Их тест вирус денге

Основные факты

Денге – это вирусная инфекция, передаваемая комарами.
Инфекция вызывает гриппоподобное заболевание и иногда приводит к развитию потенциально летального осложнения, называемого тяжелой денге.
За последние десятилетия глобальная заболеваемость денге резко возросла. В настоящее время риску заболевания подвергается около половины населения мира.
Денге распространена в условиях тропического и субтропического климата во всем мире, главным образом, в городских и пригородных районах.
Специального лечения денге/тяжелой денге нет, но благодаря раннему выявлению и доступу к надлежащей медицинской помощи показатели смертности могут оставаться ниже 1%.

Денге

Денге — это вирусная болезнь, передаваемая комарами, которая в последние годы быстро распространяется во всех регионах ВОЗ. Переносчиками вируса денге являются женские особи комаров, в основном вида Aedes aegypti и, в меньшей степени, Ae. albopictus. Этот комар передает также чикунгунью, желтую лихорадку и инфекцию Зика. Денге широко распространена в тропиках, причем местные различия в степени риска зависят во многом от осадков, температуры и стихийной стремительной урбанизации.

Тяжелая денге была впервые распознана в 1950-х гг. во время эпидемий денге в Филиппинах и Таиланде. В настоящее время тяжелая денге поражает большинство азиатских и латиноамериканских стран и является одной из ведущих причин госпитализации и смерти среди детей в этих регионах.

Возбудителем лихорадки денге является вирус семейства Flaviviridae family; существует 4 разных, но тесно связанных между собой серотипов вируса, вызывающих денге (DEN-1, DEN-2, DEN-3 and DEN-4). После выздоровления от инфекции, вызванной одним из этих серотипов, возникает пожизненный иммунитет к этому конкретному серотипу. Однако перекрестный иммунитет к другим серотипам после выздоровления бывает лишь частичным и временным. Последующие случаи инфицирования (вторичная инфекция) другими серотипами повышают риск развития тяжелой денге.

Глобальное бремя денге

Число случаев заболевания денге за последние десятилетия во всем мире резко возросло. Подавляющее большинство случаев заболевания протекают бессимптомно, в связи с чем реальный уровень заболеваемости занижается, и многие случаи классифицируются неправильно. Согласно одной оценке, ежегодно денге заражаются 390 миллионов человек (95%-ный доверительный интервал в 284–528 миллионов), из которых у 96 миллионов (67–136 миллионов) имеются клинические проявления (при любой тяжести болезни) 1 . Согласно оценке из другого исследования, посвященного распространенности денге, риску заражения вирусами денге подвергаются 3,9 млрд человек в 128 странах 2 .

Государства-члены трех регионов ВОЗ регулярно информируют о ежегодном количестве случаев заболевания. Число зарегистрированных случаев заболевания увеличилось с 2,2 млн в 2010 г. до более 3,34 млн в 2016 г. Хотя глобальное бремя этой болезни в полной мере не установлено, развертывание мероприятий по регистрации всех случаев заболевания денге частично объясняет резкое увеличение числа случаев заболевания, регистрируемых в последние годы.

К числу других характерных особенностей этой болезни относятся ее эпидемиологические паттерны, в том числе гиперэндемичность многочисленных серотипов вируса денге во многих странах и тревожные последствия как для здоровья людей, так и для глобальной и национальной экономики. Вирус денге переносится из одного места в другое инфицированными лицами, совершающими поездки.

Тенденции распространения болезни

До 1970 года эпидемии тяжелой денге происходили лишь в 9 странах. В настоящее время болезнь является эндемической более чем в 100 странах регионов ВОЗ Африки, Америки, Восточного Средиземноморья и Западной части Тихого океана. Самый высокий уровень заболеваемости регистрируется в Американском регионе, Юго-Восточной Азии и Западной части Тихого океана.

В 2008 году в Америке, Юго-Восточной Азии и Западной части Тихого океана было зарегистрировано более 1,2 миллиона случаев заболевания, а в 2015 году более 3,2 миллионов (по официальным данным, представленным ВОЗ государствами-членами). В последнее время число зарегистрированных случаев заболевания продолжает расти. В 2015 году в одной лишь Америке было зарегистрировано 2,35 миллиона случаев денге, 10 200 из которых были случаями тяжелой денге, повлекших за собой 1 181 смертей.

По мере распространения болезни в новые районы не только возрастает число случаев заболевания, но и происходят взрывные вспышки болезни. В настоящее время угроза возможной вспышки денге существует и в Европе. В 2010 году местная передача денге была впервые зарегистрирована во Франции и Хорватии, а завезенные случаи заболевания были выявлены в трех других европейских странах. В 2012 году вспышка денге на островах Мадейра, Португалия, привела более чем к 2 000 случаев заболевания, а завезенные случаи заболевания были выявлены в 10 других странах Европы, помимо континентальной Португалии. Среди лиц, возвращающихся после поездок в страны с низким и средним уровнем дохода денге является второй наиболее диагностируемой причиной повышения температуры после малярии.

В 2015 году в Дели, Индия, была зарегистрирована самая крупная вспышка за весь период с 2006 года – более 15 000 случаев заболевания. Вспышка болезни произошла на острове Гавайи в штате Гавайи, Соединенные Штаты Америки, где в 2015 году был зарегистрирован 181 случай заболевания, и передача инфекции продолжается в 2016 году. Продолжают регистрироваться случаи заболевания в островных государствах Тихого океана Фиджи, Тонга и Французской Полинезии.

Для 2016 года были характерны крупные вспышки денге в мире. В Регионе стран Америки в 2016 г. было зарегистрировано более 2,38 миллиона случаев заболевания – в одной лишь Бразилии произошло немногим менее 1,5 миллиона случаев заболевания, что почти в три раза превышает число случаев в 2014 году. В этом регионе было также зарегистрировано 1032 случая смерти от денге. В Регионе Западной части Тихого океана в 2016 г. произошло более 375 000 предполагаемых случаев денге, из которых 176 411 случаев произошли в Филиппинах и 100 028 случаев – в Малайзии. В предшествующем году на эти две страны приходилось такое же бремя болезни. Была объявлена вспышка болезни в Соломоновых Островах, где произошло более 7000 предполагаемых случаев заболевания. В Регионе Африки локализованная вспышка денге была зарегистрирована в Буркина-Фасо, где произошел 1061 предполагаемый случай заболевания.

В 2017 г. в странах Америки было зарегистрировано значительное снижение количества случаев заболевания денге: с 2 177 171 случая в 2016 г. до 584 263 случаев в 2017 году. Таким образом, снижение составило 73%. Увеличение числа случаев в 2017 г. наблюдалось только в Панаме, Перу и Арубе. Аналогичным образом, в 2017 г. было зарегистрировано снижение количества случаев тяжелой денге, составившее 53%. В период после вспышки лихорадки Зика (после 2016 г.) произошло сокращение числа случаев заболевания денге; точные причины этого сокращения остаются неизвестны.

В Регионе Западной части Тихого океана ВОЗ зарегистрировала вспышки денге в нескольких странах Тихоокеанского региона, а также циркуляцию серотипов вируса DENV-1 и DENV-2.

После снижения заболеваемости в 2017-2018 гг. резкий рост числа случаев был зарегистрирован в 2019 г. В Регионе Западной части Тихого океана рост заболеваемости был отмечен в Австралии, Камбодже, Китае, Лаосской Народно-Демократической Республике, Малайзии, Сингапуре, Вьетнаме и на Филиппинах; циркуляция серотипа вируса Den- 2 была зарегистрирована в Новой Каледонии, а Den-1 – во Французской Полинезии.

Согласно оценкам, в госпитализации ежегодно нуждаются 500 000 человек с тяжелой денге, из которых 2,5% умирает. В то же время во многих странах коэффициент летальности снизился до уровня менее 1%. В период с 2010 по 2016 гг., благодаря значительному повышению эффективности ведения пациентов за счет укрепления потенциала стран в мире было зарегистрировано снижение коэффициента летальности на 28%.

Передача инфекции

Основными переносчиками денге являются комары Aedes aegypti. Вирус передается людям при укусах инфицированных самок комаров. После инкубационного периода, длящегося 4-10 дней, инфицированный комар способен передавать вирус в течение всей своей оставшейся жизни.

Инфицированные люди являются основными носителями вирусов и способствуют их размножению, являясь источником вирусов для неинфицированных комаров. Пациенты, уже инфицированные вирусом денге, могут передавать инфекцию (в течение 4-5 дней; максимум 12 дней) через комаров Aedes после появления у них первых симптомов заболевания.

Комары Aedes aegypti живут в городских условиях и размножаются, главным образом, в искусственных емкостях. В отличие от других комаров Ae. Aegypti питаются днем; пиковое время их укусов приходится на раннее утро и вечер перед закатом. За каждый свой период питания самка Ae. Aegypti кусает большое число людей. Яйца комаров Aedes в местах, где они были отложены, могут оставаться сухими более года, и личинки начинаются развиваться при контакте с водой.

Aedes albopictus, второй по значимости переносчик денге в Азии, распространился в Северную Америку и более чем 25 стран в Европейском регионе, в значительной мере, в результате международной торговли старыми шинами (которые являются средой размножения) и движения товаров (например, декоративного бамбука). Ae. Albopictus легко адаптируются к новой среде и поэтому могут выживать в более холодных районах Европы. Причинами их распространения являются толерантность к температурам ниже нуля, гибернация и способность укрываться в микросредах.

Характерные особенности

Денге — это тяжелая гриппоподобная болезнь, которая поражает как детей грудного и раннего возраста, так и взрослых людей, но редко приводит к смерти.

Денге следует предполагать в случаях, когда высокая температура (40°C/ 104°F) сопровождается двумя из следующих симптомов: сильная головная боль, боль в области за глазами, мышечные и суставные боли, тошнота, рвота, увеличение лимфатических узлов или сыпь. Симптомы обычно длятся 2-7 дней после инкубационного периода, продолжающегося 4-10 дней после укуса инфицированного комара.

Тяжелая денге — это потенциально смертельное осложнение, связанное с вытеканием плазмы, скоплением жидкости, дыхательной недостаточностью, сильным кровотечением или поражением органов. Настораживающие признаки появляются через 3-7 дней после первых симптомов наряду со снижением температуры (ниже 38°C/ 100°F) и включают сильные боли в области живота, неукротимую рвоту, учащенное дыхание, кровоточивость десен, усталость, возбужденность и наличие крови в рвотных массах. Последующие 24-48 часов этой критической стадии могут быть летальными; необходим надлежащий медицинский уход для предотвращения развития осложнений и смерти.

Лечение

Специального лечения лихорадки денге нет.

В случаях тяжелой денге медицинская помощь врачей и медицинских сестер, имеющих опыт в области проявлений и развития болезни, может способствовать спасению жизни и снижению показателей смертности более чем с 20% до менее 1%. При лечении тяжелой денге критическое значение имеет поддержание объема жидкостей организма пациента на надлежащем уровне.

Иммунизация

Позиция ВОЗ

Клинические исследования показали, что живая аттенуированная вакцина против денге CYD-TDV эффективна и безопасна для людей, ранее перенесших инфицирование вирусом денге (серопозитивных пациентов), но связана с повышенным риском развития тяжелой денге у тех, кто впервые подвергается естественному инфицированию денге после вакцинации (серонегативных пациентов).

Рекомендуемой стратегией для стран, рассматривающих возможность вакцинации в рамках программы по борьбе с денге, является проведение предвакцинального скрининга. В соответствии с этой стратегией вакцинации подлежат только лица с доказанной инфекцией денге в анамнезе (на основе теста на антитела или лабораторной документации, подтверждающей факт инфицирования денге в прошлом).

Решение о внедрении стратегии предвакцинального скрининга следует принимать, тщательно оценив ситуацию в стране, в том числе чувствительность и специфичность имеющихся тестов, а также местные приоритеты, эпидемиологическую картину денге, страновые показатели госпитализации в связи с денге и экономическую доступность как CYD-TDV, так и скрининговых тестов.
Вакцинацию следует рассматривать в рамках комплексной стратегии профилактики денге и борьбы с ней. Она не отменяет необходимости постоянно принимать другие меры профилактики заболеваний, в частности, вести правильно организованную и целенаправленную борьбу с переносчиками инфекции. Людям, у которых возникают симптомы, напоминающие денге, следует без промедления обращаться за медицинской помощью независимо от того, прошли они вакцинацию или нет.

Профилактика и контроль

В настоящее время единственным способом контроля или предотвращения передачи вируса денге является борьба с комарами-переносчиками с помощью следующих мер:

предотвращение доступа комаров в места для откладки яиц путем управления состоянием окружающей среды и соответствующих изменений;
надлежащая утилизация твердых отходов и уничтожение искусственных, сделанных человеком сред обитания;
хранение домашних запасов воды в закрытых емкостях и их еженедельное опорожнение и мытье;
применение надлежащих инсектицидов для емкостей с водой, хранящихся вне помещений;
использование индивидуальных бытовых средств защиты, таких как оконные противомоскитные сетки, одежда с длинными рукавами, репелленты, обработанные инсектицидом материалы, спирали и испарители. Эти средства следует использовать в дневное время как дома, так и по месту работы, для защиты от укусов комаров в дневное время;
улучшение участия и мобилизации отдельных сообществ для устойчивой борьбы с переносчиками инфекции;
во время вспышек болезни чрезвычайные меры по борьбе с переносчиками могут также включать применение инсектицидов для распыления;
для определения эффективности мероприятий по борьбе с переносчиками необходимо проводить активный мониторинг и эпиднадзор за переносчиками.

Тщательная клиническая диагностика и лечение пациентов с денге могут способствовать значительному снижению показателей смертности от тяжелой формы денге.

Деятельность ВОЗ

ВОЗ предпринимает следующие ответные меры по борьбе с денге:

обеспечивает техническую поддержку и руководство для стран с целью эффективного управления вспышками денге;
поддерживает страны в подтверждении вспышек болезни через ее сотрудничающую сеть лабораторий;
оказывает поддержку странам для улучшения их систем отчетности и отражения истинного бремени болезни;
совместно с некоторыми из сотрудничающих центров ВОЗ обеспечивают специальную подготовку в области клинического ведения, диагностирования и борьбы с переносчиками на региональном и страновом уровне;
разрабатывает стратегии и политику на основе фактических данных;
разрабатывает новые инструменты, включая инсектициды и технологии их применения;
собирает официальные данные о денге и тяжелой денге, получаемые более чем из 100 государств-членов;
периодически публикует руководящие принципы и пособия по ведению случаев заболевания, диагностике, профилактике денге и борьбе с этой болезнью для государств-членов.

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Акиншина Юлия Александровна, Ларичев Виктор Филиппович, Марданлы Сейфаддин Гашимович, Бутенко Александр Михайлович, Хуторецкая Н.В.

В результате применения экспериментальных тест-систем ИФА-IgM-денге, ИФА-IgM-ЗН и ИФА-IgM-КЭ при обследовании сывороток крови больных лихорадкой Денге (ЛД), лихорадкой Западного Нила (ЛЗН) и клещевым энцефалитом (КЭ) установлена возможность четкой дифференциальной диагностики этих родственных флавивирусных инфекций. Применение ИФА-IgG тест-систем не обеспечивает такой возможности по причине выраженных перекрестных реакций группоспецифических IgG-антител. В статье приводятся данные о динамике IgMи IgG-антител у больных лихорадкой Денге . Обнаружение специфических IgG в первые дни заболевания может указывать на вторичный характер инфицирования и возможность развития геморрагического синдрома.

Application of immunoassay systems for diagnosis of dengue fever

As a result of the application of experimental test systems "ELISA-IgM-dengue", "ELISA-IgM-WN" and "ELISA-IgM-TBE" when examining sera from patients with dengue fever (DF), West Nile fever (WNF) and tick-borne encephalitis (TBE) there was established the possibility of a clear differential diagnosis of these related flavivirus infections. Application of the ELISA-IgG test systems fail to provide such an opportunity due to cause of pronounced cross-reactions of group-IgG antibodies. In the article there are presented data on dynamics of IgM and IgG antibodies in patients with dengue fever . Detection of specific IgG in the first days of the disease may indicate to a secondary nature of infection and the possibility of the development of hemorrhagic syndrome.

АкиншинаЮ.А.1, ЛаричевВ.Ф.2, Марданлы С.Г.1, Бутенко А.М.2,Хуторецкая Н.В.2, СайфуллинМ.А.3

ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЛИХОРАДКИ ДЕНГЕ

В статье приводятся данные о динамике IgM- и IgG-антител у больных лихорадкой Денге. Обнаружение специфических IgG в первые дни заболевания может указывать на вторичный характер инфицирования и возможностьраз-вития геморрагического синдрома.

Ключевые слова: лихорадка Денге; ИФА-IgM; ИФА-IgG; дифференциальная серологическая диагностика; динамика IgM- и IgG-антител.

Для цитирования: Эпидемиология и инфекционные болезни. 2015; 20 (4): 8-12. Akinshina Yu. A.1, Larichev V. F.2, Mardanly S.G.1, ButenkoA.M.2, KhutoretskayaN.V.2, SaifullinM. A.3 APPLICATION OF IMMUNOASSAY SYSTEMS FOR DIAGNOSIS OF DENGUE FEVER 1ZAO "ECOlab", 1, Budennogo Str., Electrogorsk, Moscow Region, Russian Federation, 142530;

2 D. I. Ivanovsky Institute of Virology, 16, Gamalei Str., Moscow, Russian Federation Russian, 123098 3Infectious Clinical Hospital №1, 63, Volokolamskoye Sh., Moscow, Russian Federation , 123367

As a result of the application of experimental test systems "ELISA-IgM-dengue", "ELISA-IgM-WN" and "ELISA-IgM-TBE" when examining sera from patients with dengue fever (DF), West Nile fever (WNF) and tick-borne encephalitis (TBE) there was established the possibility of a clear differential diagnosis of these related flavivirus infections. Application of the ELISA-IgG test systems fail to provide such an opportunity due to cause of pronounced cross-reactions of group-IgG antibodies. In the article there are presented data on dynamics of IgM and IgG antibodies in patients with dengue fever. Detection of specific IgG in the first days of the disease may indicate to a secondary nature of infection and the possibility of the development of hemorrhagic syndrome.

Key words: dengue fever; ELISA-IgM; ELISA-IgG; a differential serological diagnosis; the dynamics of IgM and IgG antibodies

For citation: Epidemiologiya i Infektsionnye Bolezni. 2015; 20(4): 8-12. (In Russ.)

За последние 10 лет заболеваемость лихорадкой Денге (ЛД) выросла примерно в 30 раз. Среди 2,5 млрд человек, проживающих в эндемичных районах мира, ежегодно регистрируется до 100 млн больных классической формой этого заболевания и 500 тыс. больных ЛД с геморрагическим синдромом (ГЛД) [1].

В связи с развитием массового туризма участились случаи завоза этого заболевания на неэндемичные территории, в том числе и в РФ [2]. За последние годы среди больных, госпитализированных в Инфекционную клиническую больницу № 1 нами верифицировано 157 случаев ЛД [3]. Имеется информация о случаях ЛД в Тюмени, Санкт-Петербурге, Новосибирске, Омске, Хабаровске и

Для корреспонденции: Акиншина Юлия Александровна,

Приморском крае [4, 5]. Эти данные указывают на необходимость создания отечественных ИФА тест-систем для ранней диагностики ЛД. Метод ИФА-^М при обследовании пациентов в острый период ЛД является основным в серологической экспресс-диагностике и позволяет проводить дифференциальную диагностику родственных флавивирусных инфекций [6, 7].

Согласно основной версии, ГЛД развивается вследствие последовательного инфицирования ге-терологичными вирусами Денге или обусловливается присутствием в крови больного анамнестических антител к другим флавивирусам, например желтой лихорадки (ЖЛ), лихорадки Западного Нила (ЛЗН), японского энцефалита (ЯЭ) и др. [8, 9]. В подобных случаях группоспецифические IgG-антитела могут быть обнаружены начиная с острого периода болезни, что является важным маркером возможного развития ГЛД [9, 10].

Цель исследования заключалась в определении

эффективности использования наших экспериментальных ИФА-тест-систем для диагностики ЛД и дифференциации этого заболевания от других фла-вивирусных инфекций.

Материалы и методы

Метод ИФА-^Ы. Определение специфических ^М-антител к вирусам Денге, ЗН, КЭ проводили методом MAC-ELISA [2]. В каждом опыте использовали специфические или нормальные (контрольные) антигены, а также контрольные, позитивные на ^М-антитела, сыворотки больных. Реакцию считали положительной, если отношение экстинк-ции опытных и контрольных образцов составляло не менее 3,0 (при оптической плотности (ОП) не ниже 0,3 для опытных образцов и не выше 0,1 в контроле).

Метод ИФА-IgG. Определение специфических IgG-антител к вирусам Денге, ЗН, КЭ проводили методом ИФА-IgG [11] в 96-луночных полистироловых планшетах с сорбированными поликлональны-ми мышиными противовирусными антителами IgG. Остальные реагенты вносили в следующей последовательности: блокирующий раствор 1% бычьего сывороточного альбумина, специфичный вирусный антиген (или нормальный контрольный антиген), обследуемые сыворотки и мышиные антитела иммуноглобулинам IgG человека, меченные перокси-дазой хрена. Реакцию учитывали также как при постановке МАСЮКА.

Статистические методы. Статистическую обработку результатов исследований проводили по стандартным методикам (Прохоров Ю.В., 1973; Ту-тубалин В.Н., 1992; Ширяев А.Н.,1989). Среднее

геометричное титров (MX) и среднеквадратического отклонения (oX) рассчитывали по формулам:

где , x1, x2. xn - это n реализации случайной величины X.

Поскольку титры специфических антител, выявляемых у больных методом ИФА, не подчиняются нормальному (гауссовому) распределению, для непараметрической оценки достоверности различий двух статистических выборок использовали метод Манна-Уитни. Уровень значимости был принят p Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

В МАС-ELISA были обследованы сыворотки крови больных, содержащие специфические IgM антитела: 117 образцов от 110 больных ЛД и по 24 сыворотки больных КЭ и ЛЗН для определения возможности дифференциальной диагностики этих инфекций.

При исследовании сывороток в гомологичных тест-системах специфические антитела выявлялись в 100% случаев.

В тест-системе ИФА-^М-денге слабоположительной оказалась только одна сыворотка от больного ЛЗН (4,2%). В тест-системе ИФА-^М-КЭ среди гетерологичных сывороток крови положительными оказалось 2 образца от больных ЛЗН (8,3%) и слабоположительными 2 сыворотки больных ЛД (1,7%). Результаты тестирования сывороток в тест-системе ИФА-^М-ЗН оказались следующими: 4 слабоположительных пробы больных ЛД (3,4%) и 2 слабоположительные пробы больных КЭ (8,3%) (табл. 1).

Эти данные свидетельствуют о возможности использования метода ИФА-IgM для дифференциальной диагностики флавивирусных заболеваний c использованием качественной и количественной оценки результатов.

Данные исследования сывороток крови больных ЛД, КЭ и ЛЗН в ИФА-IgM в гомологичных и гетерологичных тест-системах

Категория сывороток ИФА-^М-денге ИФА-^М-КЭ ИФА-^М-ЗН

исследованные сыворотки больных

ЛД (n = 117) КЭ (n = 24) ЛЗН (n = 24) ЛД (n = 117) КЭ (n = 24) ЛЗН (n = 24) ЛД (n = 117) КЭ (n = 24) ЛЗН (n = 24)

Положительные 117 - - - 24 2 - - 24

Слабоположительные - - 1 2 - - 4 2 -

Отрицательные 24 23 115 22 113 22 9

Данные исследования в ИФА-IgM сывороток крови больных ЛД

Дни от начала заболевания

Число положительных сывороток крови больных ЛД

Средние значения титров

1-3-й 4-6-й 7-9-й 10-25-й

7,4±1,0 10,6±1,8 11,5±1,6

1:167 1:1609 1:2862 1:4781

Данные исследования в ИФА-IgG сывороток крови больных ЛД

Дни от начала заболева- Число обследованных сывороток крови Положительные результаты по Средние значения титров

ния больных ЛД % абс. log±G абс.

1-3-й 12 8,3 1 6,6 1:100

4-6-й 34 17,6 6 8,9±1,4 1:717

7-9-й 50 34,0 17 10,2±1,6 1:1913

10-25-й 21 100,0 21 11,7±1,0 1:4210

Всего 117 38,5 45 9,3±1,0 1:1735

Средние геометрические значения титров антител ^М в сыворотках больных ЛД составляли 7,4±1,0 ^ (1:167) на 1-3-й день (р COOCO(OCD(OOCOO ^OOO^OO'-OO^'-OOOOCOOOO'-^OCO 1- CM CM CM 1- CM C\J CM C\J CM1-1- C\J CM CM CM CM CVJ CM CM CM T-

OT^-CM^l-O) CO CO CO GO

СОСОСОШОСОСОЮСМЮСО CO CO CO CM ^"СП^-CO CO CO CM CM

Ю 0> -tf CD СУ Г- О) ОТ со ю СОСМООООООт-Г-^-СО СМ СМ 00 00 СО СО 00 00 СМ СМ СУ см

Рис. 2. ОП сывороток крови больных Денге, ЛЗН и КЭ в гомологичных и гетеро-логичных тест-системах ИФА-^О. Линия тренда отображает значение ОП 0,3 выше которого сыворотки считаются положительными.

Для определения дифференциальной способности тест-систем ИФА-IgG-денге, ИФА-IgG-КЭ и ИФА-IgG-ЗН мы обследовали образцы сывороток крови больных ЛД (п = 24), КЭ (п = 12) и ЛЗН (п = 19), содержащие специфические IgG-антитела, выявляемые в гомологичных и гетерологичных тест-системах.

В тест-системе ИФА-IgG-денге положительными оказались 6 (31,6%) сывороток больных ЛЗН и 4 (33,3%) сыворотки больных КЭ. Слабоположительными - по 2 сыворотки из гетерологичных групп.

При обследовании тех же образцов в тест-системе ИФА-IgG-КЭ положительными оказались 16 (66,7%) сывороток от больных ЛД и слабоположительными 2 сыворотки больных ЛД и 1 образец от больного КЭ (8,3% в обоих случаях).

В результате тестирования в тест-системе ИФА-IgG-ЗН обнаружено18 положительных сывороток крови от больных ЛД и 9 сывороток больных КЭ (75% в обоих случаях) и 1 слабоположительная проба больного ЛД (4,2%).

В большинстве случаев количество сывороток, выявляемых в гомологичной тест-системе, превалирует над числом сывороток, выявляемых в гете-рологичных тест-системах. Особенно это касается сывороток от реконвалесцентов ЗН и КЭ, однако в гетерологичных тест-системах они нередко учиты-

ваются как положительные и слабоположительные. Например, в тест-системе ИФА-денге-IgG среди гетерологичных образцов положительными и слабоположительными оказались 45% сывороток, в тест-системе ИФА-КЭ-IgG этот показатель составил 44,2%, а в ИФА-ЗН-IgG - 77,8% (рис. 2).

Метод ИФА-IgG практически не пригоден для дифференциальной диагностики флавивирусных инфекций по причине выраженного перекрестного взаимодействия гетерологичных IgG-антител. Например, сыворотка больного КЭ (№ 1271/черный столбец) наиболее активно реагировала в тест-системе ИФА-ЗН-IgG. Подобные результаты наблюдались и при обследовании ряда сывороток от больных ЛД в тест-системе ИФА-ЗН-IgG.

Результаты исследований, представленные в настоящей статье, совпадают с аналогичными данными других авторов 15 и свидетельствуют о высокой специфичности IgM-антител при обследовании больных ЛД, ЛЗН, КЭ и других родственных флавивирусных инфекций, что позволяет с успехом использовать метод ИФА-IgM (MAC-ELISA) для их дифференциальной серологической диагностики. При наличии перекрестных реакций, выявляемых у ряда больных в тест-системах ИФА-^М-денге, ИФА-^М-ЗН и ИФА-IgM-O, адекватный вывод об этиологическом значении этих вирусов может быть сделан на основании сравнения титров антител, выявляемых антигенами гомологичных или гетерологичных вирусов, а также по показателям ОП обследуемых сывороток.

Таким образом, применение тест-систем ИФА-IgG, как правило, не обеспечивает дифференцирующего результата. На основании обследования значительного числа сывороток крови больных ЛД, а также других флавивирусных инфекций в ИФА-IgM тест-системах, разработанных в лаборатории биологии и индикации флавивирусов, можно сделать вывод об их специфичности, чувствительности и пригодности для диагностики лихорадки денге.

2. Ларичев В.Ф., Сайфуллин М.А., Акиншина Ю.А., Хуторец-кая Н.В., Бутенко А.М. Завозные случаи арбовирусных инфекций в Российской Федерации. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2012; 1: 35-9.

4. Попов А.Ф., Симакова А.И., Киряков В.Ю., Петухова С.А., Дадалова О.Б., Сокотун С.А., Шаповаленко А.М. Лихорадка денге в Приморском крае. Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2014; 4: 45-6.

5. Сафонов А.Д. Случай завоза геморрагической лихорадки денге в Омске. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2012; 1: 49-51.

6. Malavige G.N., Fernando S., Fernando D.J., Seneviratne S.L. Dengue viral infections. Postgrad Med. J. 2004; 80 (948): 588601.

7. Martin D.A., Muth D.J., Brown T., Johnson A.J., Karabatsos N., Roehrig J.T. Standardization of immunoglobulin M capture enzyme-linked immunosorbent assays for routine diagnosis of arboviral infections. Clin. Microbiol. 2000; 38: 1823-36.

8. Guzman J.R., Kron M.A. Threat of dengue haemorrhagic fever after yellow fever vaccination. Lancet. 1997; 9068: 1841.

9. Mungrue K.I. The laboratory diagnosis of dengue virus infection, a review. Adv. Lab. Med. Int. 2014; 4 (1): 1-8.

10. WHO. Dengue: Guidelines for Diagnosis, Treatment, Prevention and Control. New ed. 2009.

11. Meegan J.M., LeDuc J.W. Enzyme immunoassay. In: Manual of Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome / Eds Ho Wang Lee, J.M. Dalrymple. Korea, Seoul; 1989: 83-7.

12. Bundo K., Igarashi A. Antibody-capture ELISA for detection of immunoglobulin M antibodies in sera from Japanese encephalitis and dengue hemorrhagic fever patients. J. Virol. Meth. 1985; 11 (1): 15-22.

13. Martin D.A., Biggerstaff B.J., Allen B., Johnson A.J., Lanciotti R.S., Roehrig J.T. Use of immunoglobulin M cross-reactions in differential diagnosis of human flaviviral encephalitis infections in the United States. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2002; 9 (3): 544-9.

14. Dobler G., Jelinek T., Frosner G., Nothdurft H. D., Losher T. Serological cross reactions against TBE virus, yellow fever virus and West Nile Virus in patients with acute dengue fever. In: Fifth International Conference on Travel Medicine. Geneva; 1997.

15. Miagostovich M.P., Nogueira R.M., dos Santos F.B., Schatzmayr H.G., Araujo E.S., Vorndam V. Evaluation of an IgG enzyme-linked immunosorbent assay for dengue diagnosis. J. Clin. Virol. 1999; 14 (3): 183-9.

2. Larichev V.F., Sayfullin M.A., Akinshina Yu.A., Khutoretskaya N.V., Butenko A.M. Imported cases of arbovirus infections in the Russian Federation. Epidemiolgiya i infektsionnye bolezni. 2012; 1: 35-9. (in Russian)

3. Sayfullin M.A., Larichev V.F., Butenko A.M., Malyshev N.A. Imported cases of arboviral fevers in Moscow. [Zavoznye slu-chai arbovirusnykh likhoradok v Moskve]. In: Proceedings of the 8th International Symposium "Infectious Diseases and Antimicrobial Agents". Moscow; 2010. (in Russian)

4. Popov A.F., Simakova A.I., Kiryakov V.Yu., Petukhova S.A., Dadalova O.B., Sokotun S.A., Shapovalenko A.M. Dengue fever

in Primorsky Krai. Meditsinskaya parazitologiya i parazitarnye bolezni. 2014; 4: 45-6. (in Russian)

5. Safonov A.D. The case of the importation of hemorrhagic fever Omsk. Epidemiolgiya i infektsionnye bolezni. 2012; 1: 49-51. (in Russian)

6. Malavige G.N., Fernando S., Fernando D.J., Seneviratne S.L. Dengue viral infections. Postgrad Med. J. 2004; 80 (948): 588601.

8. Guzman J.R., Kron M.A. Threat of dengue haemorrhagic fever after yellow fever vaccination. Lancet. 1997; 9068: 1841.

9. Mungrue K.I. The laboratory diagnosis of dengue virus infection, a review. Adv. Lab. Med. Int. 2014; 4 (1): 1-8.

10. WHO. Dengue: Guidelines for Diagnosis, Treatment, Prevention and Control. New ed. 2009.

11. Meegan J.M., LeDuc J.W. Enzyme immunoassay. In: Manual of Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome / Eds Ho Wang Lee, J.M. Dalrymple. Korea, Seoul; 1989: 83-7.

Читайте также: