Коэффициент позитивности в анализе гепатита с

Выбор исследований и оценка результатов на вирусные гепатиты.

Применяемые лабораторные технологии:

• ИХЛА (иммунохемилюминесцентный анализ) – количественный высокочувствительный анализ на выявление серологических маркеров
• ИФА (иммуноферментный анализ) – полуколичественный или качественный средне-чувствительный анализ на выявление серологических маркеров
• ПЦР (полимеразная цепная реакция) – качественный и количественный анализ на выявление в крови ДНК и РНК живых вирусов в период репликации
  

1. HbsAg - поверхностный антиген вируса гепатита В.
   Метод ИФА (отечеств.) – предел обнаружения от 0.1 нг/мл, результат (+) или (-)
   Положительный тест подтверждают дополнительным исследованием. Возможно получение ложно-отрицательных результатов у 5-7% лиц, имеющих низкие уровни HBsAg или редкие субтипы вируса гепатита В.

   HBsAg – метод ИХЛА (Эбботт, США) – предел обнаружения от 0.05 МЕ/мл, выявляет все мутантные формы вируса.
   Результат отрицательный при уровне менее 0.05 МЕ/мл, положительный результат - более 0,05 МЕ/мл.
   Появляется через 1-2 недели после инфицирования. При выздоровлении исчезает через 1.5 месяца. Выявление его после 6 месяцев означает переход заболевания в хроническую форму.
   Отрицательный результат возможен у 0.01-0.05 % лиц с очень низкими уровнями HBsAg.
   Положителен у больных острым ВГВ с начала заболевания и у всех больных с хроническими формами; бессимптомное носительство антигена возможно и после выздоровления у лиц с ослабленным иммунитетом в связи с низкой продукцией антиHBsAg.

2. AntiHBcor - суммарные антитела к сердцевинному антигену вируса гепатита В. Поскольку сам антиген (HBcor) находится в печеночной клетке и в крови не обнаруживается, о его наличии судят по появлению в крови антител к нему.
   AntiHBcor - метод ИХЛА (Эбботт, США) – результат в виде цифрового коэффициента обратной реакции:
   От 1 до 3 – отрицательный
   От 0 до 1 – положительный. Чувствительность теста – 1РЕI unit/ml.
   Тест становится положительным с 4 недели у больных острым ВГВ. Выявляется у всех переболевших ВГВ ранее с выздоровлением в течение всей жизни (даже без HBsAg в крови); у больных любыми формами хронического ВГВ.
   Кровь доноров, положительных по антиHBс, считается непригодной для переливания, даже при отрицательном результате исследования на HBsAg.
   
3. AntiHBcorIgM – острофазовые антитела к сердцевинному антигену гепатита В (ИФА) отечеств. – результат (+), (-). Антитела выявляются при остром ВГВ с 2 по 8 месяц, при хроническом ВГВ указывают на наличие текущего обострения.
   Оценивается только в совокупности с HBsAg и антиHBcor.
   
4. AntiHBs - антитела к поверхностному антигену гепатита В - количественно (ИХЛА) DPC, США – пределы обнаружения – от 3 до 2000 мЕ/мл
   Менее 10 мЕ/мл – отрицательный результат
   Более 10 мЕ/мл - положительный
   Антитела появляются у больных в периоде реконвалесценции. Активная выработка антител приводит к связыванию и удалению HBsAg из кровотока при выздоровлении. Уровень их достигает пика через 6-8 месяцев; антитела могут сохраняться длительное время как показатель активации иммунитета к ВГВ у лиц, переболевших с выздоровлением. У лиц, вакцинированных против ВГВ, антитела являются показателем эффективной иммунизации при уровне от 10 мЕ/мл и более, согласно критериям ВОЗ.
   Эффективный иммунитет после прививки от ВГВ сохраняется до 10 лет, контролируется по уровню антиHBs.
   
5. НВеAg – внутренний антиген вируса гепатита В - ( метод ИФА) – результат (+), (-). Антиген выявляется на неделю позже HBsAg, держится до 2 месяцев острого периода ВГВ; является маркером максимальной заразности больного, наличие его у беременной означает риск заражения плода в 60-80%.
   Обнаруживается при хроническом активном гепатите, при хроническом персистирующем гепатите. Заменяется на антиНВе спустя 6 месяцев от начала заболевания.
   
6. AntiНВе IgG (ИФА) – антитела к внутреннему антигену гепатита В - появляются по окончании острого периода ВГВ, что означает благоприятный прогноз, особенно при нарастании титра. Могут обнаруживаться в крови в течение 2-5 лет.
   
7. AntiHVD суммарные - антитела к вирусу гепатита Д - (ИФА) качественно – результат (+), (-). Маркер инфицированности текущего или перенесенного ранее ВГД. Заболевание возможно только на фоне имеющегося ВГВ как суперинфекция.
   
8. AntiHCV суммарные - антитела к вирусу гепатита С - (ИФА) – результат (+) или (-). Используется как первичный скрининг на наличие ВГС; основанием для диагноза не является, так как возможны как ложно-положительные, так и ложно отрицательные результаты. Положительный результат подтверждают и повторяют анализ другой тест-системой. Появляются антиВГС не ранее, чем через 5 недель от момента заражения (возможно и через 30-50 недель). Ложно-отрицательные результаты возможны при использовании низкочувствительных тест-систем, не выявляющих вирусы некоторых генотипов, чаще 1а и 3а.
   AntiHCV (ИХЛА) Эбботт, США – высокочувствительный третьего поколения количественный тест на определение антител к восьми антигенам вируса гепатита С всех генотипов: Nc, E1/s,E2/Ns1, Ns2-5. Результат (+) или (-) и в виде коэффициента позитивности, позволяющего видеть изменения в динамике. Ложноотрицательный результат возможен в самом начале заболевания (так называемое серонегативное окно).

   У лиц, больных гепатитом С тест положителен как вне обострения, так и при обострении.

9. AntiHCVIgM - острофазовые антитела к вирусу гепатита С (ИФА) качественно – результат (+), (-).
   Наличие антител характерно для острой фазы ВГС, обострения хронического ВГС.
   
10. ПЦР (полимеразная цепная реакция)– анализ на выявление ДНК-РНК (DNA-RNA) живых вирусов гепатитов В,С, Д в крови – высокочувствительный тест на наличие острого ВГ или обострения хронического заболевания. Положительный тест свидетельствует о текущей репликации вируса в печеночной ткани с выходом вируса в кровь. Тест может быть отрицательным у выздоровевших после острого ВГ (до15% случаев), при хронических гепатитах вне обострения (при отсутствии репликации и деструкции печеночной ткани), на фоне противовирусной терапии, при подавлении репликации вируса гепатита С у пациентов с сочетанным гепатитом В, Д, А.
    Определение РНК вируса гепатита С в крови является золотым стандартом – наиболее чувствительным и ранним тестом для диагностики заболевания (положителен с 7-21 дня от момента инфицирования, в отличие от антител). Вирусемия в течение более 6 месяцев – свидетельство хронизации болезни. Количественный анализ (вирусная нагрузка) используется для определения показаний и контроля за лечением антивирусными препаратами гепатитов В и С.
    Определение генотипа вируса гепатита С (HCV) используется для выявления устойчивых к препаратам интерферона типов вируса (1b) и выбора тактики лечения.

ВИРУСНЫЙ ГЕПАТИТ А, ГА – широко распространенная высококонтагиозная инфекция, вызываемая вирусом гепатита А (ВГА); в клинически выраженных случаях характеризуется симптомами острого поражения печени и интоксикации. Термин ГА был предложен Ф.Мак-Коллумом в 1947 году и окончательно утвержден Научной группой экспертов ВОЗ в 1973 г. До этого ГА был известен как инфекционный гепатит, эпидемический гепатит, болезнь Боткина, катаральная желтуха, инфекционная желтуха и т.д.

ГА, как инфекция, встречается повсеместно, но частота заболеваемости варьирует в очень широких пределах: от единичных случаев за год в странах с высоким социально-гигиеническим уровнем жизни населения до показателей порядка нескольких тысяч на 100000 жителей в развивающихся странах. В некоторых из них распространенность ГА столь велика, что к возрасту 5 лет все дети оказываются перенесшими инфекцию.

Ввиду сходства клинической картины острого периода болезни при всех вирусных гепатитах, окончательный этиологический диагноз ГА может быть поставлен (или отвергнут) только с помощью специфических иммунодиагностических методов. Наиболее надежным из них является метод определения антител к вирусу в виде иммуноглобулинов класса М (анти-ВГА IgM). Эти антитела присутствуют в сыворотке с самых первых дней болезни и исчезают не ранее, чем через 3-4 месяца. Их обнаружение в одной пробе сыворотки однозначно свидетельствуют о наличии текущей или недавней ГА инфекции; напротив, отсутствие анти-ВГА IgM исключает причастность ВГА к данному заболеванию.

ВИРУСНЫЙ ГЕПАТИТ В, ГВ – широко распространенная инфекция человека, вызываемая вирусом гепатита В; в клинически выраженных случаях характеризуется симптомами острого поражения печени и интоксикации, отличается многообразием клинических проявлений и исходов заболевания. Гепатит В определяет практически всю летальность при вирусных гепатитах, 70-80% случаев которой приходится на сочетанные формы с дельта-инфекцией. Термин гепатит В утвержден в 1973 году научной группой экспертов ВОЗ. Ранее гепатит В обозначали как сывороточный гепатит, гепатит, передающийся парентерально, и т.д.

Гепатит В распространен во всех частях света, о чем свидетельствует повсеместная, но неравномерная заболеваемость острым и хроническим гепатитом В. Частота регистрируемой заболеваемости варьирует от нескольких десятков случаев в год в странах с высоким уровнем жизни (например, Скандинавские страны) до нескольких сотен на 100000 жителей для таких регионов, как Центральная Африка, Юго-Западная Азия. В целом по России в последние годы регистрируемая заболеваемость находится на уровне 18,1-21,9 случая на 100000 с колебаниями в отдельных от 5-10 в европейской части до 30-40 на Дальнем Востоке, в Туве и Якутии. Результаты анализа заболеваемости за последние двадцать лет указывают на ее рост, что отражает как глобальную тенденцию к росту заболеваемости гепатитом В, так и улучшение лабораторной диагностики этой инфекции в нашей стране. Однако следует учесть, что регистрируемая заболеваемость составляет только часть истинной, так как не все случаи острого гепатита В диагностируются, а количество недиагностируемых его безжелтушных форм, как минимум, в 5-6 раз превышает желтушные.

Заражение вирусом гепатита В происходит при непосредственном попадании вируса в кровь (при парентеральных вмешательствах или при гемотрансфузии) или через слизистые оболочки, повреждения кожного покрова (при половых контактах, вертикальной передаче, тесном бытовом контакте), вызывая первичную вирусемию. При проникновении вируса через слизистые оболочки или кожу вирусемии предшествует лимфаденит.

Возбудитель ВГВ – ДНК-содержащий вирус с предпочтительным тропизмом к печеночной ткани. Оболочка вируса состоит из повторяющихся структур поверхностного HВsAg. Внутренняя оболочка капсида вируса состоит из повторяющихся белковых структур, иммунологически идентифицированных как HВсAg. При репликации ВГВ в гепатоцитах также нарабатывается несорбирующаяся в капсид денатурированная форма HВсAg – HВеAg, который играет важную роль в развитии заболевания. В отличие от HВсAg, HВеAg может присутствовать в сыворотке крови больных ВГВ. Любая из разновидностей гепатита В обнаруживается наличием хотя бы части специфических, определяемых лабораторным анализом антигенных (HBs- , HBe-антигены), иммунологических (антитела классов IgM и IgG к антигенам) или генетических (нуклеотидные последовательности ДНК ВГВ) маркеров этой инфекции в крови, лимфе, других биологических жидкостях организма, а также в клетках и тканях различных органов. Для прямого подтверждения диагноза ВГВ-инфекции, мониторинга хронической инфекции, контроля эффективности курса терапии гепатита В весьма информативно дополнительное определение генетического маркера-ДНК ВГВ-гибридизацион-ным или наиболее высокочувствительным ПЦР-анализом.

Гепатит С, подобно гепатиту В, как инфекция, имеет повсеместное, но неравномерное распространение. Считается, что в мире проживает, как минимум, 500 миллионов человек, инфицированных ВГС. В США количество инфицированных составляет 3875000 человек. В России их число может приближаться к 5 миллионам.

Характерными особенностями ВГС – инфекции являются циркуляция вируса в минимальных концентрациях и не имеющая прецедентов гетерогенность ВГС, являющиеся причиной слабой иммуногенности вируса, что не приводит к выработке полноценного протективного иммунитета (феномен ускользания от иммунного ответа и, как следствие, длительная персистенция вируса в организме). Гепатит С имеет наиболее высокую степень хронизации по сравнению с другими гепатитами (75-80%) и является основной причиной формирования всей группы хронических болезней печени. Особенностью заболевания гепатитом С является малосимптомное течение, длительное время остающееся нераспознанным, но постепенно прогрессирующее с развитием цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы.

Отличительной чертой является волнообразное течение заболевания, в котором разграничиваются три фазы: острая, латентная и фаза реактивации.

Для острой фазы характерно повышение уровня печеночных ферментов, наличие анти-ВГС-IgM и анти-ВГС-core-IgG, а также РНК ВГС.

Латентная фаза характеризуется отсутствием клинических проявлений, наличием анти-ВГС-IgG к core и неструктурным белкам (NS3, NS4, NS5), отсутствием анти-ВГС-IgМ РНК ВГС либо их присутствием в низких концентрациях на фоне небольшого повышения уровня печеночных ферментов в период обострения.

Для фазы реактивации характерно появление клинических признаков, повышение уровня печеночных ферментов, наличие анти-ВГС-IgG к core и к NS в высоких титрах, наличие РНК ВГС, нарастание титров анти-ВГС-IgМ в динамике.

ИФА – наиболее часто применяемый метод выявления анти-ВГС в службе переливания крови и клинической диагностике. При интерпретации результатов обязательно оценивать коэффициент позитивности (КП). Расчет КП проводится для каждого антигена (core, NS3, NS4, NS5) отдельно в условных единицах. Если КП для каждого антигена меньше 1, то исследуемую сыворотку расценивать как отрицательно реагирующую и не имеющую антител к структурным и неструктурным белкам. Результаты анализа считать положительными, если значение КП >= 1 для core-Ag или/и для любых двух антигенов. Результат расценивается как неопределенный, если только с одним из неструктурных белков получена положительная реакция (КП >= 1). Коэффициент позитивности – удобная и простая величина для наблюдения заболевания в динамике. При наблюдении в динамике неопределенный результат ИФА расценивается как отрицательный если значение КП не увеличивается, не появляются антитела к другим белкам ВГС, РНК ВГС не обнаруживается, постоянно определяется нормальный уровень трансаминаз и отсутствуют клинические признаки. Необходимо помнить, что при сравнении в динамике использовать тест-системы одного производителя!

При определении анти-ВГС в некоторых случаях регистрируется ложнопозитивная реакция. В некоторых группах больных их частота может быть повышена, например, у пациентов с алкогольным поражение печени и аутоиммунным гепатитом. Ложнопозитивные результаты могут быть связаны с неправильным хранением исследуемых образцов и их возможной контаминацией.

Клиническое значение генотипов НСV

В процессе изучения вирусного гепатита С большое количество исследований было посвящено вопросам о связи генотипов/субтипов вируса с различными аспектами НСV-инфекции. У пациентов с субтипом 1b хронизация НСV-инфекции происходит в 90% случаев, в то время как с генотипами 2 и 3 – в 33-50%. (Аmоrоsо Р. еt а1, 1998). В ряде работ отмечено, что при инфицировании 1b генотипом наблюдается более тяжелое течение заболевания, развитие цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы (Mita E et al, 1994, Lau JYN et al, 1996, Serfaty L., et al 1997, Вruno S еt а1, 1997, Nagayama K. et al 2000). Пациенты с субтипом 3а имеют более выраженный стеатоз и поражения желчевыводящих путей, а так же более высокий уровень АLТ, чем пациенты с генотипом 1. При этом уровень фиброза более выражен у пациентов с субтипом 1b. (Мihm S et al, 1997). Инфицирование генотипом 1 НСV ведет к более быстрому прогрессированию ВИЧ инфекции (Sabin SA et al, 1997).

Учитывая широкий круг системных заболеваний, вызванных ВГС, предложено переитменовать гепатит С в инфекцию ВГС.

Экстрапеченочные проявления ВГС-инфекции:

1. Эндокринные – гипертиреоз, гипотиреоз, тиреоидит Хашимото, сахарный диабет.

2. Гематологические – смешанная кариоглобулинэмия, идиопатическая тромбоцитопения, апластическая анемия и др.

3. Кожные – некротизирующий васкулит, красный плоский лишай, узловая эритема, крапивница, витилиго.

4. Нейро-мышечные и суставные – миопатический синдром, периферическая полинейропатия, артриты, артралгии.

5. Почечные – гломерулонефрит.

6. Аутоиммунные – узелковый периартериит, интерстициальный легочный фиброз, легочный васкулит, дерматомиозит.

7. Прочие – лимфоцитарный сиалоаденит, язвы роговицы, увеит.

Ответ на противовирусную терапию. При монотерапии интерфероном устойчивый ответ наблюдается у 18% пациентов инфицированных субтипом 1b и у 55% пациентов инфицированных другими генотипами (Davis Gl, et al., 1997). При комбинированной схеме лечения – интерферон + рибавирин стойкий ответ наблюдается у 28% пациентов инфицированных субтипом 1b и у 66% пациентов, инфицированных другими генотипами. (McHutchinson et al., 1998).

Международный Консенсус Европейского Общества по Изучению Печени (EASL) рекомендует перед началом противовирусной терапии проводить биопсию печени и определять генотип HCV. Продолжительность терапии зависит от вирусной нагрузки и генотипа. Пациентам, инфицированным субтипом 1b, рекомендуется комбинированная терапия интерфероном с рибавирином в течение 48 недель, пациентам, инфицированным геонотипами 2 и 3 – в течение 24 недель.

ВИРУСНЫЙ ГЕПАТИТ D, ВГD – Дельта-гепатит-инфекция, вызываемая вирсом гепатита D (ВГD), характеризуется симптомами острого поражения печени и интоксикации, в большинстве случаев протекающей тяжелей, чем другие вирусные гепатиты. Обязательным условием проявления патологического действия ВГD является наличие реплицирующегося вируса гепатита В. Дельта-инфекция существует в двух формах: острой инфекции с одновременным заражение вирусом гепатита В и дельта-вирусом – коинфекция и острой инфекции с заражением ВГD носителей поверхностного антигена вируса гепатита В – суперинфекция.

Дельта-гепатит, так же как и гепатит В, имеет практически повсеместное, но и неравномерное распространение. Частота случаев коинфекции колеблется в различных странах от спорадической регистрации до 25-30% от числа заболевших острым HВsAg-позитивным гепатитом.

Показателем широты распространения дельта-инфекции служит и частота выявления антител к дельта-антигену (анти-ВГD) среди носителей ВГВ и больных хроническим гепатитом. Считается, что около 5% HВsAg – носителей (приблизительно 15 миллионов человек) инфицированы дельта-вирусом.

Заражение гепатитом D происходит только при непосредственном попадании вируса в кровь, который далее с кровотоком попадает в печень. Предполагают, что печень является единственным органом, где происходит репликация вируса гепатита D. Механизм повреждения гепатоцитов при гепатите D до конца не ясен. Вместе с тем, принято считать, что ведущее значение в этом процессе занимает прямое цитопатогенное действие вируса.

ВИРУСНЫЙ ГЕПАТИТ G, ВГG – инфекция, вызываемая вирусом гепатита G. По своим клиническим проявлениям ГG ближе всего вирусному гепатиту С. Его часто называют НCV-подобным гепатитом. Острый ГG может протекать бессимптомно или манифестно. При манифестном течении преобладают безжелтушные и стертые варианты. Клинические проявления и степень повышения активности аминотрансфераз при остром ГG менее выражены, чем даже при остром гепатите С. Исходами заболевания могут быть выздоровление с полной элиминацией вируса и формирование хронической формы инфекции. Роль вируса в развитии фульминантных форм гепатита изучается. Несмотря на пристальный интерес к проблеме гепатита G количество работ, посвященных изучению клинических проявлений этой инфекции ограничено. Вероятнее всего это можно объяснить редким выявлением случаев моноинфекции гепатита G.

Anti-HCV – специфические иммуноглобулины классов IgM и IgG к белкам вируса гепатита С, свидетельствующие о возможной инфицированности или ранее перенесенной инфекции.

Суммарные антитела к вирусу гепатита С, анти-HCV.

Синонимы английские

Antibodies to Hepatitis C Virus, IgM, IgG; HCVAb, Total.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирус гепатита С (ВГС) – РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, который поражает клетки печени и вызывает гепатит. Он способен размножаться в клетках крови (нейтрофилах, моноцитах и макрофагах, В-лимфоцитах) и ассоциирован с развитием криоглобулинемии, болезни Шегрена и В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Среди всех возбудителей вирусных гепатитов у ВГС наибольшее количество вариаций, а благодаря высокой мутационной активности он способен избегать защитных механизмов иммунной системы человека. Существует 6 генотипов и множество субтипов вируса, которые имеют разные значения для прогноза заболевания и эффективности противовирусной терапии.

Основной путь передачи инфекции – через кровь (при переливании элементов крови и плазмы, пересадке донорских органов, через нестерильные шприцы, иглы, инструменты для татуирования, пирсинга). Вероятна передача вируса при половом контакте и от матери ребенку во время родов, но это происходит реже.

Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и остается невыявленным в большинстве случаев. Только у 15 % инфицированных заболевание протекает остро, с тошнотой, ломотой в теле, отсутствием аппетита и потерей веса, редко оно сопровождается желтухой. У 60-85 % зараженных развивается хроническая инфекция, что в 15 раз превышает частоту хронизации при гепатите В. Для хронического вирусного гепатита С характерна "волнообразность" с повышением печеночных ферментов и слабовыраженными симптомами. У 20-30 % больных заболевание приводит к циррозу печени, увеличивая риск развития печеночной недостаточности и гепатоцеллюлярной карциномы.

Специфические иммуноглобулины вырабатываются к ядру вируса (нуклеокапсидному белку core), оболочке вируса (нуклеопротеинам Е1-Е2) и фрагментам генома вируса гепатита С (неструктурным белкам NS). У большинства больных ВГС первые антитела появляются через 1-3 месяца после инфицирования, но иногда могут отсутствовать в крови больше года. В 5 % случаев антитела к вирусу так никогда и не обнаруживаются. При этом о ВГC будет свидетельствовать выявление суммарных антител к антигенам вируса гепатита С.

В острый период болезни образуются антитела классов IgM и IgG к нуклеокапсидному белку core. В период латентного течения инфекции и при ее реактивации в крови присутствуют антитела класса IgG к неструктурным белкам NS и нуклеокапсидному белку core.

После перенесенной инфекции специфические иммуноглобулины циркулируют в крови 8-10 лет с постепенным снижением концентрации или сохраняются пожизненно в очень низких титрах. Они не защищают от вирусной инфекции и не снижают риска повторного заражения и развития заболевания.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики вирусного гепатита С.
• Для дифференциальной диагностики гепатитов.
• Для выявления ранее перенесенного вирусного гепатита С.

Когда назначается исследование?

• При симптомах вирусного гепатита и повышении уровня печеночных трансаминаз.
• Если известно о перенесенном гепатите неуточненной этиологии.
• При обследовании людей из группы риска по заражению вирусным гепатитом С.
• При скрининговых обследованиях.

Что означают результаты?

Отношение S/CO (signal/cutoff): 0 - 1.

Причины anti-HCV положительного результата:

• острый или хронический вирусный гепатит С;
• ранее перенесенный вирусный гепатит С.

Причины anti-HCV отрицательного результата:

• отсутствие вируса гепатита С в организме;
• ранний период после инфицирования;
• отсутствие антител при вирусном гепатите С (серонегативный вариант, около 5 % случаев).

Что может влиять на результат?

• Ревматоидный фактор в крови способствует ложноположительному результату.



• При положительном результате anti-HCV для подтверждения диагноза "вирусный гепатит С" выполняется тест с определением структурных и неструктурных белков вируса (NS, Core).
• При имеющихся факторах риска заражения и подозрении на вирусный гепатит С рекомендовано определение РНК вируса в крови методом ПЦР даже при отсутствии специфических антител.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гепатолог, гастроэнтеролог, терапевт.

Литература

• Возианова Ж. И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3 т. - К.: Здоровье, 2000. – Т.1.: 600-690.
• Кишкун А. А. Иммунологические и серологические исследования в клинической практике. – М.: ООО "МИА", 2006. – 471-476 с.
• Harrison's Principles of Internal Medicine. 16 th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
• Lerat H, Rumin S, Habersetzer F, and others. In vivo tropism of hepatitis C virus genomic sequences in hematopoietic cells: influence of viral load, viral genotype, and cell phenotype. Blood. 1998 May 15;91(10):3841-9.PMID:9573022.
• Revie D, Salahuddin SZ. Human cell types important for hepatitis C virus replication in vivo and in vitro: old assertions and current evidence. Virol J. 2011 Jul 11;8:346. doi: 10.1186/1743-422X-8-346. PMID:21745397.

Выявление антител к вирусу гепатита С (анти-ВГС) в крови пациентов методом иммуноферметного анализа (ИФА), которое является первым шагом лабораторной диагностики ВГС-инфекции, наиболее эффективно при обследовании людей без иммунодефицитного состояния в фазу развернутой продукции антител. На раннем этапе заражения ВГС и после выздоровления [8], а также при патологических и физиологических, в частности, возрастных, иммунодефицитных состояниях результаты исследования анти-ВГС в ИФА могут быть позитивными, но с низкой оптической плотностью, или противоречивыми [6]. В то же время вследствие широкого распространения и социальной значимости ВГС-инфекции необходимость в правильной интерпретации результатов исследования возникает уже на этапе первичного скрининга. Развитие гепатита С сопровождается определенными биохимическими изменениями сыворотки крови, в частности, увеличением концентрации аланинаминотрансферазы и α-фетопротеина (АФП) [3, 9]. Некоторые из биохимических маркеров повреждения печени могут быть обнаружены в сыворотке крови с неопределенным результатом исследования анти-ВГС в иммуноблоте [5]. В РФ в качестве подтверждающих тест-систем используются не только иммуноблоты, но и тест-системы для ИФА (ИФТС) в планшетном формате с раздельным определением антител к ряду антигенов ВГС. Относительно биохимической характеристики сыворотки крови с неопределенным результатом исследования анти-ВГС в планшетных ИФТС в литературе имеются единичные данные [5].

Целью представленной работы было определение концентрации α-фетопротеина в сыворотке крови пациентов пожилого возраста с различным, в том числе неопределенным, результатом исследования анти-ВГС в подтверждающих тест-системах планшетного формата с раздельным определением антител к антигенам ВГС.

Материалы и методы

Результаты были получены при исследовании 82 образцов сыворотки крови пожилых людей, направленных на определение наличия в них маркеров вирусных гепатитов.

Полученные результаты

После исследования в образцах сыворотки крови наличия анти-ВГС были выделены следующие группы:

1) при отсутствии анти-ВГС в скрининговой тест-системе образцы были признаны не содержащими анти-ВГС (группа Анти-ВГС-);

2) при выявлении в первичной скрининговой и в подтверждающей тест-системе анти-ВГС с высокой оптической плотностью (ОП не менее 2,0, КП не менее 8) образцы были признаны анти-ВГС-содержащими (группа Анти-ВГС+).

Следующие две группы были выделены при дальнейшем исследовании позитивных образцов с низкой ОП в ИФТС для первичного скрининга (ОП менее 1,4, КП менее 5), а именно:

3) при выявлении анти-ВГС с низкой ОП и соответственно с низким КП в двух подтверждающих ИФТС разных производителей и определения низкой или высокой авидности анти-ВГС образцы признавались анти-ВГС-низкопозитивными (группа Анти-ВГС низк+);

4) при выявлении анти-ВГС только в одной из двух подтверждающих ТС либо при выявлении анти-ВГС в двух подтверждающих ТС разных производителей, но при отсутствии положительного результата в ЛИА и при определении авидности анти-ВГС, результат исследования анти-ВГС рассматривался как неопределенный в ИФТС, но отрицательный в ЛИА (группа Анти-ВГС но/-).

Группу Анти-ВГС- составили 16 образцов сыворотки крови пациентов (средний возраст 74,5 ± 7,45 лет), у которых отсутствовали указания на факторы высокого риска инфицирования ВГС. В группе анти-ВГС средняя величина концентрации АФП составляла 8,25 МЕ/мл (от 3,741 до 29,71 МЕ/мл, σ = 6,266 МЕ/мл).

Группу Анти-ВГС+ составили 30 образцов (средний возраст пациентов 73,6 ± 5,5 лет). Образец №8 был получен от пациента с заболеванием печени, образец №22 - от пациента с наркоманией. В 28 из 30 образцов в подтверждающей ТС были обнаружены анти-Core и анти-NS ВГС с ОП в первичной и подтверждающей ИФТС не менее 2, КП не менее 8. В образце №18 определялись только анти-Core с ОП 2,0 и КП 8,0, в образце №7 определялись только анти-NS с ОП 2,7 и КП 10,8. Во всех образцах данной группы анти-ВГС были высокоавидными. Средняя концентрация АФП в группе Анти-ВГС+ составляла 14,725 МЕ/мл (интервал от 3,804 до 111,815 МЕ/мл, σ = 22,02 МЕ/мл).

В группу Анти-ВГСнизк+ (11 образцов, средний возраст пациентов 71,5 ± 6,4 года) образцы были отобраны согласно ранее разработанному алгоритму: либо при обнаружении только анти-Core с КП менее 2; либо при обнаружении только анти-NS ВГС (табл. 1). Средняя величина КП анти-NS в каждой ИФТС не превышала 5, однако КП анти-NS в разных ИФТС могли отличаться (образец №2). В 8 из 11 образцов авидность анти-ВГС была высокой, в трех - низкой. В 6 из 11 образцов были обнаружены только высоко- или низкоавидные анти-NS4 ВГС. Указаний на наличие факторов высокого риска инфицирования ВГС не было ни у одного пациента. Среднее значение концентрации АФП в группе анти-ВГСнизк+ было равно 7,045 МЕ/мл (от 4,06 до 24,06 МЕ/мл; σ = 5,773 МЕ/мл).

Результаты исследования 25 образцов (средний возраст пациентов 75,4 ± 7,0 лет) в ИФТС планшетного формата были противоречивыми (табл. 2). Из 25 образцов в двух (№3 и №18) были обнаружены высокоавидные анти-ВГС, в шести образцах (№№ 1, 2, 6, 9, 16, 19) авидность анти-ВГС была низкой. Все вышеперечисленные образцы в ИФТС другого производителя и в ЛИА были определены как анти-ВГС-негативные (группа Анти-ВГСно/-). Средняя величина концентрации АФП в образцах Анти-ВГСно/- была равна 11,187 МЕ/мл (от 2,941 до 83,16 МЕ/мл, σ = 16,642 МЕ/мл).

При сравнении сывороточной концентрации АФП по критерию Манна-Уитни было обнаружено, что группа образцов, не содержащих анти-ВГС, не отличается ни от одной из исследованных групп. Различия по концентрации АФП были обнаружены:

1) между группами Анти-ВГС+ и Анти-ВГСнизк+ (p = 0,024);

2) между группами Анти-ВГС+ и Анти-ВГСно/- (p = 0,045).

Обсуждение и заключение

У пациентов пожилого возраста в г. Москве инфицирование вирусом гепатита С является наиболее частой причиной хронического гепатита (69,3% больных) [2]. При инфицировании ВГС в возрасте старше 50 лет цирроз печени формируется вдвое быстрее, чем у лиц, инфицированных до 50 лет. Осложнения ВГС-инфекции выявляются у пожилых в основном в далеко зашедших формах вследствие того, что длительная бессимптомная персистенция вируса и стертые клинические проявления заболевания приводят к позднему обращению больных к врачу [2]. Повышение специфичности лабораторной диагностики ВГС-инфекции как на раннем этапе инфицирования, так и при возрастной недостаточности иммунного ответа возможно при расширенных исследованиях анти-ВГС-позитивных образцов с низкой ОП в ИФА. Сравнивая результаты исследования проб пожилых людей с ранее полученными результатами исследования проб молодых мужчин [5], можно отметить следующее. Из общего количества образцов с неопределенными результатами исследования в ИФТС позитивными при дальнейшем исследовании признается не более 1/3 как в группе молодых мужчин, так и людей старше 65 лет. Различия между группами проявились, во-первых, в спектре выявляемых антител. В пробах, полученных от пожилых людей, в ИФТС с низкой ОП могли определяться анти-NS3, -NS4 и -NS5 раздельно и в различных сочетаниях; в ИБ/ЛИА наличие анти-ВГС в пробах данной подгруппы не подтверждалось. В пробах, полученных от молодых мужчин, практически во всех образцах с неопределенным результатом исследования анти-ВГС в ИФТС выявлялись только анти-NS4 ВГС; в дальнейших исследованиях в иммуноблоте наличие анти-ВГС не подтверждалось. Во-вторых, различие между группами выявилось по авидности антител: анти-NS4 у пожилых пациентов могли быть как высоко-, так и низкоавидными, а при обнаружении в пробе молодого пациента только анти-NS4 авидность антител не определялась. В-третьих, согласно нашим данным, изменение концентрации АФП в зависимости от результата тестирования анти-ВГС (позитивного, негативного и неопределенного) в группах проб молодых и пожилых пациентов было различным. Концентрация АФП в анти-ВГС-негативных образцах сыворотки крови молодых мужчин была ниже, чем в анти-ВГС-позитивных образцах и в образцах с неопределенными в ИФТС и неотрицательными в иммуноблоте результатами. В двух последних подгруппах концентрация АФП не различалась [5], что подтверждает вывод Rios [10] об эпидемиологической близости групп с анти-ВГС-позитивными и неопределенными результатами. В отличие от этого, группа образцов пожилых людей с отрицательными результатами тестирования анти-ВГС была крайне гетерогенной по концентрации АФП, по-видимому, вследствие разнообразных приобретенных заболеваний и наличия иных, кроме ВГС, гепатотоксических факторов, вследствие чего не отличалась ни от одной из исследованных групп по концентрации АФП. Отмеченное превышение сывороточной концентрации АФП в анти-ВГС-высокопозитивных образцах над концентрацией АФП в анти-ВГС-низкопозитивных образцах может быть обусловлено длительностью инфекционного процесса, в течение которого наиболее выраженное повышение уровня АФП наблюдается на стадии тяжелого фиброза с последующим снижением при трансформации в цирроз печени (частом осложнении хронического гепатита С у пожилых людей) [3]. Кроме того, в низкопозитивных на наличие анти-ВГС-образцах отсутствие подъема концентрации АФП может быть обусловлено начальным этапом инфекционного процесса (с анти-ВГС низкой авидности) либо выздоровлением (с остаточными анти-ВГС высокой авидности) с нормализацией биохимических показателей. Образцы с противоречивыми в ИФТС, но отрицательными в иммуноблоте и в тесте на авидность результатами, по-видимому, проявляли в ИФТС ложную позитивность.

Таблица 1

Концентрация α-фетопротеина в образцах сыворотки крови пожилых людей,
содержащих высоко- и низкоавидные анти-ВГС (соответственно ВА и НА)
с низким коэффициентом позитивности (значение КП указано).