Циклоферон вирусная инфекция у кошек

Применение ИМД при вирусных инфекциях.

Поскольку вирусные инфекции практически всегда сопровождаются иммуносупрессией, актуальны поиск и применение тех ИМД, которые способны не только повышать естественную резистентность организма (стимулируя фагоцитоз и выработку антител, усиливая цитотоксическую активность лимфоцитов, индуцируя синтез ИФ и других цитокинов), но и оказывать прямой противовирусный эффект. В наибольшей степени этим требованиям удовлетворяют Фоспренил и Гамапрен. Такие препараты, сочетающие в себе свойства ИМД и антивирусного средства, можно рекомендовать для лечения и профилактики вирусных инфекций, сопровождающихся иммунодефицитным состоянием.

Благоприятный исход при практически любой вирусной инфекции непосредственно зависит от ранней стимуляции синтеза цитокинов, обеспечивающих формирование как клеточного, так и гуморального иммунного ответа (5). Так, в течение первых двух суток клинически выраженного заболевания показано применение ИМД, стимулирующих продукцию интерферона (ИФН), а также способных восстановить подавленные вирусами ранние цитокиновые реакции. Наоборот, на поздних стадиях вирусного заболевания избыточная стимуляция цитокинов может привести к развитию целого ряда иммунопатологических реакций и значительно ухудшить состояние организма и даже вызвать шок и смерть. В таких случаях наиболее эффективно применение препаратов, непосредственно воздействующих на размножение вирусов в клетках-мишенях (например: Фоспренил и Гамапрен) или обладающих системным воздействием (Фоспренил).

Таким образом, в инкубационном периоде и в первые 1 – 2 дня клинической стадии вирусного заболевания целесообразно назначать ИМД, стимулирующие продукцию ИФН, а также других факторов естественной резистентности организма (например: ИЛ-12, ФНО, ИЛ-1). Объективным критерием эффективности указанных ИМД может служить восстановление выработки ранних цитокинов, синтез которых подавлен вирусами (6). Так, Фоспренил после введения в организм при вирусной инфекции стимулирует раннюю продукцию ИФ-γ, ФНОα и ИЛ-6 и ИЛ-12 в сыворотке (12, 13), что, по-видимому, является одним из ключевых механизмов противовирусной активности препарата при его использовании в качестве профилактического средства или на самых ранних стадиях инфекционного процесса. Вирусы обладают способностью нарушать сбалансированное развитие Th1/Th 2 иммунного ответа, необходимое для формирования эффективного противовирусного иммунитета, а Фоспренил, судя по всему, способен восстанавливать этот необходимый баланс, в частности, благодаря стимуляции продукции ключевых цитокинов, обеспечивающих сбалансированное формирование Th1 (ИЛ-12, ИФ-γ,) и Th2 (ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6) иммунного ответа при вирусном инфекционном процессе (13, 15). Это свойство Фоспренила в сочетании с прямым противовирусным действием, по-видимому, и обеспечивает защиту животных от вирусной инфекции.

При лечении тяжелых инфекций следует отдавать предпочтение ИМД природного происхождения (из тимуса, дрожжей, бактериальных клеток, растений), которые, как правило, не оказывают побочных эффектов. В настоящее время чаще рекомендуют применять индукторы ИФН — интерфероногены, а не препараты самих ИФН, в том числе рекомбинантные (сейчас из препаратов на основе ИФН при лечении вирусных инфекций еще применяют разве что Кинорон, более эффективный на ранних стадиях заболевания). Это связано, в частности, с тем, что, во-первых, экзогенный ИФН после введения в организм способен подавить синтез эндогенного ИФН по принципу механизма обратной связи и вызвать дисбаланс в системе ИФН. Во-вторых, рекомбинантные ИФН быстро инактивируются. Напротив, индукторы ИФН (Максидин, Фоспренил, Достим, Риботан, Камедон, Сальмозан и др.) стимулируют синтез эндогенного ИФН (что физиологично, да и активность эндогенного ИФН сохраняется дольше), а также, в большинстве случаев, запускают синтез и продукцию других цитокинов, прежде всего, именно Th1 ряда. Кроме того, в раннем противовирусном процессе активно участвуют неспецифические естественные киллеры (ЕКК). Эти клетки после активации и пролиферации синтезируют и секретируют противовоспалительные цитокины, которые запускают каскад сигналов, способствующих прерыванию цикла репродукции вируса в инфицированной клетке. Ввиду этого, при лечении вирусных инфекций целесообразно применение ИМД, стимулирующих ЕКК, а именно Фоспренила, Максидина, Ронколейкин (его активность закономерно возрастает в сочетании с Фоспренилом). К сожалению, из ветеринарной практики изъят очень эффективный ИМД — циклоферон, который способен индуцировать секрецию ИФН всех типов. Напротив, следует приветствовать, что ветеринарные специалисты практически перестали использовать в качестве ИМД Левамизол (Декарис), который не только довольно токсичен, но также (при применении в малых дозах) избирательно стимулирует супрессорные (регуляторные) Т-клетки (4). ИМД на основе цитокинов (в том числе рекомбинантных) при введении в организм способны восполнить дефицит растворимых иммунорегуляторных факторов, что особенно важно при тяжелых поражениях иммунной системы, когда ее компенсаторные возможности нарушены. С другой стороны, необоснованное назначение подобных препаратов (при отсутствии серьезных показаний) может привести к дисбалансу в иммунной системе за счет блокирования синтеза гомологичных эндогенных молекул по принципу механизма обратной связи. Большое значение имеет сочетание ИМД на основе рекомбинантных цитокинов с другими препаратами. Очевидно, например, что эффективность Ронколейкина (рекомбинантного ИЛ-2) возрастает, если перед его введением в организм повысить уровень экспрессии соответствующих рецепторов с помощью препаратов, усиливающих секрецию ИЛ-1. Это подтверждено на практике в экспериментах по комплексному применению Ронколейкина с Фоспренилом или с Гамавитом (в состав последнего входит нуклеинат натрия — эффективный индуктор ИЛ-1 и ИФН) — эти ИМД существенно повышают активность самого Ронколейкина.

Следует остановиться на возможности сочетанного применения ИМД, различающихся между собой по спектру воздействия на лимфоидные клетки-мишени. В частности, сочетание Достима или Сальмозана (более активно воздействующих на В-клетки, чем на Т-клетки) с противовирусными ИМД (например: с Фоспренилом или Гамапреном) может, при своевременно начатом лечении, предотвратить развитие вторичных инфекций и, следовательно, снизить потребность в антибиотикотерапии. В серии экспериментальных исследований на модели острой клинически выраженной инфекции, вызываемой вирусом клещевого энцефалита (ВКЭ) у мышей, был выявлен эффект взаимного усиления активности Фоспренила и Максидина (12). В результате одновременного совместного введения мышам этих двух ИМД протективный эффект возрастал в 2 – 2,5 раза, по сравнению с эффектом от введения какого-либо одного препарата. Эти данные легли в основу клинических испытаний при лечении собак с диагнозом чума плотоядных и кошек с диагнозом панлейкопения. В результате оказалось, что при тяжелом течении чумы плотоядных, а также при вирусных инфекциях кошек сочетанное применение Фоспренила и Максидина дает положительный эффект: оба препарата, обладая различными механизмами противовирусного действия, дополняют друг друга. Их совместное применение ускоряет сроки лечения и предотвращает рецидивы заболевания, а также позволяет значительно (более чем вдвое) снизить разовые дозы препаратов, уменьшая тем самым стоимость лечения животных (21).

Вместе с тем, существует немало ситуаций, при которых ИМД противопоказаны. В частности, введение ликопида (Гликопина) мышам приводит к активации инфекционного процесса, вызванного вирусом Лангат. Этот эффект, по-видимому, связан с вызванным ИМД ростом популяции макрофагальных клеток-мишеней, в которых размножается вирус (2). При тяжелой вирусной инфекции, например, чуме плотоядных, на фоне уже развившегося иммунодефицита ветврачу, который добивается хрупкого баланса между иммуностимуляцией и иммуносупрессией при подборе терапевтических средств приходится буквально ступать по лезвию ножа. Вот почему при чуме плотоядных в первую очередь рекомендуют ИМД, способные непосредственно воздействовать на возбудителя. При острой нервной форме чумы, когда вирус, размножаясь в нейронах и глиальных клетках, вызывает демиелинизацию, многие ветврачи назначают глюкокортикоидные гормоны, поскольку применение на этой стадии болезни иммуностимуляторов (Т-активина и др.) способно убить собаку за 1 – 2 дня, причем перед гибелью клиническое состояние животных резко ухудшается (1). Например: ИФНγ способствует повреждению нервных клеток, активируя цитотоксические Т-лимфоциты. Поэтому Достим и другие ИМД, повышающие синтез ИФНγ, противопоказаны при нервной формы чумы собак, в результате их применения может ускориться развитие болезни и обостриться ее течение. Противопоказан на нервной стадии чумы плотоядных и Мастим (согласно инструкции). Напротив, Мастим-OL, преимущественно действующий на В-клетки, эффективен при нервной форме чумы у собак. На этой стадии можно также применять ИМД, обладающие сильным системным действием. В частности: Фоспренил дает хороший терапевтический эффект при введении в ликвор собакам, больным нервной формой чумы.

Полученные экспериментальные данные научно обосновывают применение ИМД на различных стадиях инфекционного вирусного процесса. При этом показано, что Фоспренил как ИМД комплексного действия, может использоваться не только на ранних, но и на более поздних клинически выраженных этапах вирусной инфекции, так как он обладает прямым противовирусным действием и способностью нарушать жизненный цикл вирионов в клетках. Причем, в отличие от большинства других противовирусных препаратов, нарушающих определенные этапы репликации вирусов (и, следовательно, имеющих ограниченный спектр применения), механизм действия Фоспренила более многообразен и включает как непосредственное воздействие на вирусы, например — торможение синтеза ключевых белков, приводящее к изменению структуры вириона, так и нарушение репликации вирусов опосредованно, через изменение метаболизма инфицированной клетки, а также системное действие.

Применение ИМД при бактериальных инфекциях.

В литературе давно утвердилось мнение о том, что инфекционные болезни являются моноэтиологичными заболеваниями. В свое время такие представления, несомненно, оказали положительное влияние и способствовали изучению проблем патогенеза, иммунитета, диагностики, профилактики и этиотропного лечения вирусных или бактериальных инфекций. Однако на практике вирусные заболевания у мелких домашних животных редко протекают в виде моноинфекции. Как правило, на фоне уже имеющегося иммунодефицита, сопровождающего вирусную инфекцию, развиваются вторичные (секундарные) инфекции, которые тоже нередко полиэтиологичны. Помимо состояния иммунной системы хозяина, большое значение в развитии секундарных инфекций отводят биологическим свойствам и активности возбудителей, а также внешним стрессорным факторам. Так, респираторные вирусы повышают восприимчивость слизистых оболочек дыхательных путей к стафилококкам, стрептококкам и другим микроорганизмам; энтеровирусы оказывают аналогичное действие на чувствительность кишечного тракта к сальмонеллам и шигеллам. Впрочем, у мелких домашних животных встречаются и чисто бактериальные инфекции. При последних, хорошо зарекомендовало себя подключение к комплексной схеме лечения Сальмозана — ИМД бактериального происхождения. Сальмозан, полученный и всесторонне исследованный в НИИЭМ им. Гамалеи РАМН, представляет собой очищенный полисахарид из О-антигена брюшнотифозных бактерий. Препарат повышает образование антител, фагоцитарную активность лейкоцитов и макрофагов, титр лизоцима в крови, стимулирует неспецифическую резистентность к инфекциям, вызванным сальмонеллами, листериями, клебсиеллами, эшерихиями, стафилококками, бруцеллами, риккетсиями, возбудителями туляремии и некоторых других заболеваний (23). Согласно данным клинических испытаний, проведенных специалистами в 10 различных клиниках РФ, при бактериальных инфекциях (сальмонеллез, колибактериоз и стафилококкоз, подтвержденные лабораторной диагностикой), респираторных заболеваниях (бронхит, пневмония), энтеритах различной этиологии и энтероколитах собак и кошек применение Сальмозана позволило значительно сократить сроки лечения и повысить эффективность терапии. Сделано заключение о целесообразности применения Сальмозана как препарата первого выбора, стимулирующего иммунитет и неспецифическую резистентность. При лечении гнойных и рваных ран применение Сальмозана позволило существенно сократить срок лечения, отмечено снижение отечности, уменьшение гнойного экссудата в первые 2 – 3 дня, выздоровление наступало в полтора раза быстрее. Способность Сальмозана активировать макрофаги и стимулировать продукцию специфических антител В-лимфоцитами и обусловливает то, что сочетание Сальмозана с ИМД, обладающими противовирусной активностью, может, при своевременно начатом лечении, предотвратить развитие вторичных инфекций. Показано, что применение Сальмозана в сочетании с такими ИМД как Фоспренил, Максидин, Гамапрен, Гамавит, Иммунофан, Кинорон и др., не только существенно повышает эффективность лечения панлейкопении, герпесвирусных инфекций и калицивироза кошек, чумы плотоядных и парвовирусного энтерита собак, а также кожных, респираторных, гнойных и некоторых иных заболеваний, но и позволяет снижать дозы антибиотиков и сократить курс антибиотикотерапии (21). При этом отмечено, что Ампиокс, Бензилпенициллин и другие антибиотики при применении Сальмозана действуют гораздо эффективнее, что позволяет, при необходимости снижения стоимости лечения, отказаться от применения дорогих антибиотиков последнего поколения.

При выборе препаратов для лечения бактериальных, вирусных и смешанных инфекций важны и другие, вспомогательные функции ИМД. В частности, при инфекциях, сопровождающихся поражением желудочно-кишечного тракта (сальмонеллез, энтериты различной этиологии, инфекционный гепатит, панлейкопения и др.) большое значение имеет обезвреживание токсинов, обильно поступающих в организм в связи с дисфункцией кишечника. Очевидно, что при таких заболеваниях показаны такие ИМД препараты, как Фоспренил, Достим, а также нуклеинат натрия или Гамавит.

При лечении хламидиоза хорошие результаты получены при использовании совместно с антибиотиками таких ИМД как Максидин, Фоспренил или Иммунофан в сочетании с Гамавитом (9). По-видимому, это объясняется описанными выше механизмами действия данных ИМД, поскольку решающая роль в выздоровлении от хламидийной инфекции принадлежит Th1- иммунному ответу, продуктами активации которого являются IL-2, ФНОβ и вырабатываемый Th1 — ИФНγ, который не только ингибирует размножение хламидий, но и стимулирует выработку IL-1 и IL-2.

Герпесвирусная инфекция кошек, или ринотрахеит (FHV)- заболевание, вызванное вирусом герпеса.

Ринотрахеит – широко распространенное респираторное заболевание кошачьих, вызываемое вирусом герпеса кошек тип 1. Заболевание видоспецифичное и не представляет угрозы для других видов животных и человека. Протекает в острой и хронической форме.

• больные животные с острой формой инфекции/
• переболевшие кошки - носители: являются скрытыми (латентными), т.е. без симптомов болезни, носителями вируса в нервных клетках, особенно тройничного нерва, длительность носительства в среднем составляет 6 мес, но может быть пожизненной.
• кошки с хронической формой инфекции в стадии обострения.

Заражение вирусом происходит через выделения из носа, рта, глаз больных животных: при непосредственном контакте с больной кошкой, через инфицированный воздух, предметы ухода, корма, а также через обувь и одежду людей, контактировавших с источником инфекции. Внедрение и размножение вируса (репликация) в организме кошки происходит в основном в слизистых оболочках носоглотки и миндалин, но помимо этого часто в патологический процесс включается конъюнктива глаз, лимфоузлы и пр.; заражение невакцинированных беременных кошек приводит к внутриутробному инфицированию плодов ( и как следствие- аборты, рождение мертвых или нежизнеспособных плодов).

Выделение вируса в окружающую среду начинается через 24 часа после заражения и продолжается до 3 недель. Устойчивость вируса: вирус погибает при 37С в течение 3 часов, при 56С – в течение 5 мин; остается жизнеспособным при 25С в течение 1 мес, при 4С -5 месяцев. Чувствителен к большинству дезинфектантов и антисептиков.

Вирус герпеса кошек приводит, как правило, к острому респираторному заболеванию. Инкубационный (скрытый) период заболевания обычно 2-6 дней.

Клинические признаки заболевания:

• Угнетение и отсутствие аппетита.
• Чихание и выделения из носа и глаз, сначала прозрачные (серозные), а при продолжительном течение болезни становятся слизисто-гнойными.
• Повышение температуры тела.
• Может быть кашель, одышка.
• Иногда появляются язвы языка, что клинически напоминает другую инфекционнную болезнь кошек - кальцивироз. Чаще всего этот симптом наблюдается у кошек с хроническим течением герпеса в стадии обострения.
• Поражение роговицы: язвы и глубокий кератит.
• Может быть слюнотечение (обычно наблюдается при язвах в ротовой полости).
• Очень редко - язвы на носу, коже морды.
• Часто ринотрахеит протекает совместно с другими инфекциями: хламидиоз, кальцивироз, микоплазмоз, бордетелла бронхосептика (Bordetella bronchiseptica).

Несмотря на то, что данная болезнь может приводить к тяжелому состоянию, уровень смертности невысокий, за исключением очень маленьких котят и кошек с сильно ослабленным иммунитетом. Смерть бывает наиболее часто вследствие обезвоживания, вторичной бактериальной инфекции, приводящей к бронхопневмонии. В среднем симптомы болезни наблюдаются в течение 7-10 дней.

• После переболевания острой герпесвирусной инфекцией около 80% кошек остаются вирусоносителями (т.е. внешне выглядят совершенно здоровыми) и примерно 50% из них выделяют вирус в окружающую среду. Выделение вируса может происходить спонтанно, но в основном это случается после стресса: переезд на другое место жительства, посещение выставок, роды, лактация, использование глюкортикостероидов (например, преднизолон, дексаметазон), оперативные вмешательства и др.
• Кошки могут стать вирусоносителями и без проявления каких-либо симптомов, т.е. кошка, заразившись, может оказаться носителем даже несмотря на то, что сама никогда не проявляла признаков болезни или была полностью вакцинирована.
• Также для ринотрахеита характерен переход в хроническую (латентную, или скрытую) форму: в этом случае вирус поступает в окружающую среду только в период обострения, т.е. когда проявляются симптомы заболевания. Хроническая (латентная) герпесвирусная инфекция наиболее часто переходит в острую стадию из-за стресса: переезд, выставки, оперативные вмешательства и др.

Несмотря на то, что у кошек встречаются и другие инфекции, сопровождающиеся респираторными симптомами (такие как кальцивироз, хламидиоз и др.), в большинстве случаев для постановки диагноза достаточно имеющихся клинических признаков.

Для диагностики в России чаще всего используют метод ПЦР, для этого берутся мазки из носа и конъюнктивы глаз. При первичной герперсвирусной инфекции вирус обнаруживается максимум в течение 7 дней от начала клинических проявлений, при повторной инфекции- максимум в течение 4 дней, во время латентной фазы в обычных мазках с конъюнктивы вирус не выявляется, т.к здесь его уже нет, а локализуется он в клетках нервной ткани.

1. Многие больные кошки не едят, т.к. теряют обоняние или из-за болезненности, вызванной наличием язв в ротовой полости, поэтому очень важно кошку кормить: для этой цели подойдет любой готовый корм в виде паштета, который предварительно разводят теплой водой, и дают кошке из шприца на 10-20мл без иглы. Если кошку в течение 3 дней не получается кормить насильно, ей показана установка специальных зондов, через которые будет осуществляется кормление.
2. Промывание носа раствором натрия хлорида 0,9% (физиологический раствор) для очищения от скопившихся выделений, проводится ежедневно и несколько раз в день. Больная кошка должна содержаться в чистом, хорошо проветриваемом помещении.
3. Антибиотики для лечения вторичной бактериальной инфекции
4. Системные противовирусные препараты
5. Симптоматическое лечение: для кошек с выраженными симптомами обезвоживания необходимы внутривенные капельницы, при повышенной температуре используются жаропонижающие средства и пр.

3.1. Протективная активность Циклоферона в опытах на животных.

В ходе опыта по определению протективной активности Циклоферона на животных не было отмечено неспецифической смертности в контрольной группе интактных животных.

Клинические признаки заболевания не зависели от выбранного штамма и были типичными для гриппозной инфекции. Они включали: затрудненное дыхание, атаксию, тремор, а также снижение потребления корма и воды.

Данные по динамике смертности животных в контрольных и опытных группах суммированы в табл. 1-5 и на рис. 1-5.

Как видно из представленных результатов, вирус гриппа вызывал летальную инфекцию у белых мышей, сопровождающуюся гибелью животных начиная с 3-4 суток после инфицирования в зависимости от дозы вируса и использованного штамма. Такой показатель, как продолжительность жизни животных, был связан с использованной дозой вируса обратной зависимостью. Активность Ремантадина, использованного в опытах как референс- препарат, была существенной для всех использованных штаммов, за исключением гриппа A/PR/8/34. Протективные свойства ремантадина при этой инфекции оказались весьма умеренными, что проявлялось некоторым снижением смертности в опытных группах по сравнению с контролем (индекс защиты 13-29 %) и незначительным увеличением продолжительности жизни (на 1,1 - 1,6 суток в зависимости от дозы вируса). Полученные данные, таким образом, согласуются с ранее полученными результатами экспериментов in vitro и in vivo, свидетельствующих о нечувствительности этого штамма вируса к ремантадину. Некоторый протективный эффект в этом случае можно объяснить антитоксическим действием препарата.

В то же время препарат сравнения Тамифлю проявлял в случае вируса A/PR/8/34 выраженный защитный эффект, как снижая смертность в группах мышей, получавших лечение (50-60 % по сравнению с контролем), так и увеличивая средний срок жизни животных (на 2 суток). Таким образом, использованный вирус оказался устойчив к ремантадину, однако чувствителен к Тамифлю.

С другой стороны, применение Тамифлю практически не влияло на показатели гибели животных, зараженных вирусом А/Владивосток/2/09 (H1N1). Таким образом, ранее полученные данные об устойчивости этого изолята к озельтамивиру - активному компоненту Тамифлю - были подтверждены в опытах на животных. Другой препарат сравнения - ремантадин - оказывал при этой инфекции выраженный защитный эффект.

Показатели протективной активности Циклоферона находились в промежутке 11-50% в зависимости от использованной дозы вируса и собственно модельного штамма. Увеличение средней продолжительности жизни животных составило 1,0 - 3,3 суток по сравнению с контролем. Следует отметить, что защитный эффект Циклоферона был выражен слабее, чем активность этиотропных препаратов сравнения (за исключением случаев резистентных штаммов), однако проявлялся в равной степени в отношении вирусов, различающихся по чувствительности к ремантадину и Тамифлю. Так, индекс защиты ремантадина против устойчивого вируса A/PR/8/34 составил 15-23%, тогда как Циклоферона - 35-41%. В то же время при использовании ремантадин- чувствительных штаммов активность ремантадина существенно превосходила эффект Циклоферона (табл.3).

3.2. Влияние Циклоферона на репродукцию вирусов гриппа в организме животных.

На следующем этапе исследования было изучено влияние Циклоферона на репликативную активность вирусов гриппа в ткани легких инфицированных животных. С этой целью из легких животных на 3 сутки после заражения были приготовлены гомогенаты, в которых затем определяли инфекционный титр вируса в культуре клеток.

Данные об уровне репликации модельных вирусов гриппа в организме животных приведены в табл. 6.

Как видно из приведенных результатов, Циклоферон снижал инфекционные титры всех исследованных вирусов, хотя и в разной степени. В отношении вирусов A/Swine/1976/31 и A/Aichi/2/68 это снижение оказалось недостоверным. Тем не менее, эффект Циклоферона отмечался и для вирусов A/Puerto Rico/8/34 и А/Владивосток/2/09, нечувствительных к препаратам сравнения.

3.3. Влияние Циклоферона на морфогенез экспериментальной летальной гриппозной инфекции у белых мышей.

На следующем этапе исследований были изучены особенности морфогенеза гриппозной инфекции в организме животных в условиях применения Циклоферона. Качественно морфологические картины гриппозной пневмонии, вызванной пятью использованными вирусами гриппа, были сходны между собой. Несколько более слабая реакция отмечалась в легких животных, зараженных озельтамивир- устойчивым вирусом А/Владивосток/2/09. Эти данные согласуются с результатами предыдущих этапов исследования о пониженной патогенности этого штамма для лабораторных животных (см. выше).

Следует отметить, что у животных, зараженных ремантадин- устойчивым штаммом гриппа A/PR/8/34 степень поражения легких и выраженность вирусиндуцированных процессов в легочной ткани практически не отличались от таковых в контрольной группе мышей (Рис.12, 13).

Сходные данные были получены при лечении животных препаратом Тамифлю. Так же, как и в случае Ремантадина, применение его для лечения инфекции, вызванной чувствительными штаммами A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) и A/swine/1976/31 (H1N1), приводило к резкому ограничению очагов гриппозной пневмонии (как на острой, так и на хронической стадиях). В то же время в отношении озельтамивир- устойчивого штамма А/Владивосток/2/09 снижение уровня вирусспецифических патологических процессов оказалось минимальным (Рис. 14, 15).

Таким образом, стимуляция иммунного ответа на стадии острого гриппа при применении Циклоферона приводит к ограничению очагов постгриппозной пневмонии и нормализации структуры респираторных отделов легких по окончании острой фазы заболевания. Следует отдельно отметить, что эффект Циклоферона наблюдался при заражении животных любым из пяти исследованных вирусов независимо от их чувствительности или устойчивости к препаратам сравнения.

3.4. Влияние Циклоферона на морфологию вирусной популяции в легких животных.

Для изучения влияния Циклоферона на особенности морфологии вирионов, реплицирующихся в легких животных, бронхолегочные смывы, освобожденные от клеточной фракции, были подвергнуты центрифугированию для концентрирования вирусного содержимого, после чего ресуспендированный осадок был исследован под электронным микроскопом.

Таким образом, в результате проведенной серии опытов показано, что действие Циклоферона в отношении реплицирующегося вируса гриппа in vivo заключается в нарушении морфогенеза вирусных частиц, что выражается в преобладании в вирусной популяции крупных частиц неправильной формы, часть с поверхностными дефектами. Инфекционность таких популяций бывает снижена за счет двух обстоятельств. Во- первых, гигантские вирусные частицы, хотя и содержат большое количество копий вирусного генома, однако неспособны инфицировать больше одной клетки, что приводит к неполной реализации инфекционного потенциала вируса. Во- вторых, дефекты в поверхностных гликопротеидах затрудняют адгезию вирионов на поверхности клеток- мишеней. Это приводит к задержке вируса во внеклеточном пространстве, делая его мишенью для протеолитических ферментов и иммунокомпетентных клеток. Учитывая эти данные, можно говорить о Циклофероне как о препарате комплексного механизма действия, воздействующем как на активность системы врожденного иммунитета хозяина, так и - возможно, опосредованно - на процессы собственно вирусного морфогенеза, снижая инфекционность вирусного потомства.

3.5. Влияние Циклоферона на морфогенез гриппозной инфекции в культуре клеток.

Для более детального изучения действия Циклоферона в культуре клеток морфогенез вируса гриппа в контроле и в присутствии Циклоферона был изучен при помощи электронной микроскопии.

При культивировании клеток в присутствии карбоксилата озельтамивира формирования внутриядерных включений и вирионов потомства практически не наблюдалось. Клетки выглядели практически интактными, органеллы были не изменены, ядерные включения были практически не выражены, распределение хроматина было характерным для нормальных клеток или с небольшими нарушениями, ядрышко было хорошо выражено и расположено центрально.

При заражении вирусом гриппа через 12 часов развития инфекционного процесса морфологических признаков репликации вируса в клетках не отмечалось (Рис.32). Вакуоли в цитоплазме наблюдались в небольшом количестве, ядра выглядели округлыми, ядрышки были хорошо сформированы, характер расположения хроматина и структура клеточных органелл были типичными для интактных клеток.

Таким образом, действие Циклоферона на морфогенез вируса гриппа в культуре клеток MDCK заключалось в предотвращении цитопатического действия вируса, задержке вирусной репликации и нарушении структуры вирусспецифических включений в ядре клетки.

В последнее время одной из важнейших проблем ветеринарии является рост заболеваний, торпидных к адекватной этиотропной терапии и связанных с нарушениями в системе иммунитета [3; 10]. Иммунная система любого животного выполняет важную функцию по сохранению постоянства внутренней среды организма, осуществляемую путем распознавания и элиминации из организма чужеродных веществ антигенной природы, как эндогенно возникающих, так и экзогенно проникающих в организм. Эта функция иммунной системы осуществляется с помощью факторов врожденного и приобретенного (или адаптивного) иммунитета [12].

Вторичная иммунная недостаточность часто наблюдается при вирусных, паразитарных и некоторых бактериальных инфекциях, истощении организма, длительном стрессе, тяжелых травмах, интоксикациях, лечении онкологических больных химиотерапевтическими средствами при длительном воздействии вредных факторов, к которым относят и корма эконом-класса, а также в неблагоприятных экологических условиях [2, 3].

В связи с резко возросшим интересом практикующих врачей к противовирусной терапии особенно важно выявить область применения и степень адекватного ответа животных на иммунную фармакотерапию различными препаратами.

Рынок предлагает большое количество лекарственных средств, биологически-активных добавок и даже кормов для ослабленных животных со сниженным иммунитетом. Практикующему врачу зачастую трудно разобраться в этом громадном потоке информации и предложений и выбрать нужное средство. Исходя из этого, мы поставили целью провести серию экспериментов по действию наиболее часто применяемых в нашем регионе препаратов, предназначенных для этиотропной терапии герпесвирусной инфекции кошек I типа (FHV-1). Для сравнения нами были выбраны наиболее часто применяемый Форвет, Фоспренил и рекомбинантный интерферон кошки Фелиферон.

Фелиферон – рекомбинантный интерферон кошки, обладающий противовирусным и иммуностимулирующим действием, появившийся на рынке ветеринарных препаратов более 3 лет назад, зарекомендовал себя в ведущих ветеринарных клиниках. Этот препарат был исследован при терапии острых вирусных инфекций у кошек [4, 6, 7, 14, 15], медленнотекущих вирусных инфекций [16, 17].

Таблица 1. Схема эксперимента по сравнительной эффективности препаратов при этиотропной терапии вирусного ринотрахеита у кошек

Данные по общеклиническим исследованиям крови были собраны в четыре сравнительные таблицы (табл. 2-5).

Согласно нашим наблюдениям, относительный эритроцитоз, гипергемоглобинемия при повышении гематокрита может являться следствием дегидратации в организме животного в период проявления острого процесса из-за отказа от воды и пищи в связи с реактивной лимфоидной гиперплазией подчелюстной лимфатической ткани. Появление плазмоцитов в крови сопровождает первичную вирусемию и является диагностическим показателем острого течения вирусной инфекции [22]. Заметная тромбоцитопения развивается из-за нарушения системы свертывания крови и проявляется ломкостью капилляров. Визуально это определяется в виде гиперемии слизистой оболочки полости рта и острых конъюнктивитов. Степень тяжести инфекционного процесса хорошо отслеживается на примере увеличения скорости оседания эритроцитов в крови. Согласно мнению Gaskell R.M. с соавт., лейкоцитоз в сочетании с повышением СОЭ и соответствующие изменения лейкоцитарной формулы – достоверный признак развития в организме острых воспалительных процессов [20]. Ряд авторов Binns S.H., Dawson S. с соавт. (2012 г.) делает выводы о сопоставлении роста СОЭ с тяжестью развития токсического процесса [21].

Отслеживая общеклиническую картину крови животных контрольной группы, мы видим, как меняется гематологическая картина на протяжении первых 5 дней заболевания. К 5-му дню болезни пропадает относительный эритроцитоз в крови и выравниваются показатели содержания гемоглобина и гематокрита. Появление миело-, метамиелоцитов и увеличение палочкоядерных нейтрофилов говорит о напряженности процессов лейкоцитопоэза. Нейтрофильный лейкоцитоз развивается вследствие увеличения продукции нейтрофилов, повышенной мобилизации костномозгового резерва или перераспределения пристеночного пула. Острые инфекционные заболевания и воспалительные процессы способствуют мобилизации костномозгового резерва и пристеночного пула нейтрофилов в периферической крови. Обнаружение нейтрофильного лейкоцитоза на пятый день болезни говорит о лейкемоидной реакции на наличие инфекции в организме и активизации лимфоидного кроветворения. Как мы видим из таблицы, этот процесс сочетается с повышением общего количества нейтрофилов. К 10-му дню от начала лечения тяжесть левого сдвига снижается, что оценивается как адекватный ответ на терапию ринотрахеита указанными препаратами. Хочется отметить развитие активной эозинофилии после 5-го дня лечения животных. Согласно данным Кисленко В.Н., (2006 г.) развитие эозинофилии соответствует началу выздоровления. Однако ряд инфекционных и других заболеваний с высоким уровнем IgE характеризуются эозинофилией после окончания воспалительного процесса, что указывает на незаконченность иммунной реакции с ее аллергическим компонентом [9]. В целом изменение количества эозинофилов в периферической крови является результатом дисбаланса процессов продукции клеток в костном мозге, их миграции и распада в тканях. В данной группе эозинофилы дали резкий количественный скачок на 5-й день болезни и спустились к верхней границе физиологической нормы к концу исследованного периода. Аналогично эозинофилам мы наблюдаем и подъем базофилов.

Возможно, причиной базофилии является реакция на введение гипериммунной сыворотки глобфел, которая, согласно данным производителя, изготавливается из сыворотки крови сельхозживотных (лошадей и быков). Таким образом, базофилез, это, скорее всего, показатель гиперчувствительности замедленного типа у исследуемых животных. Кроме того, мы наблюдаем стойкий моноцитоз, который в сочетании с нейтрофилезом и левым сдвигом может быть интерпретирован как начало выздоровления животного. Однако на 5-й и 10-й дни болезни мы диагностируем относительный лимфоцитоз, что опосредованно по некоторым данным [18] может быть компенсаторной реакцией недостаточной иммунной защиты организма. Эти же данные могут подтверждать и наличие плазмоцитов в организме кошек на 5-й и 10-й дни терапии. Наличие плазмоцитов также указывает на остаточные патологические явления в организме [2]. На фоне протекающих процессов лимфогенеза мы видим медленное увеличение количества тромбоцитов. К концу исследуемого периода количество тромбоцитов у контрольных кошек вошло в физиологические границы, при этом показатели у отдельных животных сильно разнились. Так же сильно разнились и показатели скорости оседания эритроцитов. В этой группе ни у одного животного к концу описываемого периода скорость оседания эритроцитов не уложилась в границы физиологической нормы.

Исследуя общеклинические показатели крови у кошек 1-й опытной группы в течение периода исследования, мы получили следующие показатели (табл. 3).

Как видно из таблицы, изначально эта группа животных имела более выраженный лимфоцитоз, в процессе терапии мы видим, что средний показатель содержания лимфоцитов по группе более быстро стремится к нормограмме, чем у животных контрольной группы, кроме того, мы видим более быстрое снижение СОЭ, в отличие от кошек контрольной группы, в остальном гематологические показатели кошек этой группы мало отличаются от показателей животных контрольной группы.

В таблице №4 представлены результаты общеклинического исследования крови кошек второй опытной группы, в терапевтическую схему которых был введен препарат Форвет в дозах, рекомендованных производителем.

Таблица 2. Динамика общеклинических показателей крови кошек в контрольной группе