Кора березы при гепатите с
Задачей настоящего исследования является проверка продукта экстракта из коры березы как противовирусного препарата, для лечения гепатита С. Природное происхождение действующих веществ экстракта коры березы, решает целый ряд негативных проблем, возникающих при применении химиопрепаратов. Основным действующим веществом экстракта является тритерпеновый спирт – бетулинол (бетулин).
Бетулин является защитным веществом самой березы и находится в основном в верхнем слое коры, окрашивая ее в белый цвет. Большое число исследований посвящено гепатопротекторной активности бетулина. Возможность применения производных бетулина исследовалась в отношении гепатита на моделях гепатита не вирусного происхождения, вызванного Cll4, тетрациклином и ацетоном. (О.Б. Флехтер “Синтез эфиров тритерпеноидов группы лупана и их гепатопротекторная активность”, Биоорганическая химия, 2000, том 26, №3, стр. 215-223).
В результате проведенных исследований было обнаружено, что экстракт коры березы обладает антивирусными свойствами. Этот эффект был продемонстрирован на модели экспериментальной инфекции, вызванной вирусом гепатита С человека (генотип 1b) в культурах клеток и на модели экспериментальной инфекции, вызванной ВГС у мышей.
Испытания, скрининг новых препаратов, которые могут быть активны в отношении вирусного гепатита С, стали возможными благодаря впервые полученным нами экспериментальных моделей инфекции, вызванной ВГС в культурах клеток на уровне организма лабораторных животных. В результате полученыострая и хроническая инфекции, вызванные ВГС в культурах клеток. Выделены и идентифицированы высокопродуктивные для культур клеток различного происхождения высокопродуктивные варианты ВГС. Показана возможность моделирования инфекции, вызванной разными вариантами (генотипами) ВГС не только в культурах клеток, но и в организме лабораторных животных (мышей). Получена острая и хроническая инфекция, вызванная ВГС в культурах клеток, чувствительных к репродукции флавивирусов. Таким образом, появилась уникальная возможность для оценки противовирусной активности препаратов на экспериментальной модели, вызванной ВГС в культурах клеток. Показано, что изолированные варианты ВГС способны вызвать хроническую инфекцию лабораторных мышей и кроликов, что позволило использовать этих животных для оценки противовирусной активности препаратов.
Из таблицы 1 видно, что максимальная активность препарата Бетулин была зарегистрирована при внесении его в разведении 1:20 в культуры клеток СПЭВ сразу же после заражения клеток ВГС. В этом случае титры ВГС в пробах среды, отобранных на 4-й день после заражения вирусом, снижались на 4,2 lg. Бетулин не оказывал заметного влияния на снижение инфекционных свойств ВГС, когда препарат вносили через 24 часа после заражения клеток вирусом. Следует лишь отметить, что препарат Бетулин в этих условиях не приводил к стимуляции вируспродуцирующей активности клеток. Наиболее стабильным проявлением антивирусных свойств препарата Бетулин было отмечено при его профилактическом применении, т.е. за 24 часа до заражения клеток ВГС.
Разведения препарата
Бетулин
Титры ВГС в пробах среды, отобранных на 4-й день после заражения культур клеток СПЭВ (lg ТЦД50
Препарат сразу после заражения
Через 24 часа после заражения
За 24 часа до заражения клеток
1:10
3,3
5.5.
2,5
1:20
1,3
5,5.
3,4
1:40
5,,0
4,6
3,2
1:80
4,8
5,0
3,3
Без препарата
(контроль)
5,5.
5,5
5,4
Титры вируса, содержащиеся в пробах среды, отобранной из зараженных культур клеток СПЭВ в этом случае стабильно снижались под влиянием разных разведений вносимого препарата на 2,1 – 2,9 lg ТЦД50 .
В опытах использовали белых беспородных мышей, которых заражали внутрибрюшинным способом ВГС, а через 10 дней после заражения ежедневно в течение 4 дней перорально вводили препарат Бетулин в дозах 50, 100 и 150 мг на кг веса животных. Через 3 дня после последнего введения экстракта исследовали кровь, печень и головной мозг мышей на наличие инфекционного вируса гепатита С и его антигенов. Как видно из табл.2, у животных, получавших препарат в дозе 50 мг/кг, была отмечена заметная тенденция к снижению титров гемагглютинина ВГС, а инфекционные титры ВГС в сыворотке крови падали почти в 1000 раз - на 2,6 lg (средние данные). Значительное снижение антигенной и инфекционной активностей ВГС в сыворотке крови отмечали в группе животных, получавших ежедневно экстракт в дозе 100 мг/кг. В этом случае титры инфекционной активности ВГС падали более чем в 1000 раз (на 3,4 lg) и более чем в 2 раза снижалась антигенная активность ВГС в пробах сыворотки крови мышей. В меньшей степени препарат проявлял активность в случае использования его в дозе 150 мг/кг. Снижалась антигенная активность вируса, и почти в 100 раз уменьшалась концентрация вируса (на 1,8 lg).
Близкие результаты, свидетельствующие об эффективности экстракта коры березы, были получены при изучении тканей печени от всех групп животных (табл 2). В частности показано, что максимальное снижение антигенов ВГС и его инфекционной активности наблюдали в случае использования экстракта в разовой дозе 50 и 100 мг/кг при 4-кратном введении экстракта. Показано также, что антигенная активность ВГС при этом снижалась в 2 и более раз и до 100 раз отмечали снижение инфекционной активности ВГС в тканях печени. Сокращались и размеры печени у ВГС инфицированных мышей, получавших экстракт.
Наибольшие титры ВГС (до 7,0 lg ТЦД50 / 20 мкл) наблюдали в тканях головного мозга ВГС инфицированных мышей (табл.1в). Однако и в этом случае у мышей, получавших экстракт в дозах 50 и 100 мг/кг, наблюдали 100-кратное и большее снижение титров инфекционной активности ВГС. При этом снижение антигена ВГС отмечали во всех группах животных, получавших экстракт. В группе мышей, получавших экстракт в дозе 150 мг/кг, отмечена тенденция к увеличению титров инфекционной активности ВГС в головном мозге.
Бетулин представляет собой белый порошок горьковатого вкуса, растворим в спирте, эфире, хлороформе и бензоле, слабо растворим в холодной воде, петролейном эфире и других органических растворителях. Бетулин извлечен из белой части бересты. Основу экстракта составляет тритерпеновый биофлавоноид, который назван в честь березы — бетулином, потому как латинское название березы — Betula, но сухой экстракт коры также содержит лупан, лупеол, бетулина ацетат, aллобетулин, изобетулол, олеиновую кислоту. Температура плавления бетулина 240-260 градусов, при такой темперетуре это вещество теряет биологическую активность.
Более 30 клинических испытаний в зарубежных медицинских центрах и больницах, убедительно показали, что бетулин обладает противовоспалительными, противовирусными и антибактериальными свойствами, имеет также антиоксидантную и антимутагенную активность, способность снижать уровень холестерина в крови, тем самим улучшить функцию печени и почек, а также другие виды деятельности, которые могут быть использованы для восстановления здоровья человека и животных. Бетулин имеет большой потенциал в области косметики и для лечения кожных заболеваний. Он не токсичен, не вызывает побочных реакций в организме.
Березовая кора – береста в народной медицине используется на протяжении многих веков, но сегодня с помощью современных технологией удалось получить экстакт с 80 -90 % содержанием бетулина, что открывает широкие возможности использования экстракта бересты в медицине, пищевой промышленности и косметике.
В последние два десятилетия биологическая активность экстракта коры была продемонстрирована во многих научно-исследовательских центрах, которые подтвердили прямую регулирующую деятельность бетулина, относительно к ферментативным и энзимным системам организма. Бетулин регулирует активность ферментов, влияет на синтез и функционирование клеток. Бетулин встречается во многих растениях, но в коре березы, по сравнению с другими растениями, содержание этого вещества больше. Именно бетулин защищает березовую древесину от бактериальной, грибковой, вирусной атаки. Березы никогда не болеют, другие деревья подвержены различным заболеваниям и атакам вредителей а березы — нет. На молекулярном и атомном уровне человек и растение похоже.
Исследование бетулина на биобезопасность.
По международный токсикологической классификации бетулин определен как вещество низкой токсичности: полулетальной дозой ПЛ50 бетулина является 9000mg на кг. веса, значит – человеку весом 70 кг, чтобы затошнило, каким то образом надо скушать 63 грамм этого вещества, физически это очень трудно сделать. Бетулин не проявляет аллергические, канцерогенные, раздражающие, кумулятивные, мутагенные, эмбриотоксические и сенсибилизирующие свойства.
Фармакологические свойства бетулина.
Фармакологическая активность бетулина изучена очень хорошо. Спектр действия вещества взаимосвязан, многие действующые аспекты дополняют друг друга. Основные свойства бетулина — гепатопротективное, желчегонное действие, растворение желчных и почечных камней, антиоксидантное, противовоспалительное, противоопухолевое, антимутагенное, гипохолестериномическое, противовирусное, иммуномодулирующее, антигипоксантное, гастропротективное, нейропротекторное и антисептическое действие. Бетулин синтезируется в природе, а не в лаборатории, структура этого вещества очень сложное, полноценный химический синтез врятли возможен. Патент на лечение бетулином всем людям от Бога. С каждым годом бетулин занимает все более важное место в лечении
различных заболеваний.
Гиполипидомическое действие.
Процес развития атеросклероза хорошо изучен. По разным причинам(вирусы, паразиты, свободные радикалы от стресса) в стенке артерий возникает воспаление и, как следствие этого, дефекты стенки. Организму нужно эти дырки залатать и это происходит посредством укладки липопротеидов. И так заплат на заплат, пока сосуд зарос, вот и атеросклероз. Процесс синтеза липопротеинов происходит в печени, часть уходит в кровь, избытки холестерина выводится из организма через кишечный тракт. Расстройства печени вызивает усиленное образование холестерина и влияет на атеросклеротические отложения, образующие на стенках кровеносных сосудов.
Бетулин препятствует размножению вирусов и улучшает эндотелиальную функцию барьера. Во-вторых, бетулин ингибирует абсорбцию холестерина в кишечнике. Клинически доказано, что бетулин в дозе 10 мг / кг массы тела, влияет на синтез и накопление жира в печени, тем самим снижает возможность образования жирового перераждения печени.
Бетулин взаимодействует с белками крови, которые связывают стерол-регулирующий элемент – SREBPs, которий действует как повышающий фактор, понижая активность SREBPs и ,следовательно, уровень липидов. Исследования показали, что бетулин уменьшает уровнь липидов в крови не менее эффективно, чем препараты группы статинов, в дополнении уменьшает жир в клетках печени и жировых клетках и повышает чувствительность клеток к инсулину. По сравнению с статинами, бетулин не проявляет никаких побочных эффектов, он работает в качестве эффективного гепатопротектора, длительное применение его не вызывает неблагоприятных изменений в организме.
Гепатопротективное действие (Сокращенный перевод исследования)
Гепатопротективное активность бетулина была изучена с использованием его в качестве нетоксичного вещества при лечении острого гепатита различной этиологии, вызванного отравлением парацетамолом, четыреххлористым углеродом, этанолом. Механизмы действия этих веществ очень разные, но объединяет их то, что во всех случаях повреждается клетки печени и мембраны клеток печени с выходом ферментов в кровь (анализ крови, показывающий повышенный уровнь ASАT, ALАT и ЛДГ). Эксперименты показали, что употребление бетулина 0,0006 — 0,024 мг на килограмм веса тела приводит к менее выраженной интоксикации. Клинические наблюдения и исследования показали, что бетулин защищает мембраны клетки печени от химического воздействия. Использование бетулина 14 дней в дозе, эквивалентной 10 мг на килограмм веса тела, предотвращает разрушение гепатоцитов, подавляет воспалительную инфильтрацию, улучшает отток желчи. Улучшается функция печени посредством возрастания активности citahroma P — 450, таким образом, печень может нейтрализовать конъюгированные вредные вещества. Средние уровни ALАT после месяца использования бетулина снижается на 82%, уровень щелочной фосфатазы снижается на 69%, уровень триглицеридов снихается на 62%.
Бетулин как натуральный не синтетический охранник печени является эффективным средством помощи при остром и хроническом гепатите любой этиологии, в том числе при вирусном гепатите A, B, C, в том числе, где заболевание представляет собой желтучную форму. Это является эффективным средством защиты печени при раковых заболеваниях, когда применяется химиотерапия и лучевая терапия. Также в случаях печеночной жировой дистрофии, поражениях печени возникших после травмы, ожога, операции с продолжительной анестезией. Применение бетулина при гепатите и циррозе позволяет достичь восстановления и реабилитации не причиняя вреда организму, даже долго применяя высокие дозы бетулина. Отмечено также и желчегонное действие бетулина, это вещество является отличным профилактическим средством против воспаления желчного пузыря и желчнокаменной болезни, потому что оно действует непосредственно на фактори, которые вызывают воспаление и сгущение желчи.
Бетулин, улучшая функции печени, снижает уровень холестерина в крови, способствует очищению организма от продуктов обмена веществ.
Противовоспалительные и иммуномодулирующие свойства.
Воспаление является естественным процессом самолечения любого живого организма, в результате которого защитные силы избавляются от патогенных факторов. Если иммунная система сильна, то воспаление острое и непродолжительное. Если иммунная система слабая, воспаление выражено слабо, идет длинный — хронический процес, которий связан с серьезными изменениями в организме, вызывая дистрофию, атрофию, фиброз и рак.
Бетулин значительно стимулирует фагоцитоз (процесс, в котором специфические лейкоциты глотает и уничтожает бактерии, вирусы и аномальные клетки), активизирует макрофаги и другие имунные клетки. Противовоспалительный эффект бетулина особенно выражен в отношении эксудативной и пролиферативной фазы воспаления.
Противовирусная активность.
Уже в 1994 году было доказано, что бетулин сильно тормозит размножене вируса СПИД и герпеса, но небыло известно, как это произходит. В наше время раскрит механизм действия бетулина — он блокирует связывание вируса с клеточной мембраной, а также подавляет размножение вирусов. Было обнаружено, что бетулин усиливает синтез интерферона. Противовирусная активность бетулина продемонстрирована против вируса гриппа, вируса простого герпеса, гепатита С, вируса иммунодефицита человека, аденовируса, ротовируса. Противовирусная активность связана с стимулирующим воздействием бетулина на производство интерферона и на иммуномодулирующую деятельность. Бетулин блокирует молекулы рецепторов вируса, при которых обычно прикрепляется протеиназы, чтобы иметь возможность войти в человеческую клетку, в результате чего вирус теряет способность инфицировать клетки. Кроме прочего бетулин тормозит репликацию вируса в поздней фазе, возможно, образование капсида, которое является внутренней осью вируса, на которой формируется геном вируса — две молекулы РНК. Дефект капсиды вызывает внутренную деформацию, вирус не способен созреть до такой степени, чтобы мог делиться и теряют свою вирулентность. Таким образом бетулин препятствует распространению вируса в организме.
Преимуществом бетулина по сравнению с другими противовирусными препаратами, является то, что он не токсичен, не имеет побочных эффектов, он одновременно оказывает вируцидное и иммуномодулирующее действие, может быть использован в течение длительного времени, это средство может быть менее дорогим по сравнению с использованными препаратами интерферона, которые к тому же имеют настолько выраженные побочные реакции, что иногда приходится прекратить лечение.
Противоопухолевая активность.
Антиохидантная активность.
Патологические процессы в организме часто начинается с повраждения мембран клеточной стенки и клеточных органелл (митохондриев, лизосом, ядра). Клеточная мембрана состоит из фосфолипидов, содержащих полиненасыщенные жирные кислоты. При нормальном обмене веществ в клетках образуется атомарный кислород (по существу, свободный радикал), каторий необхадим в процессе образования энергии тепла и движения. Остатки свободных радикалов нейтрализует антиоксидантная система организма – витамины, полифенолы: флавин и флавоноиды и тритерпены содержащие вещества, в оснавном человек это получает с пищей. Различные внешние и внутренние факторы (химические вещества, бытовая химия, лекарства, электромагнитное излучение, не качественная пища и т.д.) приводит к тому, что свободного кислорода в организме образуется больше, чем антиоксидантная система способна нейтрализовать, в этом случае мембранные фосфолипиды подвергаются перекислому окислению, этот процес вызывает изменения в клетках и может стать пичиной клеточной пролиферации. Структурный гидроксил бетулина С-28-ОН связывается с атомарным кислородом и сдерживает перекисное окисление липидов, защищая клетки от глубокого повреждения.
Перспектва использования бетулин содержащих пищевых добавок.
Бетулин в мире очень популярен в косметической промышленности. Существуют косметические композиции для предотвращения старения кожи, профилактики целлюлита, кремы для защиты от ультрафиолетового излучения. Крем кожи с бетулином стимулирует синтез коллагена под кожей. Бетулин улучшает структуру и блеск волос, способствует росту волос.
Бетулин, как возможность улучшения здоровья народа.
Если государство финансировало бы прибавку бетулина в пищевые продукты, такие как хлеб, молоко, через несколько лет состояние здоровья населения улучшилось настолько, что можно было бы резко снизить бюджетные расходы на здравоохранение, медицинскому персоналу можно было бы платить более высокую заработную плату и небыло бы очередей на лечение.
Производство бетулина в Латвии начато и в ближайшее время победный марш над болезнями, может быть, превзойдет достижения пенициллина.
Желая Вам крепкого здоровья — врач Артурс Терешко
РИГА, 14 апр — Sputnik, Евгений Лешковский. Такая тенденция — большая наука теперь все внимательней присматривается к природе. Это происходит по всему миру. И Латвия не отстает. Недавно мы рассказывали о новом многомиллионном проекте легендарного Латвийского института органического синтеза, который теперь намерен развивать новое направление — фитохимию: исследовать вещества растительного и животного происхождения, чтобы создавать принципиально новые препараты — для людей.
Березу это вещество, содержащееся в коре, защищает от вредных факторов окружающей среды: грибков, вирусов, насекомых и даже от радиации. Заметьте, береста не гниет — она может лежать в земле чуть ли не столетиями, тогда как само дерево давно уж пропадает.
Ученые доказали, что, получив бетулин, его можно будет использовать и для защиты человека от всякого вредного. Не удивляйтесь, у человека и у растения есть биологическое сходство по некоторым параметрам. Ученые определили фармакологическую активность бетулина. Он — сильнейший гепатопротектор: защищает печень и улучшает ее работу. Также бетулин — антиоксидантное вещество, противоопухолевое, противовирусное, а еще является превосходным иммуномодулятором, антисептиком и антимутагеном. Впрочем, и другого всего уйма полезного.
Но в советские годы Институт оргсинтеза так и не стал заниматься выделением бетулина и бетулиновой кислоты (она является сильнейшим средством для лечения человека от онкологии). Во-первых, НИИ получил госзаказы на создание других веществ. Во-вторых, процесс выделения бетулина по тем временам считался чересчур сложным и дорогим.
И спустя много лет инициативу перехватил сосед по академгородку на Тейке — Институт химии древесины. Там ученые тоже давно думали о бетулине, но все до него руки не доходили. Пока не появился на горизонте один из ведущих фитотерапевтов Артур Терешко (уверен, вы видели его лекарственные травяные сборы — они есть почти в каждой аптеке).
Артур Терешко тоже давно думал о бетулине, но не знал, где найти "столько бересты", чтобы добывать вещество не в лабораторных дозах. В итоге он и Институт химии древесины объединили силы, а еще подключили компанию Latvijas finieris ("Латвийская фанера"). Теперь отпал вопрос: где найти много бересты? На этом производстве делают фанеру из березы, а береста там раньше считалась отходом.
А Артур Терешко с "темой бетулина" впервые познакомился, когда проходил дополнительное обучение на кафедре фитотерапии Института восточной медицины РУДН — подразделения Российского Университета дружбы народов. Это было шесть лет назад. Помогли и научные труды по бетулину, написанные специалистами… всего-навсего Военно-медицинской академии имени Кирова (ведомство Минобороны России) и Новосибирского государственного медицинского университета.
"Я видел, что по всему миру многие вплотную занимаются изучением бетулина и наиболее перспективными способами его получения. Но! На фоне остального, что в мире достают "из природы" и синтезируют, бетулин делает мало кто. Лишь некоторые ученые и компании в России им занимаются, а еще китайцы наладили производство. В свою очередь, в США выделяют бетулиновую кислоту — для лечения онкологических заболеваний и СПИДа", — говорит Артур Терешко.
Как-то раз он решил заказать у китайцев килограмм бетулина, чтобы проверить в лабораториях и состав, и действие. Но подозрительный порошок… арестовали на латвийской таможне. Там никто не знал, что это за вещество. Травнику для получения посылки пришлось заказывать экспертное заключение, что это подозрительное вещество является именно бетулином, а не чем-то совсем другим. В итоге килограммовая посылочка обошлась фитотерапевту всего-то в 600 евро…
"Понял, что такое сотрудничество с Китаем не вариант, надо самим в Латвии добывать бетулин. Я вышел на ученых Айгарса Паже и Яниса Рыжкова из Института химии древесины, которые как раз устанавливали аппаратуру для экстракции вещества, чтобы получить чистый бетулин. И наше сотрудничество началось", — вспоминает Артур Терешко.
Наш фитотерапевт, как и любой уважаемый исследователь, получив первую партию бетулина, решил поставить опыты на себе.
Артур Терешко сдал все анализы, узнал, что уровень холестерина у него зашкаливает — 6,5 (при норме — 4), и начал лечиться бетулином. Дело в том, что наиболее явно вещество не только улучшает работу печени, но и приводит в норму уровень холестерина. Три месяца травник пил порошок бетулина — дважды в день по трети чайной ложки во время еды. Для чистоты эксперимента он не менял обычную диету и не пил никаких оздоровительных травяных смесей. Потом снова сделал анализы, по которым уровень холестерина был уже 4,7. То есть — значительно снизился. Почти норма.
"Меня результаты окрылили, я увидел, что все, прочитанное о бетулине, подтверждает практика, и начал действовать дальше. Между прочим, раз уменьшается уровень холестерина, снижается риск атеросклероза и улучшается работа внутренних органов. Плюс к тому бетулин резко подавляет (а при хорошем раскладе и вовсе убивает) действие в организме вирусов B и C. Они вызывают страшные формы гепатита, который официальная медицина лечит только за огромные деньги (под сотню тысяч евро на человека, и, как известно, компенсируется это не всегда) и без особой гарантии", — замечает собеседник.
Но и в институте, и Артур Терешко сказали, что бетулин в мире все еще остается, если не эксклюзивным продуктом, то близким к этому. И относится он к категории "биологически активная добавка". Артур Терешко уже зарегистрировал бетулиносодержащую добавку BETULIVER в Государственной продовольственно-ветеринарной службе.
"Ни я, ни институт не в состоянии зарегистрировать бетулин как лекарственный препарат, поскольку это стоит миллионы евро и занимает годы — с учетом лабораторных и клинических исследований. Подобное под силу лишь фармгигантам. Но бетулин им не выгоден. Они же гонятся за сверхприбылями. А какие сверхприбыли от бетулина?
Пока себестоимость килограмма чистого вещества стоит несколько сотен евро, поскольку его приходится выделять долго и на дорогой аппаратуре. Фармзаводы предпочитают производить вещества, себестоимость которых иногда — это сущие гроши, чтобы была огромная разница с ценой за конечный продукт, за лекарственный препарат, тогда это легко окупит затраты и принесет миллиардные прибыли. Поэтому мы идем другим путем. Но дорога все равно верная", — убежден Артур Терешко.
Модель:
in vitro с использованием биотест-системы на основе ключевого фермента системы микросом печени крыс цитохрома Р-450
Результат, заключение:
Исследованные препараты экстрактов бересты, содержащих бетулин в различных концентрациях, обладают гепатопротекторной и детоксицирующей активностью, так как активируют систему цитохрома Р-450 микросом печени крыс по отношению к субстратам 1 и 2 типа; диметиланилину и анилину.
Модель:
Модель экспериментального гепатита у крыс.
Результат, заключение:
В результате проведенного экспериментального исследования влияния экстракта бересты на секрецию желчи у интактных крыс и функциональную активность печени у крыс с тетрахлорметановым гепатитом установлено следующее:
— Экстракт бересты проявляет выраженную детоксицирующую активность, о чем свидетельствует положительное влияние препарата на систему детоксикации в печени животных на фоне CCI4-гепатита
— повышение активности ферментов биотрансформации
— цитохрома Р 450 и глутатионтрансферазы
Модель:
Определение сродства БЭС к биологической мембране с использованием метода флуоресцентных зондов
Результат, заключение:
Проведенные исследования свидетельствуют о мембранотропности бересты экстракта сухого по отношению к микросомальной мембране. Бересты экстракт сухой in vitro и in vivo является веществом, конкурирующим за места связывания с зондом МБА, улучшающим его проницаемость, увеличивающим полярность глубоких слоев мембраны.
Результат, заключение:
Проведенные опыты свидетельствуют о разносторонней фармакологической активности тритерпеновых веществ. При этом можно констатировать, что гиполипидемическое действие в наибольшей степени оказывает бетуленол и его ацетилирование не усиливает гиполипидемическое действие; наиболее эффективны дозы 75 и 150 мг/кг. Желчегонная активность присуща примерно в равной степени сумме тритерпеноидов и бетуленолу и еще более выражена у диацетата бетуленола. Однако антилитогенная активность в наибольшей мере свойственна бетуленолу. Вещества в дозах 10 и 75 мг/кг оказывают примерно одинаковое влияние. Наибольшее нормализующее действие при токсическом гепатите тритерпеноиды оказывают в дозе 10 мг/кг. При этом наибольшее влияние бетуленол оказывает на активность АЛТ (показатель цитолиза), а сумма тритерпеноидов - на активность ЩФ (показатель холестаза); все вещества (сумма тритерпеноидов, бетуленол и его диацетат) благоприятно воздействуют на жировую дистрофию печени.
Выводы: Сумма тритерпеноидов из коры березы, индивидуальный тритерпеноид бетулин и его диацетат обладают гиполипидемической, желчегонной, антилитогенной и гепатозащитной активностью и снижают содержание холестерина в аорте. Фармакологическая активность тритерпеноидов зависит от их состава и дозы и превосходит действие ряда официальных препаратов полиспонин, цетамифен, сапарал и глицирам.
Результат, заключение:
Бетулин снижает ожирение при диете с высоким содержанием жиров за счет увеличения расхода энергии, тогда как ловастатин (известный статин) за счет уменьшения всасывания липидов / увеличения экскреции,
Бетулин улучшает липидные параметры крови, печени и жировой ткани мышей. Бетулин взаимодействует с белками, связывающими стерол-регуляторный элемент - SREBPs (sterol regulatory element-binding proteins) – транскрипционными факторами, которые, как известно, важны для активации экспрессии генов, вовлеченных в биосинтез холестерина, жирных кислот и триглицеридов. В исследованиях на клетках ученые подтвердили, что бетулин понижает активность обычно активируемых SREBPs генов, а также уровень липидов.
Ингибирование SREBP может быть полезной стратегией для лечения диабета II типа и атеросклероза. Бетулин может служить в качестве ведущего соединения для фармакологического контроля метаболических заболеваний.
Источник:
Inhibition of SREBP by a Small Molecule, Betulin, Improves Hyperlipidemia and Insulin Resistance and Reduces Atherosclerotic Plaques
Cell Metabolism, Volume 13, Issue 1, 5 January 2011, Pages 44–56
Jing-Jie Tang, Jia-Gui Li1, Wei Qi, Wen-Wei Qiu, Pei-Shan Li1, Bo-Liang Li, Bao-Liang Song
The State Key Laboratory of Molecular Biology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, 320 Yue-Yang Road, Shanghai 200031, China
Institute of Medicinal Chemistry, Department of Chemistry, East China Normal University, Shanghai 200062, China
Владельцы патента RU 2244554:
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и используется для лечения вирусного гепатита С. Препарат для лечения вирусного гепатита С, включающий экстракт бересты с содержанием бетулина более 70% и фармацевтически приемлемый носитель. Препарат вводят пациенту перорально. Препарат способствует эффективному лечению вирусного гепатита С. 3 н.з. п. ф-лы, 2 табл.
Настоящее изобретение относится к области медицины, а более конкретно относится к изысканию новых, эффективных средств лечения гепатита С.
Вирусные гепатиты относятся к категории наиболее опасных и распространенных инфекционных заболеваний. Ежегодно в мире от патологий, связанных с этой болезнью, умирают около 2 миллионов человек.
Причиной возникновения вирусных гепатитов являются, по крайней мере, 5 различных вирусов - энтеральные вирусы А и Е и парентеральные (В, С, Д).
Вирус гепатита С является самым "молодым", он был открыт лишь в 1989 году. С его открытием началось интенсивное изучение этой разновидности гепатита, являющейся основной причиной развития хронических диффузных заболеваний печени и гепатоклеточной карциномы.
Отличительной особенностью вируса гепатита С является способность к длительному персистированию в организме, что обуславливает высокий уровень хронизации инфекции (50-80% случаев). Устойчивость вируса обусловлена его способностью реплицироваться с высоким уровнем "мутации", в результате чего возникает несколько иммунологически различающихся вариантов, благодаря которым вирус избегает иммунного надзора. Образующиеся вируснейтрализирующие антитела являются высокоспецифичными и не способны нейтрализовать вновь появляющиеся варианты вируса.
Крайне высокий уровень заболеваемости вирусным гепатитом и, в частности, гепатитом С обуславливает актуальную задачу изыскания и создания эффективных средств терапии этой инфекции.
В настоящее время в практической медицине официально известно два препарата, используемых для лечения вирусного гепатита С (интерферон и рибавирин или виразол), однако это не делает задачу изыскания новых средств лечения этого заболевания неактуальной, в частности, из-за побочных эффектов, которые сопровождают применение известных препаратов, таких как развитие анемии, нейтропении, лейкопении, диспептические явления.
Задачей настоящего изобретения является изыскание нового, высокоэффективного средства для лечения гепатита С.
Другой задачей настоящего изобретения является изыскание высокоэффективного средства для лечения гепатита С природного происхождения, поскольку при этом отпадает целый ряд проблем, сопутствующих применению химиопрепаратов.
Указанные задачи решены настоящим изобретением благодаря установлению авторами высокой противовирусной активности по отношению к вирусу гепатита С у экстракта березовой коры (бересты) с содержанием бетулина в экстракте свыше 70%.
Бетулин является одним из первых природных веществ, которое впервые было выделено из растительного сырья еще в 1778 году. В 1876 году У.Хаусманн опубликовал результаты элементарных анализов бетулина (Hausmann U., Annalen der chemie, 182, р.365).
Основным источником природного бетулина является береза. Белая часть березовой коры у отдельных видов березы (Betula verrucosa, Betula papyfera) содержит до 30% и более бетулина (Hayek, E.W. et al.(1989) A Bicentenmal of Betulin, Phytochemistry, 28(9) р.2229-2242).
Бетулин является пентациклическим тритерпеном с углеродным скелетом ряда лупана, который также называют бетулинолом, трохотоном, березовой камфарой и (корили-) резинолом. Характерной особенностью ряда лупана является кольцо с пятью атомами углерода в составе пентациклической системы, которое в положении С-19 имеет α-изопентениловую группу. Бетулин отличается высокой термостабильностью, его температура плавления находится между 250 и 261°С, причем после сублимации рекристаллизованного продукта достигаются еще более высокие значения. Его молекулярный вес составляет 442,7, он растворим в пиридине и тетрагидрофуране, но мало растворим в дихлорметане, хлороформе и холодных органических растворителях, причем с повышением температуры его растворимость значительно возрастает. В воде и холодном петролейном эфире бетулин практически не растворим. Кроме того, кинетические исследования показали очень низкую реакционную способность гидроксильных групп бетулина.
Еще в 1899 году Дж.Уилер показал антисептические свойства бетулина, и поэтому он использовался для стерилизации перевязочных бинтов и пластырей (Wheeler J., (1899), Pharm. J., Die Darstellung des Betulin durch Sublimation, 494, Ref. Chem. Centr. 1900 I, стр. 353). В натуропатии и народной медицине получали и получают до сих пор отвары березовой коры, которые применяют для лечения малярии, водянки, подагры и при кожных заболеваниях, а также в виде настойки для компрессов при лечении абсцессов.
Большое число исследований посвящено гепатопротекторной активности бетулина. Было обнаружено, что бетулин снижает активность аланинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, содержание малеинового диальдегида, предупреждает воспалительный процесс в печени (Ю.К.Василенко и др. "Фармакологические свойства тритерпеноидов коры березы" Экспериментальная и клиническая фармакология, 1993, т.54 №4 стр. 53-55).
Однако не имеется достоверных сведений о противовирусной активности бетулина, в отличие от его различных синтетических производных. Так, сообщалось, что 3-замещенные глютариловые производные бетулина in vitro обладают цитотоксичностью в отношении лимфоцитов, трансформированных HIV ("Synthesis and anti - HIV activity of betulin derivaties", Bioorg Med Chem Lett. 1998 May 19, 8(10) p.1267-1272).
Большое число публикации посвящено получению целого ряда производных бетулиновой кислоты как потенциальных средств борьбы со СПИДом (см. например, "Synthesis and anti - HIV activity of betulinic acid and dihidrobetulinic acid derivaties", Bioorg Med Chem lett, 1997, Dec 5(12) p.2133-2143).
Возможность применения производных бетулина исследовалась и в отношении гепатита на моделях гепатита не вирусного происхождения, вызванного Cll4, тетрациклином и ацетоном. (О.Б.Флехтер "Синтез эфиров тритерпеноидов группы лупана и их гепатопротекторная активность", Биоорганическая химия, 2000, том 26, №3, стр. 215-223).
Авторами настоящего изобретения неожиданно было обнаружено, что экстракт коры березы обладает антивирусными свойствами. Этот эффект был обнаружен на модели экспериментальной инфекции, вызванной вирусом гепатита С человека в организме мышей.
Несмотря на то, что антивирусная активность производных бетулина была показана рядом авторов на модели ВИЧ инфекции in vitro, неожиданность этого результата обусловлена не только тем обстоятельством, что предыдущие исследования бетулина не обнаруживали у него и у его производных противовирусной активности в отношении вирусного гепатита С, но и тем, что сами авторы изобретения при исследовании экстракта березовой коры в культурах клеток (in vitro) не обнаружили у него этой активности. Она проявилась лишь в условиях in vivo.
Далее описаны результаты исследований влияния экстракта березовой коры на репродукцию вируса гепатита С (далее сокращенно ВГС) в организме лабораторных животных.
Материал и методы:
Вирус: В работе использовали цитопатогенный вариант ВГС, выделенный из сыворотки крови хронически инфицированной ВГС больной. По данным генотипирования изолированный вариант ВГС относится к наиболее распространенному в России генотипу 1b ВГС. В исследованиях использовали инфекционные дозы ВГС, равные 10,0 ТЦД 50.
Противовирусный препарат. В работе использовали экстракт с содержанием бетулина, определенным методом ВЭЖХ - 72%. В опыте использовали различные разведения от 50 до 150 мг на 1 кг веса, которые вводили животным пероральным способом ежедневно в течение 4 дней.
Животные. Для изучения противовирусной активности бетулина использовали белых беспородных половозрелых мышей массой 18-20 г.
Методы. Материал, содержащий ВГС, вводили животным внутрибрюшинным способом. Часть животных оставляли контрольными. На 9-й день после заражения мышей “кормили” (вводили пероральным способом) раствором бетулина (физиологический раствор, с 10% Твина-80) (здесь и далее под бетулином понимается описанный выше препарат) в объеме 50 мкл, содержащих 50, 100 и 150 мг бетулина. Бетулин давали мышам 1 раз в день в течение 4-х дней. В опыте использовали по 10 животных на каждый вариант опыта. Через 2 дня, а также через 10 дней после последнего введения препарата, по 50% животных вскрывали, извлекали печень, головной мозг, забирали кровь. Пробы сывороток крови, надосадочную жидкость, полученную после центрифугирования при 3000 об/мин в течение 15 мин гомогенатов ткани печени и головного мозга использовали для определения антигенов ВГС и инфекционной активности вируса гепатита С. С этой целью вируссодержащие пробы титровали в культурах перевиваемых клеток почек эмбриона свиньи СПЭВ. Антиген ВГС в данных пробах изучали в реакции гемагтлютинации, используя классический метод, описанный Clarke и Casals (1968).
Культуры клеток. Были использованы высоко чувствительные к цитопатогенному действию ВГС культуры перевиваемых клеток почек эмбриона свиньи (СПЭВ), полученные из фирмы “Нарвак”, Москва. Их использовали в виде однодневного монослоя клеток, выращенного в 24-луночных пластиковых панелях. Культуры клеток СПЭВ выращивали на среде 199 с 10% сыворотки эмбриона телят, с добавлением глютамина и антибиотиков (100 ЕД/мл). Для титрования остаточной инфекционной активности вируса использовали ту же линию клеток почки эмбриона свиньи (СПЭВ).
Инфекционную активность ВГС, содержащегося в пробах органов и тканей инфицированных мышей, учитывали по результатам титрования, как правило, на 6-7 день после инфекции, когда развивалось максимальное цитопатогенное действие вируса, используя формулу Рида и Менча для подсчета титра вируса гепатита С.
Данные исследований приведены в таблицах 1 и 2. Как видно из данных табл. 1а, все пробы сывороток крови, полученных от ВГС инфицированных мышей, относящихся к различным группам, содержат как антигенную, так и инфекционную активности ВГС. Причем максимальные проявления этих показателей обнаружены в контрольной группе ВГС инфицированных животных, не получавших бетулин. У животных, получавших препарат в дозе 50 мг на 1 кг веса в 50 мкл, была отмечена заметная тенденция к снижению титров гемагглютинина ВГС, а инфекционные титры ВГС в сыворотке крови падали на 2,6 lg (средние данные). Значительное снижение антигенной и инфекционной активностей ВГС в сыворотке крови отмечали в группе животных, получавших ежедневно препарат “бетулин” в дозе 100 мг/кг. В этом случае титры инфекционной активности ВГС падали на 3,4 lg и более чем в 2 раза снижалась антигенная активность ВГС в пробах сыворотки крови мышей. В меньшей степени препарат проявлял активность в случае использования его в дозе 150 мг/кг. Снижалась антигенная активность вируса, титры инфекционной активности незначительно снижались под влиянием препарата (на 1,8 lg). Близкие результаты, свидетельствующие об эффективности препарата “бетулин”, были получены при изучении тканей печени от всех групп животных (табл.1б). В частности показано, что максимальное снижение антигенов ВГС и его инфекционной активности наблюдали в случае использования препарата в разовой дозе 50 и 100 мг на 1 кг веса при 4-кратном введении препарата. Из данных таблицы 1б видно, что антигенная активность ВГС при этом снижалась в 2 и более раз и до 2 lg отмечали снижение инфекционной активности ВГС в тканях печени. Сокращались и размеры печени ВГС инфицированных мышей под влиянием лечебного эффекта препарата Наибольшие титры ВГС (до 7,0 lg ТЦД50/20 мкл) наблюдали в тканях головного мозга ВГС инфицированных мышей (таблица 1 в). Однако и в этом случае у мышей, получавших препарат “бетулин” в дозах 50 и 100 мг на 1 кг наблюдали снижение титров инфекционной активности ВГС на 2,0-2,5 lg соответственно. При этом снижение антигена ВГС отмечали во всех группах животных, получавших препарат. В группе мышей, получавших бетулин в дозе 150 мг на 1 кг, отмечена тенденция к увеличению титров инфекционной активности ВГС в головном мозге.
Таким образом, данные, полученные при изучении органов и тканей мышей на 17 день после инфекции ВГС и 3-й день после 4-кратного применения препарата “бетулин”, свидетельствуют о высокой противовирусной активности препарата в отношении инфекции, вызванной ВГС у животных.
В этой связи выявлялась продолжительность положительных изменений в организме ВГС инфицированных мышей после отмены препарата. Поэтому 2-я группа ВГС инфицированных животных была обследована на 28 день после инфекции и на 11 день после отмены лечения препаратом “бетулин”.
Полученные результаты приведены в таблицах 2а, б, в. Исследование антигенной активности ВГС в органах и тканях мышей в этот период времени позволило установить, что лечение препаратом “бетулин” в дозах 50 мг и 100 мг на 1 кг, как правило, приводило к значительному снижению содержания гемагглютинина ВГС в пробах сыворотки крови, печени и головного мозга ВГС инфицированных животных (в дозе 100 мг на 1 кг до 4 раз - в печени мышей, в 2 и более раз - в сыворотке крови и головном мозге животных). Доза препарата, равная 150 мг на 1 кг, как правило, приводила к незначительному снижению содержания антигена ВГС в органах и тканях животных, инфицированных ВГС.
Изучение инфекционной активности ВГС в органах и тканях ВГС инфицированных мышей показало, что в отдаленные сроки после завершения лечения антивирусный эффект введенного препарата сохранялся в течение более чем 10 дней. Однако анализ полученных данных позволил обнаружить иные закономерности в параметрах инфекции ВГС в эти сроки. В частности, показано, что титры ВГС, содержащиеся в сыворотке крови и в печени контрольной группы животных в значительной степени превышали эти значения, выявленные в ранние сроки после заражения мышей (на 1,5 lg - в сыворотке крови, на 2,4 lg - в печени). В то же время, на 28-й день после инфекции в тканях головного мозга титры вируса стали заметно снижаться.
Противовирусный эффект препарата “бетулин” в эти сроки после отмены препарата был несколько снижен, однако наибольший эффект наблюдался в период, когда для лечения использовали дозу, равную 50 мг на 1 кг веса. В этом случае в сыворотке крови животных титры вируса снижались в среднем на 1,9 lg, в печени - на 2,9 lg, в головном мозге - на 2,4 lg. 4-кратное введение препарата “бетулин” в дозе 100 мг на 1 кг приводило к менее существенным изменениям титра ВГС в сторону уменьшения (см. таблицы.2а, б, в).
Таким образом, установлено положительное действие препарата “бетулин” на снижение показателей инфекции, вызванной ВГС у мышей, и через 10 дней после его отмены.
Полученные авторами изобретения результаты позволяют утверждать, что экстракт березовой коры обладает высокой антивирусной активностью в отношении инфекции, вызванной вирусом гепатита С, что позволяет предлагать его в качестве средства для лечения этого вида гепатита.
При этом нет оснований утверждать, что содержание бетулина в экстракте не менее 70% является критическим и ограничивать им объем изобретения. Практически значимые результаты могут быть получены и при меньших значениях содержания бетулина. Установление этих граничных значений может быть осуществлено специалистами при проведении обычной рутинной работы, в частности, основываясь на изложенном выше в описании настоящего изобретения.
Предпочтительной формой применения экстракта бересты являются твердые лекарственные формы: таблетки, пилюли, капсулы, порошки. При этом могут использоваться обычные для этого вида фармацевтически приемлемые носители. Препарат может включать один или несколько наполнителей, таких как микрокристаллическая целлюлоза, лактоза, сахара, крахмалы, маннит, сорбит и другие полиолы, карбонат кальция, фосфат кальция, сульфат кальция, полиэтиленгликоли и др.
Препарат также может включать поверхностно-активные вещества и другие обычные компоненты для твердых фармацевтических препаратов, такие как красители, ароматизаторы, адсорбенты.
При изготовлении препарата в виде таблетки с покрытием последнее может быть получено из таких пленкообразующих веществ как гидроксипропилцеллюлоза, пластификатора, такого как полиэтиленгликоли, и других вспомогательных добавок таких как, например, пигменты.
1. Применение экстракта бересты в качестве средства для лечения вирусного гепатита С.
2. Препарат для лечения вирусного гепатита С, включающий экстракт бересты с содержанием бетулина более 70% и фармацевтически приемлемый носитель.
3. Способ лечения вирусного гепатита С, характеризующийся тем, что пациенту перорально вводят препарат по п.2.
Читайте также:
