Хранение вирусов при температуре
Информация
Добавить в ЗАКЛАДКИ| Поделиться: |
Хранение вирусовВо время хранения семян зараженность их вирусами зеленой и белой мозаики значительно снижается. Практика показала, что через семена огурцов, которые хранились в тече?ше двух лет, вирусы не передаются. Свежие семена перед посевом в течение 2 ч прогревают при температуре 6( .[ . ] Итак, функции нуклеиновых кислот в микробной клетке дифференцированы. Даже ДНК клетки не все принадлежат к ГНК. Не говоря о том, что у вирусов роль ГНК выполняют двухцепочечные РНК и одноцепочечные ДНК и РНК. Двухцепочные ДНК по своим свойствам и структуре принадлежат к соединениям более устойчивым и консервативным, поэтому отобраны эволюцией для хранения наследственной информации. Клетка как бы экономит ДНК, привлекая для выполнения различных функций более подвижные, динамичные нуклеиновые кислоты — РНК.[ . ] Равномерно меченные препараты ВТМ, содержащие такое количество 14С, что в течение 10 дней происходил один распад па каждые 4—10 частиц, теряли 90% иифекциолпости после 5 месяцев хранения [772]. ВТМ, меченный 12SI, при удельной активности 2—3 мКи на 1 мг вируса, терял свою инфекционпостъ за 5 дней при температуре —20 °С [1194].[ . ] К средам для экстракции часто добавляют восстановители (сульфит натрия, тиогликолят натрия или цистеингидрохлорид). Эти соединения ■способствуют сохранению инфекционности, которую вирус легко теряет в окислительных условиях, а также уменьшают адсорбцию на вирусе компонентов клетки-хозяина. Как это показано в гл. Ниже приведены некоторые методы, которые более или менее успешно использовались для того, чтобы во время выделения «вести к минимуму действие фенолов на вирусы растений.[ . ] Рядом авторов было отмечено, что при обработке слабыми щелочами какая-то часть частиц ВТМ оказывается более устойчивой, чем остальные частицы. Подобным же образом некоторые частицы в препаратах других палочкообразных вирусов также оказались болео устойчивыми к щелочной деградации (Х-вирус картофеля [111]; вирус грапировки табака [1368]). При попытке объяснить это явление было исследовало влияние добавления различных певирусных белков на устойчивость ВТМ к щелочи [454]. При pH 7,0 рибонуклеаза в той же концентрации не снижала инфекционности препаратов. Механизм этого защитного эффекта неясен, но на основании полученных результатов можно предположить, что различная устойчивость частиц ВТМ к действию щелочей обусловлена влиянием клеточных белков, связываемых вирусом при выделении и хранении. Танигучи [1744] показал, что в действительности присутствии рибонуклеазьт при pH 10 в препарате ВТМ деградирует лишь очень небольшая часть вируса. В то же время при щелочном pH рибонуклеаза не предотвращает деполимеризации вирусных белковых палочек, не содержащих РНК [1745].[ . ] Лицензированию подлежат следующие виды генно-инженерной деятельности: генетические манипуляции на молекулярном, клеточном уровнях с участием рекомбинантных рибонуклеиновых и дезоксирибонуклеиновых кислот для создания генно-инженерно-модифицированных организмов (вирусы, микроорганизмы, трансгенные растения и животные, а также их клетки); все виды испытаний генно-инженерно-модифицированных организмов, в том числе лабораторные, клинические, полевые, опытнопромышленные; выпуск генно-инженерно-модифицированных организмов в окружающую среду; производство препаратов, получаемых с применением генно-инженерно-модифицированных организмов; хранение, захоронение, уничтожение генно-инженерно-модифицированных организмов и (или) их продуктов; утилизация отходов генно-инженерной деятельности; покупка, продажа, обмен, другие сделки и иная деятельность, связанная с генно-инженерными технологиями, генно-инженерно-модифицированными организмами и (или) их продуктами, которые не имеют сертификата качества или знака соответствия, выданных или признанных уполномоченным на то органом, в том числе в сфере международной деятельности.[ . ] Мировые потери урожая картофеля только от болезней составляют около 90 млн. т, или 17% валового сбора, что в 2 раза превышает потери зерновых культур, овощей и сахарной свеклы. Это является часто причиной вспышек болезней в период вегетации или во время хранения. У размножающихся семенами однолетних растений период латентной формы обычно прерывается завершением вегетации.[ . ] Если растворы очищенного ВТМ разбрызгать па какую-то поверхность, температура которой поддерживается на низком уровне (от —22 до —15 °С), а затем лиофилизовать, то многие палочкообразные частицы разрушаются до мелких фрагментов [1423]. Механизм этого разрушения неясен, однако многие частицы по своему внешнему виду похожи на вирусные палочки, частично депротеипизированные под действием щелочи. Тем не менее лиофи-лизацию при контролируемых условиях можно использовать для длительного хранения некоторых нестабильных вирусов.[ . ] ВСЕ О ВИЧ ВИЧ – это Вирус Иммунодефицита Человека. Он передается только от человека к человеку. Как и все другие вирусы, ВИЧ не может существовать самостоятельно. Для своего размножения ему необходима человеческая клетка – хозяин. Подобно паразиту, ВИЧ использует человеческую клетку, чтобы выжить и размножаться. ВИЧ не может находиться вне организма человека. Он очень нестоек во внешней среде. Быстро разрушается при нагревании до температуры свыше 57 градусов и почти мгновенно при кипячении. ВИЧ – инфекция – это заболевание, вызываемое вирусом после того, как он попадает внутрь человека. Вирус ослабляет иммунную систему, выполняющую защитную функцию. На протяжении определенного времени (обычно нескольких лет) организму удается удерживать ВИЧ под контролем. В этот период инфицированный человек чувствует себя (и выглядит) вполне здоровым, и часто даже не догадывается о своей проблеме. Свердловская область – регион России, наиболее пораженный ВИЧ-инфекцией. На 31.12.2017 года всего зарегистрировано 94 569 человек, на территории Свердловской области проживает 70 316 ВИЧ-инфицированных граждан (показатель пораженности 1,6 %). За 2017 год зарегистрировано 6 875 случаев ВИЧ-инфекции, показатель заболеваемости составил 158,8 на 100 тыс. населения. Среди граждан РФ выявлено 6 807 случаев, показатель заболеваемости 157,2 на 100 тыс. населения, что на 0,12 % выше аналогичного периода 2016 года (157,0 на 100 тыс.) В условиях стремительного распространения ВИЧ-инфекции важно: – знать все о ВИЧ/СПИДе – знать свой ВИЧ-статус – отказаться от наркотиков – при сексуальных контактах с партнером, ВИЧ-статус которого неизвестен, использовать презерватив. Вирус не проявляет себя долгие годы. Человек может не знать, что у него ВИЧ, чувствовать себя абсолютно здоровым и передавать его своим партнерам. Экспресс-тестирование на ВИЧ. Быстро (результат через 15 минут), анонимно, бесплатно. Расписание работы мобильного пункта
Зачем нужно знать свой ВИЧ-статус? – Знание о своем положительном ВИЧ-статусе может помочь людям вовремя получить медицинскую помощь, которая способна предотвратить серьезные и угрожающие жизни заболевания. Так, при наличии ВИЧ важно следить за своим иммунным статусом и другими показателями, что позволяет вовремя назначить необходимое противовирусное лечение и предотвратить развитие СПИДа. – Знание об отсутствии ВИЧ – инфекции может помочь человеку принять решение о том, как сделать свое поведение наиболее безопасным в отношении ВИЧ. Также знание своего ВИЧ-статуса важно для тех, кого волнует безопасность сексуального партнера. – Своевременная диагностика ВИЧ – инфекции позволяет предотвратить передачу ВИЧ – инфекции во время беременности. СПИД – синдром приобретенного иммунодефицита. СИНДРОМ – ряд признаков и симптомов, указывающих на наличие определенной болезни или состояния. ПРИОБРЕТЕННОГО – не врожденного, а переданного от человека человеку, в том числе, от матери – ребенку. ИММУННОГО – относящегося к иммунной системе человека, которая обеспечивает защиту от болезнетворных бактерий. ДЕФИЦИТА – отсутствие ответа со стороны иммунной системы на наличие болезнетворных микробов. СПИД – это конечная стадия развития ВИЧ-инфекции. Присутствие вируса в организме держит иммунитет в постоянном напряжении. Иммунная система пытается бороться с вирусом, а ВИЧ, в свою очередь, уничтожает все новые и новые CD-4 клетки. Чем больше вирусов в крови, тем больше поражается Т-лимфоцитов. У каждого организма есть свои ресурсы и свой потенциал, но они не безграничны. В какой-то момент организм исчерпывает свои ресурсы и перестает сопротивляться чужеродным агентам, развивается стадия СПИДа. Проявления СПИДа разнообразны, в основном это, так называемые, оппортунистические заболевания: пневмоцистная пневмония, туберкулез, грибковые поражения кожи и внутренних органов, герпес, токсоплазмоз, саркома Капоши и другие. СЕГОДНЯ ОТ СПИДА НЕ УМИРАЮТ, ЕСЛИ наблюдаются у врача, вовремя начинают прием терапии и не допускают ошибок в лечении. Существует единственный метод лечения, который может остановить развитие ВИЧ-инфекции и предотвратить стадию СПИДа - это антиретровирусная терапия, ее также называют высокоактивной антиретровирусной терапией (ВААРТ). Данная терапия состоит из нескольких препаратов, которые принимаются ежедневно. Эти препараты действуют на вирус, блокируя вещества (ферменты), которые нужны ему для размножения. Если ВААРТ действует эффективно, ее принимают постоянно, без перерывов. Поэтому ВААРТ предназначена для того, чтобы принимать ее постоянно. При назначении ВААРТ очень важно не пропускать прием препаратов и вовремя их принимать. В противном случае, уровень препаратов в крови может стать ниже оптимального, вирус снова начнет размножаться. Выживут разновидности вируса, которые стали резистентны (устойчивы) к данным препаратам, и терапия перестанет действовать. Вирус иммунодефицита человека может спокойно существовать только в определенных средах человеческого организма, к которым относятся: кровь, грудное молоко, сперма и интимные выделения. В какой-либо другой среде ВИЧ быстро погибает. У вируса отсутствует способность размножаться за пределами организма человека. Вирус иммунодефицита человека довольно быстро погибает при температуре выше 57?C и моментально при 100?C. Но, например, в крови, которая предназначена для переливания, ВИЧ может пережить годы, а в замороженном виде выживаемость составляет до 10 лет. Давайте попробуем разобраться, в каких условиях и при каких обстоятельствах вирус иммунодефицита погибает, а в каких выживает.
Перейдем к условиям, при которых ВИЧ погибает:
Несмотря на то, что выживаемость вируса во внешней среде все же не столь велика, важно выбирать такие салоны красоты и другие учреждения, где инструменты обрабатываются в специальном дезинфицирующем растворе и очищаются ватными дисками или латунной щеткой. Поскольку можно заразиться не только ВИЧ, но и другими инфекционными заболеваниями. Более подробно ознакомиться с тем, как следует выбирать салон красоты, можно здесь. В случае прикосновения к шприцу с остатками ВИЧ-инфицированной крови невозможно заразиться. Кроме того, не теряет своей популярности миф о заражении ВИЧ через укалывание зараженными шприцами в общественных местах – на скамейках, в вагонах метро, в кинотеатрах. Таким способом заразиться невозможно, поскольку вероятность заражения составляет 0,03%. Подробнее узнать об этом мифической способе заражения ВИЧ можно здесь. Вирусы могут перемещаться на сотни тысяч километров вместе с частичками пыли и каплями влаги. Означает ли это, что в любой момент смертоносные инфекции могут обрушиться нам на голову прямо с неба? Величественный хребет Сьерра-Невада расположен в Андалусии, на юге Пиренейского полуострова. В этих горах — самый южный горнолыжный курорт в Европе, но еще больше они славятся тем, что здесь проходит так называемый глобальный пояс пыли — ветра доносят сюда шлейф из самых пыльных областей Восточного полушария: западного побережья Северной Африки, Ближнего Востока, Центральной и Южной Азии, даже из Китая. На высоте примерно 3 тысяч метров на пике Велета ученые из Университета Британской Колумбии (Канада) установили анализаторы — ловушки для пыли и аэрозоля — смеси газа, частичек пыли и пара. Их целью было посмотреть, в каком виде живые организмы — бактерии, грибы и вирусы — способны преодолевать большие расстояния "верхом" на пылевых частицах. Каково же было удивление ученых, когда они нашли не мертвых, а вполне себе живых и бодрых микробов. За день в сборник попали миллионы бактерий и примерно миллиард вирусов. — Свыше 20 лет мы пытались понять, каким образом вирусы с одного континента перемещаются на другой,— говорит автор исследования Кертис Саттл.— Мы находили генетически идентичные вирусы в самых разных уголках планеты, и вот теперь загадка разгадана. По словам соавтора исследования, специалиста по экологии микроорганизмов из Гранадского университета в Испании Исабель Рече, со временем это глобальное переселение микроорганизмов будет все более интенсивным: из-за изменения климата усиливается эрозия почв, растет количество ураганов. Пока ученые не могут сказать, какие именно вирусы попали к ним в "сети" в горах Испании, но, по предварительным оценкам, подавляющее большинство этой биомассы — бактериофаги, вирусы, которые разрушают бактерии. Но что, если среди них окажутся болезнетворные вирусы, способные вызвать эпидемии? — Вопрос в том, выживет вирус в новых условиях или нет,— говорит Кертис Саттл.— Чаще всего это зависит от того, найдет ли он себе "хозяина" на новом месте. Подозрение, однако, существует давно. Уже в 2001 году некоторые ученые объясняли вспышку ящура в Великобритании гигантской бурей на севере Африки, которая перенесла пыль, а вместе с ней и вирус ящура на тысячи миль к северу. Буря произошла всего за неделю до того, как были выявлены первые случаи заболевания в Британии. А совсем недавно, осенью прошлого года, во время вспышки коронавируса MERS-CoV в Саудовской Аравии, врачи предупреждали, что инфекция может переноситься с порывами ветра: вирус разносят летучие мыши и крыланы, которые заражают верблюдов. Их испражнения впитываются в песок и пыль, а затем разносятся ветром. По этой причине россияне, которые планируют отправиться в эту страну, должны были проявлять бдительность, особенно оказавшись на природе.
— Могут ли переноситься патогенные вирусы на большие расстояния — вопрос абстрактный,— пояснил "Огоньку" завкафедрой инфекционных болезней и эпидемиологии РНИМУ им. Н.И. Пирогова, главный инфекционист ФМБА России Владимир Никифоров.— Все зависит от вида вируса и его жизнестойкости. Большинство быстро погибает вне организма, как, например, тот же вирус гриппа. Но есть и такие, которые могут выживать в течение нескольких дней и месяцев. К этим долгоживущим инфекциям относятся вирус гепатита В и вирус бешенства. В целом, однако, нынешнее исследование зарубежных коллег не должно вызывать паники, потому что доля патогенных вирусов в общем числе вирусов, путешествующих в атмосфере, составляет не более одной тысячной процента. Стоит отметить, что диапазон жизнестойкости у микроорганизмов чрезвычайно широк. Так, бактерии сибирской язвы чрезвычайно опасны для человека именно потому, что их споры могут жить в земле столетиями. При этом есть бактерии, которые погибают, едва выпав из привычных условий обитания (к таким, например, относится бактерия хеликобактер, которая вызывает язву желудка). Вирусы в этом отношении — более хрупкие, что в первую очередь связно с их строением. Вирус состоит всего из одной молекулы нуклеиновой кислоты, которая хранит генетическую информацию. У него нет аппарата для самовоспроизведения, поэтому он размножается, только паразитируя на клетках зараженного организма. Зато, покидая своего "хозяина", вирусы, как правило, быстро утрачивают жизнестойкость: перегреваются, высыхают и теряют способность заражать. При этом именно перегрев для вирусов — один из наиболее губительных факторов. Скажем, при температуре 37 градусов они еще "чувствуют" себя вполне сносно. А вот при жаре, когда температура тела поднимается до 38-39 градусов, вирусы погибают. Это, кстати, и объясняет, почему не надо сбивать не очень высокую температуру — нужно дать вирусам погибнуть, а не создавать комфортные условия для размножения. Зато даже при низких температурах они неплохо выживают, и это дает ответ на другой популярный вопрос: почему зимой к нам привязывается то вирус гриппа, то герпеса. — Все вирусы лучше хранятся при максимально низких температурах,— рассказывает "Огоньку" профессор Николай Львов, руководитель лаборатории герпес-вирусов Института микробиологии и эпидемиологии им. Гамалеи, в прошлом хранитель коллекции вирусов.— Не случайно люди, которые страдают от неизлечимой болезни и мечтают воскреснуть, когда эти болезни научатся лечить, просят поместить их в жидкий азот — в этом материале клетки могут храниться миллионы лет. Даже в расхожих триллерах про инопланетян есть доля правды. Мы не знаем, что происходило на Земле тысячи лет назад. Не исключено, что и во льдах Антарктики могут скрываться некие инфекции, которые останутся жизнеспособны, когда их высвободит таяние льдов. Вместе с тем способность вирусов к размножению после попадания в новый организм зависит не только от переохлаждения, но и от злоупотребления антибиотиками, которые подавляют иммунитет, а еще от стрессов, смены часовых поясов, переездов с места на место. "Каждая капелька океана действительно содержит огромное количество вирусов, не способных вызвать заболевание человека,— комментирует работу испанских и канадских микробиологов заведующий лабораторией эпидемиологии природно-очаговых инфекций ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора Александр Платонов.— Ветром брызги воды уносятся на сотни километров, вместе с микроорганизмами — это логично. Но с точки зрения эпидемиологии это значения не имеет. Если морской воздух перелетит горы, то ничего болезненного он с собой не потащит. Но вот если больной человек закашляет, то вокруг него образуется облачко вирусов, которое осядет на ближайшее окружение. Однако никакой ветер ни в Испанию, ни в Америку это облачко не унесет. Намного опаснее, с точки зрения ученых, традиционные способы миграции вирусов — в организмах носителей, которые в условиях глобального мира перестают поддаваться контролю. — Вот представьте, что человек болеет, скажем, герпесом губ,— рассуждает Николай Львов.— Он лечит его специальной противовирусной мазью, но назавтра должен лететь на другой конец земли, допустим, в Новую Зеландию. Там он активно общается с людьми, а известно, что капельки слюны при разговоре разлетаются на метр, при кашле — уже на 2 метра. И пожалуйста, контактировавшие с ним заразились герпесом, а поскольку он применял мазь, то еще и устойчивым вирусом герпеса. Вот в этом случае мы можем говорить про миграцию вируса — через человека.
Высокая мобильность людей и потрясающая скученность населения — вот основные козыри вирусов. Например, каждый вирус гриппа несет в себе 9-10 фрагментов генома и может обмениваться ими с другими вирусами. Таким образом, получается астрономическое число фрагментов генома вирусов гриппа. И именно потому так трудно создать вакцину против этого заболевания. При этом вирусы могут заимствовать генетическую информацию как у человека, так и у птиц и животных, что делает их фактически неуязвимыми для современных лекарств. — Обычно грипп существует как зоонозная (передающаяся от животного к животному) инфекция, в местах больших скоплений птиц,— объясняет Александр Платонов.— Птицы мигрируют, летят через горы, через моря в другие страны, заражают других птиц, иногда млекопитающих. В результате мутационного процесса образуются новые варианты вируса гриппа, способные заражать и человека, причем к ним у нас пока нет иммунитета. Люди контактируют с ними, заболевают и становятся сами источником инфекции. И чем населеннее местность, тем больше вероятность заболеваний. Разных, не только гриппа. Традиционно свой поход грипп всегда начинал из Юго-Восточной Азии — именно здесь больше всего птиц — разносчиков этого вируса. И именно через Азию проходят пути перелетных птиц. Так называемый свиной грипп тоже начал свой путь оттуда же. Его, кстати, правильнее назвать калифорнийским, чтобы не вводить в заблуждение. По словам профессора Платонова, в принципе, все вирусы гриппа можно считать свиными, поскольку, прежде чем "перекинуться" от птиц к млекопитающим — человеку, они сначала "обживаются" на свиньях. Пожив в них, мутируют и приобретают способность заражать людей. Победить зоонозные инфекции практически невозможно, в отличие от тех, что передаются от человека к человеку. Например, когда мы прививаемся от полиомиелита или кори, то одной прививкой защищаем не только себя, но и других людей, которых могли бы заразить. Но если вирус живет в животном, то вакцинация уже не столь эффективна, потому что не будешь же прививать всех мышей, обезьян, свиней, кур и клещей. Сейчас ученые ВОЗ создают карты перемещения инфекций, пытаясь найти новые закономерности распространения заразы. Источником все новых и новых разновидностей обычного человеческого гриппа долгое время, как отмечалось выше, оставалась Азия, откуда инфекция волнами распространялась по планете и примерно через год затухала в Южной Америке. Сегодня традиционная картинка миграции вирусов уже не столь четкая, что, возможно, тоже связано с глобальным изменением климата. — Мы собрали более 30 тысяч единиц хранения в государственной российской коллекции вирусов,— с гордостью отмечает Николай Львов из НИИ вирусологии им. Гамалеи.— И это одно из лучших подобных собраний в мире, с которым может поспорить разве только коллекция США. Вирусы, еще в советское время, собирались в Прибалтике, на Украине, Таджикистане — в общем, на всем пространстве СССР. Много вирусов мы выделяли из образцов самостоятельно, часть получали благодаря официальному обмену с другими странами. Хранят спящие вирусы самыми удивительными способами: в мозге зараженных мышей, в виде замороженных концентратов или клеточных культур. Работа государственной коллекции заключается в том, чтобы спустя годы и десятилетия поднимать вирусы из анабиоза, определять степень их сохранности и создавать оптимальные для хранения условия. Помимо чисто научных целей коллекция вирусов нужна, чтобы сохранить разнообразие этих микроорганизмов. — В природе существует огромное количество вирусов, которые не предоставляют опасности для человека, говорит Александр Платонов из ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора.— Они нужны прежде всего для экологического равновесия. Например, от тех вирусов, которые живут в морях, зависит состояние планктона. А эти водоросли производят огромное количество кислорода. Ученые предлагают рассматривать как своего рода "банк семян" микроорганизмов и те группы вирусов, которые обитают в атмосфере. — Я считаю, что атмосфера — это большая трасса в буквальном смысле,— говорит Кертис Саттл из Университета Британской Колумбии.— Она дает возможность экосистемам, расположенным в тысячах километрах друг от друга, обмениваться микроорганизмами и, на мой взгляд, это имеет гораздо более серьезные экологические последствия, чем мы думаем. Дело за малым: остается выяснить, как научиться хранить это биоразнообразие, не давая ему выйти из-под контроля. Государственная коллекция вирусов НИИ вирусологии им. Ивановского включает огромное количество микроэкспонатов. И патогенные микробы — лишь небольшая часть из них. Этот банк данных помогает создавать инновационные лекарства, бороться с бактериями, изучать эволюцию. А вообще, аргументов в пользу того, чтобы считать вирусы не только источником заболеваний, довольно много Удивительно, но многие фрагменты человеческого генетического кода происходят от вирусов, которые на ранних стадиях эволюции встроились в организм теплокровных. Предполагают, что бывшие вирусы или размножившиеся вирусоподобные объекты занимают 40-45 процентов генома человека. Именно они, по-видимому, сыграли важную роль в развитии иммунной системы. На страже урожая В некоторых странах вирусы, паразитирующие на насекомых, с успехом используются в борьбе против вредителей, атакующих сельхозкультуры. Например, вирусы ядерного полиэдроза можно успешно применять в борьбе с гусеницами совок, репной белянки и американской белой бабочки. С помощью вирусов были получены многие сорта цветов, чья пестрая окраска — результат вирусной инфекции, передающейся от поколения к поколению. Например, знаменитую и чрезвычайно ценную пестролепестность тюльпанов вызывает вирус, переносимый тлей. А недавно было установлено, что растение джут (источник грубых волокон для канатов и мешков) дает больший урожай, когда поражен вирусным заболеванием,— некротической мозаикой риса. Онколитические вирусы — большая группа микробов, которые способны бороться с раковыми клетками. Например, сейчас проходят клинические испытания генно-инженерного штамма герпес-вируса для лечения больных с тяжелой формой рака кожи. Бактериофаги — это вирусы, которые избирательно поражают бактериальные клетки. В СССР активно разрабатывали препараты на их основе, которые составляли конкуренцию традиционным антибиотикам. Сегодня применяются в случаях, когда лечение антибиотиками невозможно или недейственно. В России разрабатывалась новая живая вакцина от гриппа. Она оказалась малоэффективной, зато на ее основе сейчас создают новую вакцину против туберкулеза, где вирус гриппа используется как вектор. То есть в него генно-инженерным путем введены компоненты, которые формируют иммунитет против туберкулеза. Составитель: Рецензенты: главный специалист по клинической лабораторной диагностике УЗ Гомельского областного исполнительного комитета А.А. Кудря Характеристика вируса типа А (H1,N1) Высокопатогенный вирус гриппа А (H1,N1) (ВПВГА) относится к семейству Orthomyxoviridae. Геном вируса представлен восемью фрагментами РНК. По данным генетического анализа, вирус гриппа, вызвавший вспышку заболевания среди людей в Мексике и США весной 2009 года, является реассортантом вирусов гриппа свиней. Вирус передаётся от человека к человеку воздушно-капельным путём. Не исключён также и контактно-бытовой путь передачи. Инкубационный период при гриппе ВПВГА составляет обычно 2-3 дня, и вирус может выделяться в окружающую среду заболевшим 7 дней и более. Клиническая картина заболевания разнообразна – от бессимптомных форм до тяжелых пневмоний. Вирус чувствителен к озелтамивиру и занамивиру. Вирус чувствителен к повышенным температурам и погибает при нагревании до 70 0 С в течении 30 минут. Вирус также чувствителен к различным дезинфектантам, обладающим вирулицидным действием. ВПВГА характеризуется высокой антигенной изменчивостью. Опасения Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) связаны с генетической новизной вируса и его потенциальной способностью к дальнейшей реассортации, вследствие чего возможно возникновение более агрессивных вариантов инфекции. ВОЗ присвоила вирусу гриппа А (H1,N1) шестую степень угрозы (из шести). Степень угрозы по ВОЗ не характеризует патогенность вируса (то есть опасность заболевания для жизни людей), а указывает на его способность к распространению. Определение случаев заболевания Подтверждённый случай – заболевание, при котором имеются симптомы острого респираторного заболевания (ОРЗ) с лабораторно подтверждённой инфекцией, вызванной ВПВГА одним из следующих методов: l полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени l выделение вируса в культуре клеток. Вероятный случай – у человека имеет место ОРЗ, при этом результат ПЦР положительный на грипп типа А, но отрицательный на подтип Н1 или Н3. Подозрительный случай – случай, при котором: l У человека имеется ОРЗ, и этот человек тесно контактировал с лицом с подтверждённой инфекцией, вызванной ВПВГА, в то время, когда это лицо находилось в состоянии болезни, или l У человека имеет место ОРЗ, и известно, что этот человек недавно контактировал с животным с подтверждённой или подозреваемой инфекцией, вызванной ВПВГА, или l У человека имеет место ОРЗ, и этот человек совершил поездку в район, где имеют место подтверждённые случаи ВПГА. При поступлении из организации здравоохранения информации о подтверждённом, вероятном или подозрительном случае заболевания людей ВПГА, специалистами регионального центра гигиены и эпидемиологии проводится эпидемиологическое расследование. Организация лабораторной диагностики Сбор, хранение и транспортировка образцов для лабораторной диагностики Сбор клинического материала осуществляет обученный медицинский работник лечебно-профилактического учреждения в средствах индивидуальной защиты органов дыхания (респиратор), защитных очках или щитках для защиты лица, бахилах, двойных резиновых перчатках в стерильные флаконы, пробирки, контейнеры, стерильными инструментами. Для диагностики заболевания могут быть использованы следующие образцы: l мазок из носа l мазок из носоглотки l аспират из носоглотки l смыв из носовой полости l содержимое эндотрахеальных трубок По клиническим показаниям к ним могут быть добавлены: l трахеальный аспират l бронхоальвеолярный лаваж l биоптат легочной ткани l ткань легкого или трахеи, взятая post mortem. Курьер получает в лаборатории диагностики вирусных и особо опасных инфекций ОблЦГЭ и ОЗ стерильные пробирки с физраствором и стерильные тампоны, упакованные по 10 штук. Пробирки и тампоны хранятся в приемном покое УГОТКБ, годны для использования 7 дней. В приёмном покое хранятся также одноразовые стерильные пластиковые сухие пробирки объёмом 50 мл для сбора биологического материала (мокрота, содержимое эндотрахеальных трубок, ткань лёгкого и др.). Оптимальные сроки забора l до начала этиотропной терапии l мазок из носовой полости, зева - не позднее 5 дня от начала заболевания (лучше первые 3 дня) l парные сыворотки крови 1-я сыворотка не позднее 3-5 дня заболевания. l секционный материал - в день смерти больного Техника забора клинического материала Венозная кровь Для серологического исследования забираются парные сыворотки крови. Первую пробу крови берут в первые 3-4 дня заболевания (или в первый день обращения за медицинской помощью). Кровь забирается в чистую сухую пробирку шприцем из вены в количестве 3-5 мл у взрослых. Первичная обработка крови проводится в клинико-диагностической лаборатории УГОТКБ. Венозная кровь, отстаивается 30 минут при комнатной температуре. При помощи стеклянной палочки отделяют столбик сгустка от стенок пробирки. Пробирку центрифугируют при 1500 об/мин 10 минут. Полученную сыворотку отсасывают автоматическим дозатором с одноразовым наконечником. На каждую сыворотку используется отдельный наконечник. Сыворотка не должна быть гемолизированная, хилезная, с признаками бактериального пророста. Первую пробу сыворотки хранят при температуре минус 20 0 С до получения второй сыворотки крови. Повторное оттаивание – замораживание не допускается. Вторую пробу берут через 14 дней после начала заболевания. Обе пробы одновременно отправляют для исследования в лабораторию диагностики вирусных и особо опасных инфекций в течение 24 часов после забора второй сыворотки. Одиночные сыворотки лаборатория диагностики вирусных и особо опасных инфекций не принимает, т.к. диагностика осуществляется на основании 4-х кратного увеличения титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой. Мазок из полости носа Мазок из полости носа забирают сухими стерильными ватными тампонами. Перед взятием материала полость носа необходимо очистить от слизи, лейкоцитов, слущенных клеток эпителия. Тампон ввести легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем тампон слегка опустить книзу, ввести в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, сделать вращательное движение и удалить вдоль наружной стенки носа. Мазок берётся из обеих полостей носа. Тампоны погрузить в стерильную пробирку с 3 мл транспортной среды (фосфатно-солевой буфер или физраствор), отломать концы палочек и плотно закрыть пробкой. Материал в течение 1 - 4 часов доставляется в лабораторию. Мазки должны быть забраны таким образом, чтобы в них содержались клетки, имеющие диагностическое значение - цилиндрический эпителий из глубоких отделов носа, в котором размножаются вирусы. Мазки, содержащие клетки плоского и переходного эпителия из наружных отделов носа не информативны и исследованию не подлежат. Мазок из ротоглотки Мазки берут сухими стерильными ватными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, нёбных дужек и задней стенки ротоглотки. Тампоны погрузить в стерильную пробирку с 3 мл транспортной среды (фосфатно-солевой буфер или физраствор), отломать концы палочек и закрыть пробкой. Секционный материал Кусочки ткани легких берут асептически. Объем проб – около 1-2 см?. Секционный материал помещают в стерильную посуду и транспортируют в термоконтейнере в течение 24 часов. l Все виды собранного биологического материала должны храниться в больнице не более суток при температуре 2-8°С l Сыворотка хранится в замороженном состоянии Каждая проба представляется с сопроводительным документом. Направление на исследование материала на ВПГВА методом ПЦР представлено в Приложении 1. Материал взятый post mortem представляется с направлением по форме Приложения 2. Для исследования на грипп и другие ОРВИ (парагрипп, аденовирусная инфекция, РС-инфекция) методом РИФ с направлением на обычном бланке для исследования биологического материала. Материал доставляется в лабораторию в специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами. При необходимости используются специальные среды для транспортировки вирусосодержащего материала (выдает лаборатория диагностики вирусных и особо опасных инфекций ОблЦГЭ и ОЗ). Все транспортируемые образцы должны быть упакованы в тройную упаковку, содержащую три упаковочных слоя. Упаковка должна быть выполнена с учётом предотвращения любой утечки содержимого, выдерживать удары и нагрузки, имеющие место при транспортировке. Между первичной ёмкостью и вторичной упаковкой должен находиться мягкий абсорбирующий материал, в количестве достаточном для впитывания всего содержимого первичных ёмкостей. При транспортировке нескольких клинических образцов – каждый упаковывается в первичную упаковку, исключается любой контакт между ними. Методы лабораторной диагностики Позволяет обнаружить антиген вируса гриппа в клетках цилиндрического эпителия дыхательного тракта больного за счёт взаимодействия антигенов со специфическими противовирусными антителами. Вирус и инфицированная клетка очень неустойчивы, забор материала нужно проводить как можно быстрее после появления клинических симптомов, т.к. число инфицированных клеток уменьшается по ходу болезни. Вследствие мутаций вновь появившиеся высокопатогенные штаммы вируса гриппа свиней изменили свои антигенные свойства, вследствие чего иммунофлюоресценция может быть ложноотрицательна. Поэтому метод не применяется для диагностики ВПВГА, а используется для диагностики гриппа А (кроме свиного), гриппа В, парагриппа, аденовирусной и респираторно-синтициальной инфекции. Это методы определения специфических антител в парных сыворотках крови с целью ретроспективного подтверждения диагноза. Серологический анализ позволяет определить заболевание, вызванное одним из 6 подтипов гриппа А, включая свиной и птичий, гриппом В. Полимеразная цепная реакция Определяют РНК вируса в диагностическом материале. Результаты получают через 24 часа. При исследовании методом ПЦР анализ проводится в два этапа: I этап – обнаружение вирусов гриппа А, II этап – идентификация субтипов H1N1 и H3N2. Выделение вируса в культуре клеток или куриных эмбрионах Метод позволяет не только идентифицировать возбудителя, но и изучить его антигенные, фенотипические, генетические свойства, определить чувствительность к лекарственным препаратам. Это самый длительный метод - результаты через 2-10 дней. Материал для исследования является отделяемое из глубоких отделов носовой полости, зева, секционные ткани. Для транспортировки используют специальные среды. Исследование проводится в г. Минске в лабораториях Национального Центра Гриппа. Приложение 1 для лабораторного исследования биологического образца от больного ОРИ. Читайте также:
 Пожалуйста, не занимайтесь самолечением!При симпотмах заболевания - обратитесь к врачу.
Copyright © Иммунитет и инфекции
|
