Определение репликации вируса гепатита с

Комплексное исследование при подтвержденном вирусном гепатите В (HBV). Анализ маркеров инфекции позволяет установить клиническую стадию заболевания, иммунологический статус обследуемого, а также оценить эффективность лечения. Включает в себя определение белков вируса (антигенов), основных классов специфических антител, а также обнаружение ДНК вируса в крови.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.
• Не курить за 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирусный гепатит B (HBV) – инфекционное заболевание, которое является причиной серьёзных поражений печени. Зачастую гепатит B переходит в хроническую форму, его течение становится затяжным и провоцирует возникновение цирроза и рака печени.

Вирус гепатита B (Hepadnaviridae) содержит двухцепочечную ДНК, окруженную нуклеокапсидом размером 27 нм, в состав которого входит антиген HBcAg, и внешней оболочкой, содержащей антиген HBsAg. Этот антиген обнаруживается в крови за 6 недель до появления симптомов заболевания и может выявляться длительное время как при их наличии, так и в при их отсутствии (при хроническом гепатите и носительстве). На ранних стадиях заболевания присутствует у 90-95 % больных.

Особенностью вируса гепатита B является то, что он поступает непосредственно в кровь и циркулирует в ней на протяжении всего периода заболевания. У некоторых пациентов вирус в крови сохраняется всю жизнь. По этой причине источником заражения могут стать не только те, кто болен гепатитом в его острой форме, но также те, кто уже перенес данное заболевание, а также люди, у которых заболевание не проявляется, однако они являются носителями вируса.

Полное выздоровление регистрируется у 92-95 % больных острым гепатитом В, и лишь у 5-8 % из них отмечается переход заболевания в хроническую форму.

Гепатит B лечится исключительно в условиях стационара. Это заболевание в случае длительного течения является фактором риска развития первичной гепатоцеллюлярной карциномы (рак печени).

В жизнедеятельности вируса гепатита В различают две фазы: фазу репликации и фазу интеграции. В фазе репликации происходит воспроизведение (размножение) вируса. ДНК вируса проникает в ядро гепатоцита, где с помощью ДНК-полимеразы синтезируется нуклеокапсид, содержащий ДНК вируса, антигены HBcAg, HBeAg, которые являются основной мишенью иммунной системы. Затем нуклеокапсид мигрирует из ядра в цитоплазму, где реплицируются белки внешней оболочки (HBsAg), и, таким образом, происходит сборка полного вириона. При этом избыток HBsAg, не использованный для сборки вируса, через межклеточное пространство попадает в кровь. Полная сборка (репликация) вируса заканчивается презентацией его растворимого нуклеокапсидного антигена – HBeAg на мембране гепатоцита, где происходит его "узнавание" иммуноцитами. Антиген HBcAg серологическими методами не определяется, потому что отсутствует в крови в свободном виде. Определяется наличие в крови антител (anti-HBc) к этому антигену, вырабатывающихся вследствие его высокой иммуногенности.

Маркерами фазы репликации вируса гепатита В являются:

• выявление в крови антигенов HBeAg и anti-HBc (Ig M).

У 7-12 % больных хроническим вирусным гепатитом В возможен спонтанный переход фазы репликации в нерепликативную фазу (при этом из крови исчезает HBeAg и появляются anti-HBe). Именно фаза репликации обусловливает тяжесть поражения печени и контагиозность больного.

В фазе интеграции происходит интегрирование (встраивание) фрагмента вируса гепатита В, несущего ген HBsAg, в геном (ДНК) гепатоцита с последующим образованием преимущественно HBsAg. При этом репликация вируса прекращается, однако генетический аппарат гепатоцита продолжает синтезировать HBsAg в большом количестве.

Вирусная ДНК может быть интегрирована не только в гепатоциты, но и в клетки поджелудочной железы, слюнных желез, лейкоциты, сперматозоиды, клетки почек.

Фаза интеграции сопровождается становлением клинико-морфологической ремиссии. В этой фазе в большинстве случаев формируется состояние иммунологической толерантности к вирусу, что приводит к купированию активности процесса и носительству HBsAg. Интеграция делает вирус недосягаемым для иммунного контроля.

Серологические маркеры фазы интеграции:

• наличие в крови только HBsAg или в сочетании с anti-HBc (IgG);
• отсутствие в крови ДНК-вируса;
• сероконверсия HBeAg в anti-HBe (т.е. исчезновение из крови HBeAg и появление anti-HBe).

Пациенты, перенесшие инфекцию и имеющие антитела к вирусу, не могут повторно заразиться гепатитом B. В некоторых случаях полное выздоровление не наступает и человек становится хроническим вирусоносителем. Вирусоносительство может протекать бессимптомно, но в некоторых случаях развивается хронический активный гепатит B. Ключевым фактором риска активного вирусоносительства является возраст, когда человек был заражен: для грудных детей уровень риска превышает 50 %, в то время как для взрослых остается на уровне 5-10 %. Исследования показывают, что мужчины чаще становятся носителями, чем женщины.

HBsAg – поверхностный антиген вируса гепатита В

Поверхностный антиген вируса гепатита В (HВsAg) является белком, который присутствует на поверхности вируса. Обнаруживается в крови при остром и хроническом гепатите В. Самый ранний маркер. Достигает максимума к 4-6-й неделе заболевания. Сохраняется до 6 месяцев при остром гепатите, свыше 6 месяцев – при переходе заболевания в хроническую форму.

HBeAg – ядерный 'е’-антиген вируса гепатита В

Антиген, находящийся в ядре вируса. Появляется в крови одновременно с HBsAg и сохраняется в течение 3-6 недель. HBeAg появляется в крови больного острым гепатитом В одновременно с HBsAg или вслед за ним и сохраняется в крови 3-6 недель. Указывает на активное размножение и высокий риск передачи вируса при половом контакте, а также перинатально. Инфекционность HBeAg-положительной сыворотки в 3-5 раз выше, чем HBsAg-положительной. Выявление HBeAg в крови более 8-10 недель свидетельствует о переходе заболевания в хроническую форму. При отсутствии репликативной активности вируса во время хронической инфекции HBeAg не выявляется. Его появление же свидетельствует о реактивации вируса, что чаще происходит на фоне иммуносупрессии.

При лечении вирусного гепатита В исчезновение HBeAg и появление антител к HBe-антигену свидетельствует об эффективности терапии.

anti-HBc (Ig M) – специфические антитела класса IgМ к ядерному 'core' антигену вируса

Начинают вырабатываться еще до клинических проявлений, указывают на активную репликацию вируса.

Появляются в крови через 3-5 недель, сохраняются в течение 2-5 месяцев и исчезают в период выздоровления.

anti-HBc – суммарные антитела (IgM+IgG) к ядерному ‘core' антигену вируса гепатита В

Важный диагностический маркер, особенно при отрицательном значении HBsAg. Антитела класса IgM вырабатываются через 3-5 недель. Антитела класса IgG начинают вырабатываться с 4-6-го месяца и могут сохраняться пожизненно. Подтверждают контакт организма с вирусом.

anti-HBs – суммарные антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В

Появляются медленно, достигая максимума через 6-12 месяцев. Указывают на перенесенную инфекцию или наличие поствакцинальных антител. Выявление этих антител свидетельствует о выздоровлении и развитии иммунитета. Обнаружение антител в высоком титре в первые недели заболевания может быть связано с развитием гипериммунного варианта фульминантного гепатита В.

anti-HBe – антитела к 'е’-антигену вируса гепатита В

Появляются на 8-16-й неделе после инфицирования у 90 % больных. Свидетельствуют о завершении острого периода болезни и начале периода реконвалесценции. Могут сохраняться до 5 лет после перенесенного заболевания.

HBV (ДНК) – ДНК вируса гепатита В

Маркер наличия и репликации вируса. Методом ПЦР можно определить ДНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита В в организме и его активное размножение. Это особенно важно в сложных диагностических случаях. При инфицировании мутантными штаммами вируса результаты теста на специфические антигены HBsAg и HBeAg могут быть отрицательными, но при этом риск распространения вируса и развития заболевания у зараженного человека сохраняется.

Качественное определение ДНК вируса играет важную роль в раннем выявлении гепатита В у людей с высоким риском инфицирования. Генетический материал вируса обнаруживается в крови на несколько недель раньше, чем HBsAg. Положительный результат ПЦР за период более 6 месяцев указывает на хроническую инфекцию. Определение вирусной нагрузки (количество ДНК вируса в крови) позволяет оценить вероятность перехода заболевания в хроническую форму.

Повышенные уровни печеночных трансаминаз при положительном результате ПЦР являются показателями необходимости проведения терапии. Во время лечения вирусного гепатита В исчезновение ДНК вируса свидетельствует об эффективности лечения.

Для чего используется исследование?

• Для оценки серологического профиля;
• для выяснения стадии заболевания и степени контагиозности;
• для подтверждения заболевания и уточнения его формы (острая, хроническая, носительство);
• для наблюдения за течением хронического гепатита В;
• для оценки эффективности противовирусной терапии.

Когда назначается исследование?

• При выявлении у пациента поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg);
• при подозрении на инфицирование вирусом гепатита В и сомнительных результатах серологических тестов;
• при микст-гепатитах (сочетанные вирусные гепатиты В и С);
• при динамическом наблюдении за больным гепатитом В (определение стадии процесса при совместном исследовании на другие специфические маркеры инфекции).

Что означают результаты?

Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:

Острый гепатит В. Выделяют "дикий" штамм (естественный) и "мутантный" штамм (вид) вируса. Определение штамма вируса имеет определенное значение при выборе противовирусного лечения. Мутантные штаммы вируса несколько хуже поддаются лечению в сравнении с "диким".

Хронический гепатит В (ХВГВ). Выделяют три серологических варианта:

1. ХВГВ с минимальной активностью (ранее использовали термин "носительство HBsAg");
2. НВе-негативный ХВГВ;
3. НВе-позитивный ХВГВ.

Интерпретация сочетаний серологических маркеров гепатита В

Репликация гепатита С — это период размножения вирусных частиц в клетках печени. Часто этот процесс протекает без видимых симптомов, а само заболевание постепенно переходит в хроническую форму. Только человек с сильным иммунитетом способен самостоятельно победить болезнь. Репликативная фаза может продолжаться долго. Инфицированный чувствует себя хорошо, в то время как вирус продолжает размножаться, постоянно мутируя и поражая новые клетки печени. Распознать гепатит С можно только посредством лабораторных анализов.

Что такое репликация вируса гепатита

Фаза репликации гепатита С — это активное распространение вируса в гепатоцитах. Каждый день инфицированной клеткой производится около 50 вирионов (вирусных частиц). В общей сложности в клетках печени их может быть более одного триллиона. Также вирус поражает иммунные клетки, что приводит к нарушению в работе всех систем и органов человека при хроническом гепатите С.

РНК вируса включает больше 9 тысяч нуклеотидов (фрагментов). Из них примерно 30% постоянно мутирует. Из-за быстрой скорости мутации возникает множество вариантов вируса, которые являются квазивидами, а не обычными видами вирусного гепатита. Чтобы иммунитет начал вырабатывать антитела к новым квазивидам, должно пройти некоторое время, за которое вирус снова мутирует.

За 7 дней HCV успевает полностью изменить антигенную структуру, вследствие чего иммунная система перестает вообще его распознавать.

Интенсивность репликации HCV не такая высокая, в отличие от других видов гепатита. Активность распространения патогенов зависит от генотипа болезни. Самая низкая репликация у 1b генотипа, вследствие чего он не замечается человеком и вскоре приобретает хроническую форму.

Активная фаза репликации начинается в течение 2 недель после инфицирования, когда все вирусные частицы достигают клеток печени. Эта фаза продолжается до 3 месяцев. При сильном иммунитете патогенные клетки могут быть полностью подавлены.

Возможна репликация двух и более вирусов (В, А или D). В этом случае диагностируется микст-гепатит.

Как проявляется стадия репликации ВГС

Чаще всего (в 80% случаев) фаза репликации при гепатите С протекает бессимптомно. Инфицированный чувствует себя хорошо, к врачу не обращается. Однако в это время растет количество зараженных клеток, вследствие чего повышается вирусная нагрузка.

У 10-20% больных стадия репликации сопровождается острой симптоматикой. Первые признаки могут проявляться уже на 2 неделе после инфицирования. Наблюдается:

• повышенная утомляемость, слабость;

• головные боли;

• снижение умственной и физической активности;

• мышечные, суставные боли;

• дискомфорт в области правого подреберья;

• пожелтение кожи и склер глаз (в редких случаях);

• повышение температуры тела до 37,5°C.

При остром гепатите С на стадии репликации также могут появиться следующие жалобы:

• тошнота и рвота;

• ухудшение аппетита;

• обесцвечивание кала и потемнение мочи.

Во время осмотра больного врач диагностирует увеличение размеров печени и селезенки. Биохимия крови показывает повышение уровня печеночных ферментов (АЛТ, АСТ, билирубина). Если сразу же не начать лечение, из фазы репликации спустя полгода разовьется хронический гепатит.

Наличие вируса в организме в стадии репликации выявляется посредством ИФА (иммуноферментного анализа). С его помощью определяется ответ иммунной системы на появление в организме HCV.

Если в крови обнаружен анти-HCV IgM, значит, человек инфицировался недавно, то есть в данный момент происходит активная репликация вирусных частиц и болезнь еще не стала хронической. Анти-HCV IgG свидетельствуют о хронизации гепатита С.

Как протекает гепатит С вне репликации

После стадии репликации начинается хроническая (латентная или скрытая) фаза. Продолжаться она может до 15-20 лет. Больной является хроническим носителем HCV и иногда даже не подозревает, что болен. Симптомы могут быть слабыми или отсутствовать полностью. Лишь иногда после активных физических нагрузок или переедания чувствуется тяжесть в правом подреберье. Вирусная нагрузка стихает, но патогенные клетки все равно продолжают постепенно разрушать гепатоциты.

Хронический вирусный гепатит может резко обостриться. Это называется фазой реактивации, когда заболевание вспыхивает с новой силой. Это может произойти спустя 12-15 лет после репликации вируса, при циррозе печени — через 15-20 лет, а в случае рака печени — спустя 25-28 лет. Клетки печени полностью перестают нормально работать, в процессе обследования диагностируется высокая вирусная нагрузка.

Подбор лечения для разных фаз

Вирус HCV врачи лечат лекарственными средствами, называемыми ингибиторами протеазы и полимеразы. Такие препараты предотвращают самокопирование (репликацию) патогенных микроорганизмов. Подобная терапия проводится:

При помощи этих медикаментов достигается прямое действие на вирус HCV, в отличие от интерферона, который только стимулирует иммунитет на борьбу с возбудителем.

Благодаря ингибиторам протеазы и полимеразы вирусные частицы не могут расщепляться и строить новые РНК. Также для устранения патогенов могут прописываться интерфероны совместно с Рибавирином. Но от такой терапии в последнее время стараются отказаться вследствие невысокой эффективности (до 70%) и большого количества побочных действий.

Вирусный гепатит утят (ВГУ) - высоко контагиозная, остро протекающая среди утят и латентно среди уток болезнь, с преимущественным поражением печени. Эта болезнь до настоящего времени имеет широкое распространение в утководческих хозяйствах промышленного типа и сопровождается высокой смертностью утят 1-30 - суточного возраста, достигая до 30-95 % [4,5,17].

Вирус гепатита утят типа I относится к семейству Picarnoviridae роду Avihepatovirus [14,16].

Вирус удается культивировать на первичных клетках печени и почки эмбрионов уток и гусей [1,6], а также на фибробластах утиного и куриного эмбрионов с коллагеназой [1,7,8].

Метод тканевых культур находит все большее применение в генетических исследованиях с вирусами животных и человека. С его помощью изучен целый ряд важных генетических признаков вирусов: цитопатогенная, бляшкообразующая, интерфероногенная активность, чувствительность к экзогенному интерферону, способность к репликации при различных температурах и другие.

Способность вирусов к репродукции и способность вызывать цитопатогенное действие в клеточных культурах, а также их репликация при различных температурах культивирования являются наследственными биологическими признаками.

Работами ряда исследователей показана возможность изменения наследственных свойств вирусов путем пассажей в культуре клеток при пониженной и повышенной температурах. Усиленное применение этого метода оказалось тесно связано с глубоким изучением способности вирусов к репликации при определенной температуре, так называемого rct - признака.

Доказано, что rct - маркер вирусов является наследственным свойством и даже отдельные штаммы одного вируса обладают не одинаковым rct - признаком [3,9, 11,12,15].

Зависимость между rct - признаком и патогенностью составляет в настоящее время сущность теоретического обоснования применения метода пассажей у культуре клеток при неоптимальных температурах для получения вирусных вакцин с измененными биологическими свойствами [13,15].

Учитывая, что в литературе слабо освещен вопрос о способности вируса гепатита утят к репликации в тех или иных видах тканевых культурах и отсутствие данных по культивированию вируса при различных температурах, целью наших исследований явилось изучение способности вакцинных штаммов вируса гепатита утят к репликации в культурах клеток при различных температурах культивирования ( TC и rct - маркеры).

Материалы и методы исследований

Вирус. В работе использовали производственные вакцинные штаммы ВГНКИ-К и ЗМ-УНИИП вируса гепатита утят, культивируемые в культуре утиных фибробластов при температуре 37 º С, и хранили при минус 20 º С.

Культуры клеток: культура фибробластов 10-12 - суточных куриных эмбрионов (ФЭК); культура фибробластов 14-15 - суточных утиных эмбрионов (ФЭУ); культура клеток печени 25-27 - суточных утиных эмбрионов; культура клеток почки 25-27 - суточных утиных эмбрионов.

Первично-трипсинизированную культуру клеток готовили из кожно-мышечной ткани, печени и почек куриных и утиных эмбрионов по методике Dulbecco R.&Vogt M. (1954) в модификации Younger J.S. (1954) [10].

В качестве питательной ростовой среды использовали среду Игла МЕМ/ДМЕМ и среду 199 в соотношении 2:1 с добавлением 10 % нормальной сыворотки крупного рогатого скота и антибиотиков: бензилпенициллина 100 ЕД/см 3 и стрептомицина сульфата - 100 мкг/см 3 . Раствор для диспергирования ткани состоял из 0,25 % раствора трипсина, 0,02 % раствора версена и раствора Хенкса в соотношении 1:2:2. Трипсинизацию проводили на магнитной мешалке при температуре 36-37 ºС в течение 10-15 мин до полного расщепления фрагментов ткани на отдельные клетки. По истечении указанного времени клеточную взвесь сливали во флаконы с охлажденной смесью сыворотки крови крупного рогатого скота до 10 % и среды Игла (соотношение 1:1) с целью нейтрализации действия трипсина.

Суспензию клеток центрифугировали при 900-1000 об/мин в течение 20 мин. Из осадка после ресуспензирования готовили суспензию клеток в питательной ростовой среде с содержанием 650-750 тыс. кл./см 3 . Клеточную суспензию разливали в пробирки и матрасы по 2 и 220 см 3 соответственно и инкубировали в стационарных условиях при температуре (37,0±0,5)º С. В течение 48 часов на поверхности стекла формировался клеточный монослой.

Определение Rct TC признака. Способность вакцинных штаммов к репликации при неоптимальных температурах изучали путем 5-кратного пассирования в культуре фибробластов утиных эмбрионов. Культивирование зараженных и контрольных клеток проводили при температурах 32 и 40 ° C, учитывая время наступления и характер ЦПД в культуре клеток. Инфицирование ФЭУ проводили в дозе 1,0 ЦПД₅₀ на клетку. После 1, 3 и 5-го пассажа определяли инфекционный титр вируса методом титрования и выражали в lg ТЦД₅₀/см 3 .

Rct TC признак штаммов вируса, определяли по методу М. Беньеш-Мельник и Дж.Л. Мельник (1961) [2] , в основе которого лежит вычисление разности между титрами изучаемых штаммов вируса при 37 и 32 ° C или 37 и 40 ° C. Так, rct_32° - /rct_40° - / - разница титров вируса больше 4 lg ТЦД₅₀/см 3 ; rct_32° + / rct_40° + / - разница титров вируса меньше 2 lg ТЦД₅₀/см 3 ; rct₃₂ о± / rct₄₀ о± / - разница титров вируса от 2,1 до 4 lg ТЦД₅₀/см 3 .

Титрование вируса на культуре клеток по цитопатогенному действию (ЦПД) проводили в культурах клеток методом десятикратных разведений и с соответствующими контролями.

Величину титра вычисляли по методу Reed L.J. & Muench H. (1938) [10] и выражали в lg ТЦД₅₀ в 1.0 см 3 (тканевая цитопатогенная доза).

Статистическую обработку результатов проводили по общепринятым методам.

Результаты исследований и обсуждение

Вакцинные штаммы ВГНКИ-К и ЗМ-УНИИП вируса гепатита утят вызывали острую форму вирусной инфекции в культурах клеток куриных и утиных эмбрионов при температурах культивирования 32, 37 и 40 º С. Цитопатогенное действие сопровождалось округлением клеток на ограниченных участках монослоя, появлением симпластических образований с зернистостью в цитоплазме клеток через 72-96 часов после инокуляции, а на последней стадии репликации вируса формированием синцития и дегенерацией клеточного монослоя через 96-120 часов культивирования. Латентная фаза штамма ВГНКИ-К при температуре 37 º С составила 24 часов и 48 часов штамма ЗМ-УНИИП, а при температуре 32 и 40 º С она равнялась у штаммов ВГНКИ-К и ЗМ-УНИИП 72 и 48 часам соответственно. .Данные определения активности штаммов в различных первично-трипсинизированных культурах клеток при температуре 37 º С представлены в табл. 1.

Биологическая активность вакцинных штаммов ВГНКИ-К и 3М-УНИИП вируса гепатита утят в культурах клеток при 37 º С

Активность штаммов, lg ТЦД₅₀,M±m*

Наборы реагентов для экстракции РНК и ДНК

Плазма и сыворотка

Концентраты (элюаты) воды

ликвор, амниотическая жидкость, мазки из носа, зева

ликвор, моча, слюна

высаживание нуклеиновых кислот

сорбция нуклеиновых кислот на частицах силикагеля

сорбция нуклеиновых кислот на частицах магнетизированного силикагеля

Объем биоматериала, мкл

Объем элюции, мкл

Используемые магнитные штативы

Вирус гепатита А (ВГА, HAV)

Вирусный гепатит А – одна из наиболее распространенных в мире кишечных инфекций. Это острое заболевание печени, передающееся фекально-оральным путем. Возбудителем является вирус гепатита А (HAV), относящийся к семейству Picornaviridae. Эпидемиологическая обстановка по ВГА в России остается неблагоприятной - в последние годы отмечается увеличение числа вспышек.

Решение диагностических и эпидемиологических аспектов проблемы гепатита А во многом определяется возможностями используемых методических подходов.

Выявление РНК вируса гепатита А методом ПЦР имеет значительные преимущества по сравнению с ИФА и биохимическими тестами при выявлении вируса в крови контактных лиц, т.к. РНК возбудителя появляется в крови на третьей неделе от момента заражения и является первым диагностическим маркером, обнаруживаемым в крови пациента (Рис.1). В то время как Аnti-HAV IgM появляются в крови от нескольких дней до нескольких недель после появления РНК вируса гепатита А, АЛТ - через две недели.

Также выявление РНК вируса гепатита А методом ПЦР имеет значительное преимущество в чувствительности (как минимум в 1000 раз) по сравнению с детекцией антигена вируса в объектах окружающей среды (питьевые и сточные воды, воды из поверхностных водоемов и т.д.).

Информация для заказа:

Название	Назначение	Тестов	Формат детекции	Кат. №
Выявление РНК HАV в качественном формате	FRT	R-V4(RG,iQ)
	FEP	V4-FEP

Вирус гепатита В (ВГВ, HBV)

Вирусный гепатит В – широко распространенная инфекция человека, вызываемая ДНК-содержащим вирусом гепатита В, относящегося к семейству Hepadnaviridae.

Вирусный гепатит В представляет собой серьезную проблему здравоохранения. В настоящее время по данным ВОЗ в мире насчитывается около 500 миллионов человек, инфицированных вирусом гепатита В. Общее количество больных хроническим гепатитом В достигает 50 млн. человек.

Результаты лабораторных исследований играют ведущую роль для подтверждения диагноза вирусного гепатита В, установления диагноза хронического вирусного гепатита В, мониторинга активности вирусной репликации у носителей HBsAg, мониторинга эффективности противовирусной терапии.

Выявление ДНК вируса гепатита В c помощью ПЦР используется с целью:

- ранней диагностики острого вирусного гепатита В. Выявление ДНК HBV c помощью ПЦР позволяет эффективно обнаруживать возбудителя в период инфицирования до сероконверсии, так как ДНК HBV появляется в крови в среднем на 3 недели раньше маркера HBsAg.

- выявления скрытых форм вирусного гепатита В (“оccult” hepatitis B). HBsAg в сыворотке таких инфицированных не выявляется, в то время как ДНК HBV выявляется в плазме крови и ткани печени;

- выявления мутантных по HBsAg штаммов вируса гепатита В.

Определение вирусной нагрузки с помощью ПЦР используется для:

- установления диагноза хронического вирусного гепатита В;

- мониторинга эффективности противовирусной терапии;

- мониторинга активности вирусной репликации у носителей HbsAg.

Генотипирование вируса гепатита B целесообразно:

- в рамках эпидемиологического надзора за вирусом гепатита B, для мониторинга циркулирующих генотипов и прогноза развития эпидемиологической ситуации;

- для индивидуализации терапии и более точного прогноза ее эффективности.

Выявление мутаций устойчивости вируса гепатита B (HBV) к противоретровирусным препаратам позволяет проводить антивирусную терапию максимально экономично и эффективно.

Информация для заказа:

Название	Назначение	Формат детекции	Особенности	Кат. №
Выявление ДНК HBV в качественном формате	FRT	R-V5-Mod (RG,iQ,Mx,Dt)
	FEP	V5-FEP
АмплиСенс® HBV-Монитор-FL	Количественное определение ДНК HBV (определение вирусной нагрузки)	FRT	Содержит набор РИБО-преп для выделения ДНК	TR-V5-P-M (RG,iQ,Mx,Dt)
			Содержит набор РИБО-сорб для выделения ДНК	TR-V5-S-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
			Содержит набор МАГНО-сорб для выделения ДНК	TR-V5-M-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
			Форма комплектации для использования с автоматическими станциями для экстракции нуклеиновых кислот; не содержит набор для выделения ДНК	R-V5-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
АмплиСенс® HBV-генотип-FL	Генотипирование HBV (выявление генотипов A, B, C и D)	FRT	R-V5-G-F
				АмплиСенс® HBV-Resist-Seq	Выявление мутаций лекарственной устойчивости HBV (анализ фрагмента ревертазного домена Р-гена)	SEQ	Содержит реагенты для секвенирования на секвенаторах Applied Biosystems	TM-V5-F-1
	M-V5-F-2

Вирус гепатита С (ВГС, HCV)

Вирус гепатита С - РНК содержащий вирус, относящимся к семейству Flaviviridae. Заражение вирусом гепатита С происходит преимущественно при попадании вируса в кровь (при парентеральных вмешательствах или при гемотрансфузиях). Хронический вирусный гепатит С – одно из наиболее распространенных заболеваний печени, ведущих к развитию цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы.

Ведущую позицию в лабораторной диагностике ВГС занимают молекулярно-биологические методы, позволяющие: 1) установить факт инфицированности; 2) установить наличие показаний к противовирусному лечению; 3) выбрать оптимальную схему лечения; 4) своевременно оценить эффективность проводимого лечения и 5) оценить устойчивый ответ на лечение.

Выявление РНК HСV в качественном формате применяется для ранней диагностики острого вирусного гепатита С. РНК ВГС обнаруживается в плазме крови в среднем к 11 дню после заражения. Это позволяет диагностировать острый гепатит С задолго до сероконверсии, что особенно важно для ранней диагностики и проверки донорской крови.

Количественная оценка уровня РНК HСV (вирусная нагрузка) в плазме крови применяется для мониторинга эффективности лечения, что отражено в консенсусном мнении международных экспертов по лечению ХГС и в рекомендациях по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом С Минздрава России от 2013 года. Низкой вирусной нагрузкой принято считать значения менее 400 000 - 800 000 МЕ/мл.

Информация для заказа:

Название	Назначение	Формат детекции	Особенности	Кат. №
АмплиСенс® HСV-FL	Выявление ДНК HCV в качественном формате	FRT	R-V1-Mod (RG,iQ,Mx,Dt)
		FEP	V1-FEP
АмплиСенс® HСV-монитор-FL	количественное определение ДНК HCV (определение вирусной нагрузки)	FRT	Содержит набор РИБО-преп для выделения РНК	TR-V1-P-M (RG,iQ,Mx,Dt)
			Содержит набор РИБО-сорб для выделения РНК	TR-V1-S-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
			Содержит набор МАГНО-сорб для выделения РНК	TR-V1-M-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
			Форма комплектации для использования с автоматическими станциями для экстракции нуклеиновых кислот; не содержит набор для выделения ДНК	R-V1-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
АмплиСенс® HСV 1/2/3-FL	Генотипирование HCV	FRT	Выявление генотипов 1, 2, 3 (без дифференциации субтипов)	R-V1-G-4x (RG,iQ,Mx)
АмплиСенс® HСV-генотип-FL		FEP		V1-G-FEP
		FRT	Выявление генотипов 1а, 1b, 2, 3а и 4	R-V1-G(1-4)-2x (RG,iQ,Mx,Dt,SC)
			Выявление генотипов 1а, 1b, 2, 3а, 4, 5а и 6	R-V1-G(1-6)-2x (RG,iQ,Mx,Dt,SC)
АмплиСенс® Геноскрин- IL28B-FL	Генетических полиморфизмов в гене IL28B	FRT	Выявление аллельных вариантов однонуклеотидных полиморфизмов rs12979860 и rs8099917 в гене интерлейкина 28 В (IL 28В)	R-O5-100-F (RG,iQ,Dt,CFX)

Вирус гепатита D (ВГД, HDV, вирус гепатита Дельта)

Вирус гепатита D - РНК-содержащий вироид (несовершенный вирус), относящийся к семейству Deltavirus. HDV нуждается в хелперной функции вируса гепатита В, который обеспечивает вирус гепатита Дельта белками поверхностной оболочки (HBsAg). Поэтому HDV способен к эффективной репликации только в присутствии HBV.

HDV-инфекция может протекать в двух формах: коинфекции и суперинфекции. Коинфекцией называется инфекционный процесс, когда происходит одновременное заражение вирусами гепатита B и D. Суперинфекция – это инфекционный процесс, который развивается при заражении вирусом гепатита D больного хроническим гепатитом В или носителя вируса гепатита В. Коинфекция носит характер острого тяжелого заболевания с высоким риском развития фульминантного гепатита (до 20%). При суперинфекции, когда заболевание наслаивается на уже измененную ткань печени, в 70-80% случаев инфекция ведет к быстрому развитию цирроза.

РНК HDV является первым диагностическим маркером, обнаруживаемым в крови пациента, антитела к D-Ag появляются на 2-3 недели позже. Выявление РНК HDV c помощью ПЦР позволяет обнаруживать возбудителя в период инфицирования до сероконверсии, что особенно важно для ранней диагностики.

Распознавание HDV-инфекции на фоне гепатита В весьма важно, поскольку течение болезни, терапевтические подходы и прогноз при гепатите Дельта отличаются от таковых при гепатите В без гепатита Дельта. Количественное определение РНК вируса гепатита D в плазме крови необходимо проводить в процессе интерферонотерапии для оценки ее эффективности.

Информация для заказа:

Название	Назначение	Формат детекции	Особенности	Кат. №
АмплиСенс® HDV-FL	Выявление РНК HDV в качественном формате	FRT	Набор реагентов для обратной транскрипции и амплификации кДНК HDV	R-V3 (RG,iQ,Mx,Dt)
		FEP		V3-FEP
АмплиСенс® HDV- монитор-FL	Количественное определение РНК HDV (определение вирусной нагрузки)	FRT	Для использования с автоматическими станциями для экстракции нуклеиновых кислот и наборами для ручного выделения РНК; не содержит набор для выделения РНК	R-V3-MC (RG,iQ,Mx,Dt)
АмплиСенс® HBV/HDV-FL	Выявление ДНК HBV и РНК HDV в качественном формате	FRT	R-V56 (RG,iQ,Mx,Dt)

Вирус гепатита G (HGV/GBV-C)

Вирус гепатита G – РНК-содержащий, лимфотропный вирус, относящийся к семейству Flaviviridae, к которому относится и вирус гепатита С (HCV). Инфицирование HGV происходит при непосредственном попадании вируса в кровь (при парентеральных вмешательствах или при гемотрансфузиях) или через слизистые оболочки, повреждения кожного покрова (при половых контактах, вертикальной передаче).

HGV был впервые изолирован в 1995 году из крови пациента с хроническим гепатитом, у которого отсутствовали маркеры других вирусных гепатитов, из-за чего и был изначально отнесен к вирусам, вызывающим заболевания печени. Основным диагностическим маркером вируса гепатита G является определение РНК HGV методом ПЦР.

Информация для заказа:

Название	Назначение	Формат детекции	Кат. №
Выявление РНК HGV в качественном формате	FRT	R-V2-50-F(RG,iQ,Mx,Dt)
	FEP	V2-50F-FEP

Нормативные документы и публикации о вирусных гепатитах>>