Что такое геном вируса а птиц

doi: 10.18527/2500-2236-2017-4-1-10-20

Получена: 2017-10-18 Принята к печати: 2017-11-02 Опубликована: 2017-12-06

Р. Н. Гейдаров 1 , Н. Ф. Ломакина 2 , Е. Ю. Боравлева 2 , И.С. Холодилов 2 , А. С. Гамбарян 2# , В. М. Михайлович 1 , Е. Е. Фесенко 3

# Для корреспонденции: Александра Гамбарян: al.gambaryan@gmail.com

Среди изолятов от диких птиц идентифицированы вирусы гриппа субтипов H3N1, H3N6, H3N8, H4N6, H1N1, H5N3 и H11N9. Все они содержали последовательность ESEV на С-конце белка NS1, полноразмерную рамку считывания для белка PB1-F2. Замена N66S в PB1-F2 обнаружена у шести штаммов. Однако такие маркеры патогенности, как последовательность ESEV (лиганд PDZ-домена) в вирусном белке NS1 и замена N66S PB1-F2 в контексте генома вирусов гриппа диких уток, не делали вирус патогенным для мышей. Все изоляты были высокоурожайны в куриных эмбрионах, инфекционны и иммуногенны для мышей, но не вызывали у этих животных клинических симптомов заболевания.

Forty-two strains of avian influenza viruses were isolated from the wild waterfowl’s feces in the city of Moscow. These viruses as well as reference strains and some experimental reassortants were analyzed by microarrays. The used microarrays contained 176 probes to the different segments of influenza virus genome. The microarray allows to determine 1) the hemagglutinin and neuraminidase proteins subtype; 2) the primary structure of the C-terminal sequence of the viral NS1 protein, which serves as a ligand for the PDZ domain; 3) the presence of stop codons and substitution N66S in the reading frame of the viral protein PB1-F2; 4) the presence of the polybasic site for hemagglutinin cleavage. The viruses of H3N1, H3N6, H3N8, H4N6, H1N1, H5N3 and H11N9 subtypes were identified from the group of wild bird’s isolates. All isolates contained the ESEV sequence at the C-terminus of the NS1 protein and the full-length reading frame for the PB1-F2 protein. The replacement of N66S in PB1-F2 was found in six strains. However, the presence of ESEV sequence (ligand of PDZ domain) in the NS1 virus protein and the N66S substitution in PB1-F2 did not lead to the pathogenicity of these viruses for mice. All isolates demonstrated high yield growth in chicken embryos, were infectious and immunogenic for mice, but did not induce any clinical symptoms.

Низкопатогенные вирусы гриппа диких птиц (low pathogenic avian influenza viruses, LPAIV) расположены в основаниях эволюционных ветвей всех субтипов вирусов гриппа А. Они эволюционируют медленно и сохраняют ряд характерных признаков. К таким признакам относятся: консервативное строение рецепторсвязывающего участка в верхушечной части гемагглютинина (НА); строение сайта нарезания, который расщепляется только трипсиноподобными протеазами, секретируемыми в клетках респираторного и желудочно-кишечного тракта, что ограничивает распространение вируса в организме; низкий рН конформационного перехода молекулы НА, обеспечивающий ее высокую устойчивость к кислой среде пищеварительного тракта птиц.

Повышенная патогенность вируса – многофакторная характеристика, которая определяется множественными изменениями в различных генах вируса. Так, в молекуле HA высокопатогенных штаммов присутствует полиосновная последовательность в сайте нарезания [3]. В белке нейраминидазе (NA) появляется делеция в стеблевом участке [4]. Мутация E627K в белке PB2 способствует повышению активности вирусной полимеразы и улучшению репродукции вируса [5–7]. Замена N66S в рамке считывания PB1-F2 ускоряет ядерный транспорт [8–10]. В неструктурном белке NS1 появляются замены, приводящие к эффективному подавлению синтеза интерферона в хозяйской клетке [7, 11–13].

1) устойчивость к основным противогриппозным лекарственным средствам: препаратам группы адамантанов (амантадин, ремантадин) и ингибиторам NA (озельтамивир и его аналоги);

2) наличие и структуру участка связывания PDZ-домена в белке NS1: характерные для HPAIV последовательности ESEV, EPEV, ESKV и KSEV либо характерные для LPAIV – RSKV и RSEV;

3) наличие стоп-кодонов в позициях 12 и 58 и мутацию N66S в рамке считывания белка PB1-F2;

4) наличие в НА подтипов H5 и H7 полиосновного сайта протеолитического расщепления, характерного для HPAIV.

Вирусы

Вирусы из фекалий чаек и уток выделены в 2006–2014 гг. на берегу пруда в Тропаревском парке города Москвы и хранятся в коллекции Федерального научного центра исследований и разработки иммунобиологических препаратов им. М. П. Чумакова (Москва, Россия).

Реассортантный вирус VNH5N1-PR8/CDC-RG (VN‑PR) (H5N1) сконструирован в Центрах по контролю и профилактике заболеваний США (Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, USA) и содержит гены, кодирующие белки НА и NA от вируса A/Vietnam/1203/2004 (H5N1), а остальные – от штамма A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) (PR8). Вирус любезно предоставлен д-ром R. Donis. В гене НА методом обратной генетики модифицирован участок, кодирующий полиосновный сайт нарезания. Холодоадаптированный вирус A/Leningrad/134/17/57 (H2N2) (Len) любезно предоставлен проф. Л. Г. Руденко (Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, Россия). Вирус A/Hamburg/5/2009 любезно предоставлен д-ром М. Н. Матросовичем (Institute of Virology, Philipps University, Marburg, Germany), Вирус A/mallard/Sweden/91/2002 (H7N9) любезно предоставлен д-ром R. A. Fouchier (Department of Virology, Erasmus Medical Centre, Rotterdam, The Netherlands). Вирус А/duck/Buryatia/664/1988 (H3N1) получен из коллекции Национального исследовательского центра эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н. Ф. Гамалеи (Москва, Россия). Полные названия и обозначения вирусов приведены в Табл. 1.

Вирус

Обозначение

Субтип

Номер в GenBank (ген)

PB1-F2 66 a

Линия NS1 б

A/Vietnam/1203/2004 ×A/Puerto Rico/8/34

VN-PR × Len (клон 3697)

VN-PR × Len (клон 4760)

Hamb × Len (клон 4885)

Hamb × Len (клон 4886)

Hamb × Len (клон 4888)

а Аминокислота в позиции 66 белка PB1-F2.
б Линия гена NS1 согласно [15].

Таблица 1. Исследованные вирусы

Выделение вирусов

Выделение вирусов проводили из свежих фекалий, которые суспендировали в двойном объеме фосфатно-солевого буфера (PBS) с добавлением антибиотиков: 0.4 мг/мл гентамицина, 0.1 мг/мл канамицина, 0.01 мг/мл нистатина и 2% раствора MycoKill AB (PAA Laboratories GmbH). Суспензию центрифугировали 10 мин при 4 000 об/мин и полученным супернатантом (200 мкл) заражали 10-дневные куриные эмбрионы (КЭ). Аллантоисную жидкость собирали через 48 ч и для дальнейшего пассирования отбирали пробы, положительные в реакции гемагглютинации (РГА).

Секвенирование

Анализ на микрочипе

Биочип представляет собой подложку с упорядоченно расположенными микроячейками, содержащими ковалентно иммобилизованные олигонуклеотидные зонды. На подложках закреплены пластиковые гибридизационные камеры вместимостью 30 мкл, куда вносят исследуемые флуоресцентно меченные фрагменты генома вирусов гриппа. При гибридизации флуоресцентно меченный ПЦР-продукт образует комплекс с комплементарным иммобилизованным зондом. Анализ результатов гибридизации проводили с помощью универсального аппаратно-программного комплекса ТУ 9443-004-02699501-2006 (Институт молекулярной биологии им. В. А. Энгельгардта, Россия). Сигнал флуоресценции в каждой ячейке регистрировали камерой с ПЗС-матрицей и подвергали оцифровке.

Анализ патогенности вирусов для мышей

Мышам линии BALB/c весом 8–12 г вводили интраназально под легким эфирным наркозом по 50 мкл цельной или разведенной вируссодержащей аллантоисной жидкости (ВАЖ). Проводили ежедневное наблюдение за состоянием подопытных особей и изменением их веса в сравнении с животными контрольной группы. На 14-е сутки после заражения отбирали кровь для определения уровня антител методом ИФА. Инфекционность вирусов определяли титрованием на КЭ и выражали в lg эмбриональных инфекционных доз (lg ЭИД₅₀).

Получение реассортантов

Для получения холодоадаптированных реассортантов с донором аттенуации Len 10-дневные КЭ заражали одновременно вирусами Len и донором поверхностных белков – по 7,0 lg ЭИД₅₀ каждого вируса. КЭ инкубировали 18 ч при 32°С, после чего проводили еще один пассаж длительностью 18 ч при 32°С. Аликвоту полученного вирусного урожая инкубировали в течение ночи с мышиной иммунной сывороткой против вируса Len; затем клонировали методом предельных разведений при 26°С и отбирали пробы, положительные в реакции торможения гемагглютинации с сывороткой против донора поверхностных белков и отрицательные с сывороткой к вирусу Len. После этого трижды клонировали вирус методом предельных разведений, выращивая в течение 96 ч при 26°С.

В качестве референсных штаммов использованы вирусы: A/duck/Buryatia/664/1988 (H3N1), A/duck/Primorie/3628/2002 (H9N2), A/mallard/Sweden/91/2002 (H7N9), штамм А/chicken/Kurgan/3654at/2005 (H5N1) [19], аттенуированный в лабораторных условиях, а также циркулировавшие в человеческой популяции вирусы гриппа подтипов H1N1, H2N2 и H1N1pdm. Основные характеристики и краткие обозначения исследованных вирусов приведены в Табл. 1.

В результате анализа определены субтипы HA и NA всех изолятов. Для вирусов, у которых гены, кодирующие белки HA и NA, были секвенированы ранее, результаты субтипирования на биочипе соответствовали результатам секвенирования.

Факторы патогенности в природных изолятах

Полиосновной сайт нарезания HA был идентифицирован в НА вируса ch/Ku (H5N1), что соответствует данным секвенирования (GenBank HQ724523.1).

Устойчивость к лекарственным препаратам адамантанового ряда, обусловленная заменами в белке М2, обнаружена только у вирусов гриппа человека: PR8 (A27 и N31) и Hamb (N31).

Во всех изолятах от диких птиц белок NS1 терминирован последовательностью ESEV, а в штаммах ch/Ku, PR8 и Len – последовательностями ESKV, RSEV и RSKV соответственно, что подтверждается данными секвенирования, опубликованными в GenBank.

Стоп-кодон в рамке считывания белка PB1-F2 обнаружен в вирусе Hamb, что также соответствует данным секвенирования. Все природные изоляты содержали полноразмерную рамку считывания белка PB1-F2. У восьми штаммов выявлена замена N66S в белке PB1-F2, которая считается фактором, повышающим патогенность вируса (Табл. 1). Для 15 штаммов, вошедших в исследование, была определена первичная структура гена PB1, и результаты секвенирования подтвердили данные анализа на биочипе.

Для выяснения вопроса, как влияет замена N66S в белке PB1-F2 на патогенность природных изолятов, мы исследовали близкородственные вирусы, отличающиеся по этой позиции, на вирулентность для мышей. На Рис. 1 приведены данные изменения веса мышей для вирусов гриппа подтипов H3N8 и H3N1. Динамика изменения веса мышей, зараженных утиными вирусами 2008–2014 гг. с N66 и S66 в белке PB1-F2, не отличалась достоверно от динамики контрольных мышей. Аналогичные результаты получены и для вирусов подтипов H4N6 и H6N2 (Табл. 2). Важно подчеркнуть, что у всех зараженных мышей наблюдался мощный вирусспецифический иммунный ответ, проявляющийся в высоких титрах антител (по данным ИФА). Это свидетельствовало о том, что заражение прошло успешно. Единственный утиный штамм вируса гриппа, который вызывал болезнь и гибель мышей, – изолят 1988 года d/664.

В селе Красная Горка, Челно-Вершинского района, где был зафиксирован очаг птичьего гриппа, проведено уничтожение всего поголовья домашней птицы во всем населенном пункте.

В Красной Горке была ликвидирована 421 птица. На всех подворьях, где была обнаружена домашняя птица, проведена дезинфекция. Туши птиц сожжены. В трех дворах, где погибли 15 кур непосредственно от птичьего гриппа, которые были приобретены на одном из несанкционированных рынков ранее, сразу же после получения результатов анализов, уничтожены 56 птиц. Держать птицу жителям района можно будет только после отмены карантина.

«В результате лабораторных исследований 19 мая геном вируса гриппа А птиц подтипа Н5 выделен в патологическом материале, отобранном от павших кур, ранее содержавшихся в личных подсобных хозяйствах в селе Красная Горка.

Постановлением губернатора Самарской области от 22 мая введен карантин по высокопатогенному гриппу птиц на территории села Красная горка в Челно-Вершинском районе Самарской области. Документом предписано закрыть дорогу из населенного пункта и оборудовать на выезде из него контрольно-пропускные пункты с камерами для обработки одежды и дезинфекционными установками. В районе населенного пункта установлены предупреждающие знаки, ограничено движение транспорта, проведен учет поголовья птиц и приостановлена торговля.

Что-же такое птичий грипп и чем он опасен для человека и птицы?

Птичий грипп является высокозаразной болезнью птицы, которая характеризуется угнетенным состоянием, септицемией (тяжелое состояние, вызванное попаданием в ткани и кровь птицы возбудителей гриппа), поражением пищевой системы и респираторного тракта.

Птичий грипп: о возбудителе

Возбудителем болезни грипп птицы является РНК-содержащий вирус семейства Ortomyxoviridae, рода Influenzavirus . Благодаря специфическому строению вирусного генома он способен проявлять высокую экологическую пластичность, то есть осваивать все новые экосистемы и расширять круг хозяев. Вирус гриппа птицы родственен с вирусом гриппа человека, лошадей и свиней.

Вирус птичьего гриппа отличают по двум поверхностным антигенам – Н и N.

Вирус стоек к воздействию кислот и не теряет своей активности в пределах рН 6,5-9,0. В дистиллированной воде он быстро разрушается, его дезактивирует формальдегид и гидроксиламин, слабые растворы кислоты, препараты с содержанием атомарного кислорода, солнечная радиация и пр. При воздействии температуры 55 0 С он разрушается за 60 минут, при температуре 60 0 С – за 10 минут, при 70 0 С – за 2-5 минут. Также за 10-30 минут вирус гриппа птицы можно дезактивировать следующими веществами: 2%-й р-р едкого натра, 3%-й р-р хлорной извести, 5%-й р-р фенола, 0,5-0,75%-й р-р современных дезинфектантов на основе производных с класса четвертных соединений аммония.

Грипп птицы: как распространяется?

Грипп находится на одном из первых мест среди инфекционных болезней по количеству биологических видов, которые включаются в инфекционный процесс, и характеризуется постоянной изменчивостью возбудителя. Главным хозяином вируса гриппа является водоплавающая птица . К примеру, только у уток обнаружено 15 ГА и 9 нейраминидаз, реосортация (то есть построение генома нового вируса из фрагментов геномов родителей) которых создает разнообразие среди штаммов вируса. Это делает птичий грипп непредсказуемым.

Межвидовой барьер вируса гриппа помогают преодолевать морские котики, свиньи, киты, норки и лошади. Среди этих животных регистрируют эпизоотии и высокую смертность.

Природная стойкость уток и гусей к вирусу гриппа одновременно приводит к широкому носительству высоковирулентных штаммов возбудителя. Так, в 2004 году в России вирусоносительство вируса гриппа перелетной птицей достигало 30% . Как известно, через Россию пролегают основные миграционные русла из юго-восточной Азии, Индии, Австралии, Африки. Украине, к примеру, в этом плане повезло немного больше: через ее территорию пролетают только дикие гуси и утки, которые мигрируют между северными регионами европейской части России и Африкой.

Главным путем передачи возбудителя птичьего гриппа является воздушно-капельный. Однако возбудитель также может распространяться с зараженной питьевой водой, яйцами, перьями, кормами, отходами и инвентарем. Также создают благоприятные условия для распространения вируса кошки, насекомые, грызуны. Инкубационный период - 2-7 суток. Болезнь длится 2-25 суток. Смертность составляет от 2-5% до 90%. Птица, которая переболела птичьим гриппом, выделяет вирус во внешнюю среду более 20 дней. Вирусоносительство длится до трех месяцев, и в этот период возбудитель может передаваться с яйцами.

Птичий грипп: симптомы, патогенез

Вирус птицы способен проникнуть из кишечника в кровяное русло животного уже в первые четыре-шесть часов после инфицирования. Вследствие нарушения гематоэнцефалитического барьера развивается виремия, когда вирусы попадают в кровь и начинают распространяться по телу. В начале болезни у птицы увеличивается количество гемоглобина, эритроцитов и псевдоэозинофилов со сдвигом к палочкоядерным и юным. Вместе с этим, резко уменьшается количество эозинофилов и лимфоцитов. Под влиянием вируса гриппа птицы наблюдаются изменения биохимического состава крови, снижается или вовсе исчезает способность крови ферментативно расщеплять белки до пептидов и аминокислот (протеолиз). Стенки сосудов становятся проницаемыми: в сердечной мышце развиваются дегенеративные и дистрофические изменения, которые обуславливают его слабость. Указанные явления ведут к нарушению кровотока и развитию гиперемии, застоев, появлению отеков и кровоизлияний. К процессу приобщаются не только все органы и ткани, но и центральная нервная система.

Симптомы птичьего гриппа

Эта болезнь может протекать в нескольких формах:

Острая форма птичьего гриппа

Возникает при заражении птицы высоко вирулентным штаммом вируса и проявляется поражением респираторной системы. Сопровождается хрипами (куры кашляют, хрипят), синуситами, посинением гребешка и сережек, диареей, отеком головы.

Подострая и хроническая форма птичьего гриппа

Возникает при поражении птицы вирусами средней патогенности. В этом случае падеж птицы составляет 2-20%. У больной птицы наблюдается диарея, поражение респираторных органов, манежные движения (птица движется по кругу из-за одностороннего поражения головного мозга).

Легкая форма птичьего гриппа

Заболевание птицы гриппом в легкой форме протекает без внешних проявлений. Случается, что при птичьем гриппе имеет место субклиническая (инаппарантная) инфекция, когда в организме птицы инфекция присутствует, но узнаваемы клинических симптомов птичьего гриппа не наблюдается.

Птичий грипп: паталогоанатомические изменения

В тушках молодняка птицы, погибшей от птичьего гриппа, в мышцах обнаруживают синяки, катаральную пневмонию. В тушках взрослых кур возможны фибринозные наслоение в воздухоносных мехах, увеличенные печень, селезенка, иногда – точечные кровоизлияния в железистом желудке. Вместе с катарально-геморрагическим воспалением слизистой оболочки толстого и тонкого кишечника, в легких и трахеях обнаруживают пенистую жидкость, иногда – катаральную пневмонию, жировую дистрофию печени, сердца, почек и яичника.

Диагностика птичьего гриппа

С этой целью свежую аллантоисную жидкость с титром ГА 4 Log 2 и больше растворяют 1/10 стерильным физиологическим раствором. Далее 0,2 мл раствора вводят внутривенно 10 SPF-цыплятам шестинедельного возраста. За птицей наблюдают на протяжении 10 суток, суммируя балы: 0 – здоровые, 1 – слабые, 2 – больные, 3 – погибшие. К высоковирулетным относят штаммы, которые вызывают гибель 9-10 цыплят из 10.

Дифференциальную диагностику гриппа птицы проводят от болезни Ньюкасла, респираторного микоплазмоза, инфекционного бронхита, оспы птицы, инфекционного ларинготрахеита, а также от бактериальных и паразитарных болезней, отравлений.

Птичий грипп: иммунитет и профилактика

Заболевания могут вызывать разные сероварианты вируса гриппа. После перенесенного заболевания, вызванного одним серовариантом, организм не имеет иммунной защиты от других серовариантов. Выделение разных вариантов вируса гриппа птицы усложняется использованием средств специфической профилактики. Коммерческое производство вакцин с одного сероварианта гриппа является нецелесообразным, поэтому используют инактивированные вакцины, содержащие несколько сероваров вируса гриппа. Их применяют для профилактики клинически здоровых кур с 45-дневного возраста в благополучных и угрожающих хозяйствах. Иммунитет наступает через 15-20 дней после вакцинации и длится до 6 месяцев.

Мероприятия по ликвидации заболевания птичьим гриппом

При подтверждении гриппа хозяйство и окружающие населенные пункты поддают карантинированию. Борьбу с птичьим гриппом осуществляют соответственно к действующей инструкции. Тушки и внутренние органы, полученные от забоя птицы, подозреваемой в заражении, но без паталогоанатомических изменений, проваривают или перерабатывают на консервы. Пух и перо уничтожают. Карантин снимают после обследования специальной комиссии хозяйства и подтверждения об исполнении все мер и проведения заключительной дезинфекции, дезинсекции и дератизации.

Опасен ли птичий грипп для человека?

Да. Однако проблема не стоит настолько масштабно, как могло бы казаться, исходя из сюжетов СМИ. Птичий грипп передается человеку исключительно во время прямого контакта с больной птицей – возможно, живой, но, как правило, при разделывании тушек больной птицы (вирус живет в кишечнике). От человека, заразившегося птичьим гриппом, к другому человеку вирус не передается.

Опасность этого заболевания для людей состоит в том, что у людей нет к нему иммунитета, поэтому заразится вирусом довольно просто. Человеческому организму сложно сражаться с вирусом птичьего гриппа, и 60-80% людей, заразившихся этой болезнью, умирает.

Как человеку не заразиться птичьим гриппом? Во-первых, в случаях внезапно гибели домашней птицы, которой предшествовали вышеописанные признаки птичьего гриппа, нужно обязательно обратиться в ветеринарные службы.

Во-вторых, мясо птицы, больной птичьим гриппом, лучше утилизировать, а не принимать в пищу. Хотя случаев заражения человека через неправильно приготовленную пищу не зарегистрировано, а при повышенных температурах вирус гибнет достаточно быстро, экспериментов на себе не стоит ставить.

В-третьих, старайтесь избегать контактов с больной дикой либо домашней птицей.

В случае заражения первые симптомы проявятся через несколько часов или несколько суток (максимум – 5 суток). Начинается болезнь с озноба, головной и мышечной боли, боли в горле, повышения температуры до 38 градусов и выше. После этого появляются другие признаки: влажный кашель, иногда – с примесью крови, затрудненное дыхание. В дальнейшем поражаются почки, печень и мозг.

В случае возникновения у имеющейся в Вашем подворье птицы одного из вышеуказанных симптомов прошу незамедлительно сообщить в Большечерниговскую СББЖ по адресу: с. Большая Черниговка, ул. Степная, д. 24, или по телефону 2-19-64, 2-13-17.

Академик РАМН О. КИСЕЛЕВ, директор НИИ гриппа РАМН (Санкт-Петербург).

Академик РАМН О. КИСЕЛЕВ, директор НИИ гриппа РАМН (Санкт-Петербург). - В последнее время вспышки гриппа среди птиц приобрели массовый характер. А случались ли подобные эпидемии раньше?

- Птицы стали переносчиками вирусов гриппа миллионы лет назад. Можно сказать, что они являются резервуаром всех вирусов гриппа подтипа А, существующих в природе. Вируса подтипа В у них нет. Птичий "резервуар" сложился генетически в результате эволюции.

Вирусы птичьего гриппа выделены еще в 30-е годы прошлого века, их эволюцию серьезно изучают специалисты по экологической вирусологии в нашей стране и за рубежом. Медикам известны генеалогия этих вирусов, их геном, свойства. Собраны большие коллекции непатогенных - неопасных для человека - птичьих вирусов. "Обычный" вирус птичьего гриппа не передается от птицы к человеку и от человека к человеку. Но время от времени "резервуар" выдает варианты, опасные для людей. Кстати, изучение происхождения вирусов гриппа животных и человека показало, что все они имеют один эволюционный источник - вирусы гриппа птиц.

- Что должно произойти с вирусом птичьего гриппа, чтобы он стал патогенным для человека? Каковы механизмы "перерождения" вируса птичьего гриппа в "человеческий"?

- Традиционная вирусная цепочка начинается с диких водоплавающих птиц. Установлено, что они являются носителями всех 16 подтипов вирусов гриппа А, а самых примитивных сочетаний поверхностных антигенов (гемагглютинина НА и нейраминидазы NA. - Прим. ред. ) у этих вирусов насчитывается до 254. Каждый год перелетные птицы генерируют различные вариации вируса гриппа А в своем организме. И это при температуре тела 42,5 о C. То есть вирус птичьего гриппа выживает в условиях, при которых человек уже находится в полуобморочном состоянии.

Останавливаясь в прудах со стоячей водой, перелетная птица привносит туда с фекалиями вирус, способный жить до 400 суток - естественно, при оптимальных температурах - от 10-12 до 30 о С. Вирус через воду передается водоплавающей домашней птице, а от нее - другим домашним пернатым. Наиболее чувствительны к инфекции индюки и куры. Далее вирус гриппа может перейти к свиньям, что уже несет угрозу человеку. Дело в том, что на поверхности мембраны клеток свиньи имеются два типа рецепторов, к которым способен прикрепляться вирус гриппа: один - птичий вариант, а другой - человеческий. Причем ровно половина на половину. Поэтому свинья может стать промежуточным хозяином как птичьего, так и человеческого вируса гриппа. Когда два вируса - человеческий и птичий - инфицируют одни и те же клетки, потомство этих вирусов наследует наборы РНК-сегментов обоих вирусов. И в результате их взаимопроникновения (реассортации) иногда рождается третья высокопатогенная особь вируса, способная преодолевать межвидовые барьеры и передаваться человеку и птице. Неслучайно, по статистике, число летальных исходов от гриппа велико, если человек заразился в сельской местности.

Кроме того, в самом вирусе гриппа птиц происходят постоянные мутации генов, определяющих так называемый диапазон хозяев. Это гены гемагглютинина (НА), которые управляют вхождением вируса в клетку хозяина, и внутренние гены вируса, непосредственно отвечающие за подавление иммунитета хозяина. В результате этих мутаций также может появиться вирус, опасный для человека.

- Почему практически все случаи заболевания людей птичьим гриппом зарегистрированы в Юго-Восточной Азии?

- В Юго-Восточной Азии высокая плотность населения сочетается с интенсивным животноводством и птицеводством. Это очень подходящие условия для изменчивости вирусов гриппа. В итоге вирус гриппа птиц начал преодолевать межвидовые барьеры - им стали болеть и животные и люди. Интересно, что в Среднеазиатском регионе, где происходит интенсивный обмен вирусами гриппа между дикими перелетными птицами и домашними животными, но в силу культурных и религиозных традиций отсутствует свиноводство, и вероятность зарождения пандемических вирусов намного ниже, чем, например, в Китае.

- Вирусы гриппа, вызвавшие пандемии ХХ века (в 1918, 1957, 1968 годах), имели птичье происхождение или все-таки человеческое?

- Все пандемические вирусы ХХ века в той или иной степени содержали сегменты РНК гриппа птиц. Можно сказать, что они имели "птичий след".

- За последние два года в мире зарегистрировано около 140 случаев инфицирования людей вирусом гриппа птиц H5N1, из них половина - с летальным исходом. Вирус птичьего гриппа H5N1 чисто птичий или уже частично человеческий?

- Это чисто птичий вирус, но он постоянно изменяется, все больше и больше адаптируясь к организму человека. И все-таки, я думаю, что этот вирус не вызовет пандемию гриппа среди людей. Чтобы стать пандемическим, он должен претерпеть серьезные изменения - реассортацию или дополнительные мутации. Ведь, как я уже говорил, во всех пандемических вирусах ХХ столетия были как птичьи, так и человеческие сегменты РНК.

- Довольно широко распространено мнение, что угроза птичьего гриппа - искусственно раздутая "страшилка", выгодная крупным транснациональным птицеводческим и фармацевтическим компаниям. Как вы можете это прокомментировать?

- Вирус H5N1 образца 2004-2005 годов действительно претерпел изменения и стал более опасным, чем раньше. Об этом свидетельствует столь большое количество погибшей домашней птицы. В результате увеличивается и риск заболевания людей. В 1997 году первую вспышку эпидемии среди птиц в Гонконге удалось локализовать благодаря тому, что было уничтожено все поголовье домашней птицы в стране. Теперь это сделать невозможно - вирус распространился по всей Азии. А уж одновременные вспышки птичьего гриппа в Японии, Китае, во Вьетнаме, в Таиланде, России, Казахстане исторически беспрецедентны. Существует опасение, что новый штамм вируса птичьего гриппа может поразить весь мир.

Пока вирус не передается от человека к человеку, но из-за эпидемии среди птиц такая передача становится все более вероятной. Необходима всего лишь "правильная" рекомбинация между штаммом H5N1 и вирусом гриппа человека. Это может произойти, если кто-либо из людей или животных заболеет человеческим и птичьим гриппом одновременно. Как только птичий вирус приобретет способность распространяться от человека к человеку, может начаться пандемия, поскольку в человеческой популяции иммунитет против птичьих вирусов низок или отсутствует вовсе. Результаты последних исследований свидетельствуют о том, что "испанка" 1918 года унесла более 40 млн жизней потому, что тот вирус гриппа эволюционировал из птичьего и содержал уникальные белки-антигены (HA и NA), к которым у человека не было иммунитета. Кроме того, достоверно установлено, что ряд внутренних белков вируса "испанки", тоже птичьего происхождения, имели выдающуюся способность к подавлению иммунитета человека.

Вирус птичьего гриппа может сохраняться в течение многих лет при температуре ниже _70 о С. Следовательно, повышается опасность сохранения вируса в охлажденном и замороженном мясе домашней птицы. Но, к счастью, в прожаренном курином мясе или после варки инфекционного вируса быть не может. Интересно, что вирус категорически не выдерживает и процедуры последовательного замораживания и оттаивания.

То, что случилось осенью 2005 года в российских регионах, когда падеж птичьего поголовья приобрел характер эпидемии, заставило наших ученых забить тревогу. Так что угроза всплеска заболеваемости птичьим гриппом среди людей - реальность, а не придуманная кем-то страшилка.

- Если вирус H5N1, скорее всего, не станет пандемическим, то почему все вакцины от птичьего гриппа сейчас создаются на его основе?

- Все страны обязаны иметь эту вакцину как резервную, на случай массового распространения именно этой разновидности птичьего гриппа. А когда появится новый вирус, тогда будет и новая вакцина. В гриппозной проблеме так бывает всегда. Каждый год мы анализируем ситуацию и предлагаем новые композиции вакцин. Смена вакцинных штаммов происходит в среднем через два-три года. Может быть, через один-два года появится новый кандидат на основе другого штамма вируса птичьего гриппа.

- В НИИ гриппа разработана новая вакцина от птичьего гриппа. Расскажите о ней .

- На самом деле вакцина разработана в рамках Всемирной организации здравоохранения. Сегодня быстро решить проблему создания вакцины, не сотрудничая с зарубежными учеными, без здоровой корпоративности невозможно. Основной базовый штамм H5N1 получен из Национального института биологических стандартов и контроля Джона Вуда в Лондоне. Эта работа была опубликована в "Nature" в середине прошлого года. Прошлым летом мы изучали вирус как кандидата в вакцинные штаммы. И в августе на совещании у главного санитарного врача России пришли к выводу, что необходимо готовить вакцину на основе этого штамма и сдавать ее в производство. Аналогичные вакцины создаются и в других странах. Так, американцы уже запустили вакцину от птичьего гриппа в производство. Сейчас они готовят к производству новую вакцину из индонезийского изолята. А в России по вине производителей сроки выпуска вакцины от птичьего гриппа до сих пор не определены.

- А почему нельзя сконструировать универсальную вакцину против всех возможных сочетаний антигенов вируса гриппа?

- В мире уже есть несколько проектов универсальной вакцины против гриппа. По сложности такой проект сопоставим если не с полетом на Марс, то с чем-то близким к этому. И наш институт тоже работает над данной проблемой, причем практически без всякого финансирования. Думаю, при наличии денег сделать такую базисную вакцину мы в состоянии.

- Теоретически возможно ли сделать организм человека неуязвимым для вирусов гриппа?

- Защитить организм человека от вируса гриппа вполне возможно на генетическом уровне. Но всем известно, что генетические манипуляции любого толка на геноме человека категорически запрещены. А применительно к птицам и животным вероятность такого подхода существует. Так, например, американские генетики предлагают внедрить в ДНК птицы гены, кодирующие белковые структуры, нейтрализующие антигенные молекулы вируса гриппа (так называемые антисмысловые структуры). При наличии таких белков вирус птичьего гриппа не сможет прикрепиться к клеткам хозяина. Как генетик по базовому образованию, могу сказать, что вполне вероятно, человечеству придется пойти по пути генетической модификации, обеспечивая безопасность сельскохозяйственных и диких животных.

- Как можно обезопасить себя от гриппа, включая птичий, без вакцинопрофилактики?

Для профилактики и лечения гриппа, в том числе птичьего происхождения, НИИ гриппа рекомендует отечественные препараты, входящие в состав набора: "Интерферон гамма человеческий рекомбинантный" ("Ингарон") и "Интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный" ("Альфарона"). Лекарство просто закапывают в нос. Набор можно приобрести в аптеке без рецепта. Особо хочется подчеркнуть, что эти препараты, созданные учеными Москвы совместно с санкт-петербургским НИИ гриппа РАМН, проявляют высокую терапевтическую активность и на модели птичьего гриппа. Только своевременно начатая профилактика гриппа может предотвратить развитие тяжелого течения заболевания с непрогнозируемым исходом.

- Насколько вероятна смерть человека, если он все же заболеет птичьим гриппом?

- Несмотря на опасность вируса, летальный исход от любой гриппозной инфекции - чрезвычайное событие. В первую очередь следует вовремя обращаться к врачу и правильно лечить инфекцию. Вероятность смерти от птичьего гриппа в значительной степени зависит от здоровья пациента и от организации системы здравоохранения в стране. По мнению специалистов НИИ гриппа, смерть от гриппа в наше время - чрезвычайное событие.

- Будут ли вакцинировать от птичьего гриппа домашних птиц?

- Всероссийский институт ветеринарного птицеводства в Санкт-Петербурге разработал, успешно испытал и в настоящее время передал Россельхознадзору для промышленного производства высокоэффективную вакцину для птиц против патогенного вируса гриппа H5N1. Исследования проводились совместно с НИИ гриппа, причем весь проект осуществили исключительно на энтузиазме без финансирования из госбюджета. Эта вакцина пока только ожидает регистрации.

- У птиц - множество болезней. Как определить, что куры или утки погибают именно от гриппа?

- Действительно, у птиц и без гриппа много опасных болезней. Для диагностики гриппа у птиц ВОЗ рекомендует методы иммунофлуоресценции и ПЦР. В нашей стране птичий грипп диагностируют с помощью иммунологических тестов и определения патогенности на цыплятах. Но эти методы анализа занимают до двух недель, кроме того, у них низкая чувствительность и специфичность. Сейчас наши сотрудники с коллегами из Института биоорганической химии имени М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН в Москве разрабатывают чип для экспресс-диагностики птичьего гриппа у птиц. Московские коллеги синтезировали рецепторы птичьего и человеческого вируса, а у нас, в НИИ гриппа в Санкт-Петербурге, специалисты создают сам биочип, который имеет вид небольшой пластинки, напоминающей кредитную карту, с вмонтированными рецепторами обоих видов вируса. С помощью такого устройства любой ветеринар в райцентре, имея под рукой биоматериал погибшей птицы, сможет понять, птичий ли вирус гриппа поразил пернатую или это другая инфекция. Быстрая диагностика крайне необходима - болезнь коварна и быстротечна.

- Есть ли какие-нибудь данные о видовом составе птиц - переносчиков птичьего гриппа? Можно ли заразиться от птиц во время весенней охоты?

- Среди диких перелетных водоплавающих птиц переносчиками вирусов гриппа являются дикие утки и гуси, крачки и ржанки. Но в основном вирусы птичьего гриппа были выделены от диких уток и гусей. Дупели, бекасы, вальдшнепы не болеют. Глухари, тетерева, рябчики - тоже. Думаю, вероятность заражения от птиц средней полосы России небольшая. Большинство птиц к переносчикам вируса гриппа не относится, поэтому опасаться и тем более уничтожать их не следует.

- Почему нет сообщений о птичьем гриппе в США?

- На птицефермах США было несколько вспышек птичьего гриппа. Однако в этой стране основными производителями мяса птиц выступают небольшие фабрики с тридцатью - пятьюдесятью тысячами голов. У нас же птицекомплексы - это миллионное поголовье птиц. Если на ферме в США, например, погибают десять-двадцать тысяч особей, такое хозяйство изолируется, принимаются профилактические меры, владельцам выплачивается страховка. И нет никакой национальной трагедии, и резонанс в обществе минимален. При масштабах российских птицефабрик уровень банкротства, который они терпят, чудовищен. Такое из ряда вон выходящее событие, естественно, не оставят без внимания ни органы санитарного надзора, ни пресса.

- Поговаривают, что птичий грипп - это новейшее биологическое оружие США, направленqное против России, Китая и Азиатского региона. Что вы об этом думаете?

- Когда был открыт вирус иммунодефицита человека, газета "Правда" опубликовала довольно большую статью о том, что ВИЧ синтезирован в лабораториях Пентагона. Со всей ответственностью заявляю: человечество еще не доросло до того, чтобы создавать такие "генетические машины". Усилить патогенные свойства вируса, сохранить их и сделать из готового вируса бактериологическое оружие - да, можно. Но подобрать разносчика вируса, например утку, ученые пока не могут: приживется вирус в ней или нет - это от лукавого.

На самом деле, вопрос правильный. В будущем могут найтись "умники", которые серьезно займутся такого рода "работой". Но пока, я уверен, это исключено полностью. Кстати, ученых трудно обмануть: если и появится что-нибудь искусственное, то специалисты, имея четкие представления об эволюционном развитии вирусов, распознают рукотворную инфекцию сразу.