Сделать пцр на грипп

ОРВИ и грипп имеют респираторные симптомы и общие. Их можно распознать по катаральным признакам со стороны дыхательных путей и общей симптоматике, характерной для большинства заболеваний.

Современные методы диагностики данной группы заболеваний

Различают несколько видов диагностики, которые различаются по особенностям проведения и методу выявления возбудителя. Это:

экспресс-методы;
серологическая диагностика;
вирусологическая диагностика.

Первая группа - экспресс-методики. Это быстрый способ подтвердить или исключить наличие болезни. Используется метод флюоресценции и ПЦР. Рассмотрим их подробнее.

Изучение флюоресцирующих антител - МФА. Способ основан на определении антигенов к вирусу в эпителиальных клетках носовой слизистой, на конъюнктиве (если есть глазные поражения). Антитела при действии антигена реагируют специфическим свечением, которое легко заметить при микроскопическом исследовании. Этот параметр считается маркером диагностики и является основой для подтверждения результата. Способ имеет диагностическую ценность начиная с 3 и заканчивая 5 днем заболевания. Чувствителен к таким антигенам: вирус гриппа типа А, В, вирус парагриппа, аденовирусы и возбудитель РС-инфекции. Это удобный и быстрый метод, не требующий особых ресурсов, который часто применяется в ходе диагностики.

Метод полимеразно-цепной реакции базируется на основе обнаружения участков нуклеиновых кислот генетического материала вируса и определении их групповой принадлежности по этому критерию. Методика имеет высокую диагностическую ценность, является современным и качественным способом подтверждения заболевания. Считается “золотым стандартом” диагностики, так как не дает ложных результатов и является специфическим для определения конкретных патогенов, широко применяется в стационарных и амбулаторных условиях.

Вирусологические методики основаны на чистом выделении вирусных микроорганизмов и их конкретных штаммов, за чем следует их прикрепление к клеточным культурам в лабораторных условиях. Далее следует определение вида вируса с помощью ПЦР или других реакций. Метод требует значительных ресурсов, довольно длительный и трудоемкий. Его ценность заключается в получении эпидемиологических данных и основе для научных работ. То есть, детальное изучение вируса, частоты его распространения позволяет прогнозировать эпидемическую картину, создавать вакцины. Для исследования берется мазок из носа и носоглотки. Материал пригоден в течении 3-5 дня заболевания. С помощью вирусологических методов можно определить такие возбудители:

Серологические методы диагностики - это ретроспективное исследование, которое дает точные данные относительно стадии процесса, степени активности и типа возбудителя. Используется для эпидемиологических целей.

Для анализа используется сыворотка крови, в которой необходимо определить количество и виды антител. Используется известный антиген вируса. При возникновении реакции с материалом пациента формируются иммунные комплексы антиген-антитело, что подтверждает диагноз. Для диагностики также важен прирост титра антител, для чего используются парные сыворотки.

Результат имеет высокую точность и может определиться даже если все другие методы не дали результата, так как имеет высокую чувствительность. особенно важно использование метода для стертых форм с минимальными клиническими проявлениями. Сыворотки для анализа берутся в начале болезни, а также через 10-14 дней после её завершения. Используется метод для подтверждения наличия в организме таких возбудителей: вирусы гриппа А, В, возбудители парагриппа, аденовирусы и РС-вирусы.

Наличие вируса гриппа можно подтвердить с помощью РТГА - реакции торможения геммааглютинации. Метод основан на свойстве снижения гемагглютинирующих способностях вируса, если в крови есть антитела к нему. Для этого используется кровь с эритроцитами, антиген. Препараты крови берутся парными, в начале болезни, и в период выздоровления. Метод имеет высокую диагностическую ценность, точный и чувствительный.

Виды исследуемого материала и особенности сдачи

Для диагностики используются смывы из носа, мазки из носовых ходов, носоглотки, а также препараты крови.

Забор мазка и смыва проводит медицинский персонал. Он следит за тем, чтобы препараты строго соответствовали должной локализации. Забор проходит в чистых условиях, стерильными инструментами и в стерильную тару. До того, как взять мазки пациента просят высморкаться, чтобы очистить носовые ходы от слизи. Зонд вводится легко, на глубину 2-3 см. Проводится стандартное движение по нижней части носового хода и под раковиной носа. Необходимо, чтобы забор происходит в современной клинике, где есть возможность правильно хранить и транспортировать собранный материал в короткий срок до лаборатории.

Мазок из глотки берется по похожей методике, чтобы затронуть те участки слизистой, на которой скапливается возбудитель. Перед забором необходимо легко прополоскать рот, чтобы взятый материал был чистым. Желательно забирать материал на 3-й день после начал болезни.

Нормы и отклонения от них, расшифровка результатов

Экспресс-тест дает результаты сразу после диагностики, его расшифровка не вызывает трудностей, так как определяет наличие вируса или его отсутствие в организме.

Серологические реакции более сложные и могут расшифровываться по разному: наличие антител класса М говорит об острой стадии процесса, антитела G формируются при хроническом течении.

Сроки готовности результатов

Результаты исследования готовы на 1-2 день после сдачи. Экспресс-тест дает результат сразу. Серологические методы требуют больше затрат времени для сравнения титров антител. Более быстрые методы важны для диагностического процесса, а те, что более затратны - для эпидемиологического и научного исследования.

Скорость диагностики зависит от правильности сдачи препаратов, условий лаборатории, качества реактивов.

Вовремя сданный анализ позволяет точно и быстро определить диагноз. Это - залог правильного и эффективного лечения. Если болезнь запустить, она грозит осложнениями, которые особенно опасны, если у человека грипп. Это актуально для детей, пожилых людей, беременных женщин и лиц с дефицитом иммунной системы, ведь осложнения чаще всего проявляются у них.

Лаборатория АО "СЗЦДМ" предлагает услуги, обеспечивающие комплексное и преемственное лабораторное обследование пациента

Диагностика В медицинских центрах АО "СЗЦДМ" проводят качественные диагностические исследования всего организма

Лечение Наши медицинские центры ориентированы на обслуживание пациентов в амбулаторном режиме и объединены единым подходом к обследованию и лечению пациентов.

Реабилитация Реабилитация - это действия, направленные на всестороннюю помощь больному человеку или инвалиду для достижения им максимально возможной полноценности, в том числе и социальной или экономической.

Выезд на дом Внимание! Действует акция "Выезд на дом - 0 рублей"

Профосмотры АО "СЗЦДМ" проводит профилактические осмотры работников, которые включают в себя - комплексы лечебных и профилактических мероприятий, проводимых для выявления отклонений в состоянии здоровья, профилактики развития и распространения заболеваний.

Грипп, начавшийся в этом сезоне, опасен серьезными осложнениями, поэтому очень важно как можно раньше поставить точный диагноз, чтобы назначить адекватное лечение. И тем более важно отличить грипп от других респираторных инфекций.

Также возможно заражение вирусом гриппа B и А/H3N2, а также инфицирование одним из 13 возбудителей ОРВИ, вызывающих гриппоподобные симптомы.

Инфицирование детей до 2х лет респираторно-синцитиальным вирусом, вирусами парагриппа и бокавирусом может привести к тяжелым состояниям, требующим госпитализации — крупу и бронхо-обструктивному синдрому. Респираторно-синцитиальный вирус, метапневмовирус, вирусы гриппа и аденовирусы могут вызвать бронхиты и пневмонию преимущественно у детей до 5 лет.

Определение конкретного возбудителя респираторной инфекции даёт возможность назначить адекватное лечение, точно определить прогноз, не допустить характерных для каждого возбудителя осложнений и в ряде случаев избежать необоснованной антибиотикотерапии.

Каким возбудителем инфицирован человек, может сказать только лабораторная диагностика, по клинической картине, к сожалению, это сделать невозможно. Именно такие исследования — выявление основных возбудителей респираторных инфекций предлагает Центр Молекулярной диагностики (CMD) ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора. Диагностические тесты позволяют выявить возбудителей гриппа, ОРВИ, микоплазменной и хламидийной инфекций, коклюша и других острых респираторных заболеваний в течение одного дня. Целесообразно сдавать анализы при подозрении на вирусную инфекцию в первые — вторые сутки заболевания, когда возбудитель содержится в максимальном количестве. Помните, что точный диагноз — правильное лечение!

Диагностика гриппа и острых респираторных вирусных инфекций в CMD:

Как работают диагностические тесты

Молекулярно-генетические методы, в частности полимеразная цепная реакция (ПЦР), способны обнаружить геном возбудителя в мазке из носоглотки заболевшего.

ПЦР — быстрый прямой метод диагностики, обнаруживающий специфичные участки генома микробов, то есть отличающие их друг от друга.

ПЦР увеличивает в миллиард раз количество этих участков за счет работы фермента ДНК-полимеразы, достраивающего цепи ДНК после присоединения к специфическим участкам коротких молекул олигонуклеотидов — праймеров. В процессе достраивания цепей ДНК происходит разрушение ДНК-полимеразой меченой флуоресцентными красителями молекулы – олигонуклеотидного зонда, также специфично отжигающегося на участке ДНК искомого возбудителя, и преграждающего путь движущегося фермента.

Чем больше возбудителя было в образце клинического материала пациента, тем раньше приборы будут фиксировать увеличение над пороговым значением уровня флуоресценции в процессе реакции. Анализ проводится с детекцией в режиме реального времени. Если в образце нет возбудителя, повышение уровня флуоресценции не происходит. В процессе разработки тестов они обязательно проверяются на специфичность, то есть отсутствие перекреста с другими вирусами и бактериями.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Выявление вируса гриппа серотипов А и В (Influenza virus A/B), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (РНК) вируса в образце биоматериала.

Синонимы английские

Influenza serotypes A/B, RNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Рекомендуется употребить большой объем жидкости (воды) за 8-12 часов до сбора мокроты.
Не принимать пищу, не пить и не полоскать горло в течение 2-3 часов до исследования.
За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) и носа не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не закапывать капли/спреи в нос, не жевать жевательную резинку, не курить. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Influenza virus – это оболочечный вирус, характеризующийся наличием сегментированного негативного РНК-генома и нуклеокапсида в форме спирали. Он относится к семейству Orthomixoviridae. На основании структурных различий нуклеопротеида выделяют 3 серотипа Influenza: A, B и С. Серотип A встречается как людей, так и у животных, в то время как варианты B и C поражают преимущественно людей. Именно серотип А ответственен за подавляющее большинство случаев сезонных (эпидемических) и пандемических вспышек гриппа.

Идентификация вируса гриппа должна быть осуществлена в кратчайшие сроки, что связано с высокой заразностью этого заболевания. Кроме того, эффективность противовирусных препаратов максимальна при их назначении в первые 48 часов после инфицирования, что также диктует необходимость своевременной постановки окончательного диагноза. Среди многих "быстрых" диагностических тестов особое место занимает полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (РТ-ПЦР). Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в мокроте) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Благодаря высокой чувствительности и специфичности метода, а также возможности получить результат в наболее короткие сроки, РТ-ПЦР заменила другие, применяемые ранее, методы диагностики гриппа: выделение вируса в культуре клеток, а также серологические исследования и иммуноферментный анализ.

Многие прямые лабораторные тесты, разработанные для идентификации Influenza, основаны на выявлении белковых компонентов наружной оболочки вируса: гемагглютинина (H) и нейраминидазы (N). Эти белки являются основными факторами, определяющими степень болезнетворности вируса, а также используются для диагностики и классификации выявляемого вируса гриппа. Они обладают выраженной изменчивостью (известно 16 разновидностей N и 9 разновидностей H серотипа Influenza A) (чем вызваны ежегодные сезонные вспышки гриппа), а также создает определенные трудности при идентификации вируса гриппа с помощью этих методов. Структурное разнообразие антигенов H и N приводит к тому, что чувствительность большинства прямых лабораторных тестов (таких как прямая иммунофлюоресценция и ELISA) составляет около 65-75 %. Исследование РТ-ПЦР основано на выявлении консервативной последовательности ДНК, общей для разных штаммов вируса гриппа серотипов А и В, что обуславливает максимальную чувствительность этого теста (98-100 %).

В отличие от других тестов, чувствительность исследования РТ-ПЦР практически не изменяется при взятии материала на фоне начатой терапии противовирусными препаратами. Это связано с тем, что в реакции выявляется не сам вирусный агент, а фрагмент вирусной ДНК. По этой же причине положительный результат исследования не всегда указывает на наличие живого вируса (репликацию) и не всегда означает, что пациент остается заразным для окружающих.

В отличие от других лабораторных тестов (в первую очередь, экспресс-тестов для определения антигена вируса гриппа), результат РТ-ПЦР в меньшей степени зависит от распространенности гриппа среди населения. РТ-ПЦР характеризуется редкими ложноположительными и ложноотрицательными результатами как во время эпидемии, так и в период низкой заболеваемости гриппом.

Идентификация вируса гриппа с помощью РТ-ПЦР возможна в течение более длительного времени от начала заболевания по сравнению с большинством других тестов. Тем не менее взятие отделяемого носо/ротоглотки для исследования с помощью РТ-ПЦР должно быть произведено не позднее чем через 72-96 часов (оптимально в первые 48-72 часа). Это связано с тем, что интенсивная репликация Influenza при поражении верхних дыхательных путей происходит в течение первых 4 суток заболевания. У пациентов с вовлечением нижних отделов дыхательных путей вирусная нагрузка сохраняется высокой более длительный период. Исследование отделяемого носоглотки и мокроты дает лучшие результаты по сравнению с исследованием отделяемого ротоглотки.

При обследовании пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции верхних дыхательных путей следует выполнить анализ отделяемого носо/ротоглотки. При обследовании пациента с признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей анализ мазков из зева и носа необходимо дополнить исследованием мокроты. Исследование мокроты также должно быть осуществлено при отрицательном результате, который дал анализ отделяемого верхних дыхательных путей у пациента с клиническими признаками гриппа. Следует повторить РТ-ПЦР при отрицательном результате исследования мокроты у пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей.

Для более точной диагностики Influenza рекомендуется сочетание РТ-ПЦР с дополнительными общеклиническими исследованиями. Кроме того, необходимо исключить бактериальную суперинфекцию.

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

острой респираторной вирусной инфекции (внезапное острое начало болезни, лихорадка, боль в горле, боль в мышцах, головная боль, светобоязнь, сухой кашель, боль в грудной клетке, одышка);
острой энцефалопатии в период эпидемии гриппа (судороги, атаксия, нарушение сознания).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

Причины отрицательного результата:

отсутствие Influenza-ассоциированной инфекции.

Положительный результат исследования не означает, что пациент остается заразным для окружающих.
Анализ не позволяет выявлять Influenza серотипа С.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, врач общей практики, анестезиолог-реаниматолог.

Литература

Kamps B. S, Hoffmann C, Preiser W. Influenza Report 2006 / B. S. Kamps, С. Hoffmann, W. Preiser W. – Flying Publisher, 2006.
Wang R, Taubenberger JK. Methods for molecular surveillance of influenza. Expert Rev Anti Infect Ther. 2010 May;8(5):517-27.
Schuchat A, Bell BP, Redd SC. The science behind preparing and responding to pandemic influenza: the lessons and limits of science. Clin Infect Dis. 2011 Jan 1;52 Suppl 1:S8-12.
Pregliasco F, Mensi C, Camorali L, Anselmi G. Comparison of RT-PCR with other diagnostic assays for rapid detection of influenza viruses. J Med Virol. 1998 Oct;56(2):168-73.
WHO Global Influenza Surveillance Network. Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. – World Health Organization, 2011.

Грядет новая вспышка гриппа в сезон 2016-2017 гг. Специалисты ВОЗ прогнозируют, что в качестве возбудителей в этом сеоне будут циркулировать как вирус свиного гриппа А-Н1N1, так и гонконгский грипп — штамм А-Н3N2. В Москве и Московской области проведены мероприятия по профилактике, вакцинации групп риска, работали пункты мобильной вакцинации у метро.

Зимой 2016 г у каждого второго заболевшего гриппом жителя Москвы выявили именно вирус Н1N1. Прежние вспышки были в 2009 и 2013 гг. Вирус АН3N2 был выделен в 2014 году в Гонконге. Грипп А Н3N2 является относительно молодым штаммом и опасен тем, что пока недостаточно изучен. Эта
разновидность вируса гриппа способна спровоцировать у человека развитие осложнений с геморрагическими поражениями.

Обновлена информация про лабораторную диагностику гриппа, актуальные цены на ноябрь 2016 (в скобках — старые цены от 2013 г.).

Провериться можно и сам

остоятельно, обратившись в ближайшую независимую лабораторию. В моем списке указаны только лаборатории Москвы и Подмосковья. Но жители других городов России — Петербурга, Казани, Новосибирска, Екатеринбурга. Краснодара, Ростова и других больших и небольших городов могут уточнить на сайтах сетевых мед. лабораторий — ИНВИТРО, Ситилаб и Гемотеста, выполняется ли данные анализы в их городе.

Для исследования на грипп берут мазок из зева, носа и исследуют его методом ПЦР или иммунофлуоресценции (МФА — метод флюоресцирующих антител). Есть вариант анализа крови на антитела к свиному гриппу. Однако его скорее нужно использовать уже постфактум, выявляя штамм, который вызвал заболевание или для оценки уровня иммунитета после прививки. Поскольку в случае с гриппом H1N1 нужно получить результаты максимально быстро и сразу назначить противовирусное лечение, а антитела появляются в крови только через несколько дней, лучше использовать ПЦР мазка из зева. К тому же, это неинвазивный метод в отличие от взятия крови из вены.

1. Лаборатория Инвитро (инфо) — 2100 руб ( 980 руб )+ 399 руб взятие мазка/соскоба, срок -1 день. Материал для исследования: мазок слизи или смывы из носовых ходов. Определение штаммов вируса А : А-Н3N2 и А-Н1N1 (описание)

2. Лаборатория Гемотест (инфо) анализ на Вирусы гриппа А и В (антигенный тест) — 1205 рублей ( 850 руб. ), срок — 2 дня, проводится ПЦР исследование материала.

4. ЦНИИ Эпидемиологии (CMD) (инфо) 1 155 руб. ( 990 рублей ), 2 рабочих дня. Проводится ПЦР исследование отделяемого носоглотки для определения РНК вируса гриппа A, A/H1N1/CA/2009, B (описание). Стоимость забора соскоба/мазка — 390 руб. Есть также более полное исследование на все виды вируса гриппа и др. ОРВИ с названием теста — «Диагностика вирусных инфекций дыхательных путей (грипп и ОРВИ)«. При этом определяются также коронавирус, риновирус, аденовирус.

5. Научный центр молекулярно-генетических исследований (сайт dnk-diagnostika.ru) — стоимость анализа на свиной грипп (Вирус свиного гриппа А Н1N1/СА/2009) 950 рублей, исследуют мазок из носоглотки методом ПЦР.

6. Лаборатория Ниармедик (сайт nrlab.ru) — определение РНК вируса гриппа А и В, парагриппа 1,2,3,4 типов в мазке (37.3.4), анализ сделают за 3 рабочих дня и 650 руб. ( 590 руб. ).

7. Лаборатория ЦЭЛТ (www.celt.ru) — Вирусы гриппа A, B, A/H1N1 (свиной грипп) — стоимость исследования 950 руб.

8. Лаборатория Дитрикс Медикал (инфо) — 950 рублей, срок — 1 день, проводится определение антигенов вирусов гриппа А и В (в том числе и грипп субтип А/Н1N1) — описание теста. Материал для исследования: Мазки из носа, горла или носоглотки, аспират из назофарингеальной и назальной полостей. Взятие мазка + 395 руб.

Неспецифическая профилактика свиного гриппа

Ношение марлевой повязки (не менее 4 слоев марли, оптимально — 6 слоев) или одноразовой маски.
Частое мытье рук, особенно во время болезни или ухода за больным. Можно использовать гели для рук с дезинфицирующим свойством, чем чаще, тем лучше
Избегание близкого контакта с людьми с кашлем и лихорадкой, мест большого скопления людей.
Частое проветривание помещения прохладным воздухом
При появлении признаков болезни, оставайтесь дома и ограничьте контакты с другими людьми.
Ведение здорового образа жизни (полноценный сон, употребление здоровой пищи, физическая активность).

закаливание
прием растительных препаратов, укрепляющих иммунитет – женьшень, эхинацею, лимонник,
включение в рацион меда, продуктов, богатых витамином С (цитрусовые, клюква, плоды шиповника, малины) и антоцидов
ежедневные промывания носа и полоскание ротовой полости

Для специфической профилактики оптимальным методом является вакцина от гриппа, которую желательно проводить ежегодно, до начала роста сезонной заболеваемости, в начале осени.

По поводу того, какие вакцины лучше или хуже. Любые вакцины лучше. Какая есть, такую и применяйте. Отечественная, зарубежная, все работают, все достигают своей цели — формируют антитела против штаммов гриппа, которые в виде антигенов входят в состав каждой из вакцин.

Ограничений по прививке от гриппа нет и быть не может. И в первую очередь прививаться должны хронические больные — астматики, диабетчики, гипертоники, онкологические, эндокринологические, неврологические и прочие. Если у человека легкое ОРВИ без температуры — смело прививать. Если с температурой — прививать после её нормализации, не дожидаясь исчезновения всех симптомов. Дети до 8-9 лет, которые ни разу гриппом не болели и ни разу не прививались, для эффективной иммунизации должны получить две дозы вакцины с интервалом в 4 недели. Иммунитет формируется на 2-4 неделе после законченной вакцинации.

Составитель:

Рецензенты:

главный специалист по клинической лабораторной диагностике УЗ Гомельского областного исполнительного комитета А.А. Кудря

Характеристика вируса типа А (H1,N1)

Высокопатогенный вирус гриппа А (H1,N1) (ВПВГА) относится к семейству Orthomyxoviridae. Геном вируса представлен восемью фрагментами РНК. По данным генетического анализа, вирус гриппа, вызвавший вспышку заболевания среди людей в Мексике и США весной 2009 года, является реассортантом вирусов гриппа свиней.

Вирус передаётся от человека к человеку воздушно-капельным путём. Не исключён также и контактно-бытовой путь передачи. Инкубационный период при гриппе ВПВГА составляет обычно 2-3 дня, и вирус может выделяться в окружающую среду заболевшим 7 дней и более. Клиническая картина заболевания разнообразна – от бессимптомных форм до тяжелых пневмоний. Вирус чувствителен к озелтамивиру и занамивиру.

Вирус чувствителен к повышенным температурам и погибает при нагревании до 70 0 С в течении 30 минут. Вирус также чувствителен к различным дезинфектантам, обладающим вирулицидным действием.

ВПВГА характеризуется высокой антигенной изменчивостью. Опасения Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) связаны с генетической новизной вируса и его потенциальной способностью к дальнейшей реассортации, вследствие чего возможно возникновение более агрессивных вариантов инфекции.

ВОЗ присвоила вирусу гриппа А (H1,N1) шестую степень угрозы (из шести). Степень угрозы по ВОЗ не характеризует патогенность вируса (то есть опасность заболевания для жизни людей), а указывает на его способность к распространению.

Определение случаев заболевания

Подтверждённый случай – заболевание, при котором имеются симптомы острого респираторного заболевания (ОРЗ) с лабораторно подтверждённой инфекцией, вызванной ВПВГА одним из следующих методов:

l полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени

l выделение вируса в культуре клеток.

Вероятный случай – у человека имеет место ОРЗ, при этом результат ПЦР положительный на грипп типа А, но отрицательный на подтип Н1 или Н3.

Подозрительный случай – случай, при котором:

l У человека имеется ОРЗ, и этот человек тесно контактировал с лицом с подтверждённой инфекцией, вызванной ВПВГА, в то время, когда это лицо находилось в состоянии болезни, или

l У человека имеет место ОРЗ, и известно, что этот человек недавно контактировал с животным с подтверждённой или подозреваемой инфекцией, вызванной ВПВГА, или

l У человека имеет место ОРЗ, и этот человек совершил поездку в район, где имеют место подтверждённые случаи ВПГА.

При поступлении из организации здравоохранения информации о подтверждённом, вероятном или подозрительном случае заболевания людей ВПГА, специалистами регионального центра гигиены и эпидемиологии проводится эпидемиологическое расследование.

Организация лабораторной диагностики

Сбор, хранение и транспортировка образцов для лабораторной диагностики

Сбор клинического материала осуществляет обученный медицинский работник лечебно-профилактического учреждения в средствах индивидуальной защиты органов дыхания (респиратор), защитных очках или щитках для защиты лица, бахилах, двойных резиновых перчатках в стерильные флаконы, пробирки, контейнеры, стерильными инструментами.

Для диагностики заболевания могут быть использованы следующие образцы:

l мазок из носа

l мазок из носоглотки

l аспират из носоглотки

l смыв из носовой полости

l содержимое эндотрахеальных трубок

По клиническим показаниям к ним могут быть добавлены:

l трахеальный аспират

l бронхоальвеолярный лаваж

l биоптат легочной ткани

l ткань легкого или трахеи, взятая post mortem.

Курьер получает в лаборатории диагностики вирусных и особо опасных инфекций ОблЦГЭ и ОЗ стерильные пробирки с физраствором и стерильные тампоны, упакованные по 10 штук. Пробирки и тампоны хранятся в приемном покое УГОТКБ, годны для использования 7 дней. В приёмном покое хранятся также одноразовые стерильные пластиковые сухие пробирки объёмом 50 мл для сбора биологического материала (мокрота, содержимое эндотрахеальных трубок, ткань лёгкого и др.).

Оптимальные сроки забора

l до начала этиотропной терапии

l мазок из носовой полости, зева - не позднее 5 дня от начала заболевания (лучше первые 3 дня)

l парные сыворотки крови 1-я сыворотка не позднее 3-5 дня заболевания.
2-я сыворотка через 14 дней

l секционный материал - в день смерти больного

Техника забора клинического материала

Венозная кровь

Для серологического исследования забираются парные сыворотки крови. Первую пробу крови берут в первые 3-4 дня заболевания (или в первый день обращения за медицинской помощью). Кровь забирается в чистую сухую пробирку шприцем из вены в количестве 3-5 мл у взрослых.

Первичная обработка крови проводится в клинико-диагностической лаборатории УГОТКБ. Венозная кровь, отстаивается 30 минут при комнатной температуре. При помощи стеклянной палочки отделяют столбик сгустка от стенок пробирки. Пробирку центрифугируют при 1500 об/мин 10 минут. Полученную сыворотку отсасывают автоматическим дозатором с одноразовым наконечником. На каждую сыворотку используется отдельный наконечник. Сыворотка не должна быть гемолизированная, хилезная, с признаками бактериального пророста.

Первую пробу сыворотки хранят при температуре минус 20 0 С до получения второй сыворотки крови. Повторное оттаивание – замораживание не допускается.

Вторую пробу берут через 14 дней после начала заболевания. Обе пробы одновременно отправляют для исследования в лабораторию диагностики вирусных и особо опасных инфекций в течение 24 часов после забора второй сыворотки.

Одиночные сыворотки лаборатория диагностики вирусных и особо опасных инфекций не принимает, т.к. диагностика осуществляется на основании 4-х кратного увеличения титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой.

Мазок из полости носа

Мазок из полости носа забирают сухими стерильными ватными тампонами. Перед взятием материала полость носа необходимо очистить от слизи, лейкоцитов, слущенных клеток эпителия.

Тампон ввести легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем тампон слегка опустить книзу, ввести в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, сделать вращательное движение и удалить вдоль наружной стенки носа. Мазок берётся из обеих полостей носа. Тампоны погрузить в стерильную пробирку с 3 мл транспортной среды (фосфатно-солевой буфер или физраствор), отломать концы палочек и плотно закрыть пробкой.

Материал в течение 1 - 4 часов доставляется в лабораторию.

Мазки должны быть забраны таким образом, чтобы в них содержались клетки, имеющие диагностическое значение - цилиндрический эпителий из глубоких отделов носа, в котором размножаются вирусы. Мазки, содержащие клетки плоского и переходного эпителия из наружных отделов носа не информативны и исследованию не подлежат.

Мазок из ротоглотки

Мазки берут сухими стерильными ватными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, нёбных дужек и задней стенки ротоглотки. Тампоны погрузить в стерильную пробирку с 3 мл транспортной среды (фосфатно-солевой буфер или физраствор), отломать концы палочек и закрыть пробкой.

Секционный материал

Кусочки ткани легких берут асептически. Объем проб – около 1-2 см?. Секционный материал помещают в стерильную посуду и транспортируют в термоконтейнере в течение 24 часов.

l Все виды собранного биологического материала должны храниться в больнице не более суток при температуре 2-8°С

l Сыворотка хранится в замороженном состоянии

Каждая проба представляется с сопроводительным документом. Направление на исследование материала на ВПГВА методом ПЦР представлено в Приложении 1. Материал взятый post mortem представляется с направлением по форме Приложения 2. Для исследования на грипп и другие ОРВИ (парагрипп, аденовирусная инфекция, РС-инфекция) методом РИФ с направлением на обычном бланке для исследования биологического материала.

Материал доставляется в лабораторию в специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами. При необходимости используются специальные среды для транспортировки вирусосодержащего материала (выдает лаборатория диагностики вирусных и особо опасных инфекций ОблЦГЭ и ОЗ).

Все транспортируемые образцы должны быть упакованы в тройную упаковку, содержащую три упаковочных слоя. Упаковка должна быть выполнена с учётом предотвращения любой утечки содержимого, выдерживать удары и нагрузки, имеющие место при транспортировке. Между первичной ёмкостью и вторичной упаковкой должен находиться мягкий абсорбирующий материал, в количестве достаточном для впитывания всего содержимого первичных ёмкостей. При транспортировке нескольких клинических образцов – каждый упаковывается в первичную упаковку, исключается любой контакт между ними.

Методы лабораторной диагностики

Позволяет обнаружить антиген вируса гриппа в клетках цилиндрического эпителия дыхательного тракта больного за счёт взаимодействия антигенов со специфическими противовирусными антителами. Вирус и инфицированная клетка очень неустойчивы, забор материала нужно проводить как можно быстрее после появления клинических симптомов, т.к. число инфицированных клеток уменьшается по ходу болезни. Вследствие мутаций вновь появившиеся высокопатогенные штаммы вируса гриппа свиней изменили свои антигенные свойства, вследствие чего иммунофлюоресценция может быть ложноотрицательна. Поэтому метод не применяется для диагностики ВПВГА, а используется для диагностики гриппа А (кроме свиного), гриппа В, парагриппа, аденовирусной и респираторно-синтициальной инфекции.

Это методы определения специфических антител в парных сыворотках крови с целью ретроспективного подтверждения диагноза. Серологический анализ позволяет определить заболевание, вызванное одним из 6 подтипов гриппа А, включая свиной и птичий, гриппом В.

Полимеразная цепная реакция

Определяют РНК вируса в диагностическом материале. Результаты получают через 24 часа. При исследовании методом ПЦР анализ проводится в два этапа: I этап – обнаружение вирусов гриппа А, II этап – идентификация субтипов H1N1 и H3N2.

Выделение вируса в культуре клеток или куриных эмбрионах

Метод позволяет не только идентифицировать возбудителя, но и изучить его антигенные, фенотипические, генетические свойства, определить чувствительность к лекарственным препаратам. Это самый длительный метод - результаты через 2-10 дней. Материал для исследования является отделяемое из глубоких отделов носовой полости, зева, секционные ткани. Для транспортировки используют специальные среды. Исследование проводится в г. Минске в лабораториях Национального Центра Гриппа.

Приложение 1

для лабораторного исследования биологического образца от больного ОРИ.

Читайте также: