Как инактивировать вирус герпеса

Основные факты

Введение

ВПГ-2 передается почти исключительно половым путем и проявляется в генитальной или анальной области (генитальный герпес). Тем не менее ВПГ-1 через орально-генитальный контакт также может передаваться на область половых органов и вызывать генитальный герпес.

Инфицирование оральным и генитальным герпесом в основном проходит бессимптомно, но может сопровождаться легкими симптомами либо вызывать образование болезненных пузырьков или язв в инфицированной зоне.

Вирус простого герпеса первого типа (ВПГ-1)

ВПГ-1 — высококонтагиозная инфекция, широко распространенная эндемичная во всем мире. Большая часть заражений вирусом ВПГ-1 случается в детстве, затем инфекция сохраняется на протяжении жизни. В подавляющем большинстве случаев при инфицировании ВПГ-1 развивается оральный герпес (инфекция внутри или вокруг рта, которую иногда называют оролабиальным или орофациальным герпесом), но в некоторых случаях вирус вызывает и генитальный герпес (инфекция в генитальной или анальной области).

В 2012 году, согласно расчетам, число инфицированных вирусом ВПГ-1 составляло около 3,7 миллиарда человек в возрасте до 50 лет или 67% населения планеты. Распространенность инфекции, по расчетам, была наивысшей в Африке (87%) и самой низкой в странах Америки (40—50%).

Число инфицированных генитальной формой ВПГ-1 в 2012 году, согласно расчетам, составляло в мире 140 миллионов человек в возрасте от 15 до 49 лет, но ее распространенность существенно различалась в зависимости от региона.

Наибольшее число случаев инфицирования генитальной формой ВПГ-1, по оценкам, регистрируется в странах Америки, Европы и Западной части Тихого океана, где заражение ВПГ-1 по-прежнему происходит во взрослом возрасте. В других регионах, например в Африке, инфицирование ВПГ-1 в основном происходит в детстве, до начала половой жизни.

Оральная герпетическая инфекция, как правило, бессимптомна, и большинство инфицированных ВПГ-1 не знают о том, что заражены. Среди симптомов орального герпеса можно выделить болезненные пузырьки или открытые поражения (так называемые язвы) внутри или вокруг рта.

Генитальный герпес, вызванный ВПГ-1, может протекать бессимптомно или с легкими симптомами, которые остаются незамеченными. Если симптомы все же появляются, то генитальный герпес характеризуется наличием одного или более пузырьков или язв в генитальной области. После первоначального появления генитального герпеса могут возникать повторные симптомы, однако частота их появления при генитальном герпесе, вызванном ВПГ-1, как правило, невысока.

ВПГ-1 передается главным образом через оральный контакт и вызывает оральную герпетическую инфекцию вследствие контакта с вирусом ВПГ-1 в простудных пузырьках, слюне и на поверхностях во рту или вокруг рта. Однако вследствие орально-генитального контакта ВПГ-1 может также попасть на генитальную область и вызвать генитальный герпес.

ВПГ-1 может передаваться через поверхность ротовой полости или кожи, которая выглядит нормальной и на которой отсутствуют симптомы. Однако риск передачи наиболее высок при наличии активных поражений.

У лиц, уже инфицированных оральной формой герпеса, последующее заражение генитальной зоны ВПГ-1 маловероятно.

В редких случаях инфекция, вызванная ВПГ-1, может передаваться от матери с генитальной формой ВПГ-1 ребенку при родах.

У лиц со слабой иммунной системой, например у лиц, находящихся на поздней стадии заражения ВИЧ, ВПГ-1 может вызвать более тяжелые симптомы и более частые рецидивы. В редких случаях инфекция ВПГ-1 также может вызвать более тяжелые осложнения, например, энцефалит или кератит (глазная инфекция).

Развитие неонатального герпеса может происходить при контакте новорожденного с ВПГ в половых путях во время родов. Это заболевание является редким, составляя примерно 10 случаев на 100 000 деторождений в мире, однако оно может приводить к длительной неврологической инвалидизации или смерти. Риск развития неонатального герпеса особенно высок, если первичное инфицирование матери ВПГ происходит на поздних сроках беременности. У женщин, перенесших генитальный герпес до беременности, риск передачи ВПГ детям крайне низок.

Рецидивы симптомов орального герпеса могут вызывать дискомфорт и приводить к социальной стигматизации и появлению психологических расстройств. При генитальном герпесе эти факторы могут оказывать серьезное неблагоприятное воздействие на качество жизни и сексуальные отношения. Однако со временем большинство людей с одной из форм герпеса приспосабливаются к жизни с инфекцией.

Наиболее эффективными лекарственными средствами для лиц, инфицированных ВПГ, являются такие антивирусные средства, как ацикловир, фамцикловир и валацикловир. Они помогают снизить тяжесть и частоту появления симптомов, однако излечить инфекцию не могут.

ВПГ-1 наиболее контагиозен во время обострения орального герпеса с проявлением симптомов, однако может передаваться и в тех случаях, когда симптомы не ощущаются и не наблюдаются. Лицам с проявляющимися симптомами орального герпеса следует избегать орального контакта с другими людьми и совместного пользования предметами, которые были в контакте со слюной. Также им следует воздерживаться от оральных половых сношений, чтобы не допустить передачу герпеса на гениталии полового партнера. Лицам с симптомами генитального герпеса следует воздерживаться от половых сношений, пока у них наблюдаются какие-либо симптомы.

Лица, уже инфицированные ВПГ-1, не могут заразиться повторно, однако могут заразиться вирусом простого герпеса второго типа (ВПГ-2), поражающим генитальную область (см. ниже).

Систематическое и правильное пользование презервативами может помочь предупредить распространение генитального герпеса. Однако презервативы способны лишь снизить риск инфекции, поскольку заражение генитальным герпесом может произойти на тех участках, которые презервативом не защищены.

Беременным женщинам с симптомами генитального герпеса следует информировать об этом своих медработников. Предотвращение первичного инфицирования вирусом генитального герпеса особенно важно на поздних сроках беременности, поскольку именно в таких случаях существует максимальный риск развития неонатального герпеса.

Проводятся дополнительные исследования для разработки более эффективных методов профилактики заражения ВПГ, например вакцин. В настоящее время изучаются несколько вакцин-кандидатов против ВПГ.

Вирус простого герпеса второго типа (ВПГ-2)

Инфекция ВПГ-2, вызывающая генитальный герпес, широко распространена в мире и передается, главным образом, половым путем. ВПГ-2 — основная причина генитального герпеса, который также может быть вызван вирусом простого герпеса первого типа (ВПГ-1). Заражение ВПГ-2 сохраняется всю жизнь и не поддается лечению.

Генитальный герпес, вызванный ВПГ-2, является глобальной проблемой: согласно расчетам, в 2012 году примерно 417 миллионов человек в мире являлись носителями инфекциями. Распространенность инфекции, по оценкам, была наивысшей в Африке (31,5%), за которой следовала Америка (14,4%). Было также показано, что распространенность инфекции увеличивается с возрастом, хотя наибольшее число впервые инфицированных лиц составляют подростки.

Женщины инфицируются ВПГ-2 чаще, чем мужчины: в 2012 году носителями инфекции являлись примерно 267 миллионов женщин и 150 миллионов мужчин. Это объясняется тем, что половым путем ВПГ передается более эффективно от мужчины к женщине, чем от женщины к мужчине.

Генитальная герпетическая инфекция часто протекает бессимптомно или с легкими симптомами, которые остаются незамеченными. Большинство инфицированных не знают о наличии у них инфекции. Как правило, о ранее поставленном диагнозе генитального герпеса сообщают около 10—20% лиц, инфицированных ВПГ-2.

В тех случаях, когда симптомы все же проявляются, генитальный герпес характеризуется наличием одного или более пузырьков в области гениталий или анальной области, или открытыми поражениями (так называемыми язвами). Помимо язв в области гениталий симптомами первичного заражения генитальным герпесом часто являются озноб, ломота в теле и воспаление лимфатических узлов.

После первоначального приступа генитального герпеса, вызванного ВПГ-2, нередки повторные симптомы, однако они менее интенсивны, чем при первом приступе заболевания. Частота приступов со временем сокращается. Люди, инфицированные ВПГ-2, могут ощущать легкое покалывание или стреляющую боль в ногах, бедрах и ягодицах прежде, чем появятся генитальные язвы.

ВПГ-2 обычно передается при половых сношениях через контакт с поверхностями половых органов, через кожу, через пораженные участки или жидкости человека, инфицированного этим вирусом. ВПГ-2 может передаваться через кожу в генитальной или анальной областях, которые выглядят здоровыми, а также часто передается даже при отсутствии симптомов.

В редких случаях инфекция, вызванная ВПГ-2, может передаваться от матери младенцу при родах.

Доказано, что ВПГ-2 и ВИЧ влияют друг на друга. Инфекция ВПГ-2 увеличивает риск заражения ВИЧ-инфекцией приблизительно в три раза. Кроме того, лица, зараженные ВИЧ и ВПГ-2, с большей вероятностью передают ВИЧ другим. У лиц, инфицированных ВИЧ, ВПГ-2 является одной их наиболее частых инфекций и встречается у 60-90% лиц с ВИЧ-инфекцией.

Инфекция ВПГ-2 у лиц, живущих с ВИЧ (и других лиц с ослабленным иммунитетом), часто протекает в более тяжелой форме и с более частыми рецидивами. На поздней стадии ВИЧ ВПГ-2 может привести к таким более серьезным, хотя и редким осложнениям, как менингоэнцефалит, эзофагит, гепатит, пневмонит, некроз сетчатки или диссеминированная инфекция.

Неонатальный герпес — редкая, но в ряде случаях смертельная болезнь, которая может развиться, если новорожденный контактирует с ВПГ в родовых путях во время родов. Риск развития неонатального герпеса особенно высок, если первичное инфицирование матери ВПГ происходит на поздних сроках беременности. У женщин, перенесших генитальный герпес до беременности, риск передачи ВПГ детям крайне низок.

Рецидивы симптомов генитального герпеса могут вызывать боль и приводить к социальной стигматизации и появлению психологических расстройств. Эти факторы могут оказывать серьезное неблагоприятное воздействие на качество жизни и сексуальные отношения. Тем не менее со временем большинство инфицированных вирусом герпеса приспосабливаются к жизни с этой инфекцией.

Наиболее эффективными лекарственными средствами, для лиц, инфицированных ВПГ, являются такие антивирусные средства, как ацикловир, фамцикловир и валацикловир. Они помогают снизить тяжесть и частоту появления симптомов, однако инфекцию не излечивают.

Лицам с генитальной формой инфекции ВПГ следует воздерживаться от полового контакта в период проявления симптомов генитального герпеса. ВПГ-2 наиболее контагиозен во время появления язв, однако он также может передаваться в тех случаях, когда никакие симптомы не ощущаются или не наблюдаются.

Систематическое и правильное пользование презервативами может помочь предупредить распространение генитального герпеса. Однако презервативы обеспечивают лишь частичную защиту, поскольку ВПГ может находиться на участках, не защищенных презервативом. Мужское обрезание, сделанное под медицинским наблюдением, может обеспечить мужчинам пожизненную частичную защиту против ВПГ-2, а также ВИЧ и вируса папилломы человека (ВПЧ).

Беременные женщины с симптомами генитального герпеса должны информировать об этом своих медработников. Предупреждение новых случаев инфицирования вирусом генитального герпеса особенно важно на поздних сроках беременности, поскольку в этот период риск развития неонатального герпеса является максимальным.

Проводятся дополнительные исследования для выявления более эффективных методов профилактики заражения ВПГ, например, вакцинами или бактерицидами местного применения (препаратами для защиты от инфекций, передаваемых половым путем, которые могут применяться интравагинально или интраректально).

Реагирование ВОЗ на герпес (ВПГ-1 и ВПГ-2)

ВОЗ и партнеры прилагают усилия к ускорению исследований по разработке новых стратегий профилактики и борьбы с неонатальными и генитальными инфекциями, вызванными ВПГ-1 и ВПГ-2. Эти исследования включают разработку вакцин против ВПГ и бактерицидов местного применения. В настоящее время изучается ряд вакцин-кандидатов и бактерицидов.

дипломная работа студентки кафедры биофизики

физического факультета БГУ Хайновой О. В.

по теме: “Морфологические исследования зависимости структуры головного мозга (поле IV) от степени поражения вирусом простого герпеса (ВПГ) и построение по полученным данным математической модели заболевания”

Старший научный сотрудник лаборатории Информационно-компьютерных

технологий ЦНИЛ МГМИ Недзьведь А.М.

Среди известных науке 500 разновидностей болезнетворных для человека вирусов вирус простого, или обычного герпеса (ВПГ)- один из самых распространенных. В последние годы герпетическая инфекция, обусловленная ВПГ, привлекает все большее внимание как медицинской, так и немедицинской общественности. Это связано с тем, что герпес, известный с давних времен как малораспространенное и малозначащее заболевание, характеризовавшееся высыпанием на губах и крыльях носа болезненных пузырьков, в последнее время значительно расширил свое значение в патологии человека. Повышенный интерес к герпетической инфекции обусловлен так же рядом других причин и прежде всего тем, что ныне она распространена в самых различных районах мира, поражая до 95% процентов населения, а вызывающий ее вирус способен поражать практически все органы и системы человеческого организма и вызывать различные формы инфекции- острую, латентную и хронически рецидивирующую. Клинически герпес протекает как разнообразное, сложное и нередко тяжелое заболевание с поражением многих органов и тканей, что позволяет рассматривать его как общее системное заболевание организма. В последние годы стали накапливаться данные о возможном участии ВПГ в развитии некоторых онкологических и сердечно-сосудистых заболеваний человека.

Одним из перспективных направлений является исследование геометрических характеристик клеток, пораженных ВПГ. Использование традиционных проекционных методов не дает качественных результатов, поэтому более точной и эффективной является компьютерная обработка изображений.

В наше время в медицине и научных исследованиях широко используют компьютеры, которые стали непременным атрибутом самых различных технических комплексов. Это касается и современных систем управления и сбора данных, контрольно-измерительного и лабораторного оборудования, т.е. любых комплексов, основной задачей которых является обработка и интерпретация информации, поступающей из "внешнего мира". Большинство этих устройств имеет дело с изображениями, получаемыми тем или иным образом, поэтому актуальной становится задача обработки и анализа изображений. Методы обработки изображений сейчас играют значительную роль, особенно при разработке систем искусственного интеллекта и технического зрения.

Процесс обработки изображений состоит из трех основных шагов: ввод, обработка и анализ изображения. Ввод изображения включает улучшение формы сигнала для уменьшения шума, преобразование сигнала из аналоговой формы в цифровую и запоминание изображения. После этапа ввода начинается этап обработки изображения. Анализ изображения представляет собой идентификацию объектов и получение их количественных и качественных характеристик.

В основу работы было положено исследование поражения вирусом простого герпеса ЦНС методом компьютерного анализа изображений. Целью работы является изучение геометрических характеристик пораженных клеток, измерение зависимости этих характеристик от длительности заболевания. Также ставилaсь задача на основе полученных результатов получить систему уравнений, описывающую модель течения заболевания.

В первой главе дипломной работы дана краткая характеристика свойств вируса, описана его роль в патологии человека. Рассмотpены особенности поражения вирусом простого герпеса нервной системы.

Во второй глaве описываются основные методы изучения нервных тканей, рассматривается методика исследования клеток, пораженных ВПГ. Приводятся основные принципы и методы математической обработки изображений, дается описание системы ввода изображений “Биоскан-АТ”

В третьей главе описана методика экспериментов, приведены результаты и проведен их анализ. На основе полученных результатов построена система уравнений, описывающая модель течения заболевания.

ГЛАВА 1. Герпес и его роль в патологии человека.

Среди вирусных заболеваний герпес занимает одно из веду­щих мест. Это обусловлено повсеместным распространением ви­руса простого герпеса , многообразием клинических про­явлений заболевания и, как правило, хроническим его течением, а также различными путями передачи возбудителя инфекции. Герпес может сопровождаться поражениями ЦНС (энцефалит, миелит, энцефаломиелит), глаз (кератит, кератоконъюнктивит, увеит), печени (гепатит новорожденных и взрослых), слизистых оболочек (стоматит, афтозные язвы, поражение гениталий) и кожных покровов (экзема, везикулярные высыпания). По дан­ным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), заболева­ния, обусловленные ВПГ, занимают второе место (15,8%) после гриппа (35,8%) как причина смертности от вирусных инфекций Следует отметить уже выявленную этиологическую и патогенетическую роль ВПГ (особенно ВПГ типа 2 - ВПГ2) при раке шейки матки, что предопреде­ляет онкологический аспект проблемы.

На территории бывшего СССР по данным, собранным вирусологами и специалистами по кожным, глазным и стоматологическим заболеваниям, число только госпитализированных в стационары больных превышает 2,5 млн. в год. Значительно больше больных лечатся в амбулаториях и поликлиниках.

Герпес (от греч, herpes - лихорадка) - самая распростра­ненная вирусная инфекция человека, длительно существующая в организме, преимущественно в латентной форме. Было установлено, что, кроме вируса, поражающего челове­ка, удается выделить из органов и материалов от больных жи­вотных сходные по морфологии и физико-химическим свойствам вирусы, поражающие только животных

Впервые ВПГ был обнаружен в жидкости элементов герпетических поражений в 1912 году, а условия его пассирования на чувствительных видах лабораторных животных и культурах клеток отработаны позднее. Это позволило получать достаточно большие количества вируса для изучения структуры и свойств ВПГ, а также разработать методы индикации возбудителя для установления эпидемиологических особенностей этой инфекции.

1.1. Краткая характеристика свойств вируса.

Вирион ВПГ имеет форму, близкую к сферической, и характеризуется выраженным плеоморфизмом и значительными колебаниями в размерах (170-210 нанометров). Он содержит линейную непрерывную двухцепочечную ДНК (6,5%), белок (70%), фосфолипиды (20%), углеводы (1,6%) и имеет массу примерно 10 -15 граммов. Структура генома ВПГ является необычной для ДНК-содержащих вирусов. В составе ДНК обнаружены 2 типа повторов (концевые и внутренние), которые разделяют ее на два уникальных ковалентно связанных сегмента (короткий и длинный). Вирусные геном и ассоциированные с ним белки (нуклеоид) заключены в икосаэдрическую белковую капсулу (капсид), состоящую из 162 капсомеров, которая в свою очередь имеет внешнюю липопротеидную оболочку, происходящую из модифицированной мембраны ядра клетки-хозяина. В липопротеидную оболочку встроены 5-6 вирусных гликопротеидов, отсутствующих в ядерной и цитоплазматической мембранах неинфицированных клеток. Гликопротеиды обеспечивают прикрепление к клетке, проникновение в нее. Они изменяют антигенный состав поверхности инфицированной клетки, что важно в патогенезе инфекции и для индукции иммунного ответа (рис. 1).

По данным ряда авторов, в составе вириона имеется от 24 до 33 структурных белков. Сравнительное изучение белков и ДНК вирусных изолятов, их биологических свойств, а также путей передачи вируса в естественных условиях позволили условно выделить два типа ВПГ - ВПГ-1 и ВПГ-2. Несмотря на имеющиеся различия, представители обоих типов вируса имеют общие группоспецифические антигенные детерминанты. Наличие антигенных связей между штаммами ВПГ первого и второго типов требует определенной осторожности при идентификации выделяемых вирусов и интерпретации результатов сероэпидемиологических и диагностических исследований. Более того, общие с ВПГ антигенные детерминанты выявлены у всех патогенных для человека представителей семейства герпесвирусов: вирусов ветряной оспы - герпеса зостер и Эпштейна - Барра, цитомегаловируса и обезьяньего герпесвируса В, что также необходимо учитывать при эпидемиологических исследованиях.

Физико-химическая характеристика ВПГ изучена достаточно полно. Вирус чувствителен к высушиванию и тепловому воздействию: он инактивируется при 50-52 0 С в течение 30 минут, а при 37°С- в течение 10 часов. Однако имеются данные, что ряд штаммов вирусов первого и второго типов не полностью инактивируется даже при 56 0 С в течение 1 часа и при 70 °С в течение 30 минут. При изучении различных факторов, влияющих на термостабильность вируса, показано, что при добавлении в сре­ду Na 2 SO 4 , Na 2 HPO 4, увеличивается термостабильность, а при добавлении MgCl 2, MgSО 4 , NaCI, КН 2 РО 4 и KCI она резко уменьшается. Вирус, ресуспендированный в водной среде, со­держащей аминокислоты или белок, был более стабилен. Наи­большая термостабильность вируса наблюдалась при рН 6,5-6,9.

С другой стороны, ВПГ устойчив к воздействию низких температур и сохраняет биологическую активность 1-2 года при -24 0 С. Вирус устойчив при 4°С в 5% растворе глицерина. Применение снятого молока позволяет сохранить инфекционный титр вируса без его изменения в течение 5 мес. при -70°С. В связи с тем что вирионы ВПГ более чем на 20% состоят из липидов( при чем все липиды локализованы в оболочке), они легко разрушаются под действием эфира, спирта и других органических растворителей (ацетон, хлороформ и др.), детергентов, протеолитических ферментов (например, трипсина). Вирус весьма устойчив к ультразвуку, а также к повторному за­мораживанию и оттаиванию. Наличие дивалентных катионов и рН среды менее 6,8 увеличивает инактивацию штаммов ВПГ при воздействии теплом.

Облучение ультрафиолетовыми и рентгеновскими лучами может разрушить вирус даже при небольших дозах воздейст­вия. Аналогичное влияние оказывает и фотодинамическое воз­действие красок. Штаммы ВПГ хорошо переносят лиофилизацию и в высушенном виде сохраняют ак­тивность в течение 10 лет и более. Хорошо сохраняется вирус в тканях животных в 50% растворе глицерина.

ВПГ способен размножаться практически во всех известных линиях клеток позвоночных. При заражении чувствительных культур клеток, интенсивно размножаясь (до 50 000 -200 000 вирионов на клетку), вирус подавляет синтез клеточных макромолекул, что приводит к гибели клеток. В ходе эволюции ВПГ выработал способность не только индуцировать в инфицированной. клетке синтез необходимых для его репродукции ферментов, но и координировать оптимальную активность особых ферментных состояний клетки (в том числе фазового характера), необходимых для генерации вируса, а также угнетать и даже полностью прекращать биосинтез клеточных ферментов, которые не используются для его воспроизводства. В составе ВПГ не най­дены РНК- или ДНК-полимеразы, но ферменты, ассоциирован­ные с мембранами, такие, например, как протеинкиназа, бы­ли обнаружены и могут быть вирусспецифическими. ДНК ВПГ, как показали исследования, инфекционна.

1.1.2. Морфология и внутриклеточное развитие.

Морфогенез ВПГ можно представить следующим образом. В процессе размножения вируса исходная вирусная ДНК поступает в ядро; в ядре клетки происходит транскрипция вирионной ДНК, образуются крупные вирусспецифические мРНК, которые мигрируют в цитоплазму, расщепляются на более мелкие мРНК, ассоциирующиеся с рибосомами и формирующие полирибосомы. После синтеза структурные полипептиды транспортируются в ядро и ассоциируют с вирусной ДНК, формируя капсид вириона. Гликопротеиды, участвующие в образовании наружной оболочки вириона, встраиваются в состав ядерных и цитоплазматических мембран, заменяя клеточные белки, синтез которых в зараженной клетке подавлен. Нуклеокапсиды, выходя из клетки через специфически измененные участки ядерной и цитоплазматической мембран, захватывают их в качестве наружной оболочки вириона ВПГ. Продолжительность цикла репродукции ВПГ составляет около 10 часов. Помимо деструктивного эффекта на клетки при острой инфекции, ВПГ может оказывать трансформирующее действие.

Оболочка частиц имеет разнообразную форму. Иногда она повторяет гексагональную проекцию капсида. Ее диаметр колеблется от 170 до 210 нм. В некоторых случаях наблюдаются 2 и более нуклеокапсида, заключенных в общую оболочку. Часто оболочка бывает разрушенной, а у многих частиц отсутствует. Последние условно названы “голыми”. Капсид частиц в проекции имеет гексагональную форму со средним диаметром 160 нм. Каждая грань его - равносторонний треугольник, построенный из 15 субъединиц-капсомеров, уложенных с интервалом около 3 нм.

• КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Герпес, мирамистин, ВПГ

Герпетическая инфекция, обусловленная вирусом простого герпеса (ВПГ) 1-го и 2-го типов, занимает одно из ведущих мест по распространенности среди вирусных заболеваний. У большинства здоровых людей ВПГ-1 и ВПГ-2 вызывают широкий спектр заболеваний, причем как острую первичную инфекцию, так и рецидивирующие заболевания кожи и слизистых оболочек. У новорожденных и лиц с иммунодефицитами инфекция может протекать особенно тяжело и заканчиваться летальным исходом. Для профилактики и терапии инфекции ВПГ предложено много средств, однако препаратами выбора остаются нуклеозидные аналоги (например, ацикловир), которые обладают селективной антигерпесвирусной активностью, обусловленной подавлением репликации вируса и инактивацией вирусной ДНК-полимеразы. С 1982 г. стали регистрироваться штаммы ВПГ, устойчивые к действию ацикловира (АЦВ), а за последние 10 лет, когда АЦВ стал основным противогерпетическим средством, частота выделения таких штаммов резко возросла, особенно от иммунокомпрометированных лиц [1]. По данным разных авторов, АЦВ-резистентные штаммы ВПГ встречаются в 4–14% случаев у онкологических больных, ВИЧ-инфицированных и лиц, перенесших трансплантацию органов и тканей или получающих длительную иммуносупрессивную терапию. В этой связи актуальной задачей является поиск и изучение новых противогерпетических средств с альтернативным механизмом противовирусного действия.

Препарат Мирамистин® (мирамистин) из группы катионных антисептиков широко используется для индивидуальной профилактики заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП), в том числе герпесвирусной инфекции (ГИ), а также для лечения бактериальных и грибковых осложнений у больных ЗППП. Имеются данные об успешном применении мирамистина при лечении воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей и легких различной этиологии. Сообщалось, что мирамистин проявляет антимикробную активность в отношении бактерий, грибов, простейших, а также обладает иммуномодулирующим и регенерирующим действиями, способностью повышать неспецифическую резистентность организма. Имеются данные о противовирусном действии мирамистина в отношении ретровирусов (ВИЧ), парамиксовирусов (корь, паротит) и некоторых других [2, 3]. Обнаружено, что мирамистин проявляет активность на ранних этапах инфекционного процесса; в основе его действия лежит предотвращение адсорбции и пенетрации вируса в клетки хозяина. Учитывая, что механизм противовирусного действия мирамистина отличается от действия АЦВ, можно предположить, что использование мирамистина для профилактики и комплексной терапии ГИ позволило бы снизить не только частоту появления штаммов ВПГ, резистентных к действию ацикловира и его аналогов, но и снизить распространенность вируса среди лиц групп риска, а также повысить эффективность противогерпетического лечения.

После полного формирования в лунках планшета монослоя клеток Vero B (в течение 24 ч) ростовую среду удаляли, клетки троекратно отмывали средой Игла и вносили в лунки в составе поддерживающей среды мирамистин (в максимально переносимых и меньших концентрациях) по одной из нижеприведенных схем. Противовирусную активность препаратов (ПАП) оценивали общепринятыми методами по их способности предотвращать развитие индуцируемого вирусами цитопатического действия (ЦПД) и ингибировать репродукцию вирусов в культуре клеток, а также по наличию вирулицидного действия [4–6]. Для профилактики герпесвирусной инфекции широко применяются вирулицидные препараты, оказывающие непосредственное разрушающее действие на вирусные частицы (например, оксолиновая мазь). Оценку вирулицидного действия проводили для того, чтобы выяснить, посредством какого механизма мирамистин проявляет свою активность в отношении вируса простого герпеса: подавления репродукции вируса или в результате разрушения (повреждения) им вирусных частиц.

Схема 1 (оценка цитотоксического действия препарата на неинфицированные клетки): различные концентрации препарата вводили в состав поддерживающей среды, которой покрывали сформировавшийся монослой. Планшеты инкубировали в течение 96 ч, как указано выше. Действие препарата оценивали ежедневно методом световой микроскопии по степени изменения морфологии клеточного монослоя.

Определяли ТЦД50 препарата, которая соответствовала концентрации, вызывающей видимые нарушения морфологии у 50% клеток монослоя, и максимально переносимую концентрацию (МПК) – наи­более высокую дозу препарата, не вызывающую видимых изменений клеточного монослоя, по сравнению с контролем. Для дальнейшего исследования применяли концентрации препаратов, не превышающие МПК.

Схема 2 (определение прямого вирулицидного действия препарата на вирионы ВПГ): в течение 1 ч инкубировали суспензии штаммов ВПГ-2 или ВПГ-1 в присутствии различных концентраций препарата мирамистин в среде Игла, при 37 °С в атмосфере с 5% СO₂ с последующим титрованием суспензии в культуре клеток. Инокулюмы из серийных разведений (101–106) вносили в лунки планшета с монослоем, планшеты инкубировали 1 ч при 37 °С в атмосфере с 5% СO₂, затем суспензию вируса удаляли, клетки троекратно отмывали средой Игла и вносили в лунки свежую питательную среду, после чего планшеты инкубировали 96 ч в тех же условиях.

Схема 3 (оценка ранней профилактической активности): внесение препарата за 1 ч до инфицирования клеток. В лунки планшета с отмытым монослоем вносили питательную среду, содержащую мирамистин в указанных концентрациях, и инкубировали, как описано выше. Через 1 ч в лунки планшета вносили суспензию вируса и инкубировали в течение 1 ч. Затем суспензию вируса удаляли, в лунки вносили питательную среду, не содержащую препарат, и планшеты инкубировали, как описано выше, в течение 96 ч.

Схема 4 (оценка экстреннопрофилактической активности): внесение препарата через 1 ч после инфицирования клеток. Клетки инкубировали в обычных условиях. В лунки планшета вносили суспензию вируса и инкубировали 1 ч. Затем в лунки планшета вносили питательную среду, содержащую мирамистин в указанных концентрациях, и клетки инкубировали, затем среду с несвязавшимися вирусами удаляли и вносили в лунки питательную среду, содержащую препарат в тех же концентрациях. Через 15 мин действие препарата останавливали внесением в каждую лунку по 100 мкл ЭТС, планшеты помещали в термостат и выдерживали в тех же условиях в течение 96 ч.

Схема 5 (оценка поздней профилактической активности): внесение препарата через 12 ч после инфицирования клеток. В лунки планшета с отмытым монослоем вносили суспензию вируса и инкубировали в течение 12 ч. Затем суспензию вируса удаляли и вносили в лунки питательную среду, содержащую препарат в указанных концентрациях. Через 15 мин действие препарата останавливали внесением в каждую лунку по 100 мкл ЭТС, планшеты помещали в термостат и выдерживали в течение 96 ч в указанных выше условиях.

С целью изучения влияния различных концентраций мирамистина на репродукцию вируса на 3–4-е сутки после инфицирования отбирали соответствующие пробы вируса и определяли его остаточную инфекционность. Пробы отбирали в микропробирки с крышкой (Eppendorf) и сохраняли при -70 °С. Перед постановкой опыта пробы подвергали троекратному замораживанию-оттаиванию. Затем клеточный дебрис удаляли центрифугированием, готовили серийные 10-кратные разведения проб, которыми в дальнейшем инфицировали отмытый монослой клеток Vero B. Планшеты инкубировали 1 ч, затем суспензию вируса удаляли, троекратно отмывали клетки от несвязавшегося вируса и вносили в лунки свежую питательную среду. Планшеты выдерживали в течение 96 ч в указанных ранее условиях. Результаты титрования оценивали по общепринятой методике.

Противовирусную активность препарата оценивали по 50% ингибиторной концентрации (ИК50), то есть минимальной концентрации препарата, при которой ЦПД вируса уменьшалось наполовину по сравнению с контролем.