Инактивированный вирус бешенства штамм внуково-32

Профилактика бешенства у домашних и сельскохозяйственных животных основана на их иммунизации с помощью моно- и ассоциированных вакцин. В статье описаны отечественные и зарубежные антирабические вакцины, применяемые в России.

The prevention of rabies at domestic and agricultural animals based on their immunization by of mono - and the associated vaccines. In article the domestic and agricultural animals rabies vaccines applied in Russia are described.

В ряду инфекционных заболеваний человека и животных особое место занимает бешенство, которое, несмотря на многолетний опыт изучения, остается практически неизлечимым. Отдельные сенсационные случаи выздоровления людей заболевших бешенством оставляют надежду на то, что прогресс в этой области все же будет достигнут. Однако, современные реалии таковы, что главную роль в борьбе с данной инфекцией на сегодняшний день играет профилактика заболевания восприимчивых животных, прежде всего плотоядных, способных к дальнейшей передаче возбудителя.

Анализ эпизоотической ситуации показывает, что в России имеются стойкие природные очаги заболевания, поддерживаемые, в первую очередь, за счет диких плотоядных (лисица, енотовидная собака и др.), являющихся основным резервуаром и источником вируса бешенства. В эпизоотический процесс вовлекаются также собаки и кошки, что требует повышенного внимания в свете их непосредственной близости к человеку [3]. Основу профилактики бешенства у домашних животных составляет иммунизация их при помощи моно- и ассоциированных вакцин.

Разработка антирабических вакцин ведет свое начало с XIX века, когда Луи Пастер впервые продемонстрировал возможность защитить собак от принудительного заражения бешенством [5]. С тех пор для практического применения разработано и апробировано большое количество различных ветеринарных антирабических вакцин (мозговые, эмбриональные, культуральные и др). Совершенствование технологии производства приводит к отказу от устаревших образцов в пользу более прогрессивных и более качественных препаратов.

В настоящее время для профилактики бешенства у домашних и сельскохозяйственных животных в России зарегистрированы, производятся и применяются инактивированные культуральные антирабические вакцины из фиксированных штаммов вируса бешенства: Щелково-51, ТС-80, Внуково-32, ERA-СВ20М.

Штаммы Внуково-32 и ERA являются дериватами штамма SAD (State Alabama Dufftring), который был выделен в США от заболевшей бешенством собаки и прошел 130 последовательных пассажей через мозг мышей и 25 чередующихся пассажей через мозг мыши и клетки почки сирийского хомячка.

Штамм ERA получен из штамма SAD путем проведения 10-ти пассажей на развивающихся куриных эмбрионах и 30 пассажей в культуре клеток почки эмбриона свиней [5]. Штамм ERA был адаптирован к культуре клеток ВНК21 и после проведения 20 последовательных пассажей получил название ERA-СВ20М [2].

1. Мультикан-8 – вакцина против чумы, аденовирусных инфекций, парвовирусного, коронавирусного энтеритов, лептоспироза и бешенства собак.

2. АСТЕРИОН DHPPiR - вакцина против чумы, аденовирусных инфекций, парвовирусного энтерита, парагриппа и бешенства собак.

3. АСТЕРИОН DHPPiLR – вакцина против чумы, аденовирусных инфекций, парвовирусного энтерита, парагриппа, лептоспироза и бешенства собак.

Годовой объем выпускаемых вакцин, содержащих антирабический компонент не превышает 200 тыс. доз.

Штамм Вуково-32 также получен из штамма ERA путем проведения 10-ти пассажей в первичной культуре клеток почки сирийского хомчка (ПСХ) при 37°С и 163-ех пассажей в ПСХ при температуре 32°С [6].

Штамм ТС-80 был получен из штамма V-319, выделенного из слюнной железы летучей мыши в Мексике, путем адаптации к перевиваемой культуре клеток ВНК-21. Он прошел 10 пассажей в культуре клеток ВНК-21, а затем свыше 70 пассажей в перевиваемой культуре клеток почки сайги (ПС), после чего был взят за основу при конструировании инактивированной вакцины против бешенства животных [1].

Из штамма ТС-80 во ВНИИВВиМ (п. Вольгинский, Владимирской области) производится вакцина антирабическая инактивированная культуральная сорбированная жидкая, содержащая репродуцированный в культуре клеток ПС инактивированный теотропином вирус бешенства, сорбированный на гидроокиси алюминия, и предназначена для иммунизации крупного и мелкого рогатого скота, собак и кошек. Годовой объем выпуска данной вакцины не превышает 1 млн. доз.

Кроме отечественных вакцин в нашей стране зарегистрированы и применяются следующие зарубежные препараты, содержащие в своем составе компонент бешенства:

Все перечисленные выше инактивированные вакцины, как отечественные, так и зарубежные, регулярно проходят сертификационные испытания в ФГУ ВГНКИ, безопасны в применении и вызывают стойкий иммунитет к инфицированию бешенством, что позволяет успешно применять их в Российской Федерации.

Несмотря на такое разнообразие антирабических вакцин для животных, ситуация с бешенством в России остается напряженной, что обусловлено целым рядом обстоятельств: недостаточным контролем за численностью диких плотоядных, безнадзорных собак и кошек; слабой информированностью и ответственностью владельцев животных в плане содержания и благополучия их питомцев; отсутствием необходимой законодательной базы в сфере содержания домашних животных. Для исправления ситуации требуется согласованная работа ветеринарной службы с органами законодательной и исполнительной власти, коммунальными и санитарно-эпидемиолгическими службами, медицинскими учреждениями и надзорными органами.

1. Вишняков И.Ф., Никишин И.В., Недосеков В.В., Горшкова Т.Ф., Жестерев В.И., Шевченко А.А., Зуев В.В., Груздев К.Н. Инактивированная культуральная вакцина против бешенства животных // Ветеринария. - 1998.- № 6. - С.76-80.

2. Грибенча С.В., Лосич М.А., Грибенча Л.Ф., Непоклонова И.В. Новый принцип селекции вакцинного вируса на основе количественного уровня экспрессии G-белка – главного иммуногена вируса бешенства// Вопросы вирусологии.- 2012.-Т.57, №3.-С.44-47.

4. Иванов B.C. Бешенство животных: экспериментально-теоретическое обоснование разработки, производства, применения культуральных инактивированных вакцин и новые подходы к проблеме экстренной защиты ЦНС от возбудителя заболевания: Автореф. дисс. докт. вет. наук. - Щелково, 2001. - 60 с.

5. Селимов М.А. Бешенство - М.: Медицина, 1978. - 336 с.

Владелец регистрационного удостоверения:

Лекарственная форма

рег. №: Р N002816/01 от 04.10.13 - Бессрочно

Форма выпуска, упаковка и состав препарата Вакцина антирабическая культуральная концентрированная очищенная инактивированная сухая

Лиофилизат для приготовления раствора для в/м введения в виде пористой массы белого цвета, гигроскопичной.

1 доза (1 мл)
вакцина для профилактики бешенства (специфический антиген вируса бешенства, штамм "Внуково-32")	2.5 МЕ

Вспомогательные вещества: альбумин человека 5 мг, сахароза 75 мг, желатин 10 мг.

Растворитель: вода д/и.

2.5 МЕ (1 доза) - ампулы (5) в комплекте с растворителем 1 мл амп. (5) - пачки картонные.

Фармакологическое действие

Вакцина индуцирует выработку иммунитета против бешенства.

Показания препарата Вакцина антирабическая культуральная концентрированная очищенная инактивированная сухая

Лечебно-профилактическая и профилактическая иммунизация человека против бешенства:

лечебно-профилактическая иммунизация
- контакт и укусы людей больными бешенством животными, животными с подозрением на заболевание бешенством, дикими или неизвестными животными.
профилактическая иммунизация
- лицам, имеющим высокий риск заражения бешенством (сотрудники лабораторий, работающие с уличным вирусом бешенства; ветеринарные работники; егеря, охотники, лесники; лица, выполняющие работы по отлову и содержанию животных и другие профессиональные группы).

Открыть список кодов МКБ-10

Код МКБ-10	Показание
Z24.2	Необходимость иммунизации против бешенства

Режим дозирования

Содержимое ампулы с вакциной должно быть растворено в 1,0 мл воды для инъекций. Время растворения не должно превышать 5 мин. Растворенная вакцина представляет собой прозрачную или слабо опалесцирующую жидкость от бесцветного до светло-желтого цвета.

Растворенную вакцину вводят медленно внутримышечно в дельтовидную мышцу плеча, детям до 5 лет - в верхнюю часть переднебоковой поверхности бедра.

Введение вакцины в ягодичную область не допускается.

Не пригоден к применению препарат в ампулах с нарушенной целостностью, маркировкой, а также при изменении цвета и прозрачности, при истекшем сроке годности, неправильном хранении.

Вскрытие ампул и процедуру вакцинации осуществляют при строгом выполнении правил асептики.

Хранение растворенной вакцины более 5 мин не допускается.

Вакцинированный должен находиться под медицинским наблюдением не менее 30 мин.

Места для проведения прививок должны быть оснащены средствами противошоковой терапии.

Оказание антирабической помощи

Антирабическая помощь состоит из местной обработки ран, царапин, ссадин, мест ослюнений и последующего введения антирабической вакцины или, при наличии показаний, комбинированного введения антирабического иммуноглобулина (АИГ) и антирабической вакцины. Интервал между введением АИГ и антирабической вакцины - не более 30 мин.

Местная обработка ран

Местная обработка ран (укусов, царапин, ссадин) и мест ослюнений, должна начинаться немедленно или как можно раньше после укуса или повреждения. Она заключается в обильном промывании в течение нескольких минут (до 15 минут) раневой поверхности водой с мылом или другим моющим средством (детергентом) или в случае отсутствия мыла или детергента место повреждения промывается струей воды. После этого края раны следует обработать 70 % спиртом или 5 % водно-спиртовым раствором йода.

По возможности следует избегать наложения швов на раны. Наложение швов показано исключительно в следующих случаях:

при обширных ранах — несколько наводящих кожных швов после предварительной обработки раны;
по косметическим показаниям (наложение кожных швов на раны лица);
прошивание кровоточащих сосудов в целях остановки наружного кровотечения.

При наличии показаний к применению антирабического иммуноглобулина, его используют непосредственно перед наложением швов (см. раздел Доза антирабического иммуноглобулина (АИГ)).

После местной обработки ран (повреждений) немедленно начинают лечебно-профилактическую иммунизацию.

Показания. Контакт и укусы людей больными бешенством животными, животными с подозрением на заболевание бешенством, дикими или неизвестными животными.

Противопоказания. Отсутствуют. Беременность не является противопоказанием.

Подробная схема лечебно-профилактической иммунизации и примечания к схеме представлена в таблице (Схема лечебно-профилактических прививок антирабической вакциной и антирабическим иммуноглобулином (АИГ).

Лечебно-профилактической иммунизации подлежат все лица, подвергшиеся риску заражения бешенством. Если имеются показания к комбинированному лечению, то сначала вводится АИГ и, не более чем через 30 мин после него вводится антирабическая вакцина.

Антирабический иммуноглобулин (АИГ) назначают как можно раньше после контакта с бешенным животным или животным с подозрением на заболевание бешенством, диким или неизвестным животным.

Гетерологичный антирабический иммуноглобулинвводят не позднее 3 суток после укуса, гомологичный антирабический иммуноглобулин вводят не позднее 7 суток после укуса.

Доза антирабического иммуноглобулина (АИГ). Гетерологичный (лошадиный) антирабический иммуноглобулин назначается в дозе 40 ME на 1 кг массы тела. Гомологичный (человеческий) антирабический иммуноглобулин назначается в дозе 20 ME на 1 кг массы тела. Объем вводимого гетерологичного антирабического иммуноглобулина не должен превышать 20 мл.

Введение антирабического иммуноглобулина (АИГ). Как можно большую часть рекомендованной дозы АИГ следует инфильтрировать в ткани вокруг раны и в глубине раны. Неиспользованная часть дозы препарата вводится глубоко внутримышечно в место отличное от введения антирабической вакцины.

Показания. С профилактической целью иммунизируют лиц, имеющих высокий риск заражения бешенством (сотрудники лабораторий, работающие с уличным вирусом бешенства; ветеринарные работники; егеря, охотники, лесники; лица, выполняющие работы по отлову и содержанию животных и другие профессиональные группы).
Вакцина вводится внутримышечно в дельтовидную мышцу плеча по 1,0 мл в 0, 7 и 30 день. Ревакцинацию проводят однократно, в дозе 1,0 мл через год и далее каждые три года.

Схема профилактической иммунизации

Первичная иммунизация	Три инъекции в 0,7 и 30 день по 1,0 мл
Первая ревакцинация через 1 год	Одна инъекция, 1,0 мл
Последующие ревакцинации через каждые 3 года	Одна инъекция, 1,0 мл

Побочное действие

1. Введение вакцины может сопровождаться местной или общей реакцией. Местная реакция характеризуется незначительной припухлостью, краснотой, зудом, болезненностью в месте инъекции, увеличением регионарных лимфоузлов. Общая реакция может проявиться в виде недомогания, головной боли, слабости, повышения температуры тела. Рекомендуется симптоматическая терапия, применение гипосенсибилизирующих средств и антигистаминных средств.

В редких случаях могут развиться неврологические симптомы, такой больной должен быть сочно госпитализирован.

2. После введения антирабического иммуноглобулина из сыворотки крови лошади могут наблюдаться осложнения: местная аллергическая реакция, наступающая на 1-2 день после введения; сывороточная болезнь, которая наступает чаще всего на 6-8 день; анафилактический шок. В случае развития анафилактоидной реакции вводят подкожно раствор адреналина или норадреналина в возрастной дозировке и 0,2-1,0 мл эфедрина 5 %.

При появлении симптомов сывороточной болезни рекомендуется парентеральное введение антигистаминных лекарственных средств, кортикостероидов, препаратов кальция.

Противопоказания к применению

острые инфекционные и неинфекционные заболевания, хронические заболевания в стадии обострения или декомпенсации - прививки проводят не ранее одного месяца после выздоровления (ремиссии);
системные аллергические реакции на предшествующее введение антирабического иммуноглобулина (генерализованная сыпь, отек Квинке и др.);
аллергические реакции на антибиотики;
беременность.

Применение при беременности и кормлении грудью

Лекарственное взаимодействие

Во время проведения курса лечебно-профилактической вакцинации проведение вакцинации другими препаратами запрещается. После окончания вакцинации против бешенства проведение прививок другими вакцинами допускается не ранее, чем через 2 месяца.

Профилактическую вакцинацию проводят не ранее, чем через 1 месяц после вакцинации против другого инфекционного заболевания.

Условия хранения препарата Вакцина антирабическая культуральная концентрированная очищенная инактивированная сухая

Вакцину хранят и транспортируют при температуре от 2 до 8°С. Допускается транспортирование вакцины при температуре 25°С в течение не более 2-х суток. Хранят в недоступном для детей месте.

Острые инфекционные и неинфекционные заболевания, хронические заболевания в стадии обострения или декомпенсации - прививки проводят не ранее одного месяца после выздоровления (ремиссии).
Системные аллергические реакции на предшествовавшее введение вакцины КОКАВ (генерализованная сыпь, отек Квинке и др.).
Аллергические реакции на антибиотики.
Беременность.

Содержимое ампулы с вакциной должно быть растворено в 1,0 мл воды для инъекций.

Время растворения не должно превышать 5 мин. Растворенная вакцина представляет собой прозрачную или слегка опалесцирующую жидкость от бесцветного до светло-желтого цвета.

Растворенную вакцину вводят медленно внутримышечно в дельтовидную мышцу плеча, детям до 5 лет - в верхнюю часть переднебоковой поверхности бедра. Введение вакцины в ягодичную область не допускается.

Оказание антирабической помощи

Антирабическая помощь состоит из местной обработки ран, царапин, ссадин, мест ослюнений и последующего введения антирабической вакцины КОКАВ или, при наличии показаний, комбинированного введения антирабического иммуноглобулина (АИГ) и антирабической вакцины КОКАВ.

Интервал между введением АИГ и КОКАВ - не более 30 минут.

Местная обработка ран

Местная обработка ран (укусов, царапин, ссадин) и мест ослюнений должна начинаться немедленно или как можно раньше после укуса или повреждения. Она заключается в обильном промывании в течение нескольких минут (до 15 минут) раневой поверхности водой с мылом или другим моющим средством (детергентом) или, в случае отсутствия мыла или детергента, место повреждения промывается струей воды.

После этого края раны следует обработать 70% этиловым спиртом или 5% спиртовым раствором йода. По возможности следует избегать наложения швов на раны.

Наложение швов показано исключительно в следующих случаях:

при обширных ранах - несколько наводящих кожных швов после предварительной обработки раны;
по косметическим показаниям (наложение кожных швов на раны лица);
прошивание кровоточащих сосудов в целях остановки наружного кровотечения.

После местной обработки ран (повреждений) немедленно начинают лечебно-профилактическую иммунизацию.

Беременность не является противопоказанием.

Антирабический иммуноглобулин (АИГ) назначают как можно раньше после контакта с бешеным животным или животным с подозрением на заболевание бешенством, диким или неизвестным животным.

Перед введением гомологичного (человеческого) антирабического иммуноглобулина индивидуальная чувствительность не проверяется. Гетерологичный антирабический иммуноглобулин вводят не позднее 3 суток после укуса, гомологичный антирабический иммуноглобулин вводят не позднее 7 суток после укуса.

Доза антирабического иммуноглобулина (АИГ). Гетерологичный (лошадиный) антирабический иммуноглобулин назначается в дозе 40 ME на 1 кг массы тела.

Объем вводимого гетерологичного антирабического иммуноглобулина не должен превышать 20 мл. Гомологичный (человеческий) антирабический иммуноглобулин назначается в дозе 20 ME на 1 кг массы тела.

Введение антирабического иммуноглобулина (АИГ). Как можно большую часть рекомендованной дозы АИГ следует инфильтрировать в ткани вокруг раны и в глубине раны.

Неиспользованная часть дозы препарата вводится глубоко внутримышечно в место, отличное от введения антирабической вакцины.

Вакцина вводится внутримышечно в дельтовидную мышцу плеча по 1,0 мл в 0, 7 и 30 день. Ревакцинацию проводят однократно, в дозе 1,0 мл через год и далее каждые три года.

Вскрытие ампул и процедуру вакцинации осуществляют при строгом выполнении правил асептики. Хранение растворенной вакцины более 5 мин не допускается.

Вакцинированный должен находиться под медицинским наблюдением не менее 30 мин. Места для проведения прививок должны быть оснащены средствами противошоковой терапии.

Введение вакцины может сопровождаться местной или общей реакцией. Местная реакция характеризуется незначительной припухлостью, гиперемией, краснотой, зудом, болезненностью в месте инъекции, увеличением регионарных лимфоузлов. Общая реакция может проявиться в виде недомогания, головной боли, слабости, повышения температуры тела.

Рекомендуется симптоматическая терапия, применение гипосенсибилизирующих средств. В редких случаях могут развиться неврологические симптомы, такой больной должен быть срочно госпитализирован.

После введения антирабического иммуноглобулина из сыворотки крови лошади могут наблюдаться осложнения: местная аллергическая реакция, наступающая на 1-2 день после введения; сывороточная болезнь, которая наступает чаще всего на 6-8 день; анафилактический шок. В случае развития анафилактоидной реакции вводят подкожно раствор адреналина или норадреналина в возрастной дозировке и 0,2-1,0 мл эфедрина гидрохлорида раствора для инъекций 5%.

Содержимое (Table of Contents)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Вакцина антирабическая ФС.3.3.1.0025.15

культуральная концентрированная Взамен ГФ Х, ст.715,

очищенная инактивированная ФС 42-3447-97

Одна прививочная доза вакцины должна содержать вируса бешенства антиген специфический инактивированный, имеющий специфическую активность не менее 2,5 Международных Единиц (МЕ).

Вакцина не содержит консервантов и антибиотиков.

Вакцину выпускают в комплекте с растворителем – водой для инъекций.

Вакцина антирабическая культуральная концентрированная очищенная инактивированная предназначена для профилактики бешенства.

ПРОИЗВОДСТВО

Количество пассажей полностью охарактеризованного главного посевного вирусного материала для получения рабочего посевного вирусного материала, используемого для производства вакцины, не должно превышать 5.

Рабочий посевной вирусный материал должен отвечать следующим требованиям.

Производственный штамм вируса бешенства должен нейтрализоваться иммуноглобулином антирабическим из сыворотки крови лошади и не должен нейтрализоваться сывороткой крови крупного рогатого скота нормальной. Индекс нейтрализации – не менее 100.

Испытание на отсутствие микобактерий туберкулеза проводят путем посева на среду Левенштейна-Йенсена.

Не должен содержать посторонних вирусных агентов по результатам испытания на 20 мышах-сосунках, испытания на 20 беспородных белых мышах массой 15-20 г, испытания на 5 морских свинках массой 350 — 500 г, испытания на культурах клеток.

Используют здоровых животных, на которых ранее не проводили какие-либо испытания. Мышам-сосункам вводят по 0,01 мл испытуемого образца интрацеребрально и по 0,1 мл интраперитонеально, период наблюдения – 14 сут. Беспородным белым мышам вводят по 0,03 мл испытуемого образца интрацеребрально и по 0,5 мл интраперитонеально, период наблюдения – 28 сут. Морским свинкам вводят по 0,1 мл испытуемого образца интрацеребрально и по 5 мл интраперитонеально, период наблюдения – 42 сут.

Не менее 10 -6 LD₅₀/мл при интрацеребральном заражении новорожденных беспородных белых мышей массой 6–8 г.

Для производства вакцины используют первичную культуру клеток почек сирийских хомячков. Почки для получения культуры клеток забирают у клинически здоровых хомячков.

При работе с культурами клеток запрещается использовать антибиотики группы пенициллинов.

Необходимо проводить испытания производственной культуры клеток на стерильность и на отсутствие посторонних вирусных агентов путем изучения феномена гемадсорбции и цитопатических изменений на чувствительных тест-системах: культуре клеток, используемой для производства вакцины, культуре клеточной линии из другого источника, культуре диплоидных клеток человека.

При наличии гемадсорбции и (или) цитопатических изменений в контрольных культурах опыт следует повторить в клеточной культуре другой партии.

Если при повторном исследовании контрольных клеточных культур в одном из испытаний обнаружены цитопатические изменения или феномен гемадсорбции, то вирус, полученный в соответствующих зараженных культурах, не должен быть использован для производства вакцины.

Все вещества животного происхождения, используемые для получения производственной культуры клеток и культивирования вируса бешенства, проверяют на отсутствие бактерий, грибов, микоплазм и посторонних вирусных агентов. Для размножений клеток не следует применять сыворотки человеческого происхождения.

Все этапы производства должны быть валидированы.

Методы концентрации и очистки вируссодержащей жидкости указывают в нормативной документации. Допускается концентрация и очистка методом ультрафильтрации или концентрация методом ультрафильтрации с последующей очисткой методом гель-хроматографии.

Инактивацию проводят сразу после этапа очистки. При использовании физического метода инактивации отрабатывают режим инактивации: скорость подачи вируссодержащей жидкости, частоту вращения диска инактиватора, интенсивность излучения.

Запрещается использовать в производстве антибиотики после технологического этапа сбора вируссодержащей культуральной жидкости.

В качестве стабилизаторов используют разрешенные вещества, указанные в нормативной документации.

Испытание полуфабриката на стерильность проводят на стадии получения объединенного полуфабриката после этапа концентрации и очистки (до инактивации), после этапа инактивации, после добавления в вакцину стабилизаторов (испытывают смесь для лиофилизации), в процессе розлива.

Испытание полуфабриката на отсутствие микоплазм проводят на стадии получения объединенного полуфабриката после этапа концентрации и очистки (до инактивации), после этапа инактивации.

При использовании дополнительного метода инактивации формальдегидом в полуфабрикате определяют остаточное количество формальдегида. Содержание формальдегида в полуфабрикате – не более 60 мкг/мл.

ИСПЫТАНИЯ

Пористая масса белого цвета, гигроскопична. Определяют визуально.

Должна полностью растворяться в течение 5 мин при внесении 1 мл растворителя (вода для инъекций) на 1 дозу вакцины. Определение проводят визуально.

Вакцина не должна содержать живой вирус бешенства.

Для определения специфической безопасности проводят пассаж вакцины в первичной культуре клеток почек сирийских хомячков. В 2 флакона, содержащие питательную среду с гидролизатом лактальбумина (0,5 %) в растворе Хенкса для культур клеток, вносят по 200 мл клеточной взвеси, содержащей 300-600 тыс клеток/мл. В среду добавляют 10 % раствор сыворотки крови крупного рогатого скота жидкой.

В качестве контроля используют 2 флакона с незараженной первичной культурой клеток почек сирийских хомячков.

Объем и концентрация клеток, вносимых в опытные и контрольные флаконы, должны быть одинаковыми.

Культуру инкубируют в течение 5-6 сут при температуре (36 ± 1) ºС. Затем отбирают флаконы с полностью сформировавшимся клеточным монослоем. Для испытания на специфическую безопасность от каждой серии отбирают по 25 ампул с препаратом. В каждую ампулу вносят по 1 мл растворителя. Восстановленную вакцину объединяют в одну емкость. Из отобранных флаконов с культурой клеток сливают культуральную жидкость. В каждый опытный флакон вносят по 12,5 мл растворенной вакцины, 2 незараженных флакона оставляют (контрольные). Все флаконы инкубируют при температуре (36 ± 1) о С в течение 90 мин, после чего в опытные и контрольные флаконы вносят по 200 мл питательной среды с гидролизатом лактальбумина (0,5 %) в растворе Хенкса для культур клеток. В поддерживающую среду добавляют 5 % СКРС и канамицин до конечной концентрации 100 мкг/мл или 4 % раствор для инъекций гентамицина сульфата до конечной концентрации 80 мкг/мл. На -8 сут инкубации при температуре (32 ± 1) о С из каждого опытного флакона отбирают по 5 мл культуральной жидкости, смешивают пробы и вводят в головной мозг по 0,03 мл смеси 10 беспородным мышам массой от 6 до 7 г.

Аналогично испытывают культуральную жидкость из контрольных флаконов.

За животными наблюдают 21 сут. За весь период наблюдения не должно регистрироваться ни одного случая смерти от бешенства животного, получившего культуральную жидкость из опытных флаконов. Диагноз устанавливают на основании результатов иммунофлуоресценции (РИФ).

В случае, если в опытной группе зарегистрирована неспецифическая гибель (в первые 4 сут наблюдения) более 2 мышей, испытание повторяют.

При появлении хотя бы у 1 мыши клинических признаков бешенства (тремор конечностей, атаксия, паралич) или при гибели более 2 мышей без клинических признаков заболевания, начиная с 5 сут наблюдения, головной мозг павших животных исследуют методом иммунофлуоресценции. При получении положительных результатов серию считают не выдержавшей испытания; при получении отрицательного результата проводят повторный контроль на удвоенном количестве образцов вакцины и удвоенном количестве мышей.

В случае отрицательного результата при повторном испытании считают, что вакцина не содержит живого вакцинного вируса бешенства. В случае регистрации при повторном контроле хотя бы у 1 мыши клинических признаков бешенства, подтвержденного иммунофлуоресценцией, испытуемую серию вакцины считают не выдержавшей испытания.

Не менее 2,5 Международных Единиц (МЕ) в 1 дозе.

Определение специфической активности проводят по методике Национального института здоровья США (NIH). Специфическую активность испытуемой вакцины определяют в сравнении со стандартным образцом (СО) специфической активности вакцины антирабической культуральной концентрированной очищенной инактивированной, калиброванным по отношению к Международному стандарту антирабической вакцины. Для определения специфической активности от серии отбирают не менее 3 ампул на каждую иммунизацию.

В каждую ампулу вносят растворитель из расчета 1 мл на 1 дозу вакцины. Полученные растворы объединяют и готовят ряд разведений с пятикратным интервалом в соотношении 1:5; 1:25; 1:125; 1:625; 1:3125 на
0,9 % стерильном растворе натрия хлорида или на среде 199, содержащей
0,1 % альбумина. Разведения, используемые для иммунизации животных, указывают в нормативной документации.

Аналогичным образом готовят разведения стандартного образца, предварительно восстановленного водой для инъекций до содержания 1 МЕ
в 1 мл.

Пробирки с разведенной вакциной и стандартным образцом хранят на льду в течение времени постановки опыта, но не более 4 ч.

Одновременно с заражением иммунизированных мышей на неиммунизированных мышах из контрольной группы проводят титрование фиксированного вируса бешенства штамм CVS для определения точной дозы вируса, взятой в испытание. Для этого используют разрешающее (рабочее) разведение вируса (10 0 ) и его десятикратные разведения (10 -1 ; 10 -2 ; 10 -3 ) на

2 % растворе сыворотки крови лошади нормальной, приготовленном с применением стерильной воды очищенной или воды для инъекций. Сыворотку крови лошади нормальную предварительно инактивируют при температуре 56 о С в течение 30 мин. Каждым разведением вируса заражают не менее чем по 10 мышей интрацеребрально в объеме 0,03 мл.

За мышами наблюдают в течение 14 сут. При оценке результатов опыта учитывают мышей, заболевших или павших с 5 по 14 сут. Учет проводят ежедневно. Клиническими симптомами на разных стадиях развития заболевания могут быть: взъерошенная шерсть, замедленные и/или круговые движения, дрожание, парез, параличи.

После окончания опыта вычисляют точное количество вируса, содержащееся в 0,03 мл разрешающего разведения, по методу Рида и Менча.

Рассчитывают конечные разведения вакцины и стандартного образца, защищающие 50 % животных (КР₅₀), по следующей формуле:

Т – показатель степени десятичного логарифма;

А – логарифм обратной величины разведения, при котором смертность животных ниже 50 %;

В – показатель смертности животных ниже 50 %;

С – показатель смертности животных выше 50 %;

Д – логарифм кратности разведения.

Специфическую активность испытуемой вакцины (СА) определяют в МЕ относительно специфической активности стандартного образца по формуле:

К – величина, обратная КР₅₀ испытуемой вакцины;

М – величина, обратная КР₅₀ стандартного образца;

У – количество МЕ в 1 мл восстановленного стандартного образца (1 МЕ);

В том случае, когда при проведении испытания специфическая активность вакцины менее нормативных требований, допускается проведение повторного испытания.

В нормативной документации указывают растворитель и методику, по которой проводят испытания растворителя.

Читайте также: