пренатально, интранатально, постнатально) ребенка от матерей - носителей HBsAg или больных ОГВ в третьем триместре беременности, а чаще ХГВ, риск которого особенно велик при наличии HBeAg в крови у женщин с персистирующей HBs-антигенемией; в подавляющем большинстве случаев заражение происходит при прохождении родовых путей матери (интранатально);

- инфицирование во время половых контактов;

- передача вируса от источника инфекции (больной острой, хронической формой гепатита В и носитель HbsAg) к восприимчивым к инфекции лицам в семьях, ближайшем окружении, организованных коллективах за счет реализации контактов в быту посредством контаминированных вирусом различных предметов гигиены (бритвенных и маникюрных принадлежностей, зубных щеток, полотенец, ножниц и т.д.).

Основными факторами передачи возбудителя являются кровь, биологические секреты, сперма, вагинальное отделяемое, слюна, желчь и др.

Реализация искусственных путей передачи гепатита В может происходить в медицинских организациях во время проведения лечебно-диагностических парентеральных манипуляций.

При этом инфицирование осуществляется через медицинский, лабораторный инструментарий и изделия медицинского назначения, контаминированные вирусного гепатита В. Заражение может происходить также при трансфузиях крови и/или ее компонентов при наличии в них возбудителя.

В передаче вирусного гепатита В значительное место занимают немедицинские инвазивные процедуры. Среди таких манипуляций доминирующее положение занимает парентеральное введение психоактивных препаратов. Возможно заражение при нанесении татуировок, выполнении ритуальных обрядов и других процедур (бритье, маникюр, педикюр, проколы мочки уха, косметические процедуры и др.).

Прививочная компания против гепатита В, а также ряд других профилактических мероприятий существенно повлияли на частоту заболеваемости гепатитом В. Так, по сравнению с 1999 годом заболеваемость острым гепатитом В снизилась в 33,2 раза, носительства в 5,6 раз.

ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ И ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ

Профилактика гепатита В должна проводиться комплексно в отношении источников вируса, путей и факторов передачи, а также восприимчивого населения, включая лиц групп риска.

Меры в отношении источника возбудителя инфекции

Больные с установленным диагнозом острым гепатитом В, микст-гепатитами, а также больные хроническим гепатитом В в период обострения подлежат госпитализации в инфекционные отделения.

Все переболевшие острыми формами гепатита В и больные хроническими вирусными гепатитами подлежат обязательному диспансерному наблюдению в медицинских организациях.

Меры в отношении путей и факторов передачи

Заключительная дезинфекция в очагах вирусного гепатита B (острых, латентных и хронических форм) проводится в случае госпитализации больного в стационар, его смерти, переезде на другое место жительства, выздоровлении.

Заключительная дезинфекция (в квартирах, в общежитиях, в детских образовательных учреждениях, гостиницах, казармах и др.) проводится населением под руководством медицинских работников.

Текущая дезинфекция в очагах острого вирусного гепатита B осуществляется с момента выявления больного до его госпитализации. В очагах хронического гепатита В вне зависимости от выраженности клинических проявлений - проводится постоянно. Текущую дезинфекцию осуществляет лицо, ухаживающее за больным, или сам больной под руководством медицинского работника.

Дезинфекции подвергаются все предметы личной гигиены и вещи, непосредственно соприкасающиеся с кровью, слюной и другими биологическими жидкостями больного.

Бритвенные и маникюрные принадлежности, зубные щетки, полотенца, ножницы, белье больного и т.д. кипятят в течение 15 минут от момента закипания в 2-процентном мыльно-содовом растворе или растворе любого моющего средства (20 г на 1 л воды). Белье, полотенца после этого стирают.

Дезинфекцию с использованием химических средств проводят способом погружения изделий в раствор в емкостях из стекла, пластмасс или покрытых эмалью без повреждений. Разъемные изделия дезинфицируют в разобранном виде. Каналы и полости изделий заполняют дезинфицирующим раствором.

Для изделий и их частей, не соприкасающихся непосредственно с больным, может быть использован способ двукратного протирания салфеткой из бязи или марли, смоченной в растворе дезинфицирующего средства.

Обработка проводится дезинфицирующими средствами, обладающими вирулицидным, активным в отношении вирусного гепатита В действием и разрешенными к применению в установленном порядке. Раствор и применение проводится в соответствии со специальным разделом инструкции по применению конкретного дезсредства. При этом, средства для бытового применения, как правило не имеющие инструций, не должны быть использованы.

Меры в отношении контактных с больными гепатитом B лиц

В очагах острым гепатитом В, за лицами, общавшимися с больным, устанавливается медицинское наблюдение, проводится иммунизация против данной инфекции.

Профилактика гепатита B в организациях бытового обслуживания

В учреждениях бытового обслуживания (парикмахерские, маникюрные кабинеты и др.) должны подвергаться обеззараживанию, очистке и стерилизации все инструменты и предметы, которые могут быть возможным фактором передачи вируса. К обработке этих предметов и использованию растворов предъявляют такие же требования, как и в медицинских учреждениях.

Специфическая профилактика гепатита B

Ведущим мероприятием в профилактике гепатита B является вакцинопрофилактика.

Вакцинация населения против гепатита B проводится в соответствии с Национальным календарем профилактических прививок, календарем профилактических прививок по эпидемическим показаниям и инструкциями по применению медицинских иммунобиологических препаратов.

Основные факты

Гепатит А — это вирусное заболевание печени, течение которого может быть разным, от легкого до тяжелого.
Передача вируса гепатита А (ВГА) происходит в результате приема зараженных пищевых продуктов или воды или при непосредственном контакте с инфицированным лицом.
Почти у всех пациентов с гепатитом А достигается полное излечение и формируется пожизненный иммунитет. Однако в очень редких случаях заражение вирусом гепатита А может приводить к фульминантному гепатиту с летальным исходом.
По оценкам ВОЗ, в 2016 г. от гепатита А умерло приблизительно 7 134 человека (что составляет 0,5% смертности от вирусного гепатита).
Риск заражения гепатитом А связан с отсутствием безопасной воды, а также с плохой санитарией и несоблюдением правил гигиены (например, гигиены рук).
В странах с низким риском заражения гепатитом А через пищевые продукты и воду вспышки инфекции отмечаются у мужчин, имеющих половые контакты с мужчинами (МСМ), и лиц, употребляющих инъекционные наркотики (ЛУИН).
Эпидемии могут быть продолжительными и наносить значительный экономический ущерб.
Для профилактики гепатита А имеется безопасная и эффективная вакцина.
Самыми эффективными средствами борьбы с этой болезнью являются безопасное водоснабжение, безопасные пищевые продукты, улучшение санитарии, мытье рук и вакцина против гепатита А. Представители групп высокого риска, например лица, совершающие поездки в страны с высокой распространенностью инфекции, мужчины, имеющие половые контакты с мужчинами, и потребители инъекционных наркотиков могут пройти вакцинацию.

Гепатит А — заболевание печени, вызываемое вирусом гепатита А (ВГА). Вирус распространяется главным образом при потреблении неинфицированным (и невакцинированным) лицом продуктов питания или воды, загрязненных фекалиями зараженного человека. Это заболевание тесно ассоциируется с зараженной водой или продуктами питания, плохой санитарией, несоблюдением правил личной гигиены и анально-оральным сексом.

В отличие от гепатитов B и C , гепатит А не вызывает хронических заболеваний печени и редко приводит к летальному исходу, но может вызывать тяжелые симптомы и фульминантный гепатит (острую печеночную недостаточность), который часто является смертельным. По оценкам ВОЗ, в 2016 г. всего в мире от гепатита А умерло 134 человека (что составляет 0,5% смертности от вирусного гепатита).

Во всем мире гепатит А возникает как в виде единичных случаев, так и в виде эпидемий, которые имеют тенденцию к цикличности. Вирус гепатита А является одной из наиболее частых причин пищевой инфекции. Эпидемии, связанные с загрязненной пищей или водой, могут иметь взрывной характер, как, например, эпидемия в Шанхае в 1988 г., от которой пострадало порядка 300 000 человек 1 . Они также могут быть продолжительными, затрагивая отдельные местные сообщества в течение нескольких месяцев в результате передачи инфекции от человека к человеку. Вирус гепатита А выживает в окружающей среде и может оставаться жизнеспособным даже несмотря на воздействие различных способов обработки пищевых продуктов, обычно используемых для инактивации бактериальных патогенов и/или борьбы с ними.

Это заболевание может иметь серьезные социально-экономические последствия для населения. Лицам, которые выздоравливают после болезни, могут потребоваться недели или месяцы для возвращения к работе, учебе или повседневной жизни. Значительный ущерб может быть нанесен предприятиям общественного питания, которые в представлении населения могли стать причиной эпидемии, и производительности труда на местном уровне в целом.

Эпидемиологическая ситуация

Районы географического распространения можно подразделить на территории с высоким, средним или низким уровнем инфицирования гепатитом А. Однако заражение не означает болезнь, поскольку инфицированные дети младшего возраста не испытывают никаких выраженных симптомов.

В странах с низким и средним уровнем дохода, в которых санитарные условия и санитарно-гигиенические нормы не отвечают надлежащим требованиям, инфекция широко распространена и большинство детей (90%) заражается вирусом гепатита А в возрасте до 10 лет, чаще всего без симпт Районы с высоким уровнем инфицирования омов2. Эпидемии — нетипичное явление, потому что дети более старшего возраста и взрослые, как правило, обладают иммунитетом. В этих районах показатели заболеваемости с клиническими симптомами находятся на низком уровне, а вспышки заболевания являются редкостью.

В странах с высоким уровнем дохода и хорошими санитарно-гигиеническими условиями показатели инфицирования являются низкими. Заболевание может возникать среди подростков и взрослых из групп высокого риска, таких как потребители инъекционных наркотиков, мужчины, имеющие половые контакты с мужчинами, лица, выезжающие в районы с высокой эндемичностью, а также среди изолированных групп населения, таких как закрытые религиозные общины. В Соединенных Штатах Америки большие вспышки заболеваний были зарегистрированы среди бездомных.

В странах со средним уровнем дохода и районах с различными санитарно-гигиенические условиями многие лица не подвергаются заражению в раннем детстве и достигают взрослого возраста без иммунитета. Таким образом, улучшение экономических и санитарно-гигиенических условий иногда приводит к увеличению числа взрослых лиц, которые никогда не были инфицированы и не обладают иммунитетом. Тем самым в таких районах повышенная восприимчивость в старших возрастных группах может приводить к более высокому уровню заболеваемости и крупным вспышкам заболевания.

Вирус гепатита А передается главным образом фекально-оральным путем; то есть при употреблении неинфицированным лицом пищевых продуктов или воды, загрязненных фекалиями зараженного лица. В семьях это случается через грязные руки при приготовлении пищи для членов семьи инфицированным лицом. Вспышки инфекции, передающейся через воду, случаются не часто и обычно связаны с загрязнением воды канализационными стоками или неадекватной очисткой воды.

Вирус также может передаваться при тесном физическом контакте (например, при анально-оральном сексе) с инфицированным лицом, при этом бытовые контакты не способствуют распространению вируса.

Симптомы

Инкубационный период гепатита А обычно составляет 14–18 дней.

Симптомы гепатита А могут быть различны — от легких до тяжелых — и могут включать в себя лихорадочное состояние, недомогание, потерю аппетита, диарею, тошноту, ощущения дискомфорта в области брюшной полости, потемнение мочи и желтуху (пожелтение кожи и белков глаз). Не у всех инфицированных лиц будут проявляться все симптомы.

Риск развития симптоматической формы инфекции в результате инфицирования ВГА напрямую связан с возрастом. Тяжесть заболевания и смертность увеличиваются в более старших возрастных группах. У детей в возрасте до 6 лет инфекция обычно носит бессимптомный характер, и только у 10% развивается желтуха. У других детей и взрослых инфекция обычно протекает с появлением клинических симптомов, желтуха наблюдается в более чем 70% случаев. Гепатит А иногда рецидивирует. Сразу после перенесенной болезни пациент заболевает вновь и переносит еще один острый эпизод. Тем не менее за этим следует выздоровление.

Кто подвержен риску?

Вирусом гепатита А могут заразиться лица, которые не прошли вакцинацию или ранее не были инфицированы ВГА. В районах с широким распространением вируса (высокой эндемичностью), большинство случаев инфицирования гепатитом А происходит в раннем детстве. Факторы риска включают в себя:

плохую санитарию;
отсутствие безопасного водоснабжения;
проживание в семье с инфицированным лицом;
сексуальное партнерство с лицом, инфицированным острым гепатитом А
рекреационное использование психоактивных веществ;
сексуальные контакты между мужчинами;
поездки в районы с высокой эндемичностью без предварительной иммунизации.

Диагностика

Случаи гепатита А клинически не отличаются от других видов острого вирусного гепатита. Конкретный диагноз ставится путем выявления в крови антител иммуноглобулина G (IgM), специфичных для ВГА. Дополнительные исследования включают в себя полимеразную цепную реакцию с обратной транскрипцией (RT-PCR) для обнаружения РНК вируса гепатита А и могут потребовать привлечения специализированных лабораторий.

Лечение

Специального лечения гепатита А не существует. Восстановление после симптомов инфекции может быть медленным и занимать несколько недель или месяцев. Главное — избегать неоправданного назначения лекарственных средств. Ацетаминофен/парацетамол и лекарства против рвоты не показаны.

При отсутствии острой печеночной недостаточности госпитализация не требуется. Лечение направлено на поддержание комфорта и надлежащего баланса питания, включая восполнение потерь жидкости, вызываемых рвотой и диареей.

Профилактика

Наиболее эффективные средства борьбы с гепатитом А — это улучшение санитарии, повышение безопасности пищевых продуктов и расширение охвата вакцинацией.

Распространение гепатита А можно снизить при помощи следующих мер:

обеспечение достаточного снабжения безопасной питьевой водой;
надлежащее удаление сточных вод внутри населенных пунктов; и
соблюдение правил личной гигиены, таких как регулярное мытье рук перед едой и после посещения туалета.

На международном рынке имеются несколько инактивированных инъекционных вакцин против гепатита А. Все они похожи друг на друга в плане эффективности и набора побочных эффектов. Ни одна вакцина не была лицензирована для детей возраста младше одного года. В Китае также применяется живая оральная вакцина.

Почти 100% населения вырабатывает защитный уровень антител в течение одного месяца после одной дозы вакцины. Даже после контакта с вирусом одна доза вакцины, введенная в течение двух недель после контакта, вызывает защитное действие. Тем не менее производители рекомендуют две дозы для обеспечения долгосрочной защиты в течение 5–8 лет после вакцинации.

На данный момент миллионы лиц во всем мире были вакцинированы инактивированной инъекционной вакциной против гепатита А без серьезных нежелательных явлений. Вакцина может вводиться в рамках плановых программ иммунизации детей, а также с другими вакцинами, рекомендуемыми при поездках.

Вакцинация населения

Вакцинация против гепатита А должна быть частью комплексного плана по профилактике вирусного гепатита и борьбе с ним. При планировании крупномасштабных программ вакцинации следует проводить тщательную оценку экономической эффективности и рассматривать альтернативные или дополнительные меры профилактики, такие как улучшение санитарии, а также санитарное просвещение в целях более эффективного соблюдения правил гигиены.

Вопрос о целесообразности включения вакцины в программу плановой вакцинации детей зависит от местных условий. Следует учитывать долю восприимчивых к инфекции людей в популяции и уровень воздействия вируса. В целом всеобщая вакцинация детей наиболее целесообразна в странах со средним уровнем эндемичности. Страны с низкой эндемичностью могут рассмотреть возможность вакцинации отдельных групп высокого риска среди взрослого населения. В странах с высокой эндемичностью использование вакцины ограничено, поскольку большинство взрослых обладает естественным иммунитетом.

По состоянию на май 2019 г. 34 страны использовали или планировали внедрить вакцину против гепатита А в рамках плановой вакцинации детей из определенных групп риска.

В то время как во многих странах используется двухдозовый курс иммунизации инактивированной вакциной против гепатита А, другие страны могут рассмотреть возможность включения в свои графики вакцинации одну дозу такой вакцины. Кроме того, в некоторых странах вакцинация рекомендуется лицам, подверженным высокому риску заболевания гепатитом А, в том числе:

потребителям рекреационных наркотиков;
лицам, отправляющимся в страны, в которых вирус эндемичен;
мужчинам, имеющим половые отношения с мужчинами; и
пациентам с хроническими заболеваниями печени (по причине повышенного риска серьезных осложнений при заражении гепатитом А).

В отношении иммунизации в целях реагирования на вспышки рекомендации по вакцинации против гепатита А также должны составляться с учетом местных особенностей. Необходимо также провести оценку практической осуществимости быстрого проведения широкомасштабной кампании иммунизации.

Кампании по вакцинации для борьбы со вспышками в компактно проживающих группах являются наиболее эффективными в небольших группах населения на ранних стадиях вспышек при достижении высокого охвата нескольких возрастных групп. Работа по вакцинации должна сопровождаться санитарным просвещением в целях улучшения санитарии, соблюдения правил гигиены и повышения безопасности пищевых продуктов.

Деятельность ВОЗ

Для оказания поддержки странам в достижении глобальных целей по борьбе с гепатитом в рамках Повестки дня в области устойчивого развития на период до 2030 г. ВОЗ ведет работу в следующих областях:

повышение осведомленности, содействие созданию партнерств и мобилизация ресурсов;
формулирование политики, основанной на фактических данных, и получение данных для практических действий;
профилактика передачи инфекции; и
расширение охвата услугами по скринингу, оказанию помощи и лечению.

Начиная с 2011 г. ВОЗ совместно с национальными правительствами, гражданским обществом и партнерами организует ежегодные мероприятия, приуроченные к проведению Всемирного дня борьбы с гепатитом (в рамках одной из девяти основных ежегодных кампаний в области здравоохранения) в целях повышения осведомленности и лучшего понимания проблемы вирусного гепатита. Дата 28 июля была выбрана в честь дня рождения ученого, лауреата Нобелевской премии, доктора Баруха Бламберга, который открыл вирус гепатита В и разработал диагностический тест и вакцину против этого вируса.

An epidemic of hepatitis A attributable to the ingestion of raw clams in Shanghai, China.
Halliday ML1, Kang LY, Zhou TK, Hu MD, Pan QC, Fu TY, Huang YS, Hu SL. J Infect Dis. 1991 Nov;164(5):852-9.
Hepatitis A virus seroprevalence by age and world region, 1990 and 2005.
Jacobsen KH, Wiersma ST. Hepatitis A virus seroprevalence by age and world region, 1990 and 2005. Vaccine 28 (2010) 6653–6657.

СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ И ОЦЕНКИ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ЛИМФОТРОПНЫХ ВИРУСОВ

Настоящий способ обнаружения лимфотропных вирусов предназначается:

для повышения достоверности определения инфицированности биологических сред вирусом гепатита В (HBV), вирусом гепатита С (HCV) или вирусом иммунодефицита человека (HIV), обладающих лимфотропизмом;
для исключения ложноотрицательных реакций при тестировании донорской крови и пациентов на предмет зараженности HBV, HCV или HIV;
для обнаружения HBV, HCV или HIV в биологическом материале (донорская кровь, плазма и другие производные крови) с концентрацией вирусных частиц ниже порога чувствительности метода ИФА или ПЦР.
для оценки жизнеспособности вирусов после воздействия химических и физических факторов, разрабатываемых и предлагаемых производителями в целях инактивации вирусов в практическом здравоохранении.

Данный способ аналогов не имеет.

Область применения: Способ обнаружения и оценки жизнеспособности лимфотропных вирусов рекомендуется для применения в диагностических лабораториях различного уровня, станциях по заготовке донорской крови и её компонентов, при контроле противовирусного эффекта химических и физических факторов.

ВВЕДЕНИЕ

Вирусы гепатита В (HBV), гепатита С (HCV) и вирус иммунодефицита человека — ВИЧ (HIV) являются антропонозными вирусами — поражают клетки только организма человека и, поэтому, вызывают заболевание только у человека. Экспериментальные модели этих инфекций не существуют. Также нет культивируемых клеточных культур, на которых in vitro можно было бы адекватно изучить цитопатогенные свойства и жизнеспособность этих вирусов.

Характеристика вирусов гепатита В, гепатита С и ВИЧ.

Вирус гепатита В (HBV) является ДНК содержащим вирусом, его репликация происходит преимущественно в гепатоцитах человека. Вирус гепатита В также обладает лимфотропными свойствами — способностью поражать и реплицироваться в лимфоцитах человека.

Вирус гепатита С (HCV) является РНК содержащим вирусом, обладающим свойством поражать и реплицироваться как в гепатоцитах, так и в лимфоцитах человека.

Вирус иммунодефицита человека (HIV) относится к оболочечным ретровирусам и является РНК-содержащим вирусом. Основными клетками-мишенями для поражения и репликации являются CD4 лимфоциты.

Следовательно, общим свойством HBV, HCV и HIV является их лимфотропизм — способность проникать и реплицироваться в лимфоидных клетках.

II ПРЕДПОСЫЛКИ ДЛЯ СОЗДАНИЯ СПОСОБА ОБНАРУЖЕНИЯ И ОЦЕНКИ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ЛИМФОТРОПНЫХ ВИРУСОВ HBV, HCV И HIV.

Исследования по изучению вопросов клиники, патогенеза, лечения и диагностики хронических вирусных гепатитов, проведенные сотрудниками лаборатории по изучению хронического инфекционного процесса (зав. проф. Гулямов Н.Г.) НИИЭМИЗ МЗ РУз, а также анализ многочисленных данных научной литературы позволили выявить, что при хронических HBV- и HCV- инфекциях выраженность вторичного иммунодефицита не имеет закономерной корреляции с характером и выраженностью воспалительных и деструктивных процессов в ткани печени. Наряду с этим имеются единичные сообщения о возможности персистирования HBV и HCV, как и HIV, в мононуклеарных клетках крови, в частности в лимфоцитах и макрофагах. Однако, оценке данного факта с позиций патогенеза и клиники вирусных гепатитов ни одним исследователем не уделено внимания.

Было получено, что при HBV- и HCV-инфекциях одновременно развиваются воспалительные процессы в печени со всеми вытекающими из этого признаками гепатита, а также вторичное иммунодефицитное состояние, выражающееся в различной степени Т-лимфопении и В-лимфопении, в диспропорциях регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов (Т-хелперов и Т-супрессоров), в снижении иммунорегуляторного индекса (ИРИ), а также в явлениях дисгаммаглобулинемии. Степень и выраженность иммунодефицита при этом не имели закономерной взаимосвязи со степенью выраженности патологического процесса в печени. У больных с хроничесими HBV- и HCV-инфекциями по истечении времени интенсивность прогрессирования патологического процесса в ткани печени может быть различной — от слабого до выраженного, но, независимо от этого, происходит стабильное и неуклонное усугубление вторичного иммунодефицита.

Диссоциация степени поражения ткани печени и глубины вторичного иммунодефицита при различных нозологических формах хронических вирусных гепатитов дали основание предположить, что гепатит и вторичный иммунодефицит при HBV- и HCV-инфекциях являются процессами сочетанными, взаимно усугубляющими, но не являются взаимно обуславливающими: то есть, HBV и HCV наряду с гепатотропностью обладают и выраженным лимфотропным свойством – неопосредованным свойством формировать вторичный иммунодефицит. При этом, различия в клинических проявлениях поражения ткани печени и глубины иммунодефицита при HBV- и HCV-инфекциях обуславливается различиями в степени выраженности гепатотропных и лимфотропных свойств этих вирусов. Именно различия в степени выраженности гепатотропного и лимфотропного свойств вирусов обуславливают различия патогенеза, клинических проявлений и характера эффекта противовирусной терапии при хронических HBV- и HCV- инфекциях в различные сроки давности болезни.

Анализ классических представлений о клинике и исходах различных заболеваний вирусной этиологии у человека позволил выявить закономерность: циклическое течение с полной элиминацией возбудителя и исходом выздоровление закономерно характерно для заболеваний, вызываемых вирусами, том числе и вирусом гепатита А (HAV), не обладающими специфическим тропизмом относительно клеток иммунной системы — лимфотропностью; формирование же хронического, рецидивирующего и постоянно прогрессирующего инфекционного процесса закономерно является характерной особенностью болезней человека, вызываемых вирусами со специфическим тропизмом относительно иммунных клеток, то есть лимфотропносьтю, чему ярким примером является ВИЧ-инфекция.

Проводя аналогию между клинико-иммунологическими показателями, вариантами клинического течения, проявлениями эффекта противовирусной терапии и исходов болезни при HAV-, HBV и HCV-инфекциях нами получено. что HAV обладает преимущественно только гепатотропным свойством и лишь в единичных случаях дает хронизацию, да и то только когда вирусный гепатит развивается на фоне уже имеющихся хронической патологии печени либо вторичного иммунодефицита. Однако явных лимфотропных свойств HAV не проявляет. Отсутствие вторичного иммунодефицита вследствие прямого гепатотропного действия HAV позволяет иммунной системе реализовать адекватную противовирусную защитную реакцию, результатом чего является элиминация HAV из организма и полное выздоровление. HBV и HCV, обладая в различной степени гепатотропным действием, одновременно оказывают прямое лимфотропное, т.е. вторичный иммунодефицит формирующее воздействие.

Именно поражение иммунных клеток и развитие вторичного иммунодефицитного состояния при HBV- и HCV-инфекциях ограничивает возможности иммунной системы в реализации полноценной противовирусной реакции макроорганизма, следствием чего является формирование хронического инфекционного процесса, имеющего сходство с таковым при ВИЧ инфекции. Тождественность лимфотропных свойств HBV и HCV, а также HIV, помимо формирования вторичного иммунодефицита, подтверждается также общностью их эпидемиологических особенностей, механизмов передачи, развитием сопутствующих оппортунистических инфекций (частые ОРЗ, ОКИ) и, особенно, развитием лимфогрануломатоза в различных тканях организма. Развитие лимфогрануломатоза в различных органах и тканях организма считается присущим именно для вирусных поражений системы лимфоидных клеток (Табл. 1, Рис. 1).

Учитывая лимфотропные свойства HBV не трудно предположить, что антигены HBV (HBsAg), независимо от их титра в сыворотке, могут постоянно и существенно в больших концентрациях персистировать в цитоплазме лимфоидных элементов. Именно это явление мы использовали для повышения достоверности и исключения ложноотрицательных результатов при ИФА-анализе.

Нами с помощью ИФА-анализа проведены исследования по одновременному тестированию на наличие HBsAg в сыворотке крови и содержимом лимфоцитов больных с подозрением на вирусный гепатит. Получено, из общего числа обследованных в 17% случаях в среднем результат ИФА-анализа сыворотки крови был ложноотрицательным, так как в содержимом лимфоцитов этих же лиц были выявлены высокие титры HBsAg. Эти результаты, неопровержимо доказывают лимфотропные свойства HBV и безусловно имеют огромное практическое значение для повышения достоверности и снижения ложноотрицательных результатов при тестировании крови на наличие HBsAg с помощью ИФА-анализа.

Итак, лимфотропные свойства HBV и HCV, также как и HIV, то есть их способность проникать и реплицироваться в лимфоцитах человека, являются фактом установленным.

Исходя из изложенного выше для разработки способа обнаружения и оценки жизнеспособности HBV, HCV и HIV нами использованы лимфотропные свойства — способность этих вирусов проникать и персистировать внутриклеточно в лимфоцитах здорового человека при их совместной инкубации in vitro.

Таблица 1. Сравнительная характеристика эпидемиологических, клинических, морфологических и иммунологических свойств HAV, HBV, HCV и HIV.

Рис. 1. Гепатотропные и лимфотропные свойства HAV, HBV, HCV и ВИЧ.

III ПРИНЦИП СПОСОБА ОБНАРУЖЕНИЯ И ОЦЕНКИ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ЛИМФОТРОПНЫХ ВИРУСОВ HBV, HCV И HIV.

Способ обнаружения и оценки жизнеспособности вирусов основан на использовании лимфотропных свойств – способности HBV, HCV или HIV проникать и персистировать в лимфоцитах здорового человека.

При инкубации биологического материала с взвесью лимфоцитов здорового человека, при наличии в биологическом материале HBV, HCV или HIV, вирусы проникают в цитоплазму лимфоцитов. Далее лимфоциты путем центрифугирования концентрируются в малом объеме и разрушаются путем замораживания.

Представленный метод состоит из следующих этапов: получение взвеси лимфоцитов из крови здорового человека, инкубация лимфоцитов с исследуемым биологическим материалом (плазма, сыворотка крови и др.) осаждение лимфоцитов путем центрифугирования, отмывание лимфоцитов в физиологическом растворе, осаждение лимфоцитов и растворение в малом объеме (в 500,0 мкл физиологического раствора), разрушение лимфоцитов путем замораживания, размораживание. Содержимое разрушенных лимфоцитов подвергается ИФА или ПЦР исследованию. Обнаружение в содержимом лимфоцитов вирусов методом ИФА или ПЦР свидетельствует о наличии и жизнеспособности вирусов в исследуемом биологическом материале.

IV СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ЛИМФОТРОПНЫХ ВИРУСОВ HBV, HCV и HIV В ЛИМФОЦИТАХ ПАЦИЕНТОВ И ДОНОРОВ КРОВИ.

Способ позволяет обнаружить вирусы у пациентов и доноров крови даже при низких титрах вирусов в плазме или сыворотке крови.

Данный метод позволяет концентрировать вирусы из 5-6 мл плазмы или сыворотки в 500 мкл объема, повысить титр вирусных частиц выше порога чувствительности метода ИФА или ПЦР. Это способствует исключению ложноотрицательных результатов ИФА или ПЦР при тестировании доноров крови или пациентов на предмет их зараженности HBV, HCV или HIV.

V СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ЛИМФОТРОПНЫХ ВИРУСОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ С СОДЕРЖАНИЕМ ОЧЕНЬ НИЗКОГО ТИТРА ВИРУСОВ.

В 2-3 чистые пробирки наливается по 6-7 мл исследуемой биологической среды (плазма, сыворотка донорской крови или другие), которая подвергается ИФА или ПЦР тестированию на предмет зараженности HBV, HCV или HIV.

В каждую пробирку добавляется по 500-600 мкл взвеси лимфоцитов здорового человека, содержимое пробирок тщательно перемешивается и ставится в термостат при 37 0 С на 6-8 часов. Каждые 0,5-1 час содержимое пробирок встряхивается и перемешивается. В процессе инкубации при наличии в исследуемой биологической среде вирусов, последние, благодаря своим лимфотропным свойствам, адгезируются на поверхности мембраны и проникают в цитоплазму лимфоцитов.
После инкубации пробирки вынимаются из термостата, в них добавляется по 2 мл физиологического раствора, смесь перемешивается и подвергается центрифугированию. При центрифугировании лимфоциты осаждаются на дно пробирок.
После центрифугирования из всех пробирок удаляется надосадочная жидкость, осадки переносятся в одну пробирку. Далее дважды проводится промывка лимфоцитов в физиологическом растворе.
После последнего центрифугирования из пробирки удаляется надосадочная жидкость, осадок, содержащий лимфоциты, разбавляется 600 мкл физиологического раствора и переносится в эпиндорф. Эпиндорф ставится в морозильную камеру холодильника. При медленном замораживании мембрана лимфоцитов разрушается и содержимое цитоплазмы выходит в раствор.
По прохождению 17-18 часов эпиндорф вынимается из морозильной камеры, оттаивается при комнатной температуре.
Содержимое эпиндорфа подвергается ПЦР или ИФА исследованию на предмет наличия маркеров HBV, HCV или HIV.

Данный метод позволяет концентрировать вирусы из 18-20 мл биологической среды в 500 мкл объема, повысить титр вирусных частиц выше порога чувствительности метода ИФА или ПЦР. Это способствует исключению ложноотрицательных результатов ИФА или ПЦР при тестировании биологических сред (плазма, сыворотка донорской крови и других) на предмет зараженности HBV, HCV или HIV.

VI СПОСОБ ОЦЕНКИ IN VITRO ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ЛИМФОТРОПНЫХ ВИРУСОВ HBV, HCV и HIV.

VII СПЕКТР ПРИМЕНЕНИЯ СПОСОБА ОБНАРУЖЕНИЯ И ОЦЕНКИ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ЛИМФОТРОПНЫХ ВИРУСОВ HBV, HCV и HIV.

Станции переливания крови: для повышения достоверности обнаружения лимфотропных вирусов гепатита В (HBV), гепатита С (HCV) и вируса иммунодефицита человека (HIV) в биологических средах (донорская кровь, плазма и другие компонеты), содержащих вирусы в концентрациях ниже порога чувствительности методов ИФА или ПЦР.
Диагностические лаборатории: для повышения достоверности и исключения ложноотрицательных результатов при тестировании на предмет зараженности HBV, HCV или HIV крови доноров или пациентов с содержанием вирусов в концентрациях ниже порога чувствительности методов ИФА или ПЦР.
Фармацевтические компании: для оценки жизнеспособности вирусов HBV, HCV или HIV после воздействия химических и физических противовирусных факторов, разрабатываемых и предлагаемых производителями в целях интактивации вирусов на различных объектах.
Способ позволяет исключить ошибки при диагностике у пациентов, при тестировании донорской крови и её компонентов на предмет зараженности лимфотропными вирусами HBV, HCV или HIV. Способ создаёт возможность объективно оценить эффекти химических или физических факторов на жизнеспособность (патогенность) лимфотропных вирусов.
Способ обнаружения и оценки жизнеспособности лимфотропных вирусов аналогов не имеет.
Данный способ зарегистрирован Министерством здравоохранения Республики Узбекистан

Читайте также: